CN104873526A - 岗梅齐墩果烷型皂苷化合物在制备抗血栓药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有机有效成分的医药配制品，具体涉及岗梅齐墩果烷型皂苷化合物在制备抗血栓药物中的应用，其中，所述的岗梅齐墩果烷型皂苷化合物的分子结构如式(Ⅰ)所示。本发明所涉及的化合物具有抗凝血的药物活性，可用于制备防治血管内栓塞形成的药物。

Description

岗梅齐墩果烷型皂苷化合物在制备抗血栓药物中的应用

技术领域

本发明涉及来源于岗梅的五环三萜皂苷化合物，还涉及抗血栓形成剂、抗凝血药或血小板凝聚抑制剂。

背景技术

血栓栓塞性疾病在临床上甚为多见，涉及的病因相当广泛。近年来，随着基础医学的发展，对血小板生物化学、血管内皮细胞功能、凝血因子化学结构以及超微结构研究的深入，对血栓形成过程有了更多的了解。中医有治未病的思想。血栓栓塞性疾病如果能早期预防，或发生后能预防复发，较形成严重疾病是更有意义。已知抗血栓的代表中药有，红花、丹参当归、三七和水蛭。

岗梅为冬青科冬青属植物梅叶冬青Ilex asprella(Hook.et Arn.)Champ.ex Benth.，以根、叶入药，其主要含有三萜皂苷、内酯(或香豆精)及少量生物碱，近期有人从岗梅根中分离得到酮甾醇、酮甾醇3-O—β-D-葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素—O—β-D-葡萄糖苷和19—去氢乌索酸。岗梅的主治功能为清热解毒，生津止渴，目前主要用于感冒，高热烦渴，扁桃体炎，咽喉炎，气管炎，百日咳，肠炎，痢疾，传染性肝炎和野蕈、砒霜中毒等。另有蔡艳等从岗梅根的70％乙醇提取物分离得到10个三萜及其皂苷类化合物(蔡艳等.岗梅根化学成分的研究[J].中草药,2010,41(9):1426-1429)但文中并未报导所述10个化合物有什么新的治疗用途。因此，从岗梅中分离出有新的治疗用途的化合物对于提升岗梅的药用价值具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题提供下式(Ⅰ)所示岗梅齐墩果烷型皂苷化合物的新用途，即在制药中的新应用。

上述在制药中的新应用即为，岗梅齐墩果烷型皂苷化合物在制备抗血栓药物中的应用，其中，岗梅齐墩果烷型皂苷化合物的分子结构如式(Ⅰ)所示：

上述(Ⅰ)式所示化合物的分子式为C₄₁H₆₆O₁₉S₂，化学名为3-O-β-L-硫酸化阿拉伯糖-19-O-硫酸化羟基-齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄糖酯，英文名为3-O-β-L-sulphonylarabinopyranosyl-19-O-sulphonylhydroxy-Oleanic acid-28-O-β-D-glucopyranosyl ester。

上述应用中，所述的药物由(Ⅰ)式所示化合物和医学上可接受的辅料组成，其中(Ⅰ)式所示化合物在药物中的质量百分含量为2％～5％。

上述应用中，所述的药物为常见的口服制剂，具体是颗粒剂、胶囊剂或片剂。

上述(Ⅰ)式所示化合物通过化学合成的方法获得，也可以采用常规的方法从岗梅中分离得到。

上述岗梅是冬青科(Aquifoliaceae)冬青属(Ilex L.)多年生草本植物。

本发明所述的3-O-β-L-硫酸化阿拉伯糖-19-O-硫酸化羟基-齐墩果酸-28-O-β-D-葡萄糖酯对ADP诱导体外血小板聚集具有明显的抑制作用，抗血栓的效果显著。

附图说明

图1本发明所述化合物Ⅰ的IR图

图2本发明所述化合物Ⅰ的¹H-NMR图

图3本发明所述化合物Ⅰ的¹³C-NMR图

图4本发明所述化合物Ⅰ的DEPT图

图5本发明所述化合物Ⅰ的HSQC图

图6本发明所述化合物Ⅰ的HMBC图

具体实施方式

岗梅根(批号：20121103)存放于广州中医药大学中药学教研室标本馆。为了描述方便，以下将上述(Ⅰ)式所示化合物简称为岗梅925皂苷。

例1(岗梅925皂苷的制备)

一、化合物的制备

(1)岗梅根药材20kg,粉碎成粗粉，加入8倍量体积浓度为70％的乙醇，分4次冷浸法提取，每次12h,合并4次提取液，减压回收乙醇，得到干燥的浸膏638g，浸膏加4L水使悬浮，用12L的乙酸乙酯分3次萃取萃取，每次静置1h,得乙酸乙酯萃取部位(185g)。

(2)乙酸乙酯萃取部位溶解，过AB-8大孔树脂，用蒸馏水洗脱至没有颜色，再依次用4倍柱体积(Φ15×61cm)体积浓度为20％、50％、70％、95％的乙醇梯度洗脱，收集50％乙醇洗脱部位减压回收溶剂，得岗梅总皂苷提取物86g,总皂苷含量89.73％。

(3)取400gODS-C18反相硅胶，甲醇适量充分溶胀，装柱，用适量甲醇溶解，过硅胶柱，依次用3倍柱体积的体积浓度分别为20％,30％,40％,50％,60％,70％的甲醇梯度洗脱，洗脱液浓缩，用体积浓度10％硫酸乙醇TLC显色，取50％洗脱部位，反复过硅胶柱，纯化得化合物岗梅925-皂苷(47.2mg)，结晶反复溶解，重结晶得纯品化合物。

二、化合物的鉴定

本例得到的化合物，为无色针状结晶(甲醇)。UVλmax(MeoH)nm:202,10％硫酸乙醇溶液显紫红色(TLC)，Liebermann-Burehard及Molish反应均为阳性，推测该化合物为三萜皂苷类化合物。IR(KBr):νmax 3438,2942,2886,1728,1637,1460,1388,1229,1072,1017,913,825,589cm^-1。HR-ESI-MS：准分子离子峰为m/z925[M-H]-，子离子m/z 845为[M–H–80]–结合和红外1229,1072,1017cm-1强吸收峰,推断含SO₃,子离子m/z 763为[M–H–162]–推断出结构中含糖，元素分析测定结果显示，该化合物含硫为6.610％，推测该化合物的结构式为C₄₁H₆₆O₁₉S₂。IR图见图1。

本例得到的化合物的1H-NMR(图2)谱中显示出苷元上的七个甲基质子信号为δH 1.21，0.96,0.85,1.13,1.62,1.15,0.98(各3H，s,7×CH3)。13CNMR(图3)中给出41个C信号，8个季碳信号，δC177.2为酯羰基C-28，δC123.6,144.2为烯碳信号，同时结合DEPT谱(图4)是可以看出123.6为CH信号，所以归属为C-12，δC144.2归属为C-13，1H-NMR谱中显示出两个糖残基质子的信号δH 4.68,d(7.2)，6.37,d(7.9)，结合13CNMR和DEPT谱中δC106.4，73.9，82.4，74.7，63.9(仲碳)五碳糖结合文献信息除δC82.4外其余与β-D-阿拉伯糖类似，δC88.7为3位上苷化连氧碳，δC95.8，74.1，78.8，71.0，79.2，62.1为28位羰基所连的糖与β-D-葡萄糖数据信息类似。综合以上信息，推断该化合物为还有两个糖基的齐墩果烷型三萜皂苷类化合物。

该化合物的HSQC谱(见图5)根据1D NMR推出δC123.6为C-12,结合HSQC有δH5.50与δC123.6有交叉峰,归属δH5.50为H-12,而δH5.50(H-12)与δH1.95相关,则可将δH1.95归属为H-11,再由HSQC归属δC24.1为C-11。δH1.95(H-11)与δH1.76相关,可归属δH1.76为H-9,结合HSQC,归属δC48.2为C-9。δH4.50(H-3)与δH1.76相关,则归属δH1.76为H-2,结合HSQC,有δH1.76与δC26.4有交叉峰,则归属δC26.4为C-2。

HMBC谱分析图谱见图6,δH5.50(H-12)与δC42.0、48.2(C-9)远程相关,结合DEPT谱,δC24.1归属为C-11,δC42.0归属为C-14,。δH3.52(H-18),3.58(H-19)与δC46.4(C-17)远程相关,结合DEPT谱,δC44.5归属为C-18，δC,80.9归属为C-19。由HSQC中,有δH0.96与δC16.7(C-24)交叉峰,可归属δH0.96为H-24；δH1.21与δC28.0(C-23)交叉峰,可归属δH1.21为H-23。HMBC谱显示δH1.21甲基氢(H-23)与δC88.7、39.4、55.8、16.7远程相关,结合DEPT谱,δC88.7归属为C-3,δC39.4归属为C-4。同时也可看到δ0.96甲基氢(H-24)与C-3,C-4，C-5，C-23存在远程相关。δH0.85甲基氢(H-25)与δC33.1、40.1、48.2、24.1相关,结合DEPT谱,δC33.1，24.1归属为C-7,C-11，δC40.1、40.1可归属为C-8、C-9,δC17.5归属为C-26。δH1.62甲基氢与δC40.1、144.2(C-13)、42.0、29.0远程相关,δH1.15为甲基氢(H-29),结合HMBC谱,与δC80.9,35.5,28.9,28.7存在远程相关，则δC80.9归属为C-19含磺酸基向低场移动,结合DEPT谱δC35.5，28.9归属为C-20，C-21。综合以上结构信息得出该化合物的结构如式(Ⅰ)所示的岗梅925皂苷。

例2：(效果实验)

(1)受试药品

取实施例1得到的岗梅925皂苷准确取称量样品2.0mg，加入25mL生理盐水制成浓度为80μM的待测样品，另准确称量样品1.5mg，加入25mL生理盐水制成浓度为60μM的待测样品。以生理盐水为对照空白组。

(2)实验动物

新西兰家兔(购自广州中医药大学动物中心)2只，雌雄不限，2.0kg左右。

(3)实验方法

取新西兰家兔，以3％戊巴比妥钠麻醉(1.5mL·kg^-1)，颈总动脉采血，3.8％枸橼酸钠1:9抗凝，混匀，1000r/min离心10min，取上清液，即为富含血小板血浆(PRP)；剩余部分以3000r/min离心20min，即得贫血小板血浆(PPP)；全取上述两种血浆，用PPP调零，以PRP为血小板供体。受试样品PRP中加入浓度2mg·mL^-1样品。对照组PRP中加入等体积生理盐水。各组PRP于37℃温育10min后，分别加入ADP(终浓度为4μmol)诱导血小板聚集，按比浊法用血小板聚集仪测定血小板最大聚集率，计算曲线斜率即得血小板聚率。

(2)实验结果

将实验数据处理后结果如下表。

表1对ADP诱导体外血小板聚集的抑制作用

(待测样本分子量均以1000计)

实验结果表明岗梅925皂苷单体化合物对血小板聚集抑制率大于0，岗梅925-皂苷单体化合物有抗血小板聚集活性的作用。

例3：(颗粒剂)

取实施例1制得的岗梅925皂苷20g，加入300g淀粉、200g蔗糖、混合均匀，制软材，以18目筛制粒，60℃干燥后1h，20目整粒，分装成4g每袋的颗粒剂130袋供口服使用。

例4：(胶囊剂)

取实施例1制得的岗梅925皂苷310mg，加入6000mg微晶纤维素、5000mg羧甲基淀粉钠、4000mg十二烷基硫酸钠等辅料充分混合，采用辊压法进行干法制粒，再与适量硬脂酸镁混匀，填充入3#空心胶囊，制成100粒的胶囊剂供口服使用。

例5：(片剂)

取实施例1制得的岗梅925皂苷500mg，加入4000mg淀粉、2500mg交联PVP、3000mg羧甲基淀粉钠混合均匀，用5％PVP的75％乙醇溶液作为粘合剂，制软材，以18目筛制粒，60℃干燥后1h，20目整粒后加入适量滑石粉，混匀，压片，制成规格为100mg/片的片剂100片供口服使用。

Claims (3)

1.岗梅齐墩果烷型皂苷化合物在制备抗血栓药物中的应用，其中，所述的岗梅齐墩果烷型皂苷化合物的分子结构如式(Ⅰ)所示：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，式(Ⅰ)所示化合物在药物中的质量百分含量为2％～5％。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的药物是颗粒剂、口服片剂或胶囊剂。