CN104759264B - 用于吸附麦芽糖融合蛋白的磁性微球及制备 - Google Patents
用于吸附麦芽糖融合蛋白的磁性微球及制备 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属生化分析技术领域，具体为用于吸附麦芽糖融合蛋白的磁性微球及制备。所述纳米磁性微球由具有超顺磁性核以及通过单体聚合形成的单层或多层聚合物壳层组成，并在壳层表面共价结合多糖类化合物。本发明使用表面糊精修饰的磁性微球结合麦芽糖融合蛋白，可以实现麦芽糖融合蛋白的纯化，富集以及固定，在蛋白组学研究等领域有良好的实用价值和应用前景。
Description
技术领域
本发明属生化分析技术领域，具体为用于吸附麦芽糖融合蛋白的纳米磁性微球及制备。
背景技术
蛋白标签(protein tag)是指利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展，研究人员相继开发出了具有各种不同功能的蛋白标签。麦芽糖结合蛋白(Maltose-Binding-Protein)标签蛋白可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，在蛋白质表达方面具有广泛的应用前景。传统的MBP-融合蛋白的分离纯化可通过MBP结合蛋白与淀粉或糊精的麦芽糖单元结合，故可通过交联淀粉亲和层析进行纯化。然而传统的使用淀粉琼脂糖树脂分离麦芽糖融合蛋白的方法售价高昂，并且淀粉琼脂树脂稳定性不高，回收重复利用次数有限，同时传统的亲和载体凝胶色谱柱层析过程中，样品中不能存在固体颗粒，因此，通常需要对细胞裂解液进行过滤、离心等复杂的前处理操作，使得这一方法不利于大规模的应用。
磁性微球具有较高的磁响应性，可以进行快速的磁分离，利用特异性亲和作用在外加磁场的定向控制下，从复杂的原始生物体系中直接分离出目标生物分子，与传统的分离方法相比，这种集磁性分离的操作简便性和亲和纯化专一性的亲和磁性微球分离介质具有极大的优势。目前NEB及市售的MBP融合蛋白纯化磁珠为糊精-琼脂糖磁性微球，由于琼脂糖、葡聚糖生物大分子在微球制备工艺上的局限，这些微球粒径均为微米级别，普遍粒径尺度在10-45微米及以上，微球悬浮性差，比表面积低，不利于大规模工业应用。亦有市售的磁性微球偶联抗MBP的抗体用于MBP-融合蛋白的纯化过程，然而因抗体是不稳定的生物大分子，对存储条件及纯化条件要求高，其稳定性远不及以麦芽糖为亲和配基的纯化磁珠。
专利US20030166878A1直接将糊精沉积至磁性微粒上，获得可用于纯化MBP融合蛋白的磁珠，然而这种非共价偶联的磁珠的稳定性不佳，不适用于长期保存及工业应用。
Lilin Zhou等(J.Mater.Chem.，2012，22，6813)将氨基化麦芽糖共价偶联至包被氧化硅的磁性微球上用于纯化MBP融合蛋白，然而对麦芽糖的共价修饰，尤其是对麦芽糖还原性羟基的修饰，将降低或破坏麦芽糖与麦芽糖结合蛋白的相互结合，不利于亲和纯化过程的进行。
综上所述，本领域尚缺乏一种粒径尺度较大，性能稳定，能够可逆结合麦芽糖结合蛋白的磁性微球。
发明内容
本发明的目的是提供一种粒径尺度较大，性能稳定，能够可逆结合麦芽糖结合蛋白的磁性微球。
本发明的第一方面，提供了一种超顺磁性磁性微球，所述磁性微球包括以下部分：
超顺磁性内核，所述的内核为磁性金属纳米粒子；
包裹金属内核的壳层，所述的壳层为有机聚合物层；
连接于壳层外含多个麦芽糖结构单元的糊精，所述糊精通过共价方式与有机聚合物层相连。
在另一优选例中，所述磁珠的平均粒径为50-2000nm。
在另一优选例中，所述壳层直接包裹在金属内核之外。
在另一优选例中，所述壳层是氧化硅。
在另一优选例中，所述糊精通过偶联剂与聚合物层相连。
在另一优选例中，所述糊精与聚合物层直接相连。
在另一优选例中，所述糊精分子与聚合物层表面形成共价键，从而将糊精与聚合物层表面共价相连。
在另一优选例中，所述糊精分子与偶联剂形成共价键，且所述偶联剂与聚合物层表面形成共价键，从而将糊精连接于聚合物层表面。
在另一优选例中，所述的偶联剂为具有两个或多个功能基团的分子，较佳地为具有两个功能基团的分子。
在另一优选例中，所述的偶联剂为具有两个或多个功能性基团的直链或支链分子。
在另一优选例中，所述的偶联剂是硅烷偶联剂。在另一优选例中，所述的偶联剂为两端分别具有活性基团A和活性基团B，其中A和B可相同或不同；
在另一优选例中，活性基团A和活性基团B各自独立地选自下组：氨基、羧基、羟基、环氧基、羰基、甲氧硅烷基、乙氧硅烷基，或其组合。
在另一优选例中，所述内核的材质为Fe3O4或γ-Fe2O3。
在另一优选例中，所述微球的粒径为100-2000nm。
在另一优选例中，所述的有机聚合物层的聚合单体选自下组：氧化硅、苯乙烯、甲基丙烯酸-2-羟基乙酯，异丙基丙烯酰氯，2-(二乙氨基)乙基甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸缩水甘油酯、氯甲基乙烯基苯，甲基丙烯酸，丙烯酸，或其组合；较佳地，所述的聚合物的单体选白下组：氧化硅、甲基丙烯酸、丙烯酸、甲基丙烯酸缩水甘油酯，或其组合。
在另一优选例中，所述的有机聚合物层表面被功能基团修饰。
在另一优选例中，所述的功能基团为氨基、羟基、环氧基、羧基、羰基。
在另一优选例中，所述含多个麦芽糖结构单元的糊精的麦芽糖聚合度n＝5～400，较佳地，n=10～100。
在另一优选例中，所述糊精的葡萄糖当量DE=0.25-20，较佳地，所述糊精的葡萄糖当量DE=1-10。
在另一优选例中，所述糊精为平均分子量为1kD～50kD的糊精，较佳地，所述糊精为平均分子量为1kD～34kD的糊精。
在另一优选例中，所述微球可以与含麦芽糖结合蛋白结构单元的蛋白可逆结合。
在另一优选例中，通过加入过量麦芽糖溶液将被结合的所述蛋白从微球上洗脱。
在另一优选例中，所述含麦芽糖结合蛋白结构单元的蛋白是MBP-融合蛋白。
本发明的第二方面，提供了一种制备如本发明第一方面所述的磁性微球的方法，其特征在于，所述的制备步骤包括：
通过单体聚合制备具有超顺磁性内核-壳层结构即核壳结构的聚合物磁性微球；
对所述微球进行表面氨基功能化修饰；
将麦芽糊精与偶联剂反应，得到单端偶联的麦芽糊精(Dextrin-DSC)；
将所述单端偶联的麦芽糊精与表面氨基功能化修饰的磁性微球反应，磁分离制得麦芽糊精修饰的纳米磁性微球。
本发明的第三方面，提供了一种制备如本发明第一方面所述的磁性微球的方法，其特征在于，所述的制备步骤包括：
通过单体聚合制备具有超顺磁性内核-壳层结构即核壳结构的聚合物磁性微球；
对所述微球进行表面羧基功能化修饰；
制备一端修饰的麦芽糊精；
加入偶联剂，将所述一端修饰的麦芽糊精与表面羧基功能化修饰的磁性微球反应，磁分离，制得麦芽糊精修饰的纳米磁性微球。
在另一优选例中，所述的偶联剂为具有两个或多个官能团的分子。
在另一优选例中，所述的偶联剂选自下组：6-溴乙酸。
本发明的第四方面，提供了一种制备如本发明第一方面所述的磁性微球的方法，其特征在于，所述的制备步骤包括：
通过单体聚合制备表面具有环氧功能基团的聚合物磁性微球；加入麦芽糊精使麦芽糊精与环氧功能基反应，磁分离，制得麦芽糊精修饰的纳米磁性微球。
在另一优选例中，所述的磁性微球用于分离、纯化、富集和／或固定麦芽糖融合蛋白。
本发明的第五方面，提供了一种麦芽糖融合蛋白分离方法，所述方法包括以下步骤：
提供含麦芽糖融合蛋白的样品；
用如本发明第一方面所述的磁性微球结合麦芽糖融合蛋白；
分离所述结合蛋白的微球和溶液；
用洗脱液洗脱麦芽糖融合蛋白。
在另一优选例中，所述的洗脱液是过量的麦芽糖溶液。
在另一优选例中，用磁性分离方法分离所述微球和溶液。
本发明第六方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括：(a)如本发明第一方面所述的磁性微球；(b)一个或多个容器，所述容器用于盛放包含含麦芽糖结合蛋白结构单元的蛋白的样品；和(c)说明书。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1是SDS-PAGE凝胶电泳分析MBP-融合蛋白纯化效果图：图中各个泳道表示的意义如下：
L：分子量标准；
M：含MBP-融合蛋白的细菌裂解液；
A，使用偶联麦芽糖磁珠吸附融合蛋白后的洗脱液；
A1，偶联麦芽糖磁珠吸附MBP-融和蛋白后的上清液；
B，使用偶联麦芽糊精磁珠吸附融合蛋白后的洗脱液；
B1，偶联麦芽糊精磁珠吸附MBP-融和蛋白后的上清液。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，发现在吸附麦芽糖结合蛋白磁性微球的制备过程中，通过引入偶联剂，可使得较难结合于磁性微球表面的糊精大分子通过共价形式稳定地与微球表面结合，形成稳定的麦芽糖结合蛋白吸附层，使麦芽糖结合蛋白能够容易地从样品中分离出来。基于上述发现，发明人完成了本发明。
磁性微球
如本文所用，术语“超顺磁性纳米磁性微球”、“磁性微球”、“磁珠”、“纳米磁性微球”可互换使用，均指用于结合麦芽糖结合蛋白并磁性分离的结合相。
如本文所用，术语“含多个麦芽糖结构单元的糊精”、“麦芽糊精”可互换使用，均指含多个麦芽糖结构单元的糊精。
本发明所提供的磁性微球包括以下结构特征：磁性金属纳米粒子内核，包裹金属内核的有机聚合物层，以及共价连接于聚合物层外的糊精和／或含麦芽糖结构单元的多糖化合物。
磁性内核的材质不限，可为任意磁性金属，如铁、钴、镍及其合金。磁性内核为纳米粒子，在另一优选例中，所述磁性内核的粒径为50-2000nm。
所述糊精和／或含麦芽糖结构单元的多糖化合物通过偶联剂与聚合物层共价连接，以使磁性微球具有更好的稳定性。
所述的有机聚合物的单体选自下组：氧化硅、聚苯乙烯、甲基丙烯酸-2-羟基乙酯，异丙基丙烯酰氯，2-(二乙氨基)乙基甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸缩水甘油酯、丙烯酸、氯甲基乙烯基苯，甲基苯烯酸，或其组合；较佳地，所述的聚合物的单体是氧化硅和／或甲基丙烯酸缩水甘油酯。
所述的有机聚合物层表面被功能基团修饰以结合偶联剂。较佳地，所述的功能基团选自下组：氨基、羧基、羟基、环氧基，羰基，或其组合。
所述的偶联剂为具有两个或多个功能基团的分子；较佳地，所述的偶联剂为具有两个或多个氨基或羧基的直链或支链分子。
在另一优选例中，所述的偶联剂为两端分别具有活性基团A和活性基团B，其中A和B可相同或不同；
其中，A和B各自独立地选白下组：氨基、羧基或羟基。
通过偶联剂连接，可使不易与有机聚合物壳层表面结合的大分子结合在磁性微球表面。用于本发明磁性微球的制备的多糖化合物的麦芽糖聚合度n=3～200，较佳地，n=6～100。用于本发明磁性微球的糊精的平均分子量为1kD～50kD，较佳地为1kD～34kD。
在另一优选例中，所述糊精的葡萄糖当量DE＝0.25-20，较佳地，所述糊精的葡萄糖当量DE=1-10。
所述微球与含麦芽糖结合蛋白的结构单元可逆结合，并可通过加入过量麦芽糖溶液将所述的结构单元洗脱。
本发明的磁性微球具有较大的粒径和比表面积，可用于大量麦芽糖融合蛋白样品的分离和提纯。在一优选例中，所述微球的粒径为50-2000nm。
相比现有技术，本发明的磁性微球对麦芽糖蛋白的结合能力大大提高，在另一优选例中，所述微球对麦芽糖结合蛋白的结合能力为≥20ugMBP-融和蛋白／mg磁珠。
本发明所述的磁性微球可用于在多种实验中进行麦芽糖融合蛋白的分离、纯化、富集和固定。所述的表面糊精修饰的纳米磁性微球具有末端未经修饰的麦芽糖结构单元，可以有效结合麦芽糖融合蛋白，实现麦芽糖融合蛋白的纯化，富集以及固定，并且粒子具有较好的稳定性，分散性，磁响应性，可以实现麦芽糖融合蛋白的快速分离，常温保存，并且可以重复回收利用，具有较高的经济价值和应用前景。
磁性微球的制备
通过有机物小分子在金属磁性材料上进行聚合，得到具有核壳结构的聚合物磁性微球；然后对所述微球进行表面功能化修饰；将麦芽糊精与偶联剂反应，得到单端偶联的麦芽糊精(Dextrin-DSC)；最后将所述单端偶联的麦芽糊精与表面功能化修饰的磁性微球反应，磁分离，可制得本发明的纳米磁性微球。
可用于所述聚合物磁性微球修饰的功能化基团包括：氨基、羧基、羟基、环氧基、羰基。
可用于本发明纳米微球制备的偶联剂为具有两个或多个功能基团的分子。
在另一优选例中，所述的偶联剂为两端分别具有活性基团A和活性基团B，其中A和B可相同或不同；
在另一优选例中，活性基团A和活性基团B各自独立地选自下组：氨基、羧基、羟基、环氧基、羰基。
可用于本发明的麦芽糊精的聚合度n＝5～400，较佳地，r=10～100。用于本发明磁性微球的糊精的平均分子量为1kD～50kD，较佳地为1kD～34kD。
在另一优选例中，所述糊精的葡萄糖当量DE=0.25-20，较佳地，所述糊精的葡萄糖当量DE＝1-10。
通过本发明方法制备的磁性微球具有较大的粒径和比表面积，可用于大量麦芽糖融合蛋白样品的分离和提纯。在一优选例中，所述微球的粒径为50-2000nm。
麦芽糖结合蛋白的分离
本发明制得的磁性微球可用于麦芽糖结合蛋白的分离，分离方法如下：
往含麦芽糖融合蛋白的样品中加入本发明的磁性微球，静置或在合适条件下使麦芽糖融合蛋白与磁性微球结合，然后分离所述结合蛋白的微球和溶液，并用洗脱液洗脱麦芽糖融合蛋白。
所述的样品可以是未经过预处理的样品，也可以进行预处理以使麦芽糖融合蛋白和微球更容易地结合。
所述磁性微球可在常规条件下结合麦芽糖融合蛋白，如在室温下静置一段时间使蛋白与微球充分结合。
所述磁性微球与溶液可通过各种常规方法分离，如在磁分离架上通过磁性吸附方法分离，或通过离心、沉淀等方法分离。得到结合麦芽糖融合蛋白的磁性微球后，对微球进行洗脱，所述的洗脱液可以是过量的麦芽糖溶液。
洗脱后的麦芽糖融合蛋白进行常规后处理后，可以用于各种下游实验。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
1)本发明提供的磁性微球性质稳定，储存条件及纯化条件要求低，适合制成市售商品形式。
2)本发明磁性微球粒径大，比表面积大，且可以回收并重复利用，因而十分适合大规模工业应用。
3)通过本发明提供的制备方法，能够方便地制备共价偶联糊精的纳米微球，工艺简单，便于实现。
4)本发明的分离方法预处理简单，并可大规模快速分离麦芽糖结合蛋白，提高分离效率，可用于多种蛋白分离实验，在蛋白组学研究等领域有良好的实用价值和应用前景。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1麦芽糊精修饰的纳米磁性微球的制备
1.四氧化三铁磁性纳米粒子(Fe3O4)的制备
在500ml三颈瓶中，加入5.0g经过去离子水洗涤过的四氧化三铁粉末，加入200ml的去离子水，在600rpm转速下搅拌分散后，加入100ml硝酸溶液(3.0M)，室温下搅拌10分钟。然后用磁铁分离并用去离子水洗涤3-5次。将洗涤后的四氧化三铁泥浆搅拌分散在400ml的柠檬酸钠溶液(0.2M)中，接着用磁铁分离并用去离子水洗涤3-5次，最后所得到的四氧化三铁分散在200ml去离子水中，制备固含量约为2.0wt％的磁流体。
2.二氧化硅包覆的四氧化三铁磁性纳米微球(Fe3O4@SiO2)的制备
在一个500ml的三颈瓶中，加入5.0g事先制备好的磁流体，并用40mL去离子水和200ml无水乙醇稀释，然后在高速搅拌下加入5ml的浓氨水，加入4ml的正硅酸乙酯，维持搅拌6h后，再向此体系中加入0.5ml的三乙氧基氨丙基硅烷(APS)，继续反应12h。反应结束后离心洗涤，制得磁性微球。
3.氨基化磁性纳米微球(Fe3O4@SiO2-NH2)的制备
硅醇基氧化硅磁性微球适量，加入无水乙醇、水、浓氨水，最后加入3’-氨丙基三乙氧基硅烷，混合后常温搅拌反应3h，将产物依次用无水乙醇和蒸馏水洗涤，得表面键合氨基的磁性微球。
4.羧基化麦芽糊精制备
50ml水中加入适量氢氧化钠、6-溴己酸，完全溶解后加入麦芽糊精，室温反应3h，停止反应，冰浴下用固体磷酸二氢钠调PH=7，20ml乙酸乙酯萃取一次，水相即含羧基化麦芽糊精。
5.羧基化麦芽糊精修饰的纳米磁性微球的制备
氨基化微球悬于MES缓冲液(pH7.5)中，加入上述所得羧基化麦芽糊精，偶联剂EDC，室温摇床反应12h，磁分离，得麦芽糊精修饰的磁性微球。
实施例2MBP-融合蛋白表达及纯化
将MBP-融合蛋白表达质粒的大肠杆菌在含氨卞青霉素的LB培养基中于37℃培养过夜。次日转接于200mlLB培养基后，置37℃培养至OD600为0.5，加入终浓度为0.1mmol／L的IPTG，继续振摇培养6h。离心、收集菌体，菌体用裂解液(20mmol/L Tris-HCl(pH7.4)，200mmol／L NaCl，10mmol／Lβ-mercaptoethanol，and lmmol／L EDTA)重悬，超声裂解后，12000g离心10min，取上清，将上清与麦芽糊精修饰的纳米磁性微球，使MBP-Aβ融合蛋白结合到偶联麦芽糊精的磁性微球上，再用含有20mmol／L麦芽糖的洗脱缓冲液(20mmol/LTris-HCl(pH7.4)，200mmol／L NaCl)，即得到纯化的MBP-融合蛋白。取菌液离心上清液、磁珠吸附后、洗脱液，加入2×SDS上样缓冲液，100℃加热10min，然后SDS-PAGE凝胶电泳分析MBP-融合蛋白纯化效果，结果如图1所示。从图中可见，仅偶联麦芽糖的磁珠对含MBP-表达标签的融合蛋白无吸附富集能力(Lane A)，而偶联含多个麦芽糖单元的麦芽糊精可特异性富集纯化含MBP-表达标签的融合蛋白(Lane B)。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (11)
1.一种超顺磁性磁性微球，其特征在于，所述磁性微球包括以下部分：
超顺磁性内核，所述的内核为磁性金属纳米粒子；
包裹金属内核的壳层，所述的壳层为有机聚合物层；
连接于壳层外含多个麦芽糖结构单元的糊精，所述糊精通过共价方式与有机聚合物层相连；
其中，所述糊精为平均分子量为1kD～50kD的糊精；
并且，所述含多个麦芽糖结构单元的糊精的麦芽糖聚合度n＝5～400；
所述糊精的葡萄糖当量DE＝0.25-20；
所述的有机聚合物层表面被功能基团修饰；
所述糊精与聚合物层直接相连。
2.如权利要求1所述的磁性微球，其特征在于，所述的有机聚合物层的聚合单体选自下组：氧化硅、苯乙烯、甲基丙烯酸-2-羟基乙酯，异丙基丙烯酰氯，2-(二乙氨基)乙基甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸缩水甘油酯、氯甲基乙烯基苯，甲基丙烯酸，丙烯酸，或其组合。
3.如权利要求2所述的磁性微球，其特征在于，所述的聚合物的单体选自下组：氧化硅、甲基丙烯酸、丙烯酸、甲基丙烯酸缩水甘油酯，或其组合。
4.如权利要求1所述的磁性微球，其特征在于，所述糊精的葡萄糖当量DE＝1-10。
5.如权利要求1所述的磁性微球，其特征在于，所述含多个麦芽糖结构单元的糊精的麦芽糖聚合度n＝10～100。
6.如权利要求1所述的磁性微球，其特征在于，所述糊精为平均分子量为1kD～34kD的糊精。
7.一种制备如权利要求1所述的磁性微球的方法，其特征在于，所述的制备步骤包括：
通过单体聚合制备具有超顺磁性内核-壳层结构即核壳结构的聚合物磁性微球；
对所述微球进行表面氨基功能化修饰；
将麦芽糊精与偶联剂反应，得到单端偶联的麦芽糊精(Dextrin-DSC)；
将所述单端偶联的麦芽糊精与表面氨基功能化修饰的磁性微球反应，磁分离制得麦芽糊精修饰的纳米磁性微球。
8.一种制备如权利要求1所述的磁性微球的方法，其特征在于，所述的制备步骤包括：
通过单体聚合制备具有超顺磁性内核-壳层结构即核壳结构的聚合物磁性微球；
对所述微球进行表面羧基功能化修饰；
制备一端修饰的麦芽糊精；
加入偶联剂，将所述一端修饰的麦芽糊精与表面羧基功能化修饰的磁性微球反应，磁分离，制得麦芽糊精修饰的纳米磁性微球。
9.一种制备如权利要求1所述的磁性微球的方法，其特征在于，所述的制备步骤包括：
通过单体聚合制备表面具有环氧功能基团的聚合物磁性微球；加入麦芽糊精使麦芽糊精与环氧功能基反应，磁分离，制得麦芽糊精修饰的纳米磁性微球。
10.一种麦芽糖融合蛋白分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
提供含麦芽糖融合蛋白的样品；
用如权利要求1所述的磁性微球结合麦芽糖融合蛋白；
分离所述结合蛋白的微球和溶液；
用洗脱液洗脱麦芽糖融合蛋白。
11.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：(a)如权利要求1～6任一所述的磁性微球；(b)一个或多个容器，所述容器用于盛放包含含麦芽糖结合蛋白结构单元的蛋白的样品；和(c)说明书。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005026347A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-24 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method for isolating and purifying a nucleic acid |
| CN102585260A (zh) * | 2007-02-01 | 2012-07-18 | 能波公司 | 干燥生物材料的方法 |
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| EP1335003A3 (en) * | 2002-02-06 | 2004-04-07 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Magnetic carrier capable of binding with protein and purification method of protein utilizing the magnetic carrier |
| CN1226310C (zh) * | 2002-06-26 | 2005-11-09 | 天津大学 | 分子印迹聚合物磁性复合微球及其反相乳液聚合与悬浮聚合的复合制备方法 |
| CN101443354A (zh) * | 2006-04-14 | 2009-05-27 | 新英格兰生物实验室公司 | 与突变麦芽糖结合蛋白融合的靶蛋白的溶解和纯化 |
| US20100125129A1 (en) * | 2008-11-19 | 2010-05-20 | Nature Technology Corp. | Thermostable Fusion Proteins and Thermostable Adjuvant |
| CN102253193A (zh) * | 2010-05-20 | 2011-11-23 | 上海医脉赛科技有限公司 | 一种快速检测微生物的磁性荧光试剂盒及其制备方法和使用方法 |
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|---|---|---|---|---|
| WO2005026347A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-24 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Method for isolating and purifying a nucleic acid |
| CN102585260A (zh) * | 2007-02-01 | 2012-07-18 | 能波公司 | 干燥生物材料的方法 |
| CN103145942A (zh) * | 2013-04-02 | 2013-06-12 | 福州大学 | 一种聚氨酯改性海藻酸钙凝胶微球及其制备方法 |
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