CN104800831B - 寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 - Google Patents
寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104800831B CN104800831B CN201410033350.8A CN201410033350A CN104800831B CN 104800831 B CN104800831 B CN 104800831B CN 201410033350 A CN201410033350 A CN 201410033350A CN 104800831 B CN104800831 B CN 104800831B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lys
- phe
- gly
- sqffglm
- val
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- XADCESSVHJOZHK-UHFFFAOYSA-N Meperidine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(C(=O)OCC)CCN(C)CC1 XADCESSVHJOZHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 23
- 229960000482 pethidine Drugs 0.000 title claims abstract description 23
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 16
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 33
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 11
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 7
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 37
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 37
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 32
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 30
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 23
- TZXKOCQBRNJULO-UHFFFAOYSA-N Ferriprox Chemical compound CC1=C(O)C(=O)C=CN1C TZXKOCQBRNJULO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 102100039365 Tachykinin-4 Human genes 0.000 description 17
- 102000003840 Opioid Receptors Human genes 0.000 description 16
- 108090000137 Opioid Receptors Proteins 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 108010040718 Neurokinin-1 Receptors Proteins 0.000 description 14
- 102000002002 Neurokinin-1 Receptors Human genes 0.000 description 14
- 108010069820 Pro-Opiomelanocortin Proteins 0.000 description 14
- 239000000683 Pro-Opiomelanocortin Substances 0.000 description 14
- 102100027467 Pro-opiomelanocortin Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 101000669528 Homo sapiens Tachykinin-4 Proteins 0.000 description 12
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 11
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 11
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 10
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 10
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 9
- 102100024622 Proenkephalin-B Human genes 0.000 description 9
- 102000048260 kappa Opioid Receptors Human genes 0.000 description 9
- 108010074732 preproenkephalin Proteins 0.000 description 9
- 108020001588 κ-opioid receptors Proteins 0.000 description 9
- 102100038931 Proenkephalin-A Human genes 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 8
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 108010041071 proenkephalin Proteins 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 102100024304 Protachykinin-1 Human genes 0.000 description 5
- 101710149435 Tachykinin-4 Proteins 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 108010041634 preprotachykinin Proteins 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 101000600903 Homo sapiens Substance-P receptor Proteins 0.000 description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 4
- 102100037346 Substance-P receptor Human genes 0.000 description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 4
- 230000035611 feeding Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 3
- 101800000399 Neurokinin A Proteins 0.000 description 3
- 102400000097 Neurokinin A Human genes 0.000 description 3
- HEAUFJZALFKPBA-YRVBCFNBSA-N Neurokinin A Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)O)C1=CC=CC=C1 HEAUFJZALFKPBA-YRVBCFNBSA-N 0.000 description 3
- 102000046798 Neurokinin B Human genes 0.000 description 3
- NHXYSAFTNPANFK-HDMCBQFHSA-N Neurokinin B Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=CC=C1 NHXYSAFTNPANFK-HDMCBQFHSA-N 0.000 description 3
- 101800002813 Neurokinin-B Proteins 0.000 description 3
- 102000001490 Opioid Peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 3
- 239000003399 opiate peptide Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 101001122476 Homo sapiens Mu-type opioid receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 2
- 102100028647 Mu-type opioid receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010093625 Opioid Peptides Proteins 0.000 description 2
- 108070000021 Opioid peptides receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000008896 Opium Substances 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 2
- 230000000146 antalgic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 102000051367 mu Opioid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 2
- 229960001027 opium Drugs 0.000 description 2
- 230000008058 pain sensation Effects 0.000 description 2
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108060008037 tachykinin Proteins 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 108020001612 μ-opioid receptors Proteins 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynonadecane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000073 Achillea millefolium Species 0.000 description 1
- 235000007754 Achillea millefolium Nutrition 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000002397 Kinins Human genes 0.000 description 1
- 108010093008 Kinins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 1
- -1 MOR Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101500025123 Mus musculus Hemokinin Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000009493 Neurokinin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108050000302 Neurokinin receptors Proteins 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229940123257 Opioid receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 101100244562 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) oprD gene Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101500025128 Rattus norvegicus Hemokinin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- 102000003141 Tachykinin Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000005298 acute pain Diseases 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 229940040563 agaric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- 108700023159 delta Opioid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000048124 delta Opioid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000000841 delta opiate receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- ZTRPYTHOEREHEN-UHFFFAOYSA-N piperazine pyridine Chemical compound N1CCNCC1.N1=CC=CC=C1.N1=CC=CC=C1 ZTRPYTHOEREHEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N substance P Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)C1=CC=CC=C1 ADNPLDHMAVUMIW-CUZNLEPHSA-N 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途。具体而言，本发明涉及寡肽ASQFFGLM‑NH2在提高受试者中哌替啶的镇痛效果的用途。
Description
技术领域
本发明涉及寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途。具体而言，寡肽ASQFFGLM-NH2在提高受试者中δ阿片受体的转录和/或表达水平，并进而能与哌替啶组合或联合用于治疗或减缓疼痛。
背景技术
速激肽是具有共同羧基末端序列(FXGLM-NH2)的肽家族，其最为人所熟知的成员包括：P物质(SP)、神经激肽A(NKA)和神经激肽B(NKB)，它们是从两个不同的基因编码而来：Ppta编码SP、NKA；Pptb编码NKB。在2000年和2002年，第三个前速激肽基因Pptc被鉴定，它编码HK-1。HK-1最初是在小鼠造血细胞中被鉴定出来，它在祖B细胞发育到前B细胞的过程中起着重要的作用。后来，它在大鼠和人中也被鉴定出来。
许多证据表明，人和小鼠HK-1与SP对神经激肽受体具有类似的激活活性，都对神经激肽受体1(NK1受体)有着很高的亲和性和选择性。然而，与r/mHK-1和SP不同的是，hHK-1和hHK-1(4-11)对于神经激肽受体1的亲和性降低许多(分别是14倍和70倍)。一些研究者研究了人和小鼠HK-1在免疫系统、心血管系统和痛觉系统的一些生物学活性。在调控痛觉传递方面，本发明的发明人之前发现，r/mHK-1和hHK-1在侧脑室注射后都能产生剂量和时间依赖的镇痛效果，并且神经激肽受体1的拮抗剂和μ阿片受体拮抗剂能够分别显著阻断由r/mKH-1和hHK-1引起的镇痛效果。也就是说r/mKH-1和hHK-1的镇痛效果分别依赖于神经激肽受体1和μ阿片受体。
内源性的阿片肽和阿片受体参与了疼痛的调节过程。目前，临床上大多使用μ阿片受体的激动剂来缓解疼痛，但是其耐受性和极易产生的身体和精神的依赖性等副作用严重制约了其使用。相反，选择性的激活δ阿片受体在产生强效止痛效果的同时，很少有副作用产生。因此，激活δ阿片受体目前被认为是一种理想的止痛手段。有文献报道，上调和增加脊髓水平的δ阿片受体能有效增强δ阿片受体激动剂在慢性炎症性疼痛模型中的止痛效果(C.M.Cahill,A.Morinville,C.Hoffert,D.O’Donnell,A.Beaudet.Up-regulation andtrafficking of δ opioid receptor in a model of chronic inflammation:implications for pain control.Pain,101(2003)199 208.)。
发明内容
为了上调δ阿片受体，本发明的发明人经过长期不懈地努力发现寡肽ASQFFGLM-NH2能够上调δ阿片受体的表达。
因此，本发明一方面提供了一种上调受试者体内δ阿片受体表达水平的方法，其包括向所述受试者(例如哺乳动物，例如人)使用有效剂量的寡肽ASQFFGLM-NH2。
本发明的另一方面提供了寡肽ASQFFGLM-NH2在制备用于上调受试者(例如哺乳动物，例如人)体内δ阿片受体表达水平的制剂(例如药物)中的用途。
本发明还提供了寡肽ASQFFGLM-NH2联合或与哌替啶的组合在制备用于在受试者(例如哺乳动物，例如人)中镇痛的制剂(例如药物)中的用途。
本发明进一步地还提供了寡肽ASQFFGLM-NH2在制备用于增强哌替啶的镇痛效果的制剂(例如药物)中的用途。
本说明书以及权利要求书中有可能涉及一些缩写，这些缩写所代表的内容是本领域技术人员所周知的。但是，为了便于理解本发明的内容，将相关的缩写所代表的内容引述如下：
r/mHK-1：大鼠/小鼠hemokinin-1；FAM：羧基荧光素；PPT：前速激肽原；MOR：μ-阿片受体；POMC：阿黑皮素原；KOR：κ-阿片受体；PDYN：强啡肽原；DOR：δ-阿片受体；PENK：脑啡肽原；GAPDH：甘油醛-3-磷酸脱氢酶；HK-1(4-11)：ASQFFGLM-NH2。
附图说明
图1:小鼠侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后，NK1受体和不同前速激肽原在mRNA水平的表达变化情况。a，b和c分别是用ABI7300系统软件获得的具有代表性的NK1受体，PPT-A和PPT-C的扩增曲线。A，B和C直方图显示的分别是来自至少独立三次重复的NK1受体、PPT-A和PPT-C的相对mRNA表达水平，内参基因为管家基因GAPDH。所有反应每次一式三份，至少进行三次独立重复。每个值被注射生理盐水的对照组所标准化，对照组的值设为1，结果以平均值±SEM呈现。与对照组相比，实验组没有显著性差异。
图2:小鼠侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后内源性阿片受体和内源性阿片肽在mRNA水平的表达变化情况。a，b，c，d，e和f分别是用ABI7300系统软件获得的具有代表性的MOR(μ-阿片受体)，POMC(阿黑皮素原)，KOR(κ-阿片受体)，PDYN(强啡肽原)，DOR(δ-阿片受体)和PENK(脑啡肽原)的扩增曲线。A，B，C，D，E和F直方图显示的分别是来自至少独立三次重复的MOR，POMC，KOR，PDYN，DOR和PENK的相对mRNA表达水平，内参基因为管家基因GAPDH。所有反应每次一式三份，至少进行三次独立重复。条对应于平均值的标准差。***p≤0.001：与各自对照组相比有极显著性差异。
图3：半定量Western Blotting实验测定小鼠侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后NK1受体，MOR，POMC和DOR蛋白表达和对照组蛋白表达情况。这些图片是来自于至少三次独立重复的代表性图片。柱形图分别表示的是NK1受体(A)，MOR(B)，POMC(C)and DOR(D)的相对蛋白表达水平情况，内参基因为β-actin。*p≤0.05；**p≤0.01：与各自对照组相比有显著性差异。
图4：侧脑室注射人HK-1(4-11)联合皮下注射哌替啶后，在48.5℃的温浴甩尾实验中能剂量和时间依赖的产生协同镇痛效果。*p≤0.05，**p≤0.01和***p≤0.001,表明人HK-1(4-11)联合哌替啶注射组与单独哌替啶注射组相比有统计学上显著性差异。
具体实施方式
本发明的发明人以ICR小鼠(由浙江省杭州市杭州师范大学动物中心提供)为研究对象，研究了寡肽ASQFFGLM-NH2对各种阿片肽受体及其配体的表达水平的影响。我们实验结果显示NK1受体和前速激肽原的表达水平不受侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2的影响。相对应我们目前的工作，与生理盐水对照组相比，侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2之后，MOR(μ阿片受体)[和KOR(κ阿片受体)，以及它们各自的内源性配体POMC和PDYN的表达水平几乎没有改变。有趣的是，在我们目前的研究中，DOR(δ阿片受体)的转录和蛋白水平发生极其显著的上调，然而PENK(DOR的内源性配体)的表达水平没有发生显著变化。
因此，本发明一方面提供了一种提高受试者中δ阿片受体的转录和表达水平的方法，其包括向所述受试者施用有效量的寡肽ASQFFGLM-NH2。本发明也提供了寡肽ASQFFGLM-NH2在制备用于提高受试者中δ阿片受体的转录和表达水平的制剂(例如药物)中的用途。本发明的再一方面提供了一种药学产品(例如药物或药剂)或药物组合物，其包括作为活性成分的提高受试者中δ阿片受体的转录和表达水平的寡肽ASQFFGLM-NH2；以及包括该涉及药学产品的说明书。
本发明一方面提供了一种提高受试者中哌替啶的镇痛效果的方法，其包括向所述受试者施用有效量的寡肽ASQFFGLM-NH2，该施用是在哌替啶的施用之前或之后进行，或者与哌替啶同时施用。本发明也提供了寡肽ASQFFGLM-NH2在制备用于提高在受试者中哌替啶的镇痛效果的制剂(例如药物)中的用途。本发明的再一方面提供了一种药学产品(例如药物或药剂)或药物组合物，其包括作为活性成分的提高受试者中哌替啶的镇痛效果的寡肽ASQFFGLM-NH2；以及包括该涉及药学产品的说明书。
对于本发明所述的受试者，其优选为哺乳动物，更优选为人。
对于本发明的提高受试者中寡肽ASQFFGLM-NH2的活性，本领域技术人员可以对其作出任何修饰，前体是所述修饰不负面影响其活性。例如，可以对该寡肽进行PEG化，以提高其在体内的半衰期；可以与已知的穿透肽连接，以促进本发明寡肽的透皮吸收等。总之，本领域技术人员可对本发明的寡肽进行各种修饰以提高递送效率并保持其活性。这类修饰的寡肽也是在本发明的范围之内的。
本发明的作为活性成分的寡肽ASQFFGLM-NH2可以连同药学上可接受的载体一起使用。除活性成分外，本发明的方法、用途和产品还可以包含合适的药学上可接受的载体，包括促进活性化合物加工成制剂的赋形剂和助剂。
例如适于注射或输注的制剂包括水性和非水性无菌注射液和水性和非水性无菌混悬剂，所述无菌注射液可任选地包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和能使制剂与目的接收者的血液等压的溶质，所述无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。所述制剂可存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿，并且可以保存在冻结干燥的(冻干)条件，在立即使用前仅需要加入无菌液体载体，例如注射用水。
本发明的活性成分任选地可与固体赋形剂相组合，且任选地磨碎所得到的混合物，并且需要时，在加入合适的助剂后，加工颗粒的混合物，以获得所需剂型。合适的赋形剂特别是填充剂例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素或淀粉制剂、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。需要时，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐例如海藻酸钠。
本发明的活性成分的有效量可为提高受试者中δ阿片受体的转录和/或表达水平的的任何量，其可以是相当于约0.1-15mg寡肽ASQFFGLM-NH2，优选0.01-20mg寡肽ASQFFGLM-NH2的剂量单位。更优选地，剂量单位包括约1-4mg的寡肽ASQFFGLM-NH2。最优选地，剂量单位包括约2-3mg的寡肽ASQFFGLM-NH2。有效量的测定在本领域技术人员的能力内，特别是根据本文提供的公开内容的启示下。
根据本发明，本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物可以以任意有效剂量数施用给药受试者。优选地，本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物可以以多次剂量给药，例如从约2至约15次剂量，更优选从约4-10次剂量，最优选约6次剂量。在特别优选的实施方案，在给药过程中，以每三周给药约一次的频率将本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物给药至受试者，例如注射、输注或口服。在特别优选的实施方案，给药为通过注射。
应当理解本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物可以按用于通过任意适宜的途径给药的任意适宜的方式配制。
本发明的药学产品(药物、药剂)或药物组合物的剂量单位是基于常规进行给药受试者。例如，剂量单位可以给药多于每日一次、每周一次、每月一次等。剂量单位可以是以两次/周为基础给药，即每周两次，例如每三天一次。
如本文所使用的，“包含”与“包括”、“含有”或“特征在于”同义，并且是包括在内的或开放性的，并且不排除另外的未陈述的元件或方法步骤。术语“包含”在本文中的任何表述，特别是在描述本发明的方法、用途或产品时，应理解为包括基本上由所述组分或元件或步骤组成和由所述组分或元件或步骤组成的那些产品、方法和用途。本文示例性描述的本发明适当地可以在不存在本文未具体公开的任何一种或多种元件、一种或多种限制的情况下进行实践。
本发明的药学产品中所包含的涉及该药学产品的说明书可以含有如下内容：适应症(例如疼痛)、施用剂量(例如上述所示例性说明的)以及可能产生的副作用等等。
本文已采用的术语和表述用作描述性而不是限制性术语，并且在此种术语和表述的使用中不预期排除所示和所述特征或其部分的任何等价物，但应认识到各种修饰在请求保护的本发明的范围内是可能的。因此，应当理解尽管本发明已通过优选实施方案和任选特征具体公开，但本领域技术人员可以采用本文公开的概念的修饰和变化，并且此类修饰和变化被视为在如由附加权利要求定义的本发明的范围内。
为更清楚地说明本发明，现结合如下实施例进行详细说明，但这些实施例仅仅是对本发明的示例性描述，并不能解释为对本申请的限制。
实施例1
材料和方法
动物
雄性和雌性的ICR小鼠(20±1.0g)由杭州师范大学动物中心(中国杭州)随机提供。所有动物实验程序由浙江理工大学动物饲养和使用委员会批准，并且符合1986年11月24号欧共体委员会指令(86/609/EEC)。所有的动物饲养在12小时光/暗周期的23℃-25℃环境中，并且在实验开展前提供标准的食物和水。所有实验过程中尽可能减少小鼠所受到的伤害和痛苦。
多肽
Fluo-寡肽ASQFFGLM-NH2和寡肽ASQFFGLM-NH2多肽由中肽公司(中国杭州)使用固相多肽合成法合成，并且使用高效液相(HPLC)纯化，其纯度达到98％。FAM是羧基荧光基团，利用标准耦合技术将5-羧基荧光素耦合到寡肽ASQFFGLM-NH2肽的氨基酸基团上。寡肽ASQFFGLM-NH2溶解在生理盐水中，工作液浓度是1.5mM。荧光素标记的(FAM)寡肽ASQFFGLM-NH2溶解在50％DMSO(二甲基亚砜)中，储存液的浓度是15mM。在实验之前用生理盐水将其稀释到1.5mM的工作浓度。
侧脑室注射和组织制备
侧脑室注射按照Haley和McCormick描述的在清醒小鼠中的操作方法进行操作。每只小鼠注射的寡肽ASQFFGLM-NH2或fluo-寡肽ASQFFGLM-NH2的最终剂量是6nmol，注射体积是4μl。
我们前期的研究结果显示侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后，在20min内具有明显的镇痛效果，因此本实验的时间点选择为5、10和20min三个时间点。在注射FAM-寡肽ASQFFGLM-NH2或者寡肽ASQFFGLM-NH2(每只小鼠6nmol)后，在相应的时间点，断颈处死小鼠，注射位点的准确性由显微测量所验证。在对照组中，向小鼠侧脑室注射4μl生理盐水。然后，将注射寡肽ASQFFGLM-NH2或者生理盐水的小鼠脑迅速取出，保存在-80℃冰箱中以供进一步实验。迅速将注射FAM-寡肽ASQFFGLM-NH2的小鼠脑取出，固定在含有4％多聚甲醛(Sigma)的0.1M的pH7.4的磷酸盐缓冲液中24h，在冰冻切片(JUNG Tissue freezingmedium，LEICA，Germany)之前用30％蔗糖溶液脱水。
冠状切片和显微镜观察
每只小鼠脑冷冻在-20℃，切片厚度为10μm。然后脑组织切片被保存在玻片上。切片保存在4℃，12h内完成显微观察和拍照。样品用相差和荧光显微镜观察(NIKON TE2000-U)。根据成年小鼠脑结构图集鉴定解剖结构。
反转录和实时定量PCR
根据商品使用说明书，使用TRIzol试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)从每个冰冻的脑组织中提取总RNA。简而言之，用研钵将脑组织磨碎，然后根据每100mg加入1ml TRIzol的剂量加入TRIzol。在所有实验中，用逆转录试剂盒(Gibco BRL)将5μg总RNA逆转录成cDNA，最终体积为50μl。
引物序列如下，这与我们之前发表的工作中的引物序列相同[7]：
NK1受体(F):5’-TGGACTCTGATCTCTTCCCCAACA-3’
NK1受体(R):5’-GGACCCAGATGACAAAGATGACCACTT-3’
PPT-C(F):5’-CGGGCCATCAGTGTGCACTA-3’
PPT-C(R):5’-GGAATCCCCGTCCCCAGCAT-3’
PPT-A(F):5’-GAAATCGATGCCAACGATGATC-3’
PPT-A(R):5’-AGGCTTGGGTCTTCGGGCGATTCT-3’
MOR(F):5’-ATCCTCTCTTCTGCCATTGGT-3’
MOR(R):5’-TGAAGGCGAAGATGAAGACA-3’
POMC(F):5’-AGATTCAAGAGGGAGCTGGA-3’
POMC(R):5’-CTTCTCGGAGGTCATGAAGC-3’
KOR(F):5’-CCGATACACGAAGATGAAGAC-3’
KOR(R):5’-GTGCCTCCAAGGACTATCGC-3’
PDYN(F):5’-CGGAACTCCTCTTGGGGTAT-3’
PDYN(R):5’-TTTGGCAACGGAAAAGAATC-3’
DOR(F):5’-AAGTACTTGGCGCTCTGGAA-3’
DOR(R):5’-GCTCGTCATGTTTGGCATC-3’
PENK(F):5’-AACAGGATGAGAGCCACTTGC-3’
PENK(R):5’-CTTCATCGGAGGGCAGAGACT-3’
GAPDH(F):5’-AGGAGCGAGACCCCACTAACAT-3’
GAPDH(R):5’-GTGATGGCATGGACTGTGGT-3’
用ABI7300实时PCR检测系统设备进行相对定量实时PCR检测上述基因在mRNA水平的表达变化情况，将GAPDH作为内参基因。阴性对照用蒸馏水取代cDNA。在每次实时定量PCR后，做一次溶解曲线分析。每个靶标基因的标准表达水平用2-△△Ct方法计算(Livak KJ，Schmittgen TD(2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-TimeQuantitative PCR and the2-ΔΔCT Method.Methods25:402-408.)，公式为△△Ct＝(Ct,Target－Ct,GAPDH)Time x(Ct,Target－Ct,GAPDH)Time0。Time x表示任意时间点(5，10和20min)，time0代表靶基因标准化到对照GAPDH(生理盐水组)。每次实验为一式三份，实验至少进行三次独立的重复。所有结果表示成平均值±标准差(SEM)。
Western bloting
使用考马斯亮蓝蛋白定量法(Pierce Chemical Co.)测定总蛋白浓度，使用牛血清白蛋白(BSA，Sigma)作为标准蛋白。
蛋白进行SDS变性聚丙烯酰胺胶电泳，之后电转到硝酸纤维素膜上。接着，将硝酸纤维素膜放置在含有5％脱脂牛奶TBST中室温孵育1h，然后一抗孵育过夜(β-actin(1/10000，Bioworld)，POMC(1:10000，ABGENT)，MOR(1/10000，Epitomics)，NK1受体(1/500，Proteintech)和DOR(1/500，Bioworld))。在这之后，二抗室温孵育2h(β-actin、DOR、MOR和TACR1的二抗是HRP-羊抗兔IgG(1/5000，Bioworld)，POMC二抗是HRP-兔抗羊IgG(1/5000，Bioworld))。最后在化学发光成像仪(Sage Creation)上显色。蛋白分子量大小与预染蛋白marker(Fermentas)进行对比。
为了分析western bloing数据，对照的灰度被定义为100％，其数值由QuantityOne软件(Bio-world)测定。样品的灰度根据对照灰度被以百分比的形式输出。所有的数据来源于至少独立的三次重复实验。
数据分析
所有的数据来源于至少独立的三次重复实验。数据以平均值±SEM形式表示。所有的数据用SPSS软件(SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)分析。P值＜0.05被认为具有显著性差异。
结果
1、给小鼠侧室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后，其在脑中的分布位点
在荧光显微镜下，fluo-寡肽ASQFFGLM-NH2肽在蓝光激发下显示绿光。给侧脑室注射药物10min后，fluo-寡肽ASQFFGLM-NH2主要分布在脑室以及几个与脑室相邻的结构。然而，fluo-寡肽ASQFFGLM-NH2和fluo-r/mHK-1主要的不同分布位点是，在fluo-寡肽ASQFFGLM-NH2处理组中，没有在导水管灰质(PAG)和E/OV发现绿色荧光。
2、编码NK1受体和不同的前速激肽原在mRNA水平的表达特征
我们采用实时定量RT-PCR的方法比较研究了NK1受体和前速激肽原在mRNA水平的表达变化(图1)。其中管家基因GAPDH用来做内参。在实时定量PCR实验中，2-ΔΔCt方法被用于分析基因表达的相对变化。与对照组相比(生理盐水，标准化为1)，侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后5min、10min和20min的NK1受体的mRNA值分别是0.91±0.05，0.93±0.04and0.87±0.06(图1a，A)。5min、10min和20min的PPT-A mRNA值分别是0.99±0.06、0.93±0.17和0.96±0.09(图1a，B)。5min、10min和20min的PPT-C mRNA值分别是0.96±0.08、1.10±0.11和0.96±0.03(图1a，C)。数据分析表明对照和所有寡肽ASQFFGLM-NH2处理组的寡肽ASQFFGLM-NH2无显著性差异，这表明在小鼠中，NK1受体和前速激肽原的mRNA表达水平不受侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2的影响。
3、编码内源性阿片受体和阿片肽的mRNA的表达特征
利用实时定量RT-PCR技术，我们发现，与对照相比，寡肽ASQFFGLM-NH2处理组的DOR在mRNA水平上发生显著增强。侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后5、10和20min时间点的值分别是601.7±137.0、386.1±83.1和254.3±68.7(图2e，E)。然而，DOR的内源性配体PENK在mRNA水平没有发生显著变化，在侧脑室注射药物后，5、10和20min时间点的值分别是1.08±0.11，0.94±0.10和0.97±0.08(图2d，B)。MOR(图2a，A)、POMC(MOR的一个内源性配体，图2b，B)，KOR(图2c，C)和PDYN(KOR的一个内源性配体，图2d，D)在药物处理后在mRNA的表达水平均未发生显著变化。
4、小鼠侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2后导致DOR受体蛋白的表达显著增高
最后，我们检测了由侧脑室注射寡肽ASQFFGLM-NH2引起的DOR转录本的上调是否与DOR蛋白的表达增加相关。在图3D中可以看到，与对照组相比，经寡肽ASQFFGLM-NH2处理后，DOR蛋白的表达发生了显著上调。在5、10和20min时间点，DOR蛋白的表达量分别是1.78±0.28，3.26±0.50和5.29±0.86(图3D)。此外，我们也检测了NK1受体、MOR和POMC的转录表达与它们各自的蛋白表达的相关性，由图3A-C的结果可见这几种蛋白在对照组与hHK-1的之间没有发生显著变化。
实施例2
材料和方法
动物
雄性和雌性的ICR小鼠(20±1.0g)由杭州师范大学动物中心(中国杭州)随机提供。所有动物实验程序由浙江理工大学动物饲养和使用委员会批准，并且符合1986年11月24号欧共体委员会指令(86/609/EEC)。所有的动物饲养在12小时光/暗周期的23℃-25℃环境中，并且在实验开展前提供标准的食物和水。所有实验过程中尽可能减少小鼠所受到的伤害和痛苦。
多肽
寡肽ASQFFGLM-NH2多肽由中肽公司(中国杭州)使用固相多肽合成法合成，并且使用高效液相(HPLC)纯化，其纯度达到98％。寡肽ASQFFGLM-NH2溶解在生理盐水中，工作液浓度是1.5mM。
侧脑室注射和甩尾实验
侧脑室注射按照Haley和McCormick描述的在清醒小鼠中的操作方法进行操作。每只小鼠注射的寡肽ASQFFGLM-NH2最终剂量是6nmol，注射体积是4μl。在侧脑室注射人HK-1(4-11)后，马上皮下注射哌替啶12mg/kg，然后用温浴甩尾实验检测联合注射这两种药物对小鼠急性疼痛的影响。在温浴甩尾实验中，每只小鼠只用一次。将小鼠尾部1/3浸入48.5℃的恒温水浴中，从浸入开始到小鼠自发将尾部甩出水浴的时间间隔定义为甩尾潜伏期。每只小鼠在实验前先检测甩尾潜伏期，并筛选甩尾潜伏期在2.5-4.5s的小鼠进行实验研究，过于迟钝和过于敏感的小鼠都弃去不用。为了避免小鼠尾部被烫伤，小鼠甩尾潜伏期的最大值为15s。每只小鼠每次测甩尾潜伏期的时间间隔为10s，最后四次的甩尾潜伏期的平均值作为用药处理前的甩尾潜伏期，且这四次甩尾潜伏期的变异不能超过10％。联合注射人HK-1(4-11)和哌替啶后，检测药物注射后10，20，30，40，50和60分钟各自的甩尾潜伏期。
镇痛作用用下列公式进行计算：
甩尾潜伏期的变化百分率＝[(用药后的甩尾潜伏期-用药前的基础甩尾潜伏期)/用药前的基础甩尾潜伏期]*100％
数据分析
所有的数据来源于至少独立的三次重复实验。数据以平均值±SEM形式表示。所有的数据用SPSS软件(SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)分析。P值＜0.05被认为具有显著性差异。
结果
侧脑室注射人HK-1(4-11)联合皮下注射哌替啶后的协同镇痛效果
从图4可以看出，侧脑室注射人HK-1(4-11)能显著增强皮下注射的哌替啶的镇痛效果，在注射后一小时的时间内，每个10分钟检测到的镇痛增强的幅度大约是原来哌替啶镇痛效果的两倍。由此可见，侧脑室注射人HK-1(4-11)联合皮下注射哌替啶具有强效的协同镇痛效果。
本领域普通技术人员应当理解，可以在本发明的实践中采用除具体例示那些外的方法和原材料等而无需过度实验。任何此类方法和原材料等的所有的本领域已知的功能等价物都预期包括在本发明中。本领域技术人员还应当理解，可对本说明书及权利要求书中描述的本发明进行各种变动和修饰，且本发明包括所有此类变动和修饰。本发明还包括本说明书中单独或同时提及或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征中的任何2个或更多个的任何和所有组合。
Claims (10)
1.寡肽ASQFFGLM-NH2和哌替啶联合在制备用于在受试者中镇痛的制剂中的用途。
2.根据权利要求1中所述的用途，其中所述的受试者为哺乳动物。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述的哺乳动物为人。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述的制剂为药物。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述的寡肽被PEG化修饰。
6.寡肽ASQFFGLM-NH2在制备用于增强哌替啶在受试者中镇痛效果的制剂中的用途。
7.根据权利要求6中所述的用途，其中所述的受试者为哺乳动物。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述的哺乳动物为人。
9.根据权利要求6所述的用途，其中所述的制剂为药物。
10.根据权利要求6-9中任一项所述的用途，其中所述的寡肽被PEG化修饰。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410033350.8A CN104800831B (zh) | 2014-01-23 | 2014-01-23 | 寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410033350.8A CN104800831B (zh) | 2014-01-23 | 2014-01-23 | 寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104800831A CN104800831A (zh) | 2015-07-29 |
| CN104800831B true CN104800831B (zh) | 2018-09-21 |
Family
ID=53686309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410033350.8A Active CN104800831B (zh) | 2014-01-23 | 2014-01-23 | 寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104800831B (zh) |
-
2014
- 2014-01-23 CN CN201410033350.8A patent/CN104800831B/zh active Active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Effects of rat/mouse hemokinin-1, a mammalian tachykinin peptide,on the antinociceptive activity of pethidine administered at the peripheral and supraspinal level.;Cai-Yun Fu et al.;《Behavioural Brain Research》;20070619;39-46 * |
| Hemokinins and endokinins;N.M.Page;《Cellular and Molecular Life Sciences》;20041231;1652-1663 * |
| In vivo characterization of the effects of human hemokinin-1 and human hemokinin-1(4-11), mammalian tachykinin peptides, on the modulation of pain in mice;Cai Y. Fu et al.;《Brain, Behavior, and Immunity》;20080208;850-860 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104800831A (zh) | 2015-07-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhu et al. | Zoledronic acid promotes TLR‐4‐mediated M1 macrophage polarization in bisphosphonate‐related osteonecrosis of the jaw | |
| JP2023036871A (ja) | 心不全の治療用組成物 | |
| McCoy et al. | Evaluation of metabolically stabilized angiotensin IV analogs as procognitive/antidementia agents | |
| CN103458916B (zh) | 长效肽类似物 | |
| CN111407882A (zh) | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟射血分数保留的心力衰竭的方法和组合物 | |
| CN104159594A (zh) | 用于皮肤病治疗的凯莫瑞c15肽的局部制剂 | |
| MX2007004676A (es) | Analogos de la hormona adrenocorticotropica y metodos relacionados. | |
| BRPI0721259A2 (pt) | composto, composiÇço farmacÊutica, uso de composto, e, processo para a fabricaÇço de composto | |
| JP2001247477A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
| CN101394861A (zh) | 纽兰格林持续给药能改善心脏功能 | |
| CN102215859B (zh) | 垂体腺苷酸环化酶激活多肽（pacap）以及pacap类似物作为与抗癌剂一起的辅助治疗的用途 | |
| CN106632601B (zh) | 一种阻断突触长时程增强（ltp）的短肽及其应用 | |
| JP5427186B2 (ja) | システイン非含有環状タンパク質 | |
| Balasubramaniam et al. | Structure− activity studies including a ψ (CH2-NH) scan of peptide YY (PYY) active site, PYY (22− 36), for interaction with rat intestinal PYY receptors: development of analogues with potent in vivo activity in the intestine | |
| WO2017040186A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of neurodamage | |
| CN104800829B (zh) | 寡肽联合或与吗啡的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 | |
| CN104800831B (zh) | 寡肽联合或与哌替啶的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 | |
| CN104800832B (zh) | 一种用于癌痛治疗的寡肽联合或与吗啡组合的产品 | |
| CN104800830B (zh) | 一种用于癌痛治疗的寡肽联合或与哌替啶组合的产品 | |
| US20210024928A1 (en) | C/ebp alpha sarna compositions and methods of use | |
| JP2003509466A (ja) | コルチコトロピン放出ホルモンアナログを使用する異常な細胞増殖の阻害 | |
| CN104800835A (zh) | 寡肽联合或与脑啡肽的组合在制备用于镇痛的药物中的用途 | |
| CN113201049B (zh) | 有抗凝血和抗血小板活性的多靶点化合物及制法和用途 | |
| CN104800827A (zh) | 寡肽在制备用于提高delta阿片受体表达的药物中的用途 | |
| KR101306157B1 (ko) | 사이클로펜타펩타이드를 유효성분으로 포함하는 종양의 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: No. 258, Xueyuan Street, Xiasha Higher Education Park, Hangzhou, Zhejiang 310,000 Patentee after: China Jiliang University Address before: No. 258, Xueyuan Street, Xiasha Higher Education Park, Hangzhou, Zhejiang 310,000 Patentee before: China Jiliang University |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20231207 Address after: 810000, No. 141 Bayi East Road, Economic and Technological Development Zone, Xining City, Qinghai Province Patentee after: Qinghai ChenFei Pharmaceutical Co.,Ltd. Address before: No. 258, Xueyuan Street, Xiasha Higher Education Park, Hangzhou, Zhejiang 310,000 Patentee before: China Jiliang University |