CN104815333A - 一种聚离子胶束纳米粒子的制备方法及其应用 - Google Patents

一种聚离子胶束纳米粒子的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种聚纳米胶束的制备方法及其应用。所述纳米粒子由羧甲基壳聚糖和阳离子性多肽在缓冲溶液中以非共价键形式，通过自组装制备而成。本发明的纳米胶束粒子制备方法简单，在室温、缓存溶液中即可制备，不使用任何有机试剂以及其它有害化学物质，粒径200nm左右，且粒径分布均一，在多种溶液中均能够较长时间保持稳定性。本发明制备的纳米胶束可作为水溶性治疗试剂(光敏剂、化疗药物和核酸等)的载体，能够提高治疗试剂的稳定性能。

Description

一种聚离子胶束纳米粒子的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于生物医药材料领域。具体涉及一种基于阳离子细胞穿透肽与羧甲基壳聚糖的聚离子胶束纳米粒子的制备方法及其作为水溶性治疗试剂载体方面应用。
背景技术
聚离子胶束(Polyion complex micelles,PICMs)是由两种或两种以上带相反电荷的聚合物自组装形成的致密粒子。由于具有亲水段，它能稳定的分散在水相中。PICMs广泛用于纳米反应器，生物传感器，核磁共振成像剂的制备。然而，PICMs作为治疗试剂(光敏剂、酶、蛋白、肝素、阿霉素和核酸等)的载体才是目前研究的热点。这是由于作为治疗试剂的载体，PICMs具有以下优点：(1)包载带电荷治疗试剂越过生物环境屏障，这是由于PICMs具有一层水化层，能够避免肝脏和脾脏的单核吞噬细胞系统清除，从而延长血液循环时间；(2)PICMs的粒径为30nm到200nm,从而避免了被肾脏快速清除，同时通过增强透过和滞留效应(EPR effect)将药物被动传输到肿瘤部；(3)将特定的靶向配体链接在PICMs上可以达到主动靶向的作用；(4)作为药物的载体，PICMs能够有效得包载药物，避免泄漏和相关酶降解。
壳聚糖(聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-β-D葡萄糖)是一种广泛存在于自然界的甲壳素经过脱乙酰作用得到的多聚糖。壳聚糖的无毒性、生物可降解性、生物相容性等特点使其广泛应用于生物医药中，如：药物载体系统、基因载体、伤口敷料、组织工程等。但不溶解于水的弊端使壳聚糖的发展受限。羧甲基壳聚糖(Carboxymethly chitosan,CMCS)是壳聚糖羧甲基化后的壳聚糖衍生物，其具有良好的水溶性，并且同时兼具良好的稳定性能以及生物可降解性，逐渐成为研究的热点。O-羧甲基壳聚糖是羧甲基壳聚糖研究最为广泛的一种类型，分子中包含大量羧基的同时，也含有氨基，是一种两性离子聚合物，具有无毒性、生物可降解性、生物相容性、抗菌和真菌活性等优点，因此在生物医药中备受关注。
细胞穿透肽(Cell penetrate peptides，CPPs)是一类具有特殊细胞膜穿透功能的短肽，是一类由不多于30个氨基酸残基组成的小分子多肽，具有很强的跨膜转运能力。根据其氨基酸的组成，可分为阳离子性CPPs和两亲性CPPs，其中阳离子性细胞穿莫肽中的氨基酸残主要为精氨酸和赖氨酸组成，这类CPPs主要包括：核转入激活因子Tat蛋白有效区域，Tat-(47-57)(YGRKKRRQRRR),小分子寡聚精氨酸(Rn)、小分子寡聚赖氨酸等。CPPs可以充当药物分子的运载工具，将包括亲水性蛋白质、多肽、核酸(DNA、siRNA和miRNA)、小分子药物、光敏剂、造影剂等在内的多种分子，通过共价键或者非共价键的形式与目标分子链接，高效低递送到细胞内。尽管CPPs能够有效地而广泛地介导外源性物质进入细胞，但是单独的多肽半衰期较短，并且缺乏病灶组织和细胞特异性，能够进入几乎所有的细胞，同时作为阳离子大分子，容易与血浆中带负电性血浆蛋白等相互作用而导致聚集，并被机体免疫系统清楚，因此限制了其临床的应用。为了解决以上问题，目前研究较多的是将CPPs与其它靶标分子结合，或者通过化学反应链接上PEG分子，或者结合到已经构建好的纳米载体上，利用纳米载体具有的特殊理化性质，进行物质的运输。
当前聚离子胶束的形成，大部分是聚合物-聚合物之间相互作用形成，将CPPs作为形成聚离子胶束的组成成分，与羧甲基壳聚糖自组装形成纳米胶束，不牵涉复杂的化学反应以及任何有毒溶剂，并作为水溶性治疗试剂载体的应用，尚未见报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种基于阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子的制备方法。本发明提供的制备方法简单易操作，绿色环保，不涉及繁琐的化学反应和有毒的有机化学试剂，利于工业化生产。
本发明的另一目的在于将所述的阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子应用于水溶性治疗试剂的载体上。
为实现本发明的第一个目的，本发明提供了一种纳米胶束的制备方法，是通过活性成分O-羧甲基壳聚糖和阳离子细胞穿透肽在缓冲溶液中按照一定的质量比，通过正、负电荷间的静电相互作用，自组装形成纳米胶束。
一种聚离子纳米胶束纳米粒子，其特征在于，由多肽与羧甲基壳聚糖组成；所述多肽为水溶性、阳离子性、且具有细胞穿透功能的多肽。
进一步，所述多肽为寡聚精氨酸Rn、寡聚赖氨酸Kn、HIV-1的TAT蛋白功能区TAT肽、HIV-1Rev、低分子量鱼精蛋白中的至少一种；所述羧甲基壳聚糖为O-羧甲基壳聚糖，取代度为80％-95％，分子量为50-110KDa。
进一步，，粒径为100-250nm,表面带负电荷，Zeta电位为-35～-40mV。
所述聚离子胶束纳米粒子的方法，其特征在于，由羧甲基壳聚糖和阳离子性多肽在缓冲溶液中以非共价键形式，通过在溶液中自组装法制备而成。
进一步，其特征在于，包括以下步骤：
(a)用pH＝7.4的Tris-Hcl缓冲溶液制备多肽溶液，羧甲基壳聚糖溶液；将上述两种溶液分别过0.22μm的微孔滤膜；
(b)使用磁力搅拌器不断搅拌上述的羧甲基壳聚糖溶液中；
(c)将步骤(a)所述的多肽溶液逐滴滴加到步骤(b)所述的羧甲基壳聚糖溶液中；
(d)将步骤(c)得到的最后溶液搅拌，放置稳定，离心，用超纯水复溶，继续离心复溶，重复三次，得到聚离子胶束纳米粒子。
进一步，步骤(a)所述多肽溶液浓度为0.5-2mg/mL；所述羧甲基壳聚糖溶液浓度为1-4mg/mL；所述多肽溶液与羧甲基壳聚糖溶液体积比为1:2-1:4。
进一步，将多肽溶液滴加到羧甲基壳聚糖溶液中的滴加速度为1mL/min,滴加过程中溶液需不断搅拌。
进一步，步骤(c)搅拌温度为25-30℃，时间为5-10min。
步骤(d)所述稳定时间为15-20min；离心速度为10000-12000rpm，时间10-15min。
所述的聚离子胶束纳米粒子的应用，其特征在于，作为水溶性治疗试剂的载体。
所述水溶性治疗试剂的载体包括水溶性光敏剂、抗肿瘤药物、蛋白质或功能性核酸分子的载体。
优选地，所述羧甲基壳聚糖为O-羧甲基壳聚糖，取代度为80％-95％，分子量为50-110KDa。
优选地，所述阳离子细胞穿透肽包括寡聚精氨酸Rn、寡聚赖氨酸Kn、HIV-1的TAT蛋白功能区TAT肽、HIV-1Rev、低分子量鱼精蛋白中的至少一种。
更一步优选地，所述阳离子细胞穿透肽为Tat(YGRKKRRQRRR)。
具体包括以下步骤：
(a)用pH＝7.4Tris-Hcl缓冲溶液制备阳离子细胞穿透肽Tat溶液，羧甲基壳聚糖水溶液。将上述两种溶液分别过0.22μm的微孔滤膜，并将羧甲基壳聚糖溶液加入到25mL的圆底烧瓶中。
(b)使用磁力搅拌器不断搅拌上述的羧甲基壳聚糖溶液，搅拌速度较佳为500r/min。
(c)将步骤(a)所述的多肽溶液逐滴滴加到步骤(a)所述的羧甲基壳聚糖溶液中，采用逐滴滴加方法。
(d)将步骤(c)得到的最后溶液搅拌，放置稳定，离心，用超纯水复溶，继续离心复溶，重复三次，得到阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子。
(e)将步骤(d)得到的阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子复溶到所需溶液中，即得到分散阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子溶液。
步骤(a)中所述多肽溶液浓度为0.5-2mg/mL，优选为1mg/mL，所述羧甲基壳聚糖溶液浓度为1-4mg/mL，优选为2mg/mL。所述Tat溶液与羧甲基壳聚糖溶液体积比为1:2-4，优选为1:2。
步骤(c)中所述的溶液混合过程，采用逐滴滴加方法，优选速度为0.5-1mL/min,滴加过程中溶液需不断搅拌。
步骤(c)中所述搅拌温度为25-30℃，时间5-10min，优选为25℃，10min。
步骤(d)中所述放置稳定时间15-20min，优选为20min；离心速度为10000-12000rpm，时间10-15min，优选为12000rpm，10min。
本发明制得的鱼精蛋白/羧甲基壳聚糖聚离子胶束(PS/CMCS)纳米粒子，生物相容性效果好，毒性低，作为药物载体材料具有肿瘤组织被动靶向作用，同时能够在肿瘤酸性微环境中解散，达到控制释放药物的作用。因此，本发明中的一种基于阳离子多肽-羧甲基壳聚糖的阴离子纳米胶束的制备方法具有广泛的应用性。
本发明制备出的纳米胶束可以用于包载多种水溶性治疗试剂，如光敏剂吲哚青绿(ICG)、化疗药物阿霉素(DOX)、核酸(siRNA、miRNA)等。该载体具有很好的稳定性能，在多种溶液条件下均能较长时间稳定的存在，并且增强包载物的稳定性。
为了更好地理解本发明，现以核酸类miRNA为例，提供一种包裹miRNA的聚离子胶束纳米粒子的制备方法，但不能认为这是对本发明的产品及其制备方法的限定。
一种载有miRNA的纳米胶束的制备方法，包载效率可达90％以上，具体步骤包括：
(1)将20μg miRNA溶解于100μL无RNA酶的超纯水中。
(2)用pH＝7.4Tris-Hcl缓冲溶液制备1mg/mL阳离子细胞穿透肽溶液，2mg/mL羧甲基壳聚糖溶液。将上述两种溶液分别过0.22μm的微孔滤膜，并将羧甲基壳聚糖溶液加入到25mL的圆底烧瓶中。
(3)使用磁力搅拌器不断搅拌上述(2)中的羧甲基壳聚糖溶液中,搅拌速度较佳为500r/min。
(4)将步骤(1)中的miRNA溶液加入到上述(3)中的不断搅拌的羧甲基壳聚糖溶液中。
(5)将步骤(1)所述的多肽溶液逐滴滴加到步骤(4)所述的羧甲基壳聚糖溶液中，采用逐滴滴加方法。
(6)将步骤(5)得到的最后溶液搅拌，放置稳定，离心，用超纯水复溶，继续离心复溶，重复三次，得到包载有miRNA的阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖胶束纳米粒子。
(7)将步骤(6)得到的阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子纳米胶束复溶到所需溶液中，即得到分散性的包载有miRNA的阳离子细胞穿透肽-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子溶液。
本发明具有如下技术优点：
1.本发明纳米胶束的制备方法简单易操作，是通过溶液中带有不同电荷的多肽与羧甲基壳聚糖之间静电相互作用，自组装形成的，不涉及繁琐的化学反应和有毒的有机化学试剂，利于工业化生产。
2.利用了阳离子性细胞穿透肽作为自组装原件，不仅可以利用细胞穿透肽将强的细胞穿透能力，而且通过引进羧甲基壳聚糖，形成了表面带有负电荷、粒径合适均一的纳米胶束，有助于在各种复杂环境下稳定存在，提高了细胞穿透肽的应用能力，另一方面负电性能够显著减少由阳离子多肽导致的细胞毒性。
3.本发明制备的纳米胶束，能够作为多种水溶性治疗试剂的载体，可以增加包载物的稳定性，并且通过缓慢释放的形式增减了包载物的作用时间，从而能够提高利用度。
附图说明
图1为实施例1中的TAT-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子的透射电镜图；
图2为实施例1中的TAT-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子光散射得到的粒径分布图；
图3为实施例1中的TAT-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子的表面Zeta电位分布图；
图4为实施例1中TAT-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子在不同溶解液中粒径随时间变化示意图；
图5为实施例7中纳米胶束包载miRNA后，miRNA在含有血清的培养基中稳定性研究。
具体实施方式
为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅用于帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业得到。
多肽合成：
Tat多肽，由上海强耀公司利用固相多肽合成法合成，并进行了纯化分析。
miRNA合成：由广州锐博生物技术公司合成，并进行纯化分析。
利用透射电镜(TEM,美国FEI,Tecnai G220S-TWIN，200kV)对以下实施例中所得到的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat/CMCS)纳米粒子进行形貌特征观察。制样方法：用Milli-Q超纯水将纳米粒子稀释成0.05-0.2mg/ml溶液，取10-20μl样品滴加到含有碳支持膜的230目铜网上，恒温干燥；取5μl1-2％醋酸双氧铀染色5min，滤纸吸干染色液，常温干燥后，用TEM观察样品形态。
利用激光粒度仪(DLS,英国Malvern,Zetasizer NanoZS)对以下实施例中所得到的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat/CMCS)纳米粒子进行水合粒径、多分散指数(Polydispersity,PDI)和表面ζ电位。测试条件：Tat/CMCS纳米粒子溶液浓度为0.5mg/ml，温度25℃，角度90℃，激光波长633nm,每次检测前恒温20min，每个样品测试三次，取平均值。
实施例1 Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束纳米粒子的制备
(a)用pH＝7.4的Tris-Hcl缓冲溶液精确制备浓度为2.0mg/ml的羧甲基壳聚糖(CMCS)溶液，1.0mg/ml的Tat多肽溶液。将CMCS溶液和Tat溶液分别过0.22μm的微孔滤膜，备用。将CMCS溶液加入到25mL的圆底烧瓶中，并将其置于磁力搅拌器上，以500r/min的速度持续搅拌。在25℃下，取1ml Tat溶液逐滴滴加入上述2ml的CMCS溶液中，滴加速率为1.0ml/min。两种溶液混合后，25℃条件下继续搅拌10min后，静置20min。将混合溶液在10000rpm的离心速度下，离心10min，用3ml Milli-Q超纯水将所得纳米粒子复溶，继续在10000rpm的离心速度下，离心10min，重复三次，得到纯净的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat/CMCS)纳米粒子，冷冻干燥，备用。
(b)用Milli-Q超纯水精确制备浓度为0.05mg/ml的纳米粒子样品溶液，取10-20μl样品溶液滴加到含有碳支持膜的230目铜网上，恒温干燥；取5μl 1-2％醋酸双氧铀染色5min，滤纸吸干染色液，常温干燥后，用透射电镜(TEM,美国FEI,Tecnai G220S-TWIN，200kV)观察样品形态。
(c)用Milli-Q超纯水精确制备浓度为0.5mg/ml的纳米粒子样品溶液。取1ml样品溶液，用激光粒度仪(DLS,英国Malvern,Zetasizer NanoZS)测定纳米粒子水合粒径、多分散指数(Polydispersity，PDI)和表面ζ电位。测定条件：温度25℃，角度90°，激光波长633nm，每次检测前恒温20min，每个样品测试三次，结果取平均值。
各项检测图谱见图1至图3。其中，图1为实施例1中的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat-CMCS)纳米粒子的透射电镜图。从该图1可以看出，Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(PS/CMCS)纳米粒子具有规整的圆球形结构，干态粒径在100nm左右。
图2为实施例1中的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat-CMCS)纳米粒子的光散射示意图的粒径分布图，其中平均粒径为150nm，多分散指数为0.021。与图1相比较，粒径较电镜图中的粒径大，这是由于透射电子显微镜样品制备过程中胶束壳层的塌陷收缩，在真空环境下使得胶束缩小，而动态光散射测定的是具有核壳结构的胶束在溶液中完全舒展时的水合力学直径，在水中存在亲水性外壳溶胀。
图3为实施例1Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat-CMCS)纳米粒子的光散射示意图的电位分布图。从图3可以看出Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat-CMCS)纳米粒子表面带一定的负电荷，平均Zeta电位为-38.1mV。纳米粒子表面带一定的电荷有利于粒子的稳定性，防止粒子之间相互团聚。
图4为实施例1中的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat-CMCS)纳米粒子在不同溶液(蒸馏水，pH为7.4的PBS,含10％牛血清的RMPI 1640培养液，生理盐水)中粒径随时间变化示意图。从图4可以看出，在蒸馏水中，聚离子胶束纳米粒子的粒径第一天为148.1nm，第二天为149.2nm，第三天为152.4nm，第四天为153.4nm，粒径变化小于10％；同样在pH为7.4的PBS,含10％牛血清的RMPI 1640培养液，生理盐水变化也小于10％。由此说明该聚离子胶束纳米粒子在生理环境中稳定性好，这是由于纳米粒子表面带一定的负电荷，阻止纳米粒子相互聚集形成大粒径颗粒。
实施例2 包载miRNA纳米胶束的制备
(a)用pH＝7.4的Tris-Hcl缓冲溶液精确制备浓度为2.0mg/ml的羧甲基壳聚糖(CMCS)溶液，1.0mg/ml的Tat多肽溶液。用无100μL无RNA酶的水溶解20μg miRNA，备用。将CMCS溶液和Tat溶液分别过0.22μm的微孔滤膜，备用。将CMCS溶液加入到25mL的圆底烧瓶中，并将其置于磁力搅拌器上，以500r/min的速度持续搅拌。将溶解由miRNA的溶液加到CMCS溶液中。在25℃下，取1ml Tat溶液逐滴滴加入上述2ml的CMCS溶液中，滴加速率为1.0ml/min。两种溶液混合后，25℃条件下继续搅拌10min后，静置20min。将混合溶液在10000rpm的离心速度下，离心10min，用3ml Milli-Q超纯水将所得纳米粒子复溶，继续在10000rpm的离心速度下，离心10min，重复三次，得到纯净的Tat-羧甲基壳聚糖聚离子胶束(Tat-CMCS)纳米粒子，冷冻干燥，备用。
实施例3 MiRNA包载效率的测试
将实施例中的上清液分析，用紫外分光光度计在260nm波长下测试上清液中的miRNA残余量，与投入量进行比较进而计算出miRNA的包载效率，测定得到的包载量为92％。
实施例4 纳米胶束包载miRNA后对其在血浆中稳定性测定
将实施例2中的包载miRNA的聚离子胶束纳米粒子和等量的单独裸miRNA溶液，加入到含有50％血清的1640培养基中，37℃下孵育0、6、12、24h后，加入5μL 12％SDS溶液，以从纳米胶束中竞争性的置换出miRNA。取7μL样品与甘油混合，110V电压，于2％的琼脂糖凝胶电泳上进行电泳(含有0.5mg/mL EB),10min后观察，拍照。
从图5可以得知，单独的miRNA由于本身性质，很容易被血浆中的RNA酶降解，因此限制了其直接使用。纳米载体能够显著地保护miRNA不受酶的降解。由图5可以看出，随着时间的增加，单独的裸miRNA在含有50％血清中的培养基中逐渐降解了，以致于在24h后，由图片上的条带上，几乎观察不到miRNA了。与之对比的是，该聚离子胶束纳米粒子包载的miRNA几乎不随着时间的增长而降解，即使在24h后，miRNA的条带依然清晰。以上结果说明，通过纳米胶束的包载后，对miRNA具有很好的保护能力，能够避免受血浆中的RNA酶所降解。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细工艺设备和工艺流程，但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程，即不意味着本发明必须依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种聚离子纳米胶束纳米粒子，其特征在于，由多肽与羧甲基壳聚糖组成；所述多肽为水溶性、阳离子性、且具有细胞穿透功能的多肽。
2.根据权利要求1所述的聚离子纳米胶束纳米粒子，其特征在于，所述多肽为寡聚精氨酸Rn、寡聚赖氨酸Kn、HIV-1的TAT蛋白功能区TAT肽、HIV-1 Rev、低分子量鱼精蛋白中的至少一种；所述羧甲基壳聚糖为O-羧甲基壳聚糖，取代度为80％-95％，分子量为50-110KDa。
3.根据权利要求1-2任意一项所述聚离子胶束纳米粒子：其特征在于，粒径为100-250nm,表面带负电荷，Zeta电位为-35～-40mV。
4.制备如权利要求1-3任意一项所述聚离子胶束纳米粒子的方法，其特征在于，由羧甲基壳聚糖和阳离子性多肽在缓冲溶液中以非共价键形式，通过在溶液中自组装法制备而成。
5.制备权利要求1-3任一项所述的聚离子胶束纳米粒子的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)用pH＝7.4的Tris-Hcl缓冲溶液制备多肽溶液，羧甲基壳聚糖溶液；将上述两种溶液分别过0.22μm的微孔滤膜；
(b)使用磁力搅拌器不断搅拌上述的羧甲基壳聚糖溶液中；
(c)将步骤(a)所述的多肽溶液逐滴滴加到步骤(b)所述的羧甲基壳聚糖溶液中；
(d)将步骤(c)得到的最后溶液搅拌，放置稳定，离心，用超纯水复溶，继续离心复溶，重复三次，得到聚离子胶束纳米粒子。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(a)所述多肽溶液浓度为0.5-2mg/mL；所述羧甲基壳聚糖溶液浓度为1-4mg/mL；所述多肽溶液与羧甲基壳聚糖溶液体积比为1:2-1:4。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将多肽溶液滴加到羧甲基壳聚糖溶液中的滴加速度为1mL/min,滴加过程中溶液需不断搅拌。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(c)搅拌温度为25-30℃，时间为5-10min；
步骤(d)所述稳定时间为15-20min；离心速度为10000-12000rpm，时间10-15min。
9.根据权利要求1-2任意一项所述的聚离子胶束纳米粒子的应用，其特征在于，作为水溶性治疗试剂的载体。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述水溶性治疗试剂的载体包括水溶性光敏剂、抗肿瘤药物、蛋白质或功能性核酸分子的载体。
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