CN104897667B - Smith试剂在检测液体检材中GHB中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Smith试剂在检测液体检材中GHB中的应用。同时也公开了一种液体检材中GHB的检测方法，包括如下步骤：向待检测液体检材中滴加Smith试剂，若待检测液体检材颜色变为绿色，则证明待检测液体检材中候选含有GHB，反之，则候选不含或者含量低于检测限。本发明的检测方法具有检测灵敏度较高，专属性较好，且在低温保存下，Smith试剂至少在半年时间内性质保持稳定，反应结果可靠。

Description

Smith试剂在检测液体检材中GHB中的应用

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及Smith试剂在检测液体检材中GHB中的应用。

背景技术

临床显示，口服GHB 10mg，会产生暂时性记忆丧失，而一次使用达20g就会造成中毒。中毒症状包括恶心、呕吐、头痛、反射作用丧失、失去意识、昏迷甚至死亡，与酒精并用会更加剧其危险性。其有可能被应用于犯罪，如：添加到常见的酒类饮品(伏特加、白酒、红葡萄酒、啤酒)或者饮料(橙汁、绿茶、雪碧、可乐)而给予被害人饮用，达到不法目的，也有一些人为了追求感官刺激而服用GHB。

因此，如何快速检测检测液体检材中GHB成分，控制其被非法滥用，需要一种快速准确的检测方法，目前针对GHB的颜色反应原理均为将GHB内酯化成GBL后的双键氧化，当前，GHB在我国为管制药品，而GBL作为一种应用广泛的香料、医药中间体不受管制，因而，无法规避GBL对GHB检测结果的干扰，可能造成假阳性的产生。

发明内容

本发明的目的是提供一种Smith试剂在检测液体检材中GHB(γ-羟丁酸)中的应用。

本发明的再一个目的是提供一种液体检材中GHB的快速颜色反应辅助检测方法。

本发明所提供的检测方法，包括如下步骤：向待检测液体检材中滴加Smith试剂(颜色呈橙红色)，若待检测液体检材颜色变为绿色，则证明待检测液体检材中候选含有GHB，反之，则候选不含或者含量低于检测限。

上述检测方法中，所述待检测液体检材与Smith试剂的体积比为1：(0.2-0.6)，具体可按如下方法：向0.5ml的所述待检测液体检材中滴加2-6滴的所述Smith试剂，其中，每滴的体积约为0.05ml。

上述检测方法中，所述滴加Smith试剂之前，还包括对所述待检测液体检材调节其pH值至中性或弱酸性的步骤，具体可先用pH计测定所述待检测液体检材的pH值，据此pH值，向其中加入0.5-0.15mol/L盐酸或氢氧化钠进行调节。

为了便于对比观察，区分颜色，还可完全按所述检测方法，仅将所述待检测液体检材换为去离子水，向去离子水中滴加Smith试剂，作为阴性对照，观察颜色变化。

上述检测方法中，当所述待检测液体检材为简单基质时，所述GHB的检测限为5mg/ml；当所述待检测液体检材为复杂基质时，所述GHB的检测限为10mg/ml，其中，所述简单基质为成分单一的物质，如：水等；所述复杂基质为多成分组成的物质，如：酒、茶水、果汁、碳酸饮料等。

上述检测方法中，所述Smith试剂按照如下方法制备得到：

(1)制备改良Schweppes试剂：将葡萄糖和盐酸苯胺混合，得到改良Schweppes试剂；

(2)将溴甲酚绿和甲基橙混合，得到混合溶液A；

(3)将改良Schweppes试剂和混合溶液A混合，得到Smith试剂。

上述制备方法中，步骤(1)中，所述葡萄糖是以葡萄糖水溶液的形式存在，所述葡萄糖水溶液的质量浓度为(0.5-0.15)g/ml，具体可为0.1g/ml。

所述盐酸苯胺是以盐酸苯胺乙醇溶液的形式存在，所述盐酸苯胺乙醇溶液的质量浓度为(0.10-0.15)g/ml，具体可为0.12g/ml。

所述改良Schweppes试剂中葡萄糖的质量浓度为(0.02-0.03)g/ml，具体可为0.025g/ml。

所述改良Schweppes试剂中盐酸苯胺的质量浓度为(0.02-0.04)g/ml，具体可为0.03g/ml。

为了保持所述改良Schweppes试剂中葡萄糖和盐酸苯胺的所述质量浓度，可选用溶剂进行稀释，所述溶剂具体可为甲醇。

上述制备方法中，步骤(2)中，所述溴甲酚绿是以溴甲酚绿甲醇溶液的形式存在，所述溴甲酚绿甲醇溶液的质量浓度为(0.2-0.4)g/L，具体可为0.3g/L。

所述甲基橙是以甲基橙甲醇溶液的形式存在，所述甲基橙甲醇溶液的质量浓度为(0.05-0.2)g/L，具体可为0.1g/L。

所述溴甲酚绿和甲基橙的体积比为(0.5-1.5)：1，具体可为1:1。

上述制备方法中，步骤(2)中，还包括对所述混合溶液A调节pH值至7.0的步骤，如：可用0.1mol/L氢氧化钠调节pH值至7.0。

上述制备方法中，步骤(3)中，所述混合溶液A和所述改良Schweppes试剂的体积比为(2-4)：1，具体可为3:1。

本发明通过研究Smith试剂的颜色反应试剂稳定性与专属性、颜色反应检测限、复杂基质对颜色反应结果影响，发现Smith试剂对液体检材中GHB成分具有很好的快速检测效果。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)本发明所采用的Smith试剂和相应的检测方法具有颜色反应检测灵敏度较高，专属性较好；

2)在简单基质中，GHB的检测限可达到5mg/ml；在复杂基质中，GHB的检测限也基本可以达到10mg/ml。

3)本发明直接是和GHB产生颜色反应，通过颜色变化来检测GHB的存在与否，避免GBL的干扰。

4)低温保存下，Smith试剂至少在半年时间内性质保持稳定，反应结果可靠。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1、Smith试剂在检测液体检材中GHB成分中的应用：

1、制备Smith试剂：

(a)改良Schweppes试剂：将试剂A(2g葡萄糖溶解在20ml水中)和试剂B(2.4g盐酸苯胺溶解在20ml乙醇中)混合并用甲醇稀释至80ml；

(b)将溴甲酚绿和甲基橙等体积混合，得到混合溶液A，其中，溴甲酚绿：将0.03g溴甲酚绿溶解在100ml 80％的甲醇溶液中，用0.1N氢氧化钠调节PH值至7.0而得到，甲基橙：将0.01g甲基橙溶解在100ml甲醇中，用0.1N氢氧化钠调节PH值至7.0而得到；

(c)将步骤(b)中的混合溶液A与步骤(a)中的改良Schweppes试剂以3：1(体积比)的比例混合，得到Smith试剂。

2、应用：

1)标准样品的制备:称取γ-羟基丁酸内酯(GBL)标准样品约1g，用20％氢氧化钠调节pH值大于12，振荡5min，用水定容至10ml，配制成100mg/ml GHB(钠盐)溶液。移取100mg/ml GHB(钠盐)溶液适量，加水逐级稀释成20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml GHB(钠盐)标准物质溶液；

2)颜色反应实验：分别移取不同浓度GHB标准物质溶液各约0.5ml置于试管中，调节pH值使待测溶液(即不同浓度GHB标准物质溶液)呈中性或弱酸性，再各加入2滴Smith试剂，振摇混匀后立刻观察颜色变化情况；

移取约0.5ml去离子水置于试管中，加入2滴Smith试剂，立刻观察颜色变化情况，作为阴性控制。

颜色反应实验的测试结果如下表1所示，从表1可得知：当GHB标准物质溶液浓度低于5mg/ml，已经观察不到明显的特征颜色变化。由于快速颜色反应须满足肉眼清晰可辨的要求，本实验将GHB的Smith颜色反应检测限定为5mg/ml。

表1 颜色反应结果

3、Smith试剂的稳定性研究：配制四组Smith试剂，贮存条件如表2所示：

表2 Smith试剂贮存条件

分别考察12个月内各组Smith试剂作用效果随时间变化情况：按月配制10mg/ml的新鲜GHB标准物质溶液，以保证其自身稳定性。前3个月中，每个月都分别用各组Smith试剂对GHB标准物质溶液进行一次检测，记录检测结果；接下来的6个月中，每2个月进行一次检测，记录检测结果；最后的3个月中，每周进行一次检测，记录检测结果，相应的测试结果如表3所示：

表3 Smith试剂稳定性研究结果

从表3可得知：无论是否避光保存，在室温下储存的Smith试剂在4个月后逐渐失效，而在低温下储存的Smith试剂在8个月后依然有效。因此，为了保证实验结果的可靠性，建议Smith试剂在低温下保存，并且保存期尽可能不要超过半年。

4、Smith试剂作为液体检材中GHB快速检测试剂的专属性研究：

选取办案中常见的易于掺入饮料中的管制药品及掺假剂共27种，分别进行Smith颜色反应实验，颜色反应的过程如“2、应用”中所述，具体可向0.5ml、浓度30mg/ml的管制药品或掺假剂中滴加0.1-0.3ml的Smith试剂，观察颜色反应，记录检测结果如下表4所示：

表4 Smith试剂专属性研究结果

化合物	现象
		GBL	橙黄色
1,4-丁二醇	橙黄色
		甲基苯丙胺	橙黄色
氯胺酮	橙黄色
		咖啡因	橙黄色
苯唑卡因	橙黄色
		可卡因盐酸盐或碱	浅绿色
可待因盐酸盐	橙黄色
		地西泮	橙黄色
麻黄素	橙黄色
		海洛因盐酸盐	浅绿色
MDA	橙黄色
		MDMA	橙黄色
MDEA	橙黄色
		苯巴比妥	橙黄色
盐酸芬特明	橙黄色
		对乙酰氨基酚	橙黄色
烟酰胺	浅绿色
		甲丙氨酯(眠尔通)	浅绿色
氢氧化钠	深绿色
		盐酸安眠酮	桃红色
葡萄糖	橙黄色
		甘露醇	橙黄色
桉叶油醇	橙黄色
		糖精	橙黄色

苯甲酸钠	橙黄色
		薄荷醇	橙黄色

从表4可得知：Smith试剂对氢氧化钠溶液呈强阳性反应，对可卡因、盐酸海洛因、烟酰胺及甲丙氨酯呈弱阳性反应，对GHB类似物、其它常见管制药品及添加剂均呈阴性反应。

5、检材基质对颜色反应实验结果影响的研究：

选取四种乙醇含量不同的酒类饮品(伏特加、白酒、红葡萄酒、啤酒)，一种果汁饮料(橙汁)，一种茶类饮料(绿茶)，两种碳酸饮料(雪碧、可乐)，分别测定其pH值，并分别向其中加入适量100mg/ml的GHB标准物质溶液配制成10mg/ml的GHB饮料溶液。以相应空白饮料为阴性对照，分别进行Smith颜色反应实验，记录检测结果如表5所示：

表5 检材基质对Smith颜色反应结果的影响

从表5可得出：当GHB浓度为10mg/ml时，除红葡萄酒外，Smith试剂对以其余饮料、饮品为基质的GHB溶液均呈明显阳性反应。由于红葡萄酒自身颜色较厚重，当GHB浓度大于20mg/ml时，GHB红葡萄酒溶液Smith颜色反应现象(即呈现绿色的变化)才能被较明显观察到，红葡萄酒基质对GHB的快速颜色反应有一定干扰。

综上可知：Smith试剂作为GHB的快速颜色反应试剂有其可行性。该颜色反应检测灵敏度较高，专属性较好，但由于Smith试剂对氢氧化钠溶液呈强阳性，在样品前处理过程中需调节pH值使待测溶液呈中性或弱酸性以避免假阳性结果出现。在简单基质中，GHB的检测限可达到5mg/ml；在复杂基质中，GHB的检测限也基本可以达到10mg/ml，远低于常见市售GHB液体样品的浓度。低温保存下，Smith试剂至少在半年时间内性质保持稳定，反应结果可靠。

Claims (12)

1.Smith试剂在检测液体检材中GHB中的应用；

所述Smith试剂按照如下方法制备得到：

(1)制备改良Schweppes试剂：将葡萄糖和盐酸苯胺混合，得到改良Schweppes试剂；

(2)将溴甲酚绿和甲基橙混合，得到混合溶液A；

(3)将改良Schweppes试剂和混合溶液A混合，得到Smith试剂。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤(1)中，所述葡萄糖是以葡萄糖水溶液的形式存在，所述葡萄糖水溶液的质量浓度为(0.5-0.15)g/ml；

所述盐酸苯胺是以盐酸苯胺乙醇溶液的形式存在，所述盐酸苯胺乙醇溶液的质量浓度为(0.10-0.15)g/ml；

所述改良Schweppes试剂中葡萄糖的质量浓度为(0.02-0.03)g/ml；

所述改良Schweppes试剂中盐酸苯胺的质量浓度为(0.02-0.04)g/ml；

为了保持所述改良Schweppes试剂中葡萄糖和盐酸苯胺的所述质量浓度，选用溶剂进行稀释，所述溶剂为甲醇。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：步骤(2)中，所述溴甲酚绿是以溴甲酚绿甲醇溶液的形式存在，所述溴甲酚绿甲醇溶液的质量浓度为(0.2-0.4)g/L；

所述甲基橙是以甲基橙甲醇溶液的形式存在，所述甲基橙甲醇溶液的质量浓度为(0.05-0.2)g/L；

所述溴甲酚绿和甲基橙的体积比为(0.5-1.5)：1；

步骤(2)中，还包括对所述混合溶液A调节pH值至7.0的步骤。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：步骤(3)中，所述混合溶液A和所述改良Schweppes试剂的体积比为(2-4)：1。

5.一种液体检材中GHB的辅助检测方法，包括如下步骤：向待检测液体检材中滴加Smith试剂，若待检测液体检材颜色变为绿色，则证明待检测液体检材中候选含有GHB，反之，则候选不含或者含量低于检测限；

所述Smith试剂按照如下方法制备得到：

(1)制备改良Schweppes试剂：将葡萄糖和盐酸苯胺混合，得到改良Schweppes试剂；

(2)将溴甲酚绿和甲基橙混合，得到混合溶液A；

(3)将改良Schweppes试剂和混合溶液A混合，得到Smith试剂。

6.根据权利要求5所述的辅助检测方法，其特征在于：所述待检测液体检材与Smith试剂的体积比为1：(0.2-0.6)。

7.根据权利要求5或6所述的辅助检测方法，其特征在于：所述向待检测液体检材中滴加Smith试剂按如下方法进行：向0.5ml的所述待检测液体检材中滴加2-6滴的所述Smith试剂，其中，每滴的体积为0.05ml。

8.根据权利要求5或6所述的辅助检测方法，其特征在于：所述滴加Smith试剂之前，还包括对所述待检测液体检材调节其pH值至中性或弱酸性的步骤。

9.根据权利要求5或6所述的辅助检测方法，其特征在于：当所述待检测液体检材为简单基质时，所述GHB的检测限为5mg/ml；当所述待检测液体检材为复杂基质时，所述GHB的检测限为10mg/ml。

10.根据权利要求5所述的辅助检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述葡萄糖是以葡萄糖水溶液的形式存在，所述葡萄糖水溶液的质量浓度为(0.5-0.15)g/ml；

所述盐酸苯胺是以盐酸苯胺乙醇溶液的形式存在，所述盐酸苯胺乙醇溶液的质量浓度为(0.10-0.15)g/ml；

所述改良Schweppes试剂中葡萄糖的质量浓度为(0.02-0.03)g/ml；

所述改良Schweppes试剂中盐酸苯胺的质量浓度为(0.02-0.04)g/ml；

为了保持所述改良Schweppes试剂中葡萄糖和盐酸苯胺的所述质量浓度，选用溶剂进行稀释，所述溶剂为甲醇。

11.根据权利要求5所述的辅助检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述溴甲酚绿是以溴甲酚绿甲醇溶液的形式存在，所述溴甲酚绿甲醇溶液的质量浓度为(0.2-0.4)g/L；

所述甲基橙是以甲基橙甲醇溶液的形式存在，所述甲基橙甲醇溶液的质量浓度为(0.05-0.2)g/L；

所述溴甲酚绿和甲基橙的体积比为(0.5-1.5)：1；

步骤(2)中，还包括对所述混合溶液A调节pH值至7.0的步骤。

12.根据权利要求5所述的辅助检测方法，其特征在于：步骤(3)中，所述混合溶液A和所述改良Schweppes试剂的体积比为(2-4)：1。