CN103211809B - 一种萜类化合物的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了如下所示的萜类化合物在制备抗凝血药物中的用途，其结构式如下：其中，R1为H、C1-5的直链烷基、糖基或其中，R2选自C1-4的直链烷基。本发明从益母草中首次分离得到的紫罗烷类倍半萜化合物，在体外可以明显抑制血小板聚集，且对凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）和凝血酶时间（TT）有延长趋势，具有一定的抗凝血活性，为抗血栓天然药物的开发提供了新的选择。式Ⅰ

Description

一种萜类化合物的用途
发明内容
本发明涉及一种萜类化合物的用途。具体涉及益母草中紫罗烷类化合物的用途及其提取纯化方法。
背景技术
益母草始载于《神农本草经》，原名茺蔚，被列为上品。在《本草纲目》中被称之为“血家之圣药”，主治“胎漏难产，胎衣不下，血晕，血风，血痛，崩中漏下，尿血”，为妇科经产要药。
益母草中主要含有生物碱、二萜、黄酮、环烯醚萜苷、苯丙醇苷、挥发油、肽类和脂肪酸类等成分,目前活性研究较多的主要是生物碱和二萜类：
（1）生物碱：主要包括水苏碱、益母草碱、益母草啶和益母草宁等。现代研究表明益母草总生物碱对脑缺血再灌注损伤有治疗作用，其中，益母草碱不仅可通过抗氧化作用保护缺血损伤的心肌细胞，还具有神经保护活性。
（2）二萜：近年来对其活性成分研究增多，其中Leoheteronin A和Leopersin G明显抑制乙酰胆碱酯酶活性，在治疗阿尔茨海默病方面有很好的前景；prehispanolone为一种血小板拮抗因子，可抑制血小板聚集；leojaponin对谷氨酸盐损伤的大脑皮层细胞有保护作用；Khan得到的半日花烷型二萜具有抗炎作用等。
随着人们对益母草认识的加深和现代科学技术的进步，益母草药效部位和活性成分的研究迅速开展，但是针对益母草倍半萜的研究还很少。而且抗凝血成分可能与益母草的传统功效“活血”相关，但有关抗凝血成分的研究仍然十分缺乏。由此可见，从益母草中获得抗凝血成分具有很好的前景和研究价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种萜类化合物的新用途；本发明还提供了该类萜类化合物的制备方法。
本发明提供了如下所示的萜类化合物在制备抗凝血药物中的用途，其结构式如下：
式I
其中，R1为H、C1-5的直链烷基、糖基或其中，R2选自C1-4的直链烷基。
进一步地，所述药物是抗血小板聚集药物。
更进一步地，所述药物是抗血栓的药物。目前，抗凝血药物多用于防治血栓形成的疾病。
进一步地，所述化合物结构式如下：
式Ⅱ。
进一步地，所述化合物为2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮。
优选地，所述化合物为(2S,5S)-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮。
本发明还提供了上述（2S,5S)-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮的提取纯化方法，它包括如下操作步骤：
（1）称取益母草药材，粉碎，加95%v/v乙醇提取，提取液减压回收溶剂后，得到乙醇浸膏；
（2）将乙醇浸膏用水分散，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，得乙酸乙酯浸膏；
（3）采用硅胶柱色谱对乙酸乙酯浸膏进行分离，石油醚：丙酮=(100:1)～(0:1)梯度洗脱，取石油醚-丙酮=10:1洗脱部分上反相聚苯乙烯型树脂柱，30-100%v/v甲醇水溶液梯度洗脱，收集50%甲醇洗脱部分，再上凝胶柱色谱，石油醚-氯仿-甲醇=5:5:1洗脱，薄层追踪，收集含有目标化合物的洗脱液，回收溶剂，剩余物再先后经制备薄层色谱、反相液相制备色谱分离，纯化即得。
其中，制备薄层色谱的展开剂为分离石油醚-丙酮=8:1，反相液相制备色谱的流动相为75%v/v甲醇水溶液。
其余糖苷类、醚类、酯类化合物，均可用2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮为原料，采用常规合成方法制备即可。
本发明从益母草中首次分离得到的紫罗烷类倍半萜化合物，在体外可以明显抑制血小板聚集，且对凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）和凝血酶时间（TT）有延长趋势，具有一定的抗凝血活性，为抗血栓天然药物的开发提供了新的选择。
附图说明
图1化合物1的ESI-MS图
图2化合物1的1H-NMR图
图3化合物1的13C-NMR图
图4化合物1对体外ADP诱导血小板聚集的抑制作用图
图5化合物1对凝血功能的影响结果图
具体实施方式
实施例1(2S,5S)-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮（化合物1）的提取、分离纯化和结构鉴定
（1）实验材料：
①药材
益母草采自四川成都温江区，经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的全草。
②试剂和填料
柱层析硅胶，200～300目（试剂级），购于青岛海洋硅胶干燥剂厂；
薄层层析硅胶G、GF254和H（化学纯），购于青岛海洋硅胶干燥剂厂；
MCI gel CHP20P，75～150μm，为反相聚苯乙烯型树脂，购于日本三菱化学公司；
Sephadex LH-20葡聚糖凝胶，购于瑞典Amersham公司；
GF254硅胶制备薄层，购于烟台江友硅胶开发有限公司；
色谱甲醇，4L/瓶，购于美国Fisher公司；
石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、甲醇等分析纯试剂，购于成都科龙化工试剂厂。
③实验仪器
Cometro6000高效液相色谱仪（美国Cometro）；
Waters Synapt G2HDMS高分辨飞行时间质谱（美国Waters）；
Bruker-AV-400核磁共振仪（瑞士Bruker）；
Vector22FT-IR红外光谱仪（瑞士Bruker）；
Shimadzu UV-260紫外-可见分光光度仪（日本Shimadzu）；
Perkin-Elmer341旋光测定仪（美国PerkinElmer）；
BP211D十万分之一电子天平（瑞士Sartorius）；
R-210旋转蒸发器（瑞士BUCHI）；
DZG-6050型真空干燥箱（上海森信）。
（2）药材的提取：称取益母草药材20Kg，粉碎，加95%乙醇(3×160L)提取72小时，提取3次，提取液合并后，减压回收溶剂后，得到乙醇浸膏1.2Kg；
（3）成分的分离纯化：
①将乙醇浸膏1.2Kg用水(10L)分散，依次用乙酸乙酯(3×10L)、正丁醇(3×10L)萃取，合并乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，得乙酸乙酯浸膏400g；
②采用硅胶柱色谱对乙酸乙酯浸膏进行分离，硅胶的型号及用量分别为200～300目和4Kg，以石油醚-丙酮=(100:1)～(0:1)梯度洗脱，收集石油醚-丙酮（10:1）洗脱部分，记为F；
③进一步采用MCI树脂柱（反相聚苯乙烯型树脂柱）对F7进行分离，树脂型号为CHP20P(75–150μm)，用量为500g，以30-100%甲醇水溶液梯度洗脱，收集50%甲醇洗脱部分，记为F1；
④步骤③中的F1部分用葡聚糖凝胶柱色谱分离，葡聚糖凝胶型号为Sephadex LH-20(20–150μm)，用量为150g，以石油醚-氯仿-甲醇=5:5:1洗脱，薄层追踪，收集目标化合物洗脱液，减压回收溶剂，得化合物粗品；
⑤采用制备薄层色谱对步骤④中的化合物粗品进行纯化，制备薄层板的规格为(硅胶材料GF254，尺寸20×20cm，厚度0.45μm)，展开剂为石油醚-丙酮=8:1，展开后自然晾干，刮取主斑点带处的硅胶，随后以25mL丙酮洗脱刮取的硅胶部分，洗脱2次，合并丙酮洗脱液，减压回收溶剂，得剩余物；
⑥步骤⑤中的剩余物进一步采用反相液相制备色谱分离，色谱柱型号为：Ultimate型半制备柱(250×10mm)，填料为C18(5μm)；流速为1.5mL/min；检测波长为210nm；流动相为75%甲醇水溶液；出峰时间约21min。收集色谱主峰（约21min的色谱峰），减压回收溶剂，即得化合物(2S,5S)-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮。
（4）上述方法分离得到的化合物的结构鉴定：无色胶状物；254nm下有暗斑，碘显黄色，10%H2SO4-EtOH液显橙红色；由ESI-MS可知分子量为224，结合NMR数据，推断分子式为C13H20O3。化合物1H-NMR显示4个甲基单峰信号（δ:0.98,1.02，1.58,2.08），3个亚甲基信号[δ:2.48(1H,d,J=18.0Hz,H-9a),2.40(1H,d,J=18.0Hz,H-9b),1.91-2.02(4H,m,H2-3,H2-4)]，1个孤立烯氢质子信号[δ:5.67(s,H-7)]；化合物13C-NMR和DEPT谱显示13个碳信号，包括1个共轭羰基（δc:197.1），1个共轭双键（δc:168.1和125.8），1个氧杂螺环碳原子（δc:107.2），1个连氧季碳（δc:91.2），1个脂肪季碳（δc:42.2），3个亚甲基（δc:50.4,39.4和31.7），4个甲基（δc:27.3,25.2,23.4和21.0）。结合以上信息与参考文献（J.Agric.Food Chem.1997,45,1309–1313），确定化合物的结构为(2S,5S)-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮，具体波谱数据见表1。
表1.1H-NMR(400MHz)和13C-NMR(100MHz)核磁数据（测定溶剂：Me2CO-d6；δ：ppm；J：Hz)
本发明化合物也可以按照“J.Agric.Food Chem.1997,45,1309-1313”中的方法提取纯化，若需制备旋光化合物，取外消旋体分离即可。
以下通过试验例来具体说明本发明的有益效果。
试验例1血小板聚集试验
（1）实验材料：
①药物
受试化合物（化合物1）用DMSO配置成1×10-2mol/L的贮备液，-10℃保存，临用前用生理盐水稀释成1×10-4mol/L。
②动物
SD大鼠，清洁级，雌雄不拘，体重200～240g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供。生产质量合格证号：SCXK（川）2008-11。
③试剂
二磷酸腺苷二钠（adenosine-5′-diphosphate,ADP），美国sigma公司生产，国内分装，1g/瓶。
二甲基亚砜（DMSO），分析纯，500ml/瓶，购于成都科龙化工试剂厂。
④实验仪器
多通道血小板聚集仪（APACT/2型，德国兰波）
电子天平（ESJ120-4型，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；
水浴锅，低温冰箱等。
（2）实验方法：
选用成年、健康SD大鼠，雌雄不拘，适应环境后，股动脉采血，以3.8%枸椽酸钠与血液1：9的比例抗凝，然后以800r/min离心10min，制备富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP），剩余部分以3000r/min离心10min制备贫血小板血浆（platelet-poor plasma,PPP）。以PPP调零，取200μl PRP加入比浊管中37℃温育5min，加入20μl受试药物溶液，使得终浓度均为1×10-5mol/L，空白组加入1%DMSO溶液。混匀后继续温育5min，然后加入ADP20μl（终浓度为0.05mg/ml）诱导聚集。用血小板聚集仪检测血小板最大聚集率，按下列公式计算血小板聚集抑制率（AIR）：
AIR=[（空白对照组最大聚集率-给药组最大聚集率）/空白对照组最大聚集率]×100%
③实验结果和评价：
结果显示，化合物在终浓度为1×10-5mol/L时，对体外ADP诱导的血小板最大聚集率有明显抑制作用（P<0.01），空白组的血小板最大聚集率为61.4±9.44%，而受试化合物的血小板最大聚集率为42.0±15.63%(P<0.01)，见附图4和表2，计算得到抑制率（AIR）为31.6%，表明受试物具有明显的血小板聚集抑制作用。
表2化合物对体外血小板聚集和凝血功能的影响
注：与溶剂空白对照组比较，**P<0.01。
试验例2凝血功能试验
（1）实验材料：
①药物
受试化合物（化合物1）用DMSO配置成1×10-2mol/L的贮备液，-10℃保存，临用前用生理盐水稀释成1×10-4mol/L。
②动物
SD大鼠，清洁级，雌雄不拘，体重200～240g，由成都中医药大学实验动物研究中心提供。生产质量合格证号：SCXK（川）2008-11。
③试剂
二磷酸腺苷二钠（adenosine-5′-diphosphate,ADP），美国sigma公司生产，国内分装，1g/瓶。
PT、APTT试剂盒，均由上海太阳生物技术有限公司生产，批号分别为105197、112133。
二甲基亚砜（DMSO），分析纯，500ml/瓶，购于成都科龙化工试剂厂。
④实验仪器
全自动血凝仪（CA-500系列，日本Sysmex公司）；
电子天平（ESJ120-4型，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）；
水浴锅，低温冰箱等。
（2）实验方法：
选用成年、健康SD大鼠，雌雄不拘，适应环境后，股动脉采血，以3.8%枸椽酸钠与血液1：9的比例抗凝，将抗凝血以3500r/min离心10min，收集血浆，将每只大鼠血浆分为2管，分别按血浆与药物体积比例为9：1的比例加入1%DMSO和受试化合物，其药物终浓度为1×10-5mol/L，混匀后温育5min，然后采用全自动血凝仪用PT、APTT试剂盒测定各组的凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）和凝血酶时间（TT）。
③实验结果和评价：
结果见附图5和表3。
表3
结果显示，在凝血功能方面，受试化合物组的PT、APTT和TT值较空白组均有延长趋势，说明化合物1具有一定抑制凝血的作用。
本发明从益母草中首次分离得到的紫罗烷类倍半萜化合物，在体外可以明显抑制血小板聚集，且对凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）和凝血酶时间（TT）有延长趋势，具有一定的抗凝血活性，为抗血栓天然药物的开发提供了新的选择。

Claims (7)

1.如下所示的萜类化合物在制备抗凝血药物中的用途，其结构式如下：
其中，R1为H、C1-5的直链烷基、糖基或其中，R2选自C1-4的直链烷基。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是抗血小板聚集药物。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述药物是抗血栓的药物。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述化合物结构式如下：
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述化合物为2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮。
6.根据权利要求1、4或5所述的用途，其特征在于：所述化合物为(2S,5S)-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮。
7.权利要求6所述（2S,5S）-2-羟基-2,6,10,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]葵-6-烯-8-酮的提取纯化方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
（1）称取益母草药材，粉碎，加95%v/v乙醇提取，提取液减压回收溶剂后，得到乙醇浸膏；
（2）将乙醇浸膏用水分散，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯部分，减压回收溶剂，得乙酸乙酯浸膏；
（3）采用硅胶柱色谱对乙酸乙酯浸膏进行分离，石油醚：丙酮=(100:1)～(0:1)梯度洗脱，取石油醚-丙酮=10:1洗脱部分上反相聚苯乙烯型树脂柱，30-100%v/v甲醇水溶液梯度洗脱，收集50%甲醇洗脱部分，再上凝胶柱色谱，石油醚-氯仿-甲醇=5:5:1洗脱，薄层追踪，收集含有目标化合物的洗脱液，回收溶剂，剩余物再先后经制备薄层色谱、反相液相制备色谱分离，纯化即得；
其中，制备薄层色谱的展开剂为石油醚-丙酮=8:1，反相液相制备色谱的流动相为75%v/v甲醇水溶液。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1724000A (zh) * 2004-07-22 2006-01-25 孙毅 一种用于心脑血管的注射剂及制备方法
CN101062089A (zh) * 2007-05-23 2007-10-31 王军 益母草汤剂
CN101683441A (zh) * 2008-09-23 2010-03-31 天津市中宝制药有限公司 一种活血解瘀中药组合物

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1724000A (zh) * 2004-07-22 2006-01-25 孙毅 一种用于心脑血管的注射剂及制备方法
CN101062089A (zh) * 2007-05-23 2007-10-31 王军 益母草汤剂
CN101683441A (zh) * 2008-09-23 2010-03-31 天津市中宝制药有限公司 一种活血解瘀中药组合物

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