CN104792755B - 一种检测连翘酯苷a的组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种检测连翘酯苷A的组合物及其制备方法。该组合物由8‑羟基芘磺酸盐荧光染料HPTS、硼酸基取代的吡啶季铵盐TCTB和水组成。该组合物能够有效识别连翘酯苷A并表现为组合物荧光增强。采用荧光光谱仪检测技术，操作简单、响应迅速、成本低，在中药成分检测和分析中具有重要的应用前景和实际意义。
Description
技术领域
本发明涉及分子识别技术，具体涉及一种检测连翘酯苷A的组合物及其制备方法。
背景技术
连翘(Fructus Forsythiae)为木犀科连翘属植物连翘(Forsythia Suspensa(Thunb.Vahl.)的干燥果实。其特性为味苦、性微寒，归肺、心、小肠经，具有清热解毒、散结消肿之功效。传统用于痈疽、风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、神昏发斑及热淋尿闭等症[86]。被称为“疮家圣药”，是中国药典收载的常用中药。迄今为止关于连翘化学成分的研究报道比较多，其成分复杂多样，从中发现主要有苯乙醇及其苷类、木质素及其苷类、萜类、黄酮类等。其中苯乙醇苷类以发现有连翘酯苷A、B、C、D、E等，以连翘酯苷A的含量最高且药理活性较强。前期的研究表明，连翘酯苷A具有解热、抗感染、抗氧化作用，对合胞病毒等呼吸道病毒具有较强的抑制作用。然而目前作用连翘药材及其制剂考察指标的连翘苷无此活性，因此，采用连翘酯苷A代替连翘苷作用连翘考察指标已经被提出并将成为之后发展的趋势。因此发展能高效分离和检测连翘酯苷A的技术和方法是很有必要且符合目前的发展要求。
目前对于中药主要成分的分离和检测方法主要包括：紫外分光光度法、薄层扫描法、薄层-紫外分光光度法、毛细管电泳法及高效液相色谱法。由于糖及其中药糖苷的特殊结构以及检测技术适应的体系，基于荧光检测技术的化学识别探针研究较少且效果不理想。然而考虑到荧光光谱的高灵敏性、操作检测、响应快速等特点，获得基于荧光技术能够对中药糖苷(含有糖环结构)高效检测并识别的探针是研究人员一直努力的目标。
结合硼酸能够与单糖分子形成环状硼酸酯的特性，硼酸基修饰的化合物作用光学探针在糖分子的检测和识别方面得到了快速的发展。众所周知，中药成分中，含有糖环结构的物质较多，因此可以基于硼酸和糖环结合形成硼酸酯的特性，设计并开发基于光学检测信号的中药主要成分的检测新方法。从目前基于荧光技术对糖分子检测的探针来看，双组分荧光探针以其易修饰、波长可调及组合灵活搭配等特点得到了快速的发展和广泛的应用。因此，设计并得到基于荧光检测技术，能够对连翘酯苷A高选择性和灵敏性检测的双组分体系是本发明的目标。
发明内容
本发明的目的在于提供一种专门用于检测连翘酯苷A的组合物，以及该组合物在检测连翘酯苷A中的应用。
本发明提供的一种检测连翘酯苷A的组合物，由8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)、硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)和水组成，8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)的浓度为1.0×10-6mol/L～1.0×10-5mol/L，组合物中8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)和硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)摩尔比为1︰10～30，所述的8-羟基芘磺酸盐荧光染料HPTS和硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)的结构式如下：
所述的组合物中8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)和硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)最佳摩尔浓度比为1︰15～25。
上述组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)、配制浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液；8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)直接从Sigma Aldrich购买；
2)、硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)的制备；可按照文献Dyes and Pigments,97(2013)318-323制备；
3)、配制浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液；
4)、以步骤1)和3)配制的溶液为母液，配制8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)浓度为1.0×10-6mol/L～1.0×10-5mol/L，并含有10～30倍摩尔当量硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)的水溶液，混匀即可。
检测连翘酯苷A时，移取上述组合物2mL，采用滴定的方法将检测样品加入，用荧光光谱仪测定，激发波长为400nm，发射波长为510nm。
与现有技术相比，本发明有如下优点和效果：本发明以荧光光谱技术为检测手段，可调控的双组分体系为检测探针，通过邻二羟基与硼酸基形成环状硼酸酯进而引起检测体系中电荷的重新分布，导致体系荧光信号的变化来达到对被连翘酯苷A的识别。本发明组合物对连翘酯苷A具有高的选择性。采用荧光光谱仪测定，方法简单、响应迅速、灵敏度高。为中药主要成分检测提供一种高效的分析技术，具有重要的应用价值和实际意义。
附图说明
图1.组合物与连翘酯苷A相互作用的荧光光谱图。
图2.组合物分别与3种连翘主要成分相互作用的荧光强度比较图。
图3.组合物分别与3种连翘主要成分作用后，在365nm紫外灯照射下溶液颜色的变化。
具体实施方式
实施例1：组合物的制备
1)、称取0.524g 8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)溶解并定容于1L的容量瓶中，摇匀，得到浓度为1.0×10-3mol/L 8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液；
2)、按照文献Dyes and Pigments,97(2013)318-323的方法制备硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)；
3)、称取0.725g硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)溶解并定容于1L的容量瓶中，摇匀，得到浓度为1.0×10-3mol/L硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液；
4)、取4.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和80.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为4.0×10-6mol/L，TCTB浓度为8.0×10-5mol/L。
实施例2：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取4.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和10.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为4.0×10-6mol/L，TCTB浓度为1.0×10-5mol/L。
实施例3：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取4.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和60.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为4.0×10-6mol/L，TCTB浓度为6.0×10-5mol/L。
实施例4：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取4.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和100.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为4.0×10-6mol/L，TCTB浓度为1.0×10-4mol/L。
实施例5：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取4.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和120.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为4.0×10-6mol/L，TCTB浓度为1.2×10-4mol/L。
实施例6：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取1.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和15.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为1.0×10-6mol/L，TCTB浓度为1.5×10-5mol/L。
实施例7：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取10.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和300.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为1.0×10-5mol/L，TCTB浓度为3.0×10-4mol/L。
实施例8：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取10.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和200.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为1.0×10-5mol/L，TCTB浓度为2.0×10-4mol/L。
实施例9：组合物的制备
1)、2)、3)同实施例1；
4)、取1.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的8-羟基芘磺酸盐荧光染料(HPTS)水溶液和20.0mL浓度为1.0×10-3mol/L的硼酸基取代的吡啶季铵盐(TCTB)水溶液加入1L的容量瓶中，加水定容，混匀；制得1L组合物水溶液，其中HPTS浓度为1.0×10-6mol/L，TCTB浓度为2.0×10-5mol/L。
实施例10：
取实施例1制备的组合物2mL于荧光池中，连翘酯苷A的检测采用滴定的方法，滴定量不超过总体积的3％。荧光光谱测定在加入连翘酯苷A后，震荡30s进行荧光扫描。测试所用荧光仪为日立F-4600荧光仪，测试激发和发射狭缝宽度分布为2.5nm和5.0nm。激发波长为400nm，发射波长为510nm，测试在室温下进行，结果见图1。图中：0号线为组合物的荧光光谱，1～8号线为为组合物中逐渐加入连翘酯苷A的荧光光谱。连翘酯苷A的浓度分别为：1,5.0×10-6mol/L、2,8.0×10-6mol/L、3,1.0×10-5mol/L、4,2.0×10-5mol/L、5,3.0×10- 5mol/L、6,4.0×10-5mol/L、7,5.0×10-5mol/L、8,8.0×10-5mol/L。
实施例11：
取实施例1制备的组合物2mL于荧光池中，分别加入3种连翘主要成分(连翘酯苷A、连翘苷及连翘脂素)进行测定，3种连翘主要成分的浓度都为5.0×10-5mol/L。采用滴定的方法，滴定量每次不超过总体积的3％。荧光光谱测定在加入连翘主要成分后，震荡30s进行荧光扫描。测试所用荧光仪为日立F-4600荧光仪，测试激发和发射狭缝宽度分布为2.5nm和5.0nm。激发波长为400nm，发射波长为510nm，测试在室温下进行，结果见图2。
实施例12：
分别取实施例1制备的组合物2mL于塑料小管中，将3种连翘主要成分(连翘酯苷A、连翘苷及连翘脂素)加入小管中，摇震30s后，在365nm紫外灯下观察溶液颜色，测试在室温下进行，结果见图3。图中：三种连翘主要成分的浓度都为5.0×10-5mol/L，0为HPTS的溶液(亮绿色)、1为组合物的溶液(无色)、2为组合物中加入连翘脂素的溶液(无色)、3为组合物中加入连翘苷的溶液(无色)、4为组合物中加入连翘酯苷A的溶液(浅绿色)。
Claims (3)
1.一种检测连翘酯苷A的组合物，其特征在于，由8-羟基芘磺酸盐荧光染料HPTS、硼酸基取代的吡啶季铵盐TCTB和水组成，其中8-羟基芘磺酸盐荧光染料HPTS的浓度为1.0×10- 6mol/L～1.0×10-5mol/L，组合物中HPTS和TCTB摩尔比为1︰10～30，所述的HPTS和TCTB的结构式如下：
2.如权利要求1所述的一种检测连翘酯苷A的组合物，其特征在于，所述的HPTS和TCTB摩尔比为1︰15～25。
3.如权利要求1或2所述的一种检测连翘酯苷A的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)、配制浓度为1.0×10-3mol/L的HPTS水溶液；
2)、制备TCTB；
3)、配制浓度为1.0×10-3mol/L的TCTB水溶液；
4)、以步骤1)和3)配制的溶液为母液，配制HPTS浓度为1.0×10-6mol/L～1.0×10-5mol/L，并含有10～30倍摩尔当量TCTB的水溶液，混匀即可。
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