CN104736147B - 用于控制体重的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供能够调节大麻素受体活性的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯‑阿德耳加成物并且涉及能够调节脂肪吸收和储存的黄烷‑3‑醇的低聚物。所述查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯‑阿德耳加成物或黄烷‑3‑醇的低聚物可任选与其它体重控制剂组合使用，所述其它体重控制剂如食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、其它大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂或饱腹剂，以及涉及其使用方法，如治疗或预防体重增加或肥胖、促进体重减轻、食欲抑制、改进饱腹感等。

Description

用于控制体重的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2012年5月29日提交的美国临时专利申请号61/652,807和2013年3月14日提交的美国临时专利申请号61/783,729在35U.S.C.§119(e)下的权益，其中这两个临时申请以引用的方式整体并入本文。
背景
技术领域
本公开涉及用于体重控制的组合物和方法，并且更具体地涉及查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物，涉及黄烷-3-醇的低聚物或两者，任选地与其它体重控制剂组合，如食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂或饱腹剂，以及涉及其使用方法，如治疗或预防体重增加或肥胖，促进体重减轻、食欲抑制，改进饱腹感等。
相关技术描述
肥胖是食物问题。在工业化国家，富裕为公众提供了丰富和变化的食品。具有相关味道和嗅觉乐趣的食物是一种享乐，不只是为了基本生存。因此，肥胖和肥胖相关的健康问题正快速增加并且存在对帮助体重控制的膳食补充剂的强烈需要。降低体重的食物补充剂的市场规模极大并且存在很少的有效产品。
多年来，大麻(Cannabis sativa)(大麻(marijuana))被认为通过其活性组分δ-9-四氢大麻酚(THC)(外源性大麻素)的作用刺激食物消耗。此作用引起研究它的作用机理。最终克隆了用于THC的结合位点并且称为CB1和CB2。这些受体属于其特征在于七个跨膜环结构域的G-蛋白偶联的家族。这两个受体属于Gi/0亚类并且通过负调节环状AMP水平来发信号。CB1还显示出激活钾通道。CB2受体存在于免疫细胞中并且不涉及食物消耗的调节。涉及进食行为的大麻素受体CB1广泛地表达在脑组织和外周组织中，包括脂肪组织、骨骼肌、肝脏和胃肠(GI)道。
大多数公布的CB1受体拮抗剂可最好称为“反向激动剂”，因为它们能够抑制未占据的CB1受体的组成型活性。这组化合物的主要临床指征为肥胖和物质滥用。在过去，已在临床研究中测试了五种CB1化合物。它们包括利莫那班(Rimonabant)(Sanofi-Aventis，于2006年推出)、MK-0364(Merck，III期)、溴乙那班(Surinabant)和AVE-1625(Sanofi-Aventis，II期)以及SLV-319(Solvay，II期)。利莫那班(作为RimoslimTM或销售)为1994年发现的第一种选择性CB1拮抗剂。它在37个国家被批准，但此后它由于神经副作用已从肥胖治疗中撤销。
市场上的另一种产品为四氢利普他丁(tetrahydrolipstatin)(奥利司他(orlistat)，作为或出售)。基于其抑制脂肪酸合酶从化学文库中鉴定出奥利司他，但开发为胰甘油三酯脂肪酶抑制剂。但是，奥利司他由于肝脏毒性的情况已置于具有潜在严重危险信号的药物列表上，这导致产品标签改变并且FDA继续评估此问题以确定任何进一步调节动作的需要(参见www.fda.gov/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Surveillance/AdverseDrugEffects/ucm161063.htm)。
由上可知，对用于体重控制的改进组合物和方法的需要是明显的。
简述
简而言之，本公开涉及有用于体重控制的化合物和组合物以及相关方法，所述化合物和组合物包括化合物的立体异构体、药学上或营养学上可接受的盐、互补异构体、糖苷和前药，以及所述化合物和组合物在体重控制和相关方法中的用途。
在一个实施方案中，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和至少一种其他体重控制剂，其中体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂或饱腹剂，其中查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为具有式I或II结构的化合物：
或其药学上或营养学上可接受的盐、互补异构体、糖苷或立体异构体，其中取代基如本文所定义。
在另一方面，本公开提供了用于使用组合物控制体重的方法，所述组合物包含查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物或连同至少一种其它体重控制剂一起使用的查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物。在某些实施方案中，本公开的组合物可用于以下方法中，所述方法用于治疗、预防或控制体重增加或肥胖或超重、促进或控制体重下降、食欲抑制、减少食物渴求、减少两餐之间和晚上进食、改进饱腹感、改进脂肪摄取或脂肪吸收、增加代谢以促进体重下降或预防体重增加、维持体重、促进脂肪燃烧、增加脂解、减少身体脂肪或脂肪组织、增加肌肉或瘦体重、减少肝脂肪变性、改善脂肪肝、改善一种或多种肝NASH分数、增强脂肪代谢、减少促炎性脂肪因子的释放、从脂肪组织中脂连蛋白增加、促进健康脂质特征(通过，例如降低LDL胆固醇、降低总胆固醇、降低甘油三酯或增加HDL)、促进糖代谢、降低空腹血糖水平、阻断碳水化合物的吸收、维持健康的血糖水平、减少热量摄入、提高热效率、减少食物摄入、减少内脏脂肪、减小腰围、减小身体对质量指数(BMI)或其任何组合。
本发明的这些和其它方面将在参考以下详述时变得明显。
附图简述
图1示出用以下之一处理8周的高脂肪膳食的小鼠的平均体重的图表：木兰提取物、桑树提取物、Mutamba提取物、迷迭香提取物或巴拉圭茶提取物。阴性对照包括没有接受处理的高脂肪膳食(HFD)的小鼠和保持在正常膳食对照(NC)上的小鼠，而阳性对照为用奥利司他处理的高脂肪膳食的小鼠。
图2示出用以下提取物组合之一处理8周的高脂肪膳食的小鼠的平均体重的图表：(1)实施例63的组合物1A(3种组分)–木兰(100mg/kg):桑树(200mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg)；(2)组合物2A(3种组分)–木兰(100mg/kg):桑树(200mg/kg):Mutamba(500mg/kg)；(3)实施例68的组合物10(3种组分)–木兰(100mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg):Mutamba(500mg/kg)；(4)组合物12(3种组分)–桑树(200mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg):Mutamba(500mg/kg)；以及(5)实施例73的组合物11(4种组分)–木兰(100mg/kg):桑树(200mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg):Mutamba(500mg/kg)。阴性对照包括没有接受处理的高脂肪膳食(HFD)的小鼠和保持在正常膳食(ND)上的小鼠，而阳性对照为用奥利司他(ORI)处理的高脂肪膳食的小鼠。
图3示出Mutamba级分84/F6的MALDI-TOF正离子模式质谱，所述Mutamba级分84/F6从Mutamba茎皮EtOH提取物84中产生。
详述
本公开提供查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和至少一种其它体重控制剂的组合物。查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物可从某些植物或某些植物部分如桑树根皮获得或富集，并且可用作大麻素受体(例如CB1、CB2)调节剂。大麻素受体活性的调节可有助于控制体重或糖尿病。与查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物一起使用的示例性体重控制剂包括食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、其它大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。此外，本公开的查耳酮和异戊烯苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物以及其组合物可用于治疗或预防体重相关的病症的方法中。
在以下描述中，列出某些具体细节以便提供本公开各种实施方案的全面理解。然而，本领域技术人员将理解本发明可在不需要这些细节的情况下实践。
在本描述中，除非另外指出，任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应该理解为包括列举的范围内的任何整数值，并且当适当时包括其分数(如整数的十分之一和百分之一)。因此，除非另外指出，本文列举的涉及任何物理特征的任何数字范围如聚合物亚基、大小或厚度应该理解为包括列举的范围内的任何整数。如本文所使用，除非另外指出，术语“大约”和“基本上由......组成”是指所指示的范围、值或结构的±20％。应该理解，如本文所使用的术语“一个/种(a/an)”是指所列举的组分的“一种或多种”。使用替代(例如，“或”)应该理解为意指多个替代中的任一、两者或其任何组合。除非上下文另外要求，否则贯穿本说明书和权利要求书，词语“包含(comprise)”及其变体如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”以及同义术语像“包括”和“具有”以及其变体应该解释为开放、包括的含义；即，如“包括，但不限于”。
贯穿本说明书引用“一个实施方案(one embodiment)”或“一个实施方案(anembodiment)”意指连同包括在本发明的至少一个实施方案中的实施方案一起描述的具体特点、结构或特征。因此，贯穿本说明书在各个地方出现短语“在一个实施方案中(in oneembodiment)”或“在一个实施方案中(in an embodiment)”不必要全部是指相同的实施方案。此外，具体特点、结构或特征可以任何适合的方式组合在一个或多个实施方案中。
“氨基”是指-NH2基团。
“氰基”是指-CN基团。
“羟基(Hydroxy)”或“羟基(hydroxyl)”是指-OH基团。
“亚氨基”是指＝NH取代基。
“硝基”是指-NO2基团。
“氧代”是指＝O取代基。
“硫代”是指＝S取代基。
“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成的直链或支链的烃链基团，所述烷基为饱和的或不饱和的(即，含有一个或多个双键或三键)，具有1至12个碳原子(C1-C12烷基)、或1-8个碳原子(C1-C8烷基)或1至6个碳原子(C1-C6烷基)，并且所述烷基通过单键连接至分子的其余部分，所述单键例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1,1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基、乙烯基、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基、乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。除非在说明书中另外具体说明，否则烷基可任选被取代。
“亚烷基”或“亚烷基链”是指将分子的其余部分连接至基团的直链或支链的二价烃链，其仅由碳和氢组成，所述亚烷基或亚烷基链为饱和的或不饱和的(即，含有一个或多个双键或三键)，并且具有1至12个碳原子，例如亚甲基，亚乙基、亚丙基、正亚丁基、亚乙烯基、亚丙烯基、正亚丁烯基、亚丙炔基、正亚丁炔基等。亚烷基链通过单键或双键连接至分子的其余部分并且通过单键或双键连接至基团。将亚烷基链连接至分子的其余部分和连接至基团的点可通过链内的一个碳或任何两个碳。除非在说明书中另外具体说明，否则亚烷基链可任选被取代。
“烷氧基”是指式-ORa的基团，其中Ra为含有1至12个碳原子的如上所定义的烷基。除非在说明书中另外具体说明，否则烷氧基可任选被取代。
“烷基氨基”是指式-NHRa或-NRaRa的基团，其中每个Ra独立地为含有1至12个碳原子的如上所定义的烷基。除非在说明书中另外具体说明，否则烷基氨基可任选被取代。
“硫代烷基”是指式-SRa的基团，其中Ra为含有1至12个碳原子的如上所定义的烷基。除非在说明书中另外具体说明，否则硫代烷基可任选被取代。
“芳基”是指包含氢、6至18个碳原子和至少一个芳环的烃环系统基团。出于本公开的目的，芳基可为单环、双环、三环或四环的环体系，其可包括稠环系统或桥环系统。芳基包括衍生自醋蒽烯、苊、醋菲烯、蒽、薁、苯、屈、荧蒽、芴、不对称引达省、对称引达省、茚满、茚、萘、非那烯、菲、七曜烯、芘以及三亚苯的芳基。除非在说明书中另外具体说明，否则术语“芳基”或前缀“ar-”(如在“芳烷基”中)意指包括任选取代的芳基。
“芳烷基”是指式-Rb-Rc的基团，其中Rb为如上所定义的亚烷基链并且Rc为如上所定义的一个或多个芳基，例如苯甲基、二苯甲基等。除非在说明书中另外具体说明，否则芳烷基可任选被取代。
“环烷基”或“碳环”是指仅由碳原子和氢原子组成的稳定非芳香族单环或多环烃基，其可包括稠环系统或桥环系统，具体3至15个碳原子，或具有3至10个碳原子，并且其为饱和的或不饱和的并且通过单键连接至分子的其余部分。单环基团包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。多环基团包括例如金刚烷基、降冰片基、十氢萘基、7,7-二甲基-双环[2.2.1]庚基等。除非在说明书中另外具体说明，否则环烷基可任选被取代。
“环烷基烷基”是指式-RbRd的基团，其中Rb为如上所定义的亚烷基链并且Rd为如上所定义的环烷基。除非在说明书中另外具体说明，否则环烷基烷基可任选被取代。
“稠合”是指稠合至本公开的化合物中的现有环结构的本文所描述的任何环结构。当稠环为杂环基环或杂芳基环时，变为稠合杂环基环或稠合杂芳基环的一部分的现有环结构上的任何碳原子可用氮原子替换。
“卤”或“卤素”是指溴、氯、氟或碘。
“卤代烷基”是指被如上所定义的一个或多个卤代基取代的如上所定义的烷基，例如三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1,2-二溴乙基等。除非在说明书中另外具体说明，否则卤代烷基可任选被取代。
“杂环基”或“杂环”是指由2至12个碳原子和1至6个杂原子组成的稳定3元至18元非芳环基团，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。除非在说明书中另外具体说明，否则杂环基可为单环、双环、三环或四环的环系统，其可包括稠环系统或桥环系统；并且杂环基中的氮、碳或硫原子可任选被氧化；氮原子可任选被季铵化；并且杂环基可为部分或完全饱和的。所述杂环基的实例包括二氧戊环基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异恶唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、恶唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、硫吗啉基、1-氧代硫代吗啉基以及1,1-二氧代-硫代吗啉基。除非在说明书中另外具体说明，除非在说明书中另外具体说明，否则杂环基可任选被取代。
“N-杂环基”是指含有至少一个氮的如上所定义的杂环基，并且其中杂环基连接至分子的其余部分的点通过杂环基中的氮原子。除非在说明书中另外具体说明，否则N-杂环基可任选被取代。
“杂环基烷基”是指式-RbRe的基团，其中Rb为如上所定义的亚烷基链并且Re为如上所定义的杂环基，并且如果杂环基为含氮杂环基，杂环基可在氮原子处连接至烷基。除非在说明书中另外具体说明，否则杂环基烷基可任选被取代。
“杂芳基”是指包含氢原子、1至13个碳原子、1至6个杂原子以及至少一个芳环的5元至14元环系统，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组。出于本公开的目的，杂芳基可为单环、双环、三环或四环的环系统，其可包括稠环系统或桥环系统；并且杂芳基中的氮、碳或硫原子可任选被氧化；氮原子可任选被季铵化。实例包括氮杂基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并吲哚基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧杂环戊烯基、1,4-苯并二恶烷基、苯并萘并呋喃基、苯并恶唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并二氧杂环己烯基、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻嗯基(苯并噻吩基)、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、吲嗪基、异恶唑基、萘啶基、恶二唑基、2-氧代氮杂基、恶唑基、环氧乙烷基、1-氧化吡啶基、1-氧化嘧啶基、1-氧化吡嗪基、1-氧化哒嗪基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、奎宁环基、异喹啉基、四氢喹啉基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基以及苯硫基(即噻嗯基)。除非在说明书中另外具体说明，否则杂芳基可任选被取代。
“N-杂芳基”是指含有至少一个氮的如上所定义的杂芳基，并且其中杂芳基连接至分子的其余部分的点通过杂芳基中的氮原子。除非在说明书中另外具体说明，否则N-杂芳基可任选被取代。
“杂芳基烷基”是指式-RbRf的基团，其中Rb为如上所定义的亚烷基链并且Rf为如上所定义的杂芳基。除非在说明书中另外具体说明，否则杂芳基烷基可任选被取代。
本文所使用的术语“取代”意指任何上述基团(即，烷基、亚烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基或杂芳基烷基)，其中至少一个氢原子通过键替换为非氢原子中，如卤素原子，如F、Cl、Br和I；基团如羟基、烷氧基和酯基团中的氧原子；基团如硫醇基、硫代烷基、砜基团、磺酰基和亚砜基团中的硫原子；基团如胺、酰胺、烷基胺、二烷基胺、芳胺、烷基芳胺、二芳胺、N-氧化物、酰亚胺和烯胺中的氮原子；基团如三烷基甲硅烷基、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基和三芳基甲硅烷基中的硅原子；以及各种其它基团中的其它杂原子。“取代”还意指任何上述基团，其中一个或多个氢原子通过高级键(例如，双键或三键)替换为杂原子，如氧代、羰基、羧基和酯基团中的氧；和基团如亚胺、肟、腙和腈中的氮。例如，“取代”包括任何上述基团，其中一个或多个氢原子被替换为-NRgRh、-NRgC(＝O)Rh、-NRgC(＝O)NRgRh、-NRgC(＝O)ORh、-NRgSO2Rh、-OC(＝O)NRgRh、-ORg、-SRg、-SORg、-SO2Rg、-OSO2Rg、-SO2ORg、＝NSO2Rg以及-SO2NRgRh。“取代”还意指任何上述基团，其中一个或多个氢原子被替换为-C(＝O)Rg、-C(＝O)ORg、-C(＝O)NRgRh、-CH2SO2Rg、-CH2SO2NRgRh。在上述中，Rg和Rh为相同或不同的并且独立地为氢、烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基或杂芳基烷基。“取代”进一步意指任何上述基团，其中一个或多个氢原子通过键替换为氨基、氰基、羟基、亚氨基、硝基、氧代、硫代、卤代、烷基、烷氧基、烷基氨基、硫代烷基、芳基、芳烷基、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、杂环基、N-杂环基、杂环基烷基、杂芳基、N-杂芳基或杂芳基烷基。另外，每个上述取代基还可任选地被一个或多个上述取代基取代。
“糖苷”是指其中经过糖苷键将糖基团通过其异头碳键合至另一个基团的分子。示例性糖包括葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡糖苷酸以及其它糖。糖苷可通过O-(O-糖苷)、N-(葡基胺)、S-(硫代糖苷)或C-(C-糖苷)糖苷键来连接。本公开的化合物可在任何适合的连接点处形成糖苷。
“异戊烯基”是指基团。异戊烯基包括异戊二烯基，所述异戊二烯基是指基团(顺式或反式)。异戊烯基可为取代的或未取代的。
“异戊烯基苯基”是指连接至如上所定义的异戊烯基部分的苯基部分。异戊烯基苯基包括取代的苯基如类黄酮和其它取代的苯基和杂芳基，前提是在分子中存在至少一个异戊烯基。在取代的苯基和杂芳基的情况下，异戊烯基部分不需要直接连接至苯环，而可在分子中的任何点处连接。
“查耳酮”是指包含以下核心结构的化合物：
查耳酮可在任何上述碳原子处被各种取代。
“前药”意思是指可在生理条件下或通过溶剂分解转化成本公开的生物活性化合物的化合物。因此，术语“前药”是指药学上和营养学上可接受的本公开的化合物的代谢前体。前药可在向有需要的受试者施用时为非活性的，但在体内转化成本公开的活性化合物。前药通常例如通过血液中的水解在体内快速转变以产生本公开的母体化合物。前药化合物常常在哺乳动物生物中提供溶解性、组织相容性或延迟释放的优点(参见，Bundgard,H.,Design of Prodrugs(1985),第7-9、21-24页(Elsevier,Amsterdam))。前药的讨论提供于Higuchi,T.等,A.C.S.Symposium Series,第14期和Bioreversible Carriers in Drug Design,编著Edward B.Roche,American Pharmaceutical and Nutraceuti calAssociation and Pergamon Press,1987中。
术语“前药”还意指包括任何共价键合的载体，其中当向哺乳动物受试者施用所述前药时在体内释放本公开的活性化合物。本公开的化合物的前药可通过以用常规操纵或在体内使改性物裂解成本公开的母体化合物的方式改性存在于本公开的化合物中的官能团来制备。前药包括本公开的化合物，其中羟基、氨基或巯基键合至任何基团，所述任何基团在本公开的化合物的前药向哺乳动物受试者施用时分别裂解形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括本公开化合物中的醇官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物或胺官能团的酰胺衍生物。
本公开还意指涵盖结构(I)的所有药学上或营养学上可接受的化合物，所述化合物被具有不同原子量或质量数的原子替换的一个或多个原子同位素标记。可并入所公开的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，分别如2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl、123I和125I。这些放射性标记的化合物可有用于帮助确定或测量化合物的有效性，通过表征例如作用的位点或模式、或作用的药理学重要位点的结合亲和力。某些结构(I)的经同位素标记的化合物(例如并入放射性同位素的那些)有用于药物或底物组织分布研究。放射性同位素氚(即3H)和碳-14(即14C)鉴于其容易并入和现成的检测手段而特别有用于此目的。
被较重的同位素如氘(即2H)取代可提供由较大的代谢稳定性产生的某些治疗优势(例如体内半衰期增加或剂量需求减少)，并且因此在一些情况下可能为优选的。
被正电子发射同位素(如11C、18F、15O和13N)取代可有用于检验底物受体占据的正电子发射断层(PET)研究。结构(I)的经同位素标记的化合物可通常通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于如下列出的制备和实施例中描述的那些方法，使用适当的经同位素标记的试剂替代先前所采用的未标记的试剂来制备。
本公开还意指涵盖所公开的化合物的体内代谢产物。所述产物可例如由所施用的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等产生，主要由于酶促过程。因此，本公开包括由一种方法产生的化合物，所述方法包括向哺乳动物施用本发明的化合物持续足以产生其代谢产物的一段时间。所述产物通常通过向动物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或向人施用可检测剂量的本公开经放射性标记的化合物，允许代谢发生足够时间，并且从尿、血液或其它生物样品中分离其转化产物来鉴定。
“稳定化合物”和“稳定结构”意思是指足够坚固以在从反应混合物中分离成有用纯度中存在并且配制到有效治疗剂中的化合物。
“哺乳动物”包括人和家养动物(如实验室动物或家庭宠物(例如，猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔))和非家养动物(如野生动物等)。
“任选的”或“任选地”意指随后描述的元件、组分、事件或情况可发生或可不发生，并且描述包括其中元件、组分、事件或情况发生的情形和其中它们没有发生的情形。例如，“任选地取代的烷基”意指烷基可以是取代的或可以不是取代的，并且描述包括取代的芳基和不具有取代的芳基。
“药学上或营养学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括已通过美国食品和药物管理局批准为可接受用于人或家养动物的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
“药学上或营养学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。
“药学上或营养学上可接受的酸加成盐”是指保留游离碱的生物有效性和性质、不是生物学或其它方式不希望的并且通过无机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)和有机酸(如乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己氨磺酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、十一碳烯酸等)形成的那些盐。
“药学上或营养学上可接受的碱加成盐”是指保留游离酸的生物有效性和性质、不是生物学或其它方式不希望的那些盐。这些盐通过无机碱或有机碱加成游离酸来制备。衍生自无机碱的盐包括钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。在某些实施方案中，无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐或镁盐。衍生自有机碱的盐包括以下物质的盐：伯胺、仲胺和叔胺、取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂，如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、普鲁卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、苯乙苄胺、苄星青霉素、乙二胺、葡糖胺、甲葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。特别有用的有机碱为异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱和咖啡因。
常常结晶产生本公开的化合物的溶剂化物。如本文所使用，术语“溶剂化物”是指包含本公开的化合物的一个或多个分子与溶剂的一个或多个分子的聚集体。溶剂可为水，在所述情况下溶剂化物可为水合物。或者，溶剂可为有机溶剂。因此，本发明的化合物可作为水合物存在，包括一水合物，二水合物，半水合物，倍半水合物，三水合物，四水合物等以及相应的溶剂化形式。本公开的化合物可为真正的溶剂化合物，而在其它情况下，本公开的化合物可仅仅保留外来的水或作为水加一些外来溶剂的混合物。
“药物组合物”或“营养组合物”是指本公开的化合物和本领域中普遍接受用于递送生物活性化合物至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。例如，本公开的药物组合物可被配制或用作独立组合物，或作为处方药物、非处方(OTC)药品、植物药物、草药、顺势疗法药剂或政府机构审查和批准的任何其它形式的保健品中的组分。本公开的示例性营养组合物可被配制或用作独立组合物，或作为食物、功能性食物、饮料、食物棒、食物香料、医疗食品、膳食补充剂或草药产品中的营养组分或生物活性组分。本领域中普遍接受的介质包括所有药学上或营养学上可接受的载体、稀释剂或其赋形剂。
如本文所使用，“富集”是指与提取或其它制备之前存在于植物材料或其它来源重量中的一种或多种活性化合物的量相比，具有至少2倍高达至约1000倍的一种或多种活性化合物增加的植物提取物或其它制剂。在某些实施方案中，提取或其它制备之前的植物材料或其它来源的重量可为干重、湿重或其组合。
如本文所使用，“主要活性成分”或“主要活性组分”是指存在于植物提取物或其它制剂中或富集在植物提取物或其它制剂中的一种或多种活性化合物，所述活性化合物能够具有至少一种生物活性。在某些实施方案中，富集的提取物的主要活性成分将为富集在所述提取物中的一种或多种活性化合物。通常，与其它提取物组分相比，一种或多种主要活性组分将直接或间接地赋予大多数(即，大于50％)的一种或多种可测量的生物活性或作用。在某些实施方案中，主要活性成分可为按提取物重量百分比计次要的组分(例如，包含在提取物中的小于50％、25％或10％的组分)，但仍提供大多数的希望的生物活性。含有主要活性成分的本公开的任何组合物还可包含可以或可以不促成富集的组合物的药物活性或营养活性的次要活性成分(但没有达到主要活性成分的水平)和在不存在主要活性成分的情况下可以不是有效的单独地次要活性成分。
“有效量”或“治疗有效量”是指当向哺乳动物(如人)施用时足以实现治疗的本公开的化合物或组合物的量，所述治疗包括以下任何一种或多种：(1)治疗或预防哺乳动物体重增加；(2)促进体重减轻；(3)抑制哺乳动物食欲；(4)改进哺乳动物的饱腹感；(5)治疗或预防哺乳动物肥胖；(6)改进哺乳动物的脂肪摄入；以及(7)增加代谢以促进哺乳动物体重减轻或预防体重增加。构成“治疗有效量”的本公开的化合物或组合物的量将取决于化合物、治疗的病状及其严重性、施用方式、治疗持续时间或待治疗的受试者年龄而改变，但常规可通过本领域普通技术人员考虑其自己的知识和本公开内容来确定。
如本文所使用的“膳食补充剂”为改善、促进、增加、管理、控制、维护、优化、改进、降低、抑制或预防与天然状态或生物过程相关的具体病状的产品(即，不用于诊断、治疗、缓解、治愈或预防疾病)。例如，相对于体重相关的病状，膳食补充剂可用来促进体重减轻、控制体重增加、维持体重、改进饱足感、减少热量摄入、增加肌肉质量等。示例性膳食补充剂包括一种或多种膳食成分，如维生素、矿物质、草药或其它植物、氨基酸或通过增加总膳食摄入用来补充饮食的任何其它物质或浓缩物、代谢物、成分、提取物或其任何组合。在某些实施方案中，膳食补充剂是食物的特殊分类并且不是药物。
如本文所使用的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指治疗具有感兴趣的疾病或病状的哺乳动物(如人)体内的感兴趣的疾病或病状，并且包括：(i)预防疾病或疾状在哺乳动物中出现，具体地当所述哺乳动物易患病状但尚未诊断患有所述病状时；(ii)抑制疾病或病状，即阻止其发展；(iii)减轻疾病或病状，即引起疾病或病状消退；或(iv)减轻由疾病或病状产生的症状(例如，减轻疼痛、减少炎症、引起体重减轻)而不解决潜在的疾病或病状。如本文所使用，术语“疾病”和“病状”可互换地使用或可为不同的，因为具体疾病或病状可以不具有已知的致病因素(以致于尚未找出病因)，并且因此它是还没有确认为疾病而是仅仅作为不希望的病状或综合症，其中或多或少的一组具体症状已由临床医生鉴定出。
如本文所使用，“统计学显著”是指使用学生t-检验计算时p值为0.050或更小，并且指示测量的具体事件或结果不可能偶然引起。
本公开的化合物或其药学上或营养学上可接受的盐可包含一个或多个不对称中心并且可因此引起对映异构体、非对映异构体和其它以绝对立体化学的方式可被定义的立体异构体形式，如(R)-或(S)-或如(D)-或(L)。例如，结构I或II的化合物可至少在结构下方用*注释的位置处具有手性中心。
因此，在某些实施方案中，标记有上述*的位置(和化合物I和II内的各种其它位置)可各自独立地呈R或S异构体形式存在，并且本发明意指包括所有所述可能的异构体以及其外消旋形式和光学纯形式。可使用手性合成子或手性试剂来制备光学活性(+)和(-)、(R)-和(S)-或(D)-和(L)-异构体，或使用常规技术例如色谱法和分级结晶来拆分。用于制备/分离单个对映异构体的常规技术包括从适合的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。当本文所述的化合物含有烯烃双键或其它几何不对称中心并且除非另外指出时，意图为化合物包括E和Z几何异构体。同样，还意图包括所有互变异构体形式。
“立体异构体”是指由相同原子通过相同键键合而组成的化合物，但具有不同的三维结构，其为不可互换的。本发明涵盖了各种立体异构体及其混合物并且包括“对映异构体”，其是指两种立体异构体，其分子为彼此不可重叠的镜像。
“互变异构体”是指质子从分子的一个原子转移到相同分子的另一个原子。本发明包括任何所述化合物的互变异构体。
本文所使用的化学命名方案和结构图为使用ACD/Name版本9.07软件程序或ChemDraw超版11.0软件命名程序(CambridgeSoft)的I.U.P.A.C.命名系统的修改形式，其中本公开的化合物在本文中称为中心核心结构例如咪唑并吡啶结构的衍生物。针对本文所采用的复杂化学名称，在其连接至基团之前命名取代基。例如，环丙基乙基包含具有环丙基取代基的乙基骨架。除了如下所述，在本文的化学结构图中标识出所有键，除了一些碳原子，假设所述碳原子键合至足够的氢原子以完成化合价。
如本文所述，在某些实施方案中，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和至少一种其它体重控制剂，其中体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂或饱腹剂，其中查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为具有式I或II结构的化合物：
或其药学上或营养学上可接受的盐、互变异构体、糖苷、前药或立体异构体，其中：
R1a和R1b各自独立地为C1-12烷基；
R2a和R2b各自独立地为H或R2a或R2b分别与以下之一连接以形成醚键：R4a、R5a、R6a、R7a、R12a、R13a、R14a或R15a或R4b、R5b、R6b、R7b、R12b、R13b、R14b或R15b；
R3a和R3b各自独立地为H、羟基或氧代；
R4a、R5a、R6a和R7a各自独立地为H、羟基、卤素、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或R4a、R5a、R6a或R7a之一与R4a、R5a、R6a或R7a中的另一个连接以形成杂环或杂芳环或R4a、R5a、R6a或R7a之一与X1连接以形成直接键；
R4b、R5b、R6b和R7b各自独立地为H、羟基、卤素、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或R4b、R5b、R6b、R7b之一与R4b、R5b、R6b、R7b中的另一个连接以形成杂环或杂芳环或R4b、R5b、R6b或R7b之一与X2连接以形成直接键；
R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a和R11b各自独立地为H、羟基、卤素、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或R8a、R9a、R10a或R11a之一R8b、R9b、R10b或R11b之一分别与R8a、R9a、R10a或R11a中的另一个或R8b、R9b、R10b或R11b中的另一个连接以形成杂环或杂芳环；
R12a、R13a、R14a和R15a各自独立地为H、羟基、卤素、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或R12a、R13a、R14a、R15a之一与R12a、R13a、R14a或R15a中的另一个连接以形成杂环或杂芳环或R12a、R13a、R14a或R15a之一与Y1连接以形成醚键；
R12b、R13b、R14b和R15b各自独立地为H、羟基、卤素、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷基氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或R12b、R13b、R14b、R15b之一与R12b、R13b、R14b或R15b中的另一个连接以形成杂环或杂芳环；
X1连接R4a、R5a、R6a或R7a之一以形成直接键或X1与Y1连接以形成氧代部分；
X2与R4b、R5b、R6b或R6b之一连接以形成直接键或X2与Y2连接以形成氧代部分；
Y1为H或Y1与R12a、R13a、R14a或R15a之一连接以形成醚键或Y1与相邻脂肪族碳连接以形成环氧乙烷环；
Y2为H或Y2与相邻脂肪族碳连接以形成环氧乙烷环；并且
虚线键表示使得所有化合价饱和的任何双键。
在上述的另外实施方案中，R1a和R1b各自独立地为甲基、
在一些实施方案中，R2a和R2b为H。在其它实施方案中，R3a和R3b为H。
在又其它实施方案中，化合物具有以下结构(Ia)或(IIa)：
在还其它实施方案中，化合物具有以下结构(Ib)或(IIb)：
在上述组合物的其它方面中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b各自独立地为H、羟基、卤素、C1-12烷氧基、C1-12烷基或杂芳基，或R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a或R15b之一与相同环上的R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b中的另一个连接以形成杂芳环。
在一些实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a或R15b之一与相同环上的R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b中的另一个连接以形成杂芳环。例如，在一些实施方案中，上述R基团可连接形成二氧亚甲基并且因此所形成的杂芳环为任选取代的苯并二恶唑。
在还其它实施方案中，化合物具有以下结构(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)或(IIg)之一：
其中R每次出现时独立地为H、羟基或C1-12烷基。
在上述的另外实施方案中，化合物具有以下结构(Ih)、(Ii)、(Ij)、(Ik)、(Il)、(IIh)、(IIi)、(IIj)、(IIk)或(IIl)之一：
在还其它实施方案中，至少一个R为羟基，并且在其它实施方案中至少一个R为
在其它相关实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b中的至少两个为羟基。
在一些示例性组合物中，化合物具有以下结构(Im)、(In)、(IIm)或(IIn)之一：
在一些实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a或R15b中的至少一个为在其它实施方案中，R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a或R15b中的至少一个为杂芳基。例如，在一些实施方案中，杂芳基选自：
其中R每次出现时独立地为H、羟基或C1-12烷基。例如，在一些实施方案中，至少一个R为羟基，并且在其它实施方案中，至少一个R为
在还其它实施方案中，X1与R4a、R5a、R6a或R7a之一连接以形成直接键或X2与R12b、R13b、R14b或R15b之一连接以形成直接键并且化合物具有以下结构(Io)或(IIo)之一：
例如，在一些另外实施方案中，化合物具有以下结构(Ip)或(IIp)之一：
在还一些其它另外的实施方案中，Y1与R12a、R13a、R14a或R15a之一连接以形成醚键并且化合物具有以下结构(Iq)或(Ir)之一：
在一些更具体的实施方案中，化合物选自提供于表A中的任何化合物。
表A 示例性化合物列表
可从指定植物种类或某些植物部分(例如，来自树皮、树干、树干皮、茎皮、根、根皮、树皮表面、叶、果实、花、其它植物部分或其任何组合)中提取、分离或纯化表A中的化合物或可如下更详细地描述合成或半合成制备表A中的化合物。在某些实施方案中，富集表A的一种或多种化合物或表A的一种或多种化合物作为指定植物种类的提取物中的主要活性成分，其中富集的提取物获自整个植物或某些植物部分，如叶、树皮、树干、树干皮、茎、茎皮、细枝、块茎、根、根皮、树皮表面、嫩梢、根茎、种子、果实、雄蕊群、雌蕊群、花萼、雄蕊、花瓣、萼片、心皮(雌蕊)、花或其任何组合。
应该理解，如上所列出的结构(I)或(II)的化合物的任何实施方案和用于如上所列出的结构(I)或(II)的化合物的本文所列出的任何具体取代基可独立地与结构(I)或(II)的化合物的其它实施方案或取代基组合以形成以上没有具体列出的本公开的实施方案。另外，在针对具体实施方案或权利要求中的任何具体R基团列出取代基的列表的事件中，应该理解每个单独的取代基可从具体实施方案或权利要求中删除并且剩余的取代基列表将认为在本公开的范围内。
出于施用的目的，本发明的化合物可作为原料化学品施用或可配制成药物组合物或营养组合物。本发明的药物组合物或营养组合物包含结构(I)或(II)的化合物和药学上或营养学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。结构(I)或(II)的化合物以有效于治疗感兴趣的具体疾病或病状的量存在于组合物中-即，以充分促进体重减轻或本文所述的任何其它相关指征的量，并且通常对患者具有可接受的毒性。体重减轻和结构(I)或(II)的化合物的其它活性可通过本领域技术人员例如在以下实施例中所述来确定。适当的浓度和剂量可通过本领域技术人员容易地确定。
施用以纯的形式或以适当的药物或营养组合物形式的本公开的化合物或其药学上或营养学上可接受的盐可经过用于类似应用的任何接受的施用方式来进行。本发明的药物或营养组合物可通过将本公开的化合物与适当的药学上或营养学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合来制备，并且可配制成固体、半固体、液体或气态形式，如片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、软膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球和气雾剂。施用所述药物或营养组合物的常用途径包括经口、局部、透皮、吸入、肠胃外、舌下、颊、直肠、阴道或鼻内。如本文所使用的术语肠胃外包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术。配制本公开的药物或营养组合物以便允许在向患者施用组合物时包含在其中的活性成分为生物可利用的。将向受试者或患者施用的组合物采用一个或多个剂量单位形式，其中例如，片剂可为单一剂量单位，并且以气雾剂形式的本公开的化合物的容器可容纳多个剂量单位。制备所述剂型的实际方法为已知的或为本领域技术人员所显而易见的；例如，参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版(Philadelphia College ofPharmacy and Science,2000)。在任何事件中，待施用的组合物含有治疗有效量的本公开的化合物或其药学上或营养学上可接受的盐用于根据本发明的教义治疗感兴趣的疾病或病状。
本公开的药物或营养组合物可以固体或液体形式。在一方面，载体为微粒，以使得组合物例如以片剂或粉剂形式。载体可为液体，其中组合物为例如口服糖浆、可注射液体或气雾剂，所述气雾剂用于例如吸入施用。
在意图经口施用时，药物或营养组合物为固体或液体形式，其中半固体、半液体、悬浮液和凝胶形式包括在本文认为是固体或液体的形式内。
作为用于经口施用的固体组合物，药物或营养组合物可配制成粉剂、颗粒剂、压缩片剂、丸剂、胶囊剂、口香糖、薄片、棒或类似形式。这样一种固体组合物将通常含有一种或多种惰性稀释剂或可食用载体。另外，可存在以下的一种或多种：粘合剂如羧甲基纤维素、乙基纤维素、环糊精、微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉、乳糖或糊精，崩解剂如藻酸、藻酸钠、羟乙酸钠、玉米淀粉等；润滑剂如硬脂酸镁或氢化植物油(Sterotex)；助流剂如胶体二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙调味剂以及着色剂。
当药物或营养组合物呈胶囊形式时，例如明胶胶囊，它可含有除了以上类型的材料之外的液体载体，如聚乙二醇或油。
药物或营养组合物可呈液体的形式，例如酏剂、糖浆、溶液、乳液或混悬液。作为两个实例，液体可用于经口施用或用于通过注射来递送。当意图用于经口施用时，有用的组合物含有除了本发明化合物之外的一种或多种甜味剂、防腐剂、染料/着色剂以及风味增强剂。在意图通过注射施用的组合物中，可包括一种或多种表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲液、稳定剂和等渗剂。
本公开的液体药物或营养组合物(无论它们是溶液、悬浮液或其它类似形式)可包括以下佐剂中的一种或多种：无菌稀释剂如注射用水、盐溶液(如生理盐水)、林格氏溶液、等渗氯化钠、不挥发性油如可作为溶剂或悬浮介质的合成的甘油单酯或甘油二酯、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂；抗菌剂如苄醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及用于调节张力的药剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可封闭在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。生理盐水通常为有用的佐剂。可注射药物或营养组合物为无菌的。
意图用于肠胃外或经口施用的本公开的液体药物或营养组合物应该含有使得将获得适合剂量的一定量的本公开的化合物。
本公开的药物或营养组合物可意图用于局部施用，在所述局部施用的情况下载体可适合地包含溶液、乳液、霜剂、洗剂、软膏或凝胶基质。基质例如可包含以下的一种或多种：凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释剂(如水和醇)以及乳化剂和稳定剂。增稠剂可存在于药物或营养组合物中用于局部施用。如果意图用于透皮施用，组合物可包括透皮贴剂或离子电渗装置。
本公开的药物或营养组合物可意图用于直肠施用，呈例如栓剂的形式，所述栓剂将在直肠中融化并且释放药物。用于直肠施用的组合物可含有油脂性基质作为适合的非刺激性赋形剂。所述基质包括羊毛脂、可可脂和聚乙二醇。
本公开的药物或营养组合物可包括各种材料，所述材料改进了固体或液体剂量单位的物理形式。例如，组合物可包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常为惰性的，并且可选自例如糖、虫胶和其它肠溶包衣剂。或者，活性成分可装入明胶胶囊中。
呈固体或液体形式的本公开的药物或营养组合物可包括结合本公开的化合物的药剂并且因而帮助化合物的递送。可在此能力中起作用的适合的药剂包括单克隆或多克隆抗体、蛋白质或脂质体。
呈固体或液体形式的本公开的药物或营养组合物可包括减小颗粒的大小以例如改进生物可利用性。在具有或不具有赋形剂的组合物中的粉末、细粒、颗粒、微球等的大小可为巨型的(例如，眼睛可见或至少100μm大小)、微型的(例如，可在约100μm至约100nm大小范围内)、纳米型的(例如，可不大于100nm大小)以及介于其间的任何大小或其任何组合以改进大小和堆密度。
本公开的药物或营养组合物可由剂量单位组成，所述剂量单位可作为气雾剂施用。术语气雾剂用来表示各种系统，所述系统在具有胶体性质的那些系统至由加压包装组成的系统的范围内。递送可通过液化或压缩的气体或通过分散活性成分的适合的泵系统。本公开的化合物的气雾剂可以单相、双相或三相系统递送以便递送活性成分。气雾剂的递送包括必要的容器、活化剂、阀门、子容器等，其在一起可形成试剂盒。本领域技术人员在不过度实验的情况下可确定最适当的气雾剂。
本公开的药物或营养组合物可通过药物或营养领域中熟知的方法来制备。例如意图通过注射施用的药物或营养组合物可通过将本公开的化合物与无菌蒸馏水组合以便形成溶液来制备。可添加表面活性剂以促进均匀溶液或悬浮液的形成。表面活性剂为与本公开的化合物非共价相互作用以便促进化合物在水性递送系统中溶解或均匀悬浮的化合物。
以治疗有效量施用本公开的化合物或其药学上或营养学上可接受的盐，所述治疗有效量将取决于各种因素而改变，所述因素包括所采用的具体化合物的活性；化合物的代谢稳定性和作用长度；患者的年龄、体重、一般健康、性别和饮食；施用方式和时间；排泄速率；药物组合；具体病症或病状的严重性；以及经历疗法的受试者。
还可在施用一种或多种其它治疗剂的同时、之前或之后施用本公开的化合物或其药学上或营养学上可接受的衍生物。所述组合疗法包括施用含有本公开的化合物和一种或多种另外活性剂的单一药物或营养剂量制剂，以及施用本公开的化合物和在其自身单独的药物或营养剂量制剂中的每种活性剂。例如，可将本公开的化合物连同另一种活性剂一起存在于单一口服剂量组合物如片剂或胶囊剂中来向患者施用，或在单独口服剂量制剂中施用每种药剂。当使用单独剂量制剂时，本公开的化合物和一种或多种另外活性剂可在基本上相同的时间下(即同时)或在分别错开的时间下(即依次)施用；组合疗法理解为包括所有这些方案。
应该理解在本描述中，描绘的式的取代基或变化的组合是容许的，只要所述贡献产生稳定的化合物。
本领域技术人员还将了解，在本文描述的方法中，中间体化合物的官能团可需要通过适合的保护基来保护。所述官能团包括羟基、氨基、巯基和羧酸。用于羟基的适合的保护基包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲基甲硅烷基)、四氢吡喃基、苯甲基等。用于氨基、脒基和胍基的适合的保护基包括叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等。用于巯基的适合的保护基包括-C(O)-R”(其中R”为烷基、芳基或芳烷基)、对甲氧基苯甲基、三苯甲基等。用于羧酸的适合保护基包括烷基、芳基或芳烷基酯。可根据标准技术添加或去除保护基，所述标准技术为本领域技术人员已知的并且如本文所述。保护基的使用详细描述于Green,T.W.和P.G.M.Wutz,ProtectiveGroups in Organic Synthesis(1999),第3版,Wiley中。如本领域技术人员将了解，保护基还可为聚合物树脂如王氏树脂、Rink树脂或2-氯三苯甲基-氯化物树脂。
还将通过本领域技术人员所了解，虽然本发明的化合物的所述保护的衍生物可以同样不拥有药理学活性，但是它们可向哺乳动物施用并且此后在身体中代谢以形成药理学活性的本公开的化合物。所述衍生物可因此描述为“前药”。本公开的化合物的所有前药包括在本公开的范围内。
此外，以游离碱或酸形式存在的本公开的所有化合物可通过用适合的无机或有机碱或酸通过本领域技术人员已知的方法处理来转化为其药学上或营养学上可接受的盐。本公开的化合物的盐可通过标准技术转化为其游离碱或酸形式。
在一些实施方案中，可从植物来源(例如从表A中和贯穿本申请的其它地方包括的那些植物)分离出本公开的化合物。用于分离化合物的适合的植物部分包括叶、树皮、树干、树干皮、茎、茎皮、细枝、块茎、根、根皮、树皮表面、嫩梢、根茎、种子、果实、雄蕊群、雌蕊群、花萼、雄蕊、花瓣、萼片、心皮(雌蕊)、花或其任何组合。在一些相关实施方案中，从植物来源分离出化合物并且合成改性以含有任何列出的取代基。在这方面，从植物分离出的化合物的合成改性可使用本领域中已知和在本领域普通技术人员的知识范围内的任何数量的技术来完成。
如上所指出，本发明的化合物为查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物。虽然不希望受理论约束，认为狄尔斯-阿德耳反应作为各种植物中的生物合成途径的部分发生，并且因此本公开的某些实施方案包括从植物分离出化合物并且按现状使用或进行各种合成改性。然而，在其它实施方案中合成制备化合物。例如，以下反应方案示出了制得本发明的化合物的方法，即使用合成技术制得结构(I)或(II)的化合物：
反应方案1
可根据反应方案1中示出的一般工序合成制备结构(I)或(II)(例如，(Ib)或(IIb))的代表性化合物。查耳酮A和异戊烯基苯基B可购自商业来源，根据本领域已知的工序从植物来源中分离或制备。查耳酮A与异戊烯基苯基B在适当狄尔斯-阿德耳条件(所述条件为本领域已知的)下的反应产生结构(I)或(II)的化合物。结构(I)和(II)的化合物由于查耳酮A的不对称性而为区域异构体。各种取代基(即，“R”基团)可在如反应方案1中所描绘的狄尔斯-阿德耳环化之前设置或在环化之后设置。用于改进以上方法和用于添加各种R基团的方法为本领域中熟知的并且在本领域普通技术人员的掌握之内。
应该理解，本领域技术人员可能够通过类似方法或通过组合本领域技术人员已知的其它方法来制得这些化合物。还应该理解，本领域技术人员将能够以如下所述的类似方式通过使用适当的起始组分和需要时修改合成的参数来制得以下非具体示出的结构(I)或(II)的其它化合物。通常，起始组分可获自如Sigma Aldrich、Lancaster Synthe sis,Inc.、Maybridge、Matrix Scientific、TCI和Fluorochem USA等的来源或根据本领域技术人员已知的来源合成(参见，例如Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第5版(Wiley,2000年12月))或如本发明中所述来制备。
在另外的实施方案中，本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物可与一种或多种体重控制剂组合。如本文所使用的“体重控制剂”是指生物活性的化合物、分子或组合物，其允许受试者控制其体重，这可涉及维持具体体重水平、减少体重增加或减轻体重。体重控制剂的生物活性可包括减少或抑制食欲、改变代谢水平、改变脂质代谢、减少热量摄入等。示例性体重控制剂包括食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其组合。
在某些实施方案中，本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物与至少一种其它体重控制剂一起使用，所述体重控制剂如食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂或饱腹剂。体重控制剂和本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物可在一起配制或单独配制。另外，本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物可在至少一种其它体重控制剂施用的同时、之前或之后由受试者施用或摄取。
在某些实施方案中，食欲抑制剂为西布曲明(sibutramine)、二乙胺苯丙酮、苄非他明(benzphetamine)、苯甲曲秦或儿茶酚胺。在另外的实施方案中，脂肪酶抑制剂为Mutamba提取物、迷迭香提取物、鼠尾草酸、鼠尾草酚、脂抑素(lipostatin)、四氢脂抑素、石榴(Punica granatum)果皮提取物、地钱(Marchantia polymorpha)全株植物提取物、竹节参(Panax japonicas)提取物或桔梗(Platycodi radix)提取物。
在还另外的实施方案中，大麻素受体调节剂为大麻素受体激动剂、拮抗剂或反向激动剂。在又另外的实施方案中，大麻素受体调节剂特异于大麻素受体1(CB1)、大麻素受体2(CB2)或CB1和CB2，如CB1拮抗剂或反向激动剂。示例性大麻素受体调节剂包括利莫那班、N-(哌啶-1-基)-5-(4-碘苯基)-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(AM 251)、1-(2,4-二氯苯基)-5-(4-碘苯基)-4-甲基-N-4-吗啉基-1H-吡唑-3-甲酰胺(AM281)、4-[6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1-苯并呋喃-3-羰基]苄腈(LY 320135)、木兰提取物、木兰醇、和厚朴酚、木兰醇和和厚朴酚、别嘌醇或荜茇(Piper Longum)籽提取物。在某些实施方案中，本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物可与查耳酮和异戊烯基苯基部分的第二、第三、第四或第五狄尔斯-阿德耳加成物一起使用。在某些实施方案中，体重控制剂包括查耳酮和异戊烯基苯基部分的两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种或十种狄尔斯-阿德耳加成物。
例如，在某些实施方案中，本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物可与食欲抑制剂和脂肪酶抑制剂、或食欲抑制剂和大麻素受体调节剂、或食欲抑制剂和精神药物、食欲抑制剂和胰岛素增敏剂、或食欲抑制剂和兴奋剂、或食欲抑制剂和饱腹剂一起使用。在还另外的实施方案中，本公开的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物可与脂肪酶抑制剂和兴奋剂、或大麻素受体调节剂和兴奋剂、或大麻素受体调节剂和脂肪酶抑制剂一起使用。任何上述组合物还可包含饱腹剂或精神药物或胰岛素增敏剂。
在某些实施方案中，单独、组合或与另一种体重控制剂一起使用的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物具有异戊烯基苯基部分，所述部分为异戊烯基苯酚、异戊二烯基类黄酮(isoprenylated flavonoid)、异戊烯基类黄酮(prenylatedflavonoid)、异戊烯基类黄酮二聚体或其组合。在某些实施方案中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物具有异戊烯基苯基部分，所述部分为异戊二烯基类黄酮如异戊二烯基黄酮、黄酮醇、黄烷酮、查耳酮，异黄酮、异黄烷酮、橙酮或芪。在某些实施方案中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物具有异戊烯基类黄酮，所述异戊烯基类黄酮为异戊烯基黄酮、黄酮醇、黄烷酮、查耳酮、异黄酮、异黄烷酮、橙酮或芪。在另外的实施方案中，单独地、组合地或与一种或多种其它体重控制剂一起使用查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物，所述一种或多种其它体重控制剂从桑属提取物或大绿柄桑木提取物中纯化、分离、富集或包含在所述提取物中，如桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。
在另外的实施方案中，与查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物一起使用的体重控制剂为精神药物，如情绪稳定剂、抗抑郁剂或抗惊厥剂。在还另外的实施方案中，与查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物一起使用的体重控制剂为兴奋剂，如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或右旋安非他命、或从以下物质中纯化、分离、富集或包含在以下物质中的一种或多种兴奋剂：巴拉圭茶提取物、绿茶提取物、绿咖啡豆提取物、可乐果提取物、酸橙(Citrus aurantium)果实提取物、藤黄果提取物、槟榔果实/种子提取物或右旋安非他命。在甚至另外的实施方案中，与查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物一起使用的体重控制剂为胰岛素增敏剂，如噻唑烷二酮(例如，罗格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone))、恶唑烷二酮、异恶唑烷二酮、双胍(例如二甲双胍(metformin))、选择性mTOT(噻唑烷二酮的线粒体靶标)调节剂、肉桂提取物、大花紫薇提取物、铬、鱼油，乙酸，D-手性肌醇或α-硫辛酸。在又另外的实施方案中，与查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物一起使用的体重控制剂为饱腹剂，如十二烷酸、十二烷酸甘油酯、1,3-双十二烷酸甘油酯、三十二烷酸甘油酯以及其衍生物或混合物、或从仙人掌提取物、松子提取物或纤维补充剂中纯化、分离、富集或包含在其中的一种或多种饱腹剂。
如本文所指出，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的化合物可通过化学合成或从植物提取物中获得，所述植物提取物如桑属或Milicia提取物。例如，桑属为桑科中的开花树属，所述属包含在许多国家野生生长或培养生长的大于30个物种(称为桑椹)。示例性桑属物种包括桑树、鸡桑、Morus celtidifolia Kunth、桑豆、非洲桑(Morus mesozygia Stapf)、小叶桑(Morus microphylla)、黑桑、红果桑(Morus rubraL.)、广东桑(Morus atropurpurea)、山桑、华桑、腋芽桑(Morus indica)、鲁桑、倭桑(Morusjaponica)、八丈桑(M orus kagayamae)、长果桑(Morus laevigata)、偏叶桑(Moruslatifolia)、荔波桑(Morus liboensis)、奶桑、蒙桑、鲁桑、川桑(Morusnotabilis)、Morus rotundiloba、Morus serrate、波罗蜜、Morus tillaefolia、裂叶桑(Morus trilobata)、滇桑以及长穗桑。在某些实施方案中，桑属提取物来自桑树，或桑属提取物为来自一种、两种、三种、四种或五种不同桑属物种的提取物的混合物。提取物的混合物可包括来自列于表A中的两种或更多种桑属物种的提取物。
木兰包括木兰科的木兰亚科中的约210种开花植物物种。称为厚朴(Hou Pu)的木兰可在许多国家野生生长或培养生长。示例性木兰物种包括日本厚朴木兰(Magnoliaobovata Thunb.)、凹叶厚朴(Magnolia officinalis Rehd.&Wilson)、长喙厚朴(Magnoliarostrata W.W.Smi th)、三瓣木兰(Magnolia tripetala)、毛叶玉兰(Magnolia globosaHoo k.f.&Thoms)、天女木兰(Magnolia sieboldii K.Koch)、西康玉兰(Magnoliawilsonii)(Finet.&Gagnep.)Rehd.、福来氏木兰(Magnolia frase ri Walt.)北美大叶木兰(Magnolia macrophylla Michx)、Magnolia deci dua(Q.Y.Zheng)V.S.Kumar、Magnoliadolichogyna(Dandy ex Noot.)Figlar&Noot.、川滇木莲(Magnolia duclouxii Finet&Gagnep.)、Magnolia figlarii V.S.Kumar、木莲(Magnolia fordiana)、Magnolia emarginata Urb.&Ekman、Magnolia hamorii Howard、Magnolia pallesc ens Urb.&Ekman、Magnolia mahechae(Lozano)Govaerts、Magnolia ptaritepuiana Steyermark、Magnoliastriatifolia Little、Magnolia mexicana DC.、Magnolia minor(Urb.)Govaerts、Magnolia morii(Lozano)Govaerts、Magnolia narinensis(Lozano)Govaerts、Magnolianeillii(Lozano)Govaerts、Magnolia ovata(A.St.-Hil.)Spreng、Magnoliapolyhypsophilla(Lozano)Govaerts、Magnolia quetzal、Magnolia rimachii(Lozano)Govaerts、Magnolia sambuensis、Magnolia delava yi Franchet、Magnolia fistulosa(Finet&Gagnep.)Dandy、Magnolia henryi Dunn、Magnolia nana Dandy、Magnoliaodoratissima、Magnolia grandiflora L以及Magnolia guatemalensis。在某些实施方案中，木兰提取物来自厚朴，或木兰提取物为来自一种、两种、三种、四种或五种不同木兰物种的提取物的混合物。
通常称为迷迭香(Rosemary)的迷迭香(Rosmarinus officinalis)为产于地中海地区的具有芳香、常绿、针样叶和白色、粉色、紫色或蓝色花的木质多年生草本植物。迷迭香为薄荷唇形科的成员，其包括许多其它草本植物。其它示例性迷迭香物种包括毛迷迭香(Rosmarinus tomentosus)、Rosmarinus eriocalyx以及Rosmarinus palaui。在某些实施方案中，迷迭香提取物来自迷迭香(Rosmarinus officinalis)，或迷迭香提取物为来自一种、两种或三种迷迭香物种的提取物的混合物。
最通常使用的巴拉圭茶的植物来源为巴拉圭冬青(Ilex paraguariensis)，其为熟知作为冬青茶饮料的来源的冬青树(冬青科)物种。巴拉圭茶产于阿根廷东北部的亚热带南美、玻利维亚、巴西南部、乌拉圭和巴拉圭。所述属分布在全世界的不同气候处。示例性冬青属物种包括美国冬青(Ilex opaca)、卡罗来纳冬青(Ilex ambigua)、中国冬青(枸骨(Ilex cornuta))、美国冬青(Common Winterberry)(北美冬青(Ilex verticillata))、达宏冬青(Dahoon)(Ilex cassine)、落叶冬青(Deciduous Holly)(叶狭窄落叶冬青(Ilexdecidua))、英国冬青(枸骨叶冬青(Ilex aquifolium))、澳大利亚冬青(Ilexarnhemensis)。光滑冬青(光枝刺叶冬青(Ilex glabra))、日本冬青(齿叶冬青(Ilexcrenata))、Large Gallberry(Ilex coriacea)、美洲冬青(Smooth Winterberry)(冬青金樱子(Ilex laevigata))、代茶冬青(Yaupon)(代茶冬青(Ilex vomitoria))、非洲物种(Ilex mitis)以及马卡罗尼亚加那利冬青(Ilex canariensis Macaronesia)、欧洲冬青(Ilex aquifolium))。以前是美洲山冬青属(Nemopanthus)的典型物种的Ilex mucronata产于北美东部。美洲山冬青属被处理为具有冬青科的八种物种的单型属，现在基于分子数据(与Ilex amelanchier密切相关)转到冬青属。在某些实施方案中，巴拉圭茶提取物来自巴拉圭冬青(Ilex paraguariensis)，或巴拉圭茶提取物为来自一种、两种、三种、四种或五种冬青属物种的提取物的混合物。
锦葵科中的开花树属的Guazuma广泛存在于加勒比海、南美、中美洲和墨西哥。Mutamba为在传统中草药医学中具有各种医学价值的Guazuma植物的通用名。本公开的示例性凝缩单宁可从Guazuma 植物的不同物种中提取，包括Guazuma commersoniopsis、Guazuma euguazuma、Guazuma gynophoricola、Guazuma blumei、Guazuma b ubroma、Guazuma burbroma、Guazuma coriacea、Guazuma crinita、Guazuma grandiflora、Guazumaguazuma、Guazuma invira、Guazu ma iuvira、Guazuma longipedicellata、Guazumaparvifolia、Guazum a polybotra、Guazuma polybotrya、Guazuma rosea、Guazuma tomentosa、Guazuma ulmifolia以及Guazuma utilis。在某些实施方案中，Mutamba提取物来自Guazuma ulmifolia，或Mutamba提取物为来自一种、两种、三种、四种或五种Guazuma物种的提取物的混合物。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；木兰提取物；以及巴拉圭茶提取物，所述这些提取物可分别以2:1:5重量比至2:1:10重量比混合在一起或一起使用。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；木兰提取物；以及巴拉圭茶提取物，所述这些提取物可分别以2:1:5重量比至2:1:10重量比混合在一起或一起使用。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物；木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物；并且巴拉圭茶提取物为巴拉圭冬青提取物，所述巴拉圭冬青提取物富含咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、别嘌醇(高纯度，如至少90％纯度或至少91％、92％、93％、94％或95％纯度，从木兰植物提取物中分离的木兰醇和和厚朴酚混合物)以及巴拉圭茶提取物，其中查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、别嘌醇(高纯度，如至少90％纯度或至少91％、92％、93％、94％或95％纯度)从木兰植物提取物中分离的木兰醇和和厚朴酚混合物)以及巴拉圭茶提取物，其中查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合，并且巴拉圭茶提取物为富含咖啡因、二咖啡酰奎宁酸或这两者的巴拉圭冬青提取物。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；木兰提取物；以及Mutamba提取物，所述这些提取物可分别以2:1:5重量比至2:1:10重量比混合在一起或一起使用。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；木兰提取物；以及Mutamba提取物，所述这些提取物可分别以2:1:5重量比至2:1:10重量比混合在一起或一起使用。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、别嘌醇和Mutamba提取物，其中查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、别嘌醇和Mutamba提取物，其中查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；迷迭香提取物；以及巴拉圭茶提取物，所述这些提取物可分别以2:5:5重量比至2:5:10重量比混合在一起或一起使用。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；迷迭香提取物；以及巴拉圭茶提取物，所述这些提取物可分别以2:5:5重量比至2:5:10重量比混合在一起或一起使用。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含(1)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酚和巴拉圭茶提取物，或(2)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酸和巴拉圭茶提取物；其中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合，并且巴拉圭茶提取物为巴拉圭冬青提取物，所述巴拉圭冬青提取物富含咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含(1)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酚和巴拉圭茶提取物，或(2)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酸和巴拉圭茶提取物；其中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合，并且巴拉圭茶提取物为巴拉圭冬青提取物，所述巴拉圭冬青提取物富含咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；迷迭香提取物；以及mutamba提取物，所述这些提取物可分别以2:5:5重量比至2:5:10重量比混合在一起或一起使用。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；迷迭香提取物；以及mutamba提取物，所述这些提取物可分别以2:5:5重量比至2:5:10重量比混合在一起或一起使用。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含(1)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酚和mutamba提取物，或(2)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酸和mutamba提取物；其中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含(1)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酚和mutamba提取物，或(2)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酸和mutamba提取物；其中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；迷迭香提取物；以及槟榔提取物，所述这些提取物可分别以2:5:5重量比至2:5:10重量比混合在一起或一起使用。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含：桑属提取物，所述桑属提取物含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；迷迭香提取物；以及槟榔提取物，所述这些提取物可分别以2:5:5重量比至2:5:10重量比混合在一起或一起使用。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在某些实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的组合物包含(1)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酚和槟榔提取物，或(2)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酸和槟榔提取物；其中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。在另外的实施方案中，包含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物和体重控制剂的组合物包含(1)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酚和槟榔提取物，或(2)查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物、鼠尾草酸和槟榔提取物；其中，查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其任何组合。
在任何上述实施方案中，包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的组合物可与药学上或营养学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂一起配制。在另外的实施方案中，药物或营养制剂包含提取物混合物或类似物质中的约0.5重量％(wt％)至约90wt％、约0.5wt％至约80wt％、约0.5wt％至约75wt％、约0.5wt％至约70wt％、约0.5wt％至约50wt％、约1.0wt％至约40wt％、约1.0wt％至约20wt％、约1.0wt％至约10wt％、约3.0wt％至约9.0wt％、约5.0wt％至约10wt％、约3.0wt％至约6.5wt％的主要活性成分。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在任何上述实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的桑属提取物。在某些实施方案中，桑属提取物为富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的桑树提取物。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含桑属提取物(如桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物)中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分，如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合。
在任何上述实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的Gu azuma ulmifolia(Mutamba)提取物。在某些实施方案中，Guazuma ul mifolia(Mutamba)提取物富含原花青素、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1、原花青素二聚体、原花青素三聚体、原花青素四聚体、原花青素五聚体、原花青素六聚体、凝缩单宁、儿茶素或表儿茶素的低聚物、表儿茶素或其任何组合。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含Guazumaulmifolia(Muta mba)提取物中的约0.5重量％(wt％)至约50wt％的主要活性成分，如原花青素、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1、原花青素二聚体、原花青素三聚体、原花青素四聚体、原花青素五聚体、原花青素六聚体、凝缩单宁、儿茶素或表儿茶素的低聚物、表儿茶素或其任何组合。
在任何上述实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分如木兰醇、和厚朴酚或这两者、或高纯度木兰醇、和厚朴酚或其混合物的木兰提取物。在某些实施方案中，玉兰提取物为富含木兰醇、和厚朴酚或这两者、或高纯度木兰醇、和厚朴酚或其混合物的厚朴提取物，所述物质分离自具有至少约90％、91％、92％、93％、94％或95％纯度的厚朴植物提取物。在某些实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含厚朴(木兰)提取物中的约5.0重量％(wt％)至约10wt％的主要活性成分，如木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物。
在任何上述实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的巴拉圭茶提取物。在某些实施方案中，巴拉圭茶提取物为富含咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者的巴拉圭冬青提取物。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分，如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者。
在任何上述实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的迷迭香(Rosmarinus officinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物。在某些实施方案中，迷迭香(Rosmarinus officinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物富含鼠尾草酚、鼠尾草酸、熊果酸或其任何组合。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含迷迭香(Rosmarinusofficinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物中的约1.0重量％(wt％)至约10wt％的主要活性成分，如鼠尾草酚，鼠尾草酸、熊果酸或其任何组合。
在任何上述实施方案中，包含桑属提取物、木兰提取物和巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物的提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的药物或营养制剂将包括桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分、木兰提取物中的约5.0wt％至约10wt％的主要活性成分以及巴拉圭茶提取物中的约0.5wt％至约5.0wt％的主要活性成分。在某些实施方案中，药物或营养制剂包含桑属提取物中的约1％主要活性成分(如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合)、木兰提取物中的约7％主要活性成分(如木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物)以及巴拉圭茶提取物中的约1％主要活性成分(如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者)。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
在任何上述实施方案中，包含桑属提取物、木兰提取物和Guazuma ulmifolia(Mutamba)提取物的提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的药物或营养制剂将包括桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分、木兰提取物中的约5.0wt％至约10wt％的主要活性成分以及Mutamba提取物中的约0.5wt％至约50wt％的主要活性成分。在某些实施方案中，药物或营养制剂包含桑属提取物中的约1％主要活性成分(如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合)、木兰提取物中的约7％主要活性成分(如木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物)以及Mutamba提取物中的约1％主要活性成分(如原花青素、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1、原花青素二聚体、原花青素三聚体、原花青素四聚体、原花青素五聚体、原花青素六聚体、凝缩单宁、儿茶素或表儿茶素的低聚物、表儿茶素或其任何组合)。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在任何上述实施方案中，包含桑属提取物、迷迭香(Rosmarinus officinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物和巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物的提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的药物或营养制剂将包括桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分、迷迭香提取物中的约1.0wt％至约10wt％的主要活性成分以及巴拉圭茶提取物中的约0.5wt％至约5.0wt％的主要活性成分。在某些实施方案中，药物或营养制剂包含桑属提取物中的约1％主要活性成分(如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合)、迷迭香提取物中的约4.5％主要活性成分(如鼠尾草酚、鼠尾草酸、熊果酸或其任何组合)以及巴拉圭茶提取物中的约1％主要活性成分(如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者)。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑树的提取物。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。在相关实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在另外的实施方案中，包含本文所提供的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物(任选地包括体重控制剂)的组合物可用于以下方法中，所述方法用于治疗或预防体重增加或肥胖、促进体重减轻、食欲抑制、改进饱腹感、改进脂肪摄取、增加代谢以促进体重减轻或预防体重增加、维持体重、减少身体脂肪或脂肪组织、增加肌肉或瘦体重、减少肝脂肪变性、改善脂肪肝、改善一种或多种肝NASH分数、增强肝中的脂肪酸代谢、促进健康脂质特征(通过例如，降低LDL胆固醇、降低总胆固醇、降低甘油三酯或增加HDL)、促进糖代谢、降低空腹血糖水平、维持健康的血糖水平、减少热量摄入、提高热效率、减少食物摄入、减少内脏脂肪、减少腰围、减小身体对质量指数(BMI)、增加能量、提高耐力、维持能量水平而节食、促进生热、减少多余流体、减少水分保持同时维持正常的水合作用、增加肌肉质量、提高脂肪对肌肉质量比例、优化或改善身体组成、优化或改善用于胃口控制的激素平衡、维持正常的胰岛素、瘦素、生长素、PYY、GIP或肠抑素水平或功能、优化、管理或改善激素平衡来控制饱腹感、维持或管理健康的CCK肽、GLP-1、蛙皮素或生长抑素水平或功能、维持肠道的健康菌群、优化、改善或控制消化、诱导脂解、降低细胞内甘油三酯积累、减少脂肪组织或脂肪细胞中的脂肪积累、维持健康的脂联素水平、管理或减少脂肪生成或与果糖、葡萄糖或这两者代谢相关的体重增加、减少或控制与超重或肥胖哺乳动物相关的氧化应激(例如，通过减少反应性氧物质或氧化性自由基；提高ORAC(氧自由基吸收能力)值；维持谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和内源性抗氧化剂的健康水平；维持健康的氧化动态平衡)、控制或管理与超重或肥胖哺乳动物相关的全身性炎症(例如，通过促进花生四烯酸的正常代谢、维持促炎性细胞因子的正常水平)、管理情绪应力或与超重或肥胖哺乳动物相关的其它精神病症或其任何组合。
在相关实施方案中，与组合物一起使用的用来治疗或改进各种体重相关的病状的体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在某些实施方案中，本文提供了包含药学上可接受的赋形剂和低聚物的分离的低聚物或组合物(例如，用于体重控制或体重减轻)，其中低聚物包含2至30个亚基，其中亚基每次出现时独立地具有以下结构(III)：
或其药学上可接受的盐、立体异构体或互变异构体，其中R1a和R1b每次出现时独立地为H、羟基、卤素、没食子酸酯、糖苷、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷基氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或与相邻亚基连接的直接键；R2每次出现时独立地为H或与相邻亚基连接的醚键；R3每次出现时独立地为H或与相邻亚基连接的直接键；R4每次出现时为OH或与相邻亚基连接的醚键；并且R5a、R5b、R5c、R5d和R5e每次出现时独立地为H、羟基、卤素、没食子酸酯、糖苷、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷基氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基或芳烷基羰基，其中R1a、R1b、R2、R3或R4中的至少一个为与相邻亚基连接的直接键或醚键。在某些实施方案中，具有结构(III)中所列出的亚基并且其中R1a、R1b、R2、R3或R4中的至少一个为与相邻亚基连接的直接键或醚键的黄烷-3-醇的低聚物为二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体、十聚体或高达至30个黄烷-3-醇亚基(如30聚体的总分子量将为约103Da)。
在另外的实施方案中，两个相邻亚基可具有以下结构(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)之一：
在任何上述实施方案中，每个R1a和R1b每次出现时为H或与相邻亚基连接的直接键。在另外的实施方案中，R5a每次出现时为H并且R5b每次出现时为羟基；或R5a每次出现时为羟基并且R5b每次出现时为H。在还另外的实施方案中，每个R5c、R5d和R5e每次出现时为H。在某些实施方案中，具有结构(IIIa)、(IIIb)或(IIIc)中所列出的亚基的黄烷-3-醇的低聚物为二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体、十聚体或高达至30个黄烷-3-醇亚基(如30聚体的总分子量将为约103Da)。
在某些实施方案中，本文提供了包含药学上可接受的赋形剂和低聚物的分离的低聚物或组合物(例如，用于体重控制或体重减轻)，其中低聚物包含2至30个亚基，其中亚基每次出现时独立地具有以下结构(IIId)：
或其药学上可接受的盐、立体异构体或互变异构体，其中R1a和R1b每次出现时独立地为H、羟基、卤素、没食子酸酯、糖苷、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷基氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基、芳烷基羰基或与相邻亚基连接的直接键；并且R5a、R5b、R5c、R5d和R5e每次出现时独立地为H、羟基、卤素、没食子酸酯、糖苷、硫氢基、氨基、醛、C1-12烷基、C1-12烷氧基、C1-12烷硫基、C1-12烷基氨基、芳基、杂芳基、芳烷基、烷基羰基或芳烷基羰基，其中R1a、R1b、位置2或位置4中的至少一个为与相邻亚基连接的直接键或醚键。在某些实施方案中，具有结构(IIId)中所列出的亚基并且其中R1a、R1b、位置2或位置4中的至少一个为与相邻亚基连接的直接键或醚键的黄烷-3-醇的低聚物为二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体、十聚体或高达至30个黄烷-3-醇亚基(如30聚体的总分子量将为约103Da)。
在另外的实施方案中，两个相邻亚基可具有以下结构(IIIe)、(IIIf)或(IIIg)之一：
结构(IIIe)和(IIIf)为示例性B型键联并且结构(IIIg)为A型键联的实例。更确切地来说，结构(IIIe)为4→8键联，其中R1a、R3或这两者都可作为与一个或多个相邻亚基高达至共30个亚基连接的直接键或醚键，并且结构(IIIe)为4→6键联，其中R3、R4或这两者都可作为与一个或多个相邻亚基高达至共30个亚基连接的直接键或醚键。
在某些实施方案中，本公开提供了包含任何上述黄烷-3-醇的低聚物和至少一种其它体重控制剂的组合物，所述体重控制剂如食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂或饱腹剂。在另外的实施方案中，食欲抑制剂为西布曲明、二乙胺苯丙酮、苄非他明、苯甲曲秦或儿茶酚胺。在还另外的实施方案中，脂肪酶抑制剂为迷迭香提取物、鼠尾草酸、鼠尾草酚、脂抑素、四氢脂抑素、石榴果皮提取物、地钱全株植物提取物、竹节参提取物或桔梗提取物。在又另外的实施方案中，大麻素受体调节剂为可特异于大麻素受体1(CB1)、大麻素受体2(CB2)或CB1和CB2的大麻素受体激动剂、拮抗剂或反向激动剂(例如，大麻素受体1(CB1)拮抗剂或反向激动剂)。在另外的实施方案中，大麻素受体调节剂为利莫那班、N-(哌啶-1-基)-5-(4-碘苯基)-1-(2,4-二氯苯基)-4-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺(AM 251)、1-(2,4-二氯苯基)-5-(4-碘苯基)-4-甲基-N-4-吗啉基-1H-吡唑-3-甲酰胺(AM281)、4-[6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1-苯并呋喃-3-羰基]苄腈(LY320135)、桑属提取物、来自植物的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物(例如，分离自或包含在桑树提取物、大绿柄桑木提取物中，或为桑白皮素G、桑酮G、桑酮M、桑根酮A、桑根皮素、桑皮醇、桑根酮C、桑根酮D、桑根酮O或其组合)、木兰提取物、木兰醇、和厚朴酚、木兰醇和和厚朴酚、别嘌醇或荜茇籽提取物。在还另外的实施方案中，精神药物为情绪稳定剂、抗抑郁剂或抗惊厥剂。在甚至另外的实施方案中，胰岛素增敏剂为噻唑烷二酮(例如，罗格列酮、吡格列酮)、双胍(例如，二甲双胍)或选择性mTOT调节剂。在又另外的实施方案中，兴奋剂为巴拉圭茶提取物、咖啡因、绿茶提取物、绿咖啡豆提取物、可乐果提取物、酸橙果实提取物、藤黄果提取物、槟榔果实/种子提取物或右旋安非他命。在另外的实施方案中，饱腹剂为十二烷酸、十二烷酸甘油酯、1,3-双十二烷酸甘油酯、三十二烷酸甘油酯以及其衍生物和混合物、或仙人掌提取物、松子提取物或纤维补充剂。
在某些实施方案中，组合物包含：Mutamba提取物，其含有或富含本文所所描述的黄烷-3-醇的一种或多种低聚物；桑属提取物，其含有或富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物；以及木兰提取物，所述这些提取物可分别以5:2:1重量比至10:2:1重量比混合在一起或一起使用。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。
在某些实施方案中，组合物包含：Mutamba提取物，其含有或富含本文所描述的黄烷-3-醇的一种或多种低聚物；迷迭香提取物；以及巴拉圭茶提取物，所述这些提取物可分别以2:1:2重量比至1:1:1重量比混合在一起或一起使用。
在还另外的实施方案中，如本文所描述的黄烷-3-醇的一种或多种低聚物或黄烷-3-醇化合物的所述低聚物的组合物(任选地包括体重控制剂)可用于以下方法中，所述方法用于治疗或预防体重增加或肥胖、促进体重减轻、食欲抑制、改进饱腹感、改进脂肪摄取、增加代谢以促进体重减轻或预防体重增加、维持体重、减少身体脂肪或脂肪组织、增加肌肉或瘦体重、减少肝脂肪变性、改善脂肪肝、改善一种或多种肝NASH分数、增强肝中的脂肪酸代谢、促进健康脂质特征(通过例如，降低LDL胆固醇、降低总胆固醇、降低甘油三酯或增加HDL)、促进糖代谢、降低空腹血糖水平、维持健康的血糖水平、减少热量摄入、提高热效率、减少食物摄入、减少内脏脂肪、减少腰围、减小身体对质量指数(BMI)、增加能量、提高耐力、维持能量水平而节食、促进生热、减少多余流体、减少水分保持同时维持正常的水合作用、增加肌肉质量、提高脂肪对肌肉质量比例、优化或改善身体组成、优化或改善用于胃口控制的激素平衡、维持正常的胰岛素、瘦素、生长素、PYY、GIP或肠抑素水平或功能、优化、管理或改善激素平衡来控制饱腹感、维持或管理健康的CCK肽、GLP-1、蛙皮素或生长抑素水平或功能、维持肠道的健康菌群、优化、改善或控制消化、诱导脂解、降低细胞内甘油三酯积累、减少脂肪组织或脂肪细胞中的脂肪积累、维持健康的脂联素水平、管理或减少脂肪生成或与果糖、葡萄糖或这两者代谢相关的体重增加、减少或控制与超重或肥胖哺乳动物相关的氧化应激(例如，通过减少反应性氧物质或氧化性自由基；提高ORAC(氧自由基吸收能力)值；维持谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和内源性抗氧化剂的健康水平；维持健康的氧化动态平衡)、控制或管理与超重或肥胖哺乳动物相关的全身性炎症(例如，通过促进花生四烯酸的正常代谢、维持促炎性细胞因子的正常水平)、管理情绪应力或与超重或肥胖哺乳动物相关的其它精神病症或其任何组合。
在相关实施方案中，与组合物一起使用的用来治疗或改进各种体重相关的病状的体重控制剂为食欲抑制剂、脂肪酶抑制剂、大麻素受体调节剂、精神药物、胰岛素增敏剂、兴奋剂、饱腹剂或其任何组合。在任何这些实施方案中，体重控制剂为食欲抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为脂肪酶抑制剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为大麻素受体调节剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为精神药物。在任何这些实施方案中，体重控制剂为胰岛素增敏剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为兴奋剂。在任何这些实施方案中，体重控制剂为饱腹剂。
在任何上述使用方法实施方案中，包含提取物混合物的组合物(任选地包括体重控制剂)可与药学上或营养学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂一起配制。在另外的实施方案中，药物或营养制剂包含提取物混合物或类似物质中的约0.5重量％(wt％)至约90wt％、约0.5wt％至约80wt％、约0.5wt％至约75wt％、约0.5wt％至约70wt％、约0.5wt％至约50wt％、约1.0wt％至约40wt％、约1.0wt％至约20wt％、约1.0wt％至约10wt％、约3.0wt％至约9.0wt％、约5.0wt％至约10wt％、约3.0wt％至约6.5wt％的主要活性成分。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
在任何上述使用方法实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的桑属提取物。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分，所述桑属提取物富含例如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合。在某些这些实施方案中，桑属提取物为富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的桑树提取物。
在任何上述使用方法实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的Guazuma ulmifolia(Mutamba)提取物。在某些实施方案中，Guazuma ulmifolia(Mutamba)提取物富含原花青素、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1、原花青素二聚体、原花青素三聚体、原花青素四聚体、原花青素五聚体、原花青素六聚体、凝缩单宁、儿茶素或表儿茶素的低聚物、表儿茶素或其任何组合。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含Guazumaulmifolia(Mutamba)提取物中的约0.5重量％(wt％)至约50wt％的主要活性成分，如原花青素、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1、原花青素二聚体、原花青素三聚体、原花青素四聚体、原花青素五聚体、原花青素六聚体、凝缩单宁、儿茶素或表儿茶素的低聚物、表儿茶素或其任何组合。
在任何上述使用方法实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的木兰提取物。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含木兰提取物中的约5.0重量％(wt％)至约10wt％的主要活性成分，如木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物。在某些这些实施方案中，木兰提取物为富含木兰醇、和厚朴酚或这两者、或高纯度木兰醇、和厚朴酚或其混合物的厚朴提取物，所述物质分离自具有至少90％、91％、92％、93％、94％或95％纯度的厚朴植物提取物。
在任何上述使用方法实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物。在某些实施方案中，巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物富含咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分，如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者。
在任何上述使用方法实施方案中，组合物包含提取物混合物(任选地包括体重控制剂)，其中提取物之一为富含一种或多种主要活性成分的迷迭香(Rosmarinusofficinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物。在某些实施方案中，迷迭香(Rosmarinusofficinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物富含鼠尾草酚、鼠尾草酸、熊果酸或其任何组合。在另外的实施方案中，包含本文所描述的提取物混合物的药物或营养制剂包含迷迭香(Rosmarinus officinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物中的约1.0重量％(wt％)至约10wt％的主要活性成分，如鼠尾草酚，鼠尾草酸、熊果酸或其任何组合。
在任何上述使用方法实施方案中，包含桑属提取物、木兰提取物和巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物的提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的药物或营养制剂将包括桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分、木兰提取物中的约5.0wt％至约10wt％的主要活性成分以及巴拉圭茶提取物中的约0.5wt％至约5.0wt％的主要活性成分。在某些实施方案中，药物或营养制剂包含桑属提取物中的约1％主要活性成分(如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合)、木兰提取物中的约7％主要活性成分(如木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物)以及巴拉圭茶提取物中的约1％主要活性成分(如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者)。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
在任何上述使用方法实施方案中，包含桑属提取物、木兰提取物和Guazumaulmifolia(Mutamba)提取物的提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的药物或营养制剂将包括桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分、木兰提取物中的约5.0wt％至约10wt％的主要活性成分以及Mutamba提取物中的约0.5wt％至约50wt％的主要活性成分。在某些实施方案中，药物或营养制剂包含桑属提取物中的约1％主要活性成分(如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合)、木兰提取物中的约7％主要活性成分(如木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物)以及Mutamba提取物中的约1％主要活性成分(如原花青素、原花青素B2、原花青素B5、原花青素C1、原花青素二聚体、原花青素三聚体、原花青素四聚体、原花青素五聚体、原花青素六聚体、凝缩单宁、儿茶素或表儿茶素的低聚物、表儿茶素或其任何组合)。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
在任何上述使用方法实施方案中，包含桑属提取物、迷迭香(Rosmarinusofficinalis)(迷迭香(Rosemary))提取物和巴拉圭冬青(巴拉圭茶)提取物的提取物混合物(任选地包括体重控制剂)的药物或营养制剂将包括桑属提取物中的约0.5重量％(wt％)至约5.0wt％的主要活性成分、迷迭香提取物中的约1.0wt％至约10wt％的主要活性成分以及巴拉圭茶提取物中的约0.5wt％至约5.0wt％的主要活性成分。在某些实施方案中，药物或营养制剂包含桑属提取物中的约1％主要活性成分(如桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合)、迷迭香提取物中的约4.5％主要活性成分(如鼠尾草酚、鼠尾草酸、熊果酸或其任何组合)以及巴拉圭茶提取物中的约1％主要活性成分(如咖啡因、二咖啡酰奎尼酸或这两者)。在任何上述实施方案中，桑属提取物为桑树提取物或富含桑酮G、桑白皮素G、桑根皮素或其任何组合的提取物，并且木兰提取物为厚朴提取物或富含木兰醇、和厚朴酚、这两者或这两者的高纯度混合物的提取物。在任何这些实施方案中，药物或营养组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
实施例
实施例1
从桑树制备有机水性提取物
将来自桑树(Morus alba L.)根皮的植物材料研磨至不大于两毫米(mm)的粒径。然后将干燥的研磨植物材料(60克(g))转移至锥形瓶并且添加甲醇:二氯甲烷(1:1体积比)(600毫升(mL))。振荡混合物一小时，过滤并且再次用甲醇:二氯甲烷(1:1体积比)(600mL)提取生物质。合并这些有机提取物并且在真空下蒸发以得到3.55g的有机提取物(OE)。在有机提取之后，空气干燥生物质并且用超纯水(600mL)提取一次。过滤水溶液并且冷冻干燥以得到4.44g的水性提取物(AE)。
使用相同工序获得类似结果，但其中有机溶剂替代为甲醇或乙醇以分别得到甲醇提取物(ME)或乙醇提取物(EE)。使用此相同工序提取植物的其它物种和部分以及海洋样品。
实施例2
植物提取物的CB1结合活性
使用大麻素受体结合测定作为初级筛选方法来鉴定CB1拮抗剂化合物。使用从Reggio等.,J.Med.Chem.41:5177,1998(CB1受体测定)和Munro等.,Nature 365:61,1993(CB2受体测定)改编的方法进行测定。简而言之，在改良型HEPES(pH7.4)缓冲液中使用结合Chem-1膜的人大麻素受体蛋白。在37℃下，将10微克(μg)等分试样的Chem-1膜、放射性标记的[3H]CB1-配体SR141716A(2纳摩(nM))(CB1受体拮抗剂)和测试提取物或阳性对照R(+)-WIN-55,212-2(10μM)(CB1受体激动剂)孵育在孵育缓冲液(50mM HEPES(pH7.4)、5mMMgCl2、1mM CaCl2、0.2％BSA)中持续90分钟。在孵育之后，过滤膜并且洗涤四次，然后计数过滤器以确定特异性结合CB1-膜的[3H]WIN-55,212-2的量。
表1呈现来自从桑树的不同植物部分：根皮、果实、叶、茎皮和茎中获得的OE和AE的CB1结合测定结果。在从根皮中获得的OE中发现CB1-配体结合活性的最大抑制，其中在100μg/mL的测试浓度下为91％抑制并且在10μg/mL的测试浓度下为82％。
表1 由来自各种桑树植物部分的提取物进行的CB1配体结合活性的抑制
*结果表示为相对于对照放射性标记的SR141716A配体的抑制百分比。
OE意指用如实施例1中所描述的甲醇:二氯甲烷(1:1体积比)提取的研磨植物材料。
AE意指空气干燥并且用超纯水提取一次、过滤和冷冻干燥以得到如实施例1中所描述的水性提取物材料的OE提取的材料。
EE意指仅用乙醇提取研磨植物材料。
╫ME意指仅用甲醇提取研磨植物材料。
这些数据显示桑树根皮的有机提取物含有中等高水平的阻断标记的CB1-配体结合人CB1受体蛋白的组分。相比之下，在本实验中测试的其它桑树植物组织(果实、叶、茎皮和茎)均具有不可检测水平的CB1-配体结合CB1受体的抑制。
CB1结合测定还从列于表2中的其它植物物种中检测到抑制活性。那些桑科和豆科植物中的常见化学组分为查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物。可在不同植物组织(如根、茎、根茎或全株植物)中检测到查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物的存在。
表2.来自含有异戊烯基类黄酮的植物提取物的CB1结合活性
实施例3
活性植物提取物的高通量纯化(HTP)
将来自在实施例1中获得的桑树根皮提取物的有机提取材料(400mg)加样于预填充(2cm ID x 8.2cm，10g硅胶)柱上。然后使用具有梯度流动相为(A)50:50体积比的EtOAc:己烷和(B)甲醇的高通量纯化(HTP)系统，以5mL/min的流速在30分钟内从100％A至100％B洗脱柱。使用宽带波长UV检测器监测分离并且使用Gilson级分收集器以1.9毫升/孔将级分收集在96深孔板中。在低真空下干燥样品板并且离心，然后用1.5毫升二甲亚砜(DMSO)/孔溶解样品。取出一部分(100μL)并且合并(基于UV迹线)用于CB1抑制测定。保留具有显著CB1结合活性的柱级分用于进一步测试。
实施例4
通过合并的来自桑树的HTP级分进行的CB1活性抑制
通过由标记的CB1-配体检验合并的HTP级分的CB1结合活性的抑制来进一步研究来自实施例3的桑树根皮的有机提取物。合并的HTP级分的活性特征表明分级分离的桑树有机提取物中的多于一种组分可有助于CB1-配体结合活性的抑制。
表3呈现来自桑树根皮提取物的合并HTP级分的CB1结合测定结果
表3.合并的桑树HTP级分的CB1-配体结合抑制
实施例5
从桑树提取物分离、纯化和鉴定CB1结合抑制剂
分割如实施例1中所描述获得的来自桑树根皮的有机提取物(11g)并且单独加样于两个预填充快速柱(120g二氧化硅，粒径32-60μm，4cm x 19cm)上，然后用己烷、EtOAc和甲醇(作为流动相)以20毫升/分钟的流速洗脱。用95％己烷/EtOAC开始梯度持续5分钟，然后经过25分钟的持续时间使EtOAc从5％增加至100％，然后在经过下一个15分钟时间段使MeOH从0％增加至50％MeOH/EtOAC之前在100％EtOAc下再保持五分钟，最后改变洗脱溶液至100％MeOH并且洗脱柱持续另外16分钟。总运行时间为66分钟并且每个柱产生88个级分。通过硅胶薄层色谱法(TLC)分析级分并且将所述级分汇集在一起以产生八个柱洗脱液池。然后使用描述于实施例2中的CB1结合测定来测试八个洗脱液池中的每一个。所得到的CB1结合测定数据示于表4中。
表4 二氧化硅级分池的CB1活性
这些数据显示当在20μg/mL浓度下的CB1结合测定中测试时，在池4(含有1.4g材料)和池5(1.7g材料)中CB1-配体结合的抑制水平最高。
所得到的最佳活性的最佳池(含有300mg材料)在制备型C18柱(30cm x 250cm)上分级分离，以20毫升/分钟的流速经过60分钟用水(A)和甲醇(B)的梯度流动相产生22个级分池。质谱(MS)分析显示材料的这些汇集的级分含有以下更详细描述的三种相关化合物，所有所述化合物在描述于实施例2中的CB1结合测定中具有抑制活性。
化合物1(28.2mg)通过高分辨电子喷雾电离质谱(HRESIMS)鉴定为查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物，所述狄尔斯-阿德耳加成物称为桑酮G，又称为桑白皮素B或桑白皮素F(m/z)[M+H]-＝693.2329；UVλmax(MeOH):265,320nm；1H NMR(600MHz,DMSO-d6,100℃)δppm 1.44(s,3H)1.52(br.s.,3H)1.58(s,3H)1.92(m,2H)3.08(d,3H)3.56(m,2H)4.29(d,J＝10.02Hz,1H)4.48(m,1H)5.07(m,1H)5.14(br.s,1H)5.93(s,2H)5.96(dd,J＝8.35,2.23Hz,1H)6.02(br s,1H)6.11(d,J＝2.23Hz,1H)6.41(dd,J＝8.35,2.23Hz,1H)6.51(s,1H)6.60(m,1H)7.13(d,J＝8.35Hz,1H)7.28(br s,1H)；13C NMR(126MHz,METHANOL-d4)δppm 16.35(1C)21.78(1C)23.35(1C)24.53(1C)37.72(1C)97.14(1C)101.57(1C)102.22(1C)102.33(1C)104.28(1C)106.55(2C)107.00(1C)107.21(1C)112.37(1C)114.47(1C)120.27(1C)121.62(2C)123.27(1C)131.05(1C)131.35(2C)132.62(1C)132.99(1C)155.16(1C)155.56(1C)156.38(1C)159.66(1C)160.39(2C)161.13(1C)161.88(1C)164.51(1C)164.63(1C)182.46(1C)208.68(1C)。
化合物2(10.5mg)通过HRESIMS鉴定为桑白皮素G，又称为桑酮H或桑白皮素A，查耳酮和异戊烯基苯基部分的另一种狄尔斯-阿德耳加成物(m/z)[M-H]-＝759；UVλmax(MeOH):265,320nm；13C NMR(126MHz,METHANOL-d4)ppm 16.35(1C)16.47(1C)20.96(1C)21.79(1C)23.32(1C)24.51(1C)24.53(1C)33.74(1C)35.61(1C)36.81(1C)37.77(1C)97.19(1C)102.27(1C)102.33(1C)104.24(1C)106.07(1C)106.53(2C)107.34(1C)112.37(1C)113.94(1C)114.35(1C)120.17(1C)121.60(2C)122.31(2C)123.25(1C)130.21(2C)131.33(2C)132.96(1C)156.37(3C)157.07(1C)159.59(1C)160.37(1C)161.23(1C)161.77(1C)161.96(1C)162.21(1C)182.45(1C)208.82(1C)。
实施例6
通过从桑树纯化的桑酮G和桑白皮素G抑制CB1、CB2和α-葡糖苷酶
使用描述于实施例2中的CB1结合测定来测试在实施例5中分离和鉴定的桑酮G和桑白皮素G化合物。在0.04μg/mL与20μg/mL之间范围内的浓度测试桑酮G桑白皮素G化合物以获得每个化合物的剂量-反应曲线。绘制样品浓度对抑制百分比的曲线图并且确定IC50(定义为相对于对照实现50％结合活性抑制的浓度)。每个化合物的CB1测定数据示于表5中。
还使用类似于在实施例2中描述用于CB1受体的那些方法稍加一些修改来检验纯化的桑酮G和桑白皮素G化合物的CB2受体-配体结合活性的抑制。简而言之，在改良型HEPES缓冲液(pH7.0)中使用在CHO-K1细胞中表达的人大麻素CB2受体蛋白。将30μg等分试样的CB2-膜与氚标记的非特异性CB1激动剂[3H]WIN-55,212-2(2.4nM)混合，并且在37℃下将桑酮G和桑白皮素G化合物的测试样品或仅是非特异性配体R(+)-WIN-55,212-2(10μM)(阳性对照)孵育在孵育缓冲液(20mM HEPES(pH7.0)，0.5mg/ml BSA)中持续90分钟。在孵育之后，过滤膜并且洗涤；然后计数过滤器以确定特异性结合CB2-膜的放射标记的[3H]WIN-55,212-2的量。每个化合物的CB2测定数据示于表5中。
如下测量了每个纯化的桑酮G和桑白皮素G化合物的稻α-葡糖苷酶活性的抑制。稻α-葡糖苷酶抑制测定：在25℃下用MES缓冲液pH6.3中的77mU/ml酶稻α-葡糖苷酶预孵育测试化合物或媒介物持续15分钟。使用添加2mM对硝基苯基a-D-吡喃葡萄糖苷开始反应，在70℃下孵育另外的90分钟，然后通过添加1M碳酸钠来终止。通过分光光度计测量最终产物对硝基苯酚。每个桑树化合物的稻α-葡糖苷酶测定数据示于表5中。
表5.通过桑酮G和桑白皮素G抑制CB1、CB2和α-葡糖苷酶
这些数据显示两种主要活性化合物(桑酮G和桑白皮素G)为CB1选择性抑制剂并且提取物不含有任何显著的α-葡糖苷酶抑制。
实施例7
通过从大绿柄桑木(非洲柚木)纯化的化合物进行的CB1和CB2结合抑制
分割使用描述于实施例1中的方法获得的来自大绿柄桑木的茎皮的有机提取物(8g)并且单独加样于两个预填充的快速柱(120g二氧化硅，粒径32-60μm，4cm x 19cm)上，然后用如在实施例5中所描述的梯度洗脱柱。从活性级分之一中分离查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物并且鉴定为桑根酮C/D/O。结构和光谱数据如下：ESIMS(m/z)[M-2H]-706；UVλmax(MeOH):265,320nm；1H NMR(500MHz,METHANOL-d4)ppm 1.55(s,CH3,3H)1.58(s,CH3,3H)1.82(m,CH3,3H)2.28(dd,J＝18.65,5.09Hz,1H)2.39(dd,J＝17.80,5.09Hz,1H)2.69(m,1H)2.94(m,1H)3.87(d,J＝6.78Hz,CH,1H)4.16(br.s.,CH,1H)4.49(br.s.,CH,1H)5.19(br.s.,1H)5.45(br.s.,1H)5.64(s,1H)6.11(d,J＝2.26Hz,1H)6.17(dd,J＝8.48,2.26Hz,1H)6.23-6.34(m,3H)6.42(dd,J＝8.20,1.70Hz,1H)6.86(d,J＝8.19Hz,1H)7.21(d,J＝8.48Hz,1H)8.08(d,J＝8.76Hz,1H)。
在如实施例2中所描述的CB1结合抑制活性测定中测试桑根酮。活性数据列于表6中。
表6 通过从大绿柄桑木分离的桑根酮抑制CB1和CB2
这些数据显示桑根酮为CB1配体结合的有效抑制剂，其中CB1选择性超过CB2受体蛋白。
实施例8
各种大绿柄桑木提取物的制备
Milicia EtOAc提取物8如下产生：切割、压碎5kg的干燥大绿柄桑木茎皮，并且用大约4倍体积(20L)的乙醇(食品级，Korea Ethanol Supplies Company，Korea)水溶液(v/v)提取。在80℃下处理提取溶剂4小时，并且过滤所得到的提取物以获得在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。上述提取工序重复两次。将所得到的提取溶液合并在一起并且浓缩直到体积变为原始体积的1/25。然后通过真空冷冻干燥来干燥浓缩的溶液以获得200g的粗大绿柄桑木EtOH提取物粉末。
将在以上工序中制备的196g粗大绿柄桑木EtOH提取物粉末悬浮于2L蒸馏水中并且将悬浮液与2L正己烷剧烈混合，获得正己烷可溶性级分和水溶性级分。收集正己烷可溶性级分并且使残余溶液受到第二次正己烷提取。上述工序重复四次并且合并所得到的正己烷可溶性级分，并且在真空下蒸发以获得74.8g的大绿柄桑木茎皮的正己烷可溶性提取物8-1。
将在以上工序中制备的大绿柄桑木茎皮的水溶性级分与等体积的乙酸乙酯剧烈混合以获得乙酸乙酯可溶性级分和水溶性级分。收集乙酸乙酯可溶性级分并且使残余溶液再受到乙酸乙酯提取。此工序重复四次。在真空下分别蒸发乙酸乙酯可溶性级分和水溶性级分，获得大绿柄桑木茎皮的63.9g乙酸乙酯可溶性提取物8和35.34g水溶性提取物8-2。
实施例9
在桑树提取物中测试α-葡糖苷酶和CB1活性
在描述于实施例6中的测定中评价从水/EtOAc分隔物产生的桑树70％EtOH提取物及其富含桑树的EtOAc级分的针对α-葡糖苷酶的活性。这些数据显示于表7中。
表7 桑树提取物的CB1和α-葡糖苷酶抑制活性
这些数据显示在EtOAc富集桑树乙醇提取物之后，乙醇提取物的α-葡糖苷酶抑制活性消除，而CB1受体结合测定中的提取物(即，异戊烯基类黄酮)的结合抑制活性保留。
实施例10
体外研究从桑树和其它植物中分离的化合物的CB1功能活性
在人CB1受体结合测定中测试从桑树和大绿柄桑木中分离的化合物的体外功效和CB1结合特异性，并且通过测量对cAMP或激动剂诱导的cAMP调节的作用来确定化合物的激动剂或拮抗剂功能。通过Ricerca Biosciences LLC,(Concord,OH)在植物提取物样品上进行测定，基本上如由Breivogel等,J.Biol.Chem.273:16865,1998和Gonsiorek等.,Mol.Pharmacol.57:1045,2000所描述。
CB1激动剂作用GPCR功能测定
简而言之，将CHO-K1细胞悬浮于用HEPES 20mM(pH 7.4)补充的HBSS缓冲液中，然后在存在以下之一的情况下以104个细胞/孔的密度分布在微型板中：HBSS(基础对照)、100nM下的参比激动剂(刺激对照)、参比激动剂(EC50确定)或植物提取物测试化合物。此后，以3μM的最终浓度添加腺苷酸环化酶激活物NKH 477。在37℃下孵育10分钟之后，裂解细胞并且添加荧光受体(D2标记的cAMP)和荧光供体(用铕穴状化合物标记的抗cAMP抗体)。在室温下60min之后，使用酶标仪(Rubystar,BMG)在λex＝337nm和λem＝620nm和665nm下测量荧光转移。通过将在665nm下测量的信号除以在620nm下测量的信号(比率)来确定cAMP浓度。结果表示为针对100nM CP 55940(全CB1激动剂)的对照反应的百分比。标准参比激动剂为CP 55940，在每个实验中在若干浓度下测试所述标准参比激动剂以产生浓度-反应曲线，从所述浓度-反应曲线中计算出其EC50值。
CB1拮抗剂作用GPCR功能测定
将CHO-K1细胞悬浮于用HEPES 20mM(pH 7.4)补充的HBSS缓冲液中，然后以104个细胞/孔的密度分布在微型板中并且在存在以下之一的情况下在室温下预孵育5分钟：3μM的参比拮抗剂AM 281(基础对照)、HBSS(刺激对照)(参比拮抗剂用于IC50确定)或测试植物提取物化合物。参比激动剂CP 55940还以10nM的最终浓度存在或从反应混合物中省略用于基础对照。此后，以3μM的最终浓度添加腺苷酸环化酶激活物NKH 477。在37℃下孵育10分钟之后，裂解细胞并且添加荧光受体(D2标记的cAMP)和荧光供体(用铕穴状化合物标记的抗cAMP抗体)。在室温下60分钟之后，使用酶标仪(Rubystar,BMG)在λex＝337nm和λem＝620nm和665nm下测量荧光转移。通过将在665nm下测量的信号除以在620nm下测量的信号(比率)来确定cAMP浓度。结果表示为针对10nM CP 55940的对照反应的抑制百分比。标准参比拮抗剂为AM 281，在每个实验中在若干浓度下测试所述标准参比拮抗剂以产生浓度-反应曲线，从所述浓度-反应曲线中计算出其IC50值。在六种不同浓度(0.3μM、1μM、3μM、10μM、30μM和150μM)下测试化合物以产生剂量曲线。结果列于以下表8中。
表8 CB1激动剂和拮抗剂活性
表7中呈现的数据表明桑酮G和桑根酮化合物影响CB1受体活性，具有激动剂样而非拮抗剂的行为。相比之下，桑白皮素G似乎对CB1受体具有中等拮抗剂样活性。
实施例11
HPLC定量来自桑树的活性提取物
如下产生原材料的提取物：将与硅藻土混合物的20克植物粉末加入100mL提取室中。使用ASE 350(提取条件：加热＝5分钟，静置＝5分钟，冲洗＝80体积，吹扫＝900秒，循环＝3，压力＝1500psi，温度＝80℃，溶剂C＝100％乙醇)用溶剂(在1∶1下的100％EtOH或MeOH/CH2Cl2)提取所述植物粉末。提取之后，过滤溶液并且收集，然后在50℃下用蒸发器浓缩以产生固体提取物。
使用Agilent HPLC/PDA系统来检测和定量桑属提取物中的查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物桑酮G和桑白皮素。使用C18反相柱(Phenomenex，USA)作为Luna 5um，50mm长和4.6mm直径。使用二元纯化的水(流动相A)和乙腈(流动相B)梯度来洗脱。将流速设定为穿过Luna C18柱的1ml/min，其中柱温为40℃。将UV检测器设定为在270nm下读取吸光度。
表9 HPLC分析方法的梯度表
时间(min) 流动相A 流动相B
0.0 50 50
5.0 50 50
30.0 20 80
30.5 50 50
35.0 50 50
使用纯的桑酮G、纯的桑白皮素G和参比标准材料(RSM，桑属EtOAc级分17)作为定量标准物。在超声处理大约15分钟之后，在3mg/ml至1mg/ml范围内的浓度下制备所有提取物样品。在烧瓶中使样品溶液冷却至室温并通过0.45um尼龙注射器式过滤器过滤，并且将10μl的样品注射到HPLC中。
收集来自中国和韩国这两个国家不同地质位置的桑属植物。对从不同位置收集的不同物种、不同植物部分以及在植物的不同年龄时的桑酮G和桑白皮素G含量的HPLC定量列于表10至表14中。
表10 两个桑属植物物种中的桑酮G和桑白皮素G含量
表11 在桑属植物的不同部分中的桑酮G和桑白皮素G含量
表12 来自韩国不同地质位置的桑树根皮中的桑酮G和桑白皮素G含量
表13 购自中国不同地质位置的桑树根皮中的桑酮G和桑白皮素G含量。
表14 不同年龄时的桑树根皮的桑酮G和桑白皮素G含量。
实施例12
桑树70％ETOH提取物12的制备
切割、压碎干燥的桑树根和根皮(93.3kg)，然后用大约7倍体积(700L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取；在100℃下进行提取4小时。过滤乙醇溶液以获得上清液，然后在真空下在40℃下用蒸发器浓缩所述上清液。此提取和浓缩工序重复两次。然后将提取溶液合并在一起并且浓缩直到体积变为原始体积的1/25。通过真空冷冻干燥来干燥浓缩的溶液以获得18.3kg的桑树70％EtOH提取物粉末12。提取产率为约19.6％(w/w)。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例13
桑树ETOAC级分13的制备
来自实施例12的桑树EtOH提取物12(15kg)用大约两倍体积(300L)的乙酸乙酯(EP级，Ducksan Chemical，Korea)提取。通过用均质机(IKA T25D,Germany)在15,000rpm下使提取溶液均质化5分钟来进行提取。然后通过离心机(Beckman J-20XP,Germany)在3,000rpm(rotor#JLA 8.1000)下分离均质化良好的提取溶液持续5分钟。通过滤纸(HyundaiMicro,No.20,Korea)过滤上层(EtOAc可溶性层)并且收集EtOAc溶液。用2倍体积(300L)的乙酸乙酯(EP级，Ducksan Chemical，Korea)重新提取由离心收集的残余物(沉淀物材料)。在150rpm下搅拌重新提取的溶液持续2小时。然后过滤(Hyundai Micro,No.20,Korea)所得到的混合物以获得另外的EtOAc提取物溶液。上述工序重复两次。然后合并所得到的三种EtOAc提取物溶液并且在40℃下通过蒸发器浓缩以获得最终EtOAc提取物13。产率为从15kg中得到3.04kg的70％EtOH提取物。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例14
桑树ETOAC级分14的制备
使用描述于实施例12中的提取方法从EtOH提取物中产生桑树EtOAc级分14。4.5kg的干燥桑树根和根皮产生715g的粗桑树EtOH提取物粉末。在溶剂分离(solventpartition)之后，从691.4g的粗桑树EtOH粉末制备对应的正己烷可溶性和水溶性提取物。这导致产生桑树的95.9g正己烷可溶性提取物和263.8g水溶性提取物。用等量的乙酸乙酯(EtOAc)进一步分离水溶性提取物以产生EtOAc提取物。从此过程中获得的桑树EtOAc级分14的最终量为331.8g。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例15
桑树ETOAC级分15的制备
使用描述于实施例12和实施例14中的提取方法产生桑属EtOAc级分15。干燥的桑树根和根皮(2.0kg)产生283.5g的粗桑树EtOH提取物粉末。根据实施例14的方法从100g的粗桑树EtOH粉末制备对应的正己烷可溶性提取物和水溶性提取物。这导致产生13.7g的正己烷可溶性提取物和38g的桑树水溶性提取物。在用EtOAc溶剂分离之后，从此方法获得的桑树EtOAc级分15的最终量为47.6g。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例16
桑树ETOAC级分16的制备
使用描述于实施例12和实施例14中的提取方法产生桑属EtOAc级分16。3kg干燥的桑树根和根皮产生428g的粗桑树EtOH提取物粉末。根据实施例14的方法从300g的粗桑树EtOH粉末制备对应的正己烷可溶性提取物和水溶性提取物。这导致产生40.8g的正己烷可溶性提取物和92.7g的桑树水溶性提取物。在用EtOAc溶剂分离之后，从此方法获得的桑树EtOAc级分16的最终量为150.1g。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例17
桑树ETOAC级分17的制备
使用描述于实施例12和实施例14中的提取方法产生桑属EtOAc级分17。4kg干燥的桑树根和根皮产生570g的粗桑树EtOH提取物粉末。根据实施例14的方法从570g的粗桑树EtOH粉末制备对应的正己烷可溶性提取物和水溶性提取物。这导致产生80.5g的正己烷可溶性提取物和156g的桑树水溶性提取物。在用EtOAc溶剂分离之后，从此方法获得的桑树EtOAc级分17的最终量为327g。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例18
桑树70％ETOH沉淀物提取物18的制备
桑树EtOH沉淀物提取物18如下产生：切割、压碎634千克(KG)的干燥桑树根和根皮并且用大约7倍体积(3600升(L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取；在80℃下处理提取溶剂持续4小时；过滤残余物以获得然后在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。上述工序重复三次。然后浓缩提取溶液直到体积变为约1/30原始的初始体积。然后合并浓缩的溶液以再次蒸发，以便使浓缩溶液的体积减少直到原始提取溶液的1/90体积。在室温下静置浓缩的溶液持续24小时(h)以允许分离成两层(上清液和沉淀物层)。过滤沉淀物并且通过真空冷冻干燥来干燥以获得桑树70％EtOH沉淀物粉末。从634kg的植物原材料中获得总共24kg的所得到的产物。提取产率为约3.79％(w/w)。主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例19
桑树70％ETOH沉淀物提取物(19-1)、ETOH合并提取物(19-2)和ETOH上清液(19-3)提取物的制备
桑树EtOH沉淀物提取物如下产生：切割、压碎465kg的干燥桑树根和根皮并且用大约10倍体积(4500L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取；在80℃下处理提取溶剂持续4小时；过滤残余物以获得然后在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。上述工序重复三次。浓缩提取溶液直到体积变为1/30原始体积。然后合并浓缩的溶液并且再次蒸发以使浓缩溶液的体积减少直到达到原始提取溶液的1/90体积。将浓缩的溶液置于室温下持续24小时以允许分离成上清液和沉淀物层。然后通过真空干燥沉淀物层以获得12kg的桑树70％EtOH沉淀物提取物粉末。提取产率为约2.6％(w/w)。通过真空干燥来干燥上清液层以获得24kg桑树70％EtOH上清液提取物粉末。上清液提取物的提取产率为约5.2％。
桑树70％EtOH合并提取物19-2通过将2kg的沉淀物提取物19-1和4kg的上清液提取物19-3共混来获得。在桑树EtOH沉淀物19-1和合并提取物19-2中的主要活性组分含量列于实施例20的表16中。
实施例20
HPLC定量不同桑树提取物中的活性含量
用于桑酮G和桑白皮素G的详细HPLC定量方法描述于实施例11中。针对粗提取物的复杂性，还可使用如下的不同洗脱溶剂：使用二元0.1％磷酸的纯化水溶液(流动相A)和乙腈(流动相B)梯度用于洗脱(表15)。
表15 HPLC分析方法的梯度表
时间(min) 流动相A 流动相B
0 33 67
5 33 67
55 24 76
59 0 100
65 0 100
66 33 67
75 33 67
穿过Luna C18柱的流速为0.8ml/min，其中柱温35℃。将紫外检测器设定在275nm下。参比标准材料(RSM，桑属EtOAc级分17)用DMSO提取并且用于计算。表16列出描述于实施例12-19中的中试和生产级桑树根皮提取物和级分的桑酮G和桑白皮素G的主要活性组分。
表16 不同桑树根皮提取物和级分中的桑酮G和桑白皮素G
样品提取物 ％桑酮G ％桑白皮素G ％总活性物
12 2.88 1.64 4.51
13 8.80 5.80 14.60
14 13.53 8.32 21.85
样品提取物 ％桑酮G ％桑白皮素G ％总活性物
15 10.51 6.95 17.46
16 10.93 7.38 18.31
17(RSM) 9.95 6.65 16.60
18 5.30 4.16 9.46
19-1 6.21 4.33 10.54
19-2 3.30 1.81 5.11
实施例21
迷迭香蒸汽蒸馏的ETOH提取物的制备
用大约6倍体积(15L)的水蒸馏干燥的迷迭香叶(2.6kg)以在100℃下去除精油和挥发性组分持续5小时。在蒸汽蒸馏之后，过滤所保留的残余物以使水蒸馏的溶液从残余物中去除，然后用6倍体积(15L)的乙醇(95％)在80℃下再提取残余物持续5小时。过滤所得到的提取物以获得在40℃下使用蒸发器浓缩的上清液。上述提取工序重复两次。将所得到的上清液合并在一起并且然后在40℃下用蒸发器浓缩。然后通过真空冷冻干燥来干燥所得到的浓缩溶液以获得357.1g的迷迭香蒸汽蒸馏的EtOH提取物粉末21。提取产率为约13.7％(w/w)。化学分析显示迷迭香提取物21含有以下化合物(重量百分比)：鼠尾草酚：2.97％；鼠尾草酸：2.00％和熊果酸：18.49％；这三种化合物的总活性物为23.80％。
实施例22
迷迭香ETOH提取物22和22-1的制备
基本上使用描述于实施例21中的方法产生迷迭香EtOH提取物22。用大约10倍体积(300L)的水蒸馏29kg干燥的迷迭香叶以在100℃下去除精油和挥发性组分持续2小时。接下来过滤残余物以使水蒸馏的溶液从残余物中去除，然后用10倍体积(300L)的95％乙醇在室温(20℃)下再提取残余物持续2小时。过滤所得到的残余物以获得在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。在室温(20℃)下用10倍体积(300L)的70％乙醇(v/v)再次提取所得到的残余物持续2小时。过滤所得到的提取物残余物并且保留并合并上清液。然后在40℃下用蒸发器浓缩所得到的上清液。最终通过真空冷冻干燥来干燥所得到的浓缩溶液以获得2.5kg的迷迭香水蒸馏EtOH提取物粉末22。提取产率为约8.6％(w/w)。此提取物的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的HPLC活性物特征提供于实施例25、表18中。
迷迭香EtOH提取物22-1如下产生：用大约10倍体积(600L)水蒸馏58.68kg干燥的迷迭香叶以在100℃下去除精油和挥发性组分持续2小时；通过过滤使残余物从水蒸馏的溶液中去除并且然后用10倍体积(600L)95％乙醇在室温(20℃)下再提取残余物持续2小时。过滤残余物以获得上清液。然后用10倍体积(600L)70％乙醇在室温(20℃)下再次提取残余物持续2小时。过滤双重提取的残余物以获得上清液。合并这两种上清液并且在40℃下用蒸发器浓缩。通过真空冷冻干燥来干燥浓缩的上清液以获得迷迭香水蒸馏的EtOH提取物粉末22-1。产率为从58.68kg的原材料获得5.0kg迷迭香提取物粉末22-1。提取产率为约8.5％(w/w)。
实施例23
迷迭香水蒸馏的ETOH提取物23的制备
迷迭香EtOH提取物基本上如实施例22中所描述来产生。62kg干燥的迷迭香叶产生5.9kg水蒸馏的提取物粉末。提取产率为约9.5％(w/w)。此提取物23中的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的HPLC活性物特征提供于实施例25、表10中。
实施例24
迷迭香蒸汽蒸馏的ETOH提取物24的制备
迷迭香蒸汽蒸馏的EtOH提取物基本上如实施例21中所描述来产生。2kg干燥的迷迭香叶产生命名为批号RN348-3201的317.7g水蒸馏的提取物粉末。提取产率为约15.8％(w/w)。此提取物中的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的HPLC活性物特征提供于实施例22、表10中。
实施例25
迷迭香叶提取物的分析结果
使用以下分析方法来确定迷迭香蒸汽蒸馏的乙醇提取物24和水蒸馏的乙醇提取物22和23中的鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的量。使用具有C18反相柱(Phenomenex，USA，Luna 5um，250mm x 4.6mm)的Agilent HPLC/PDA系统，以用于检测和定量鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸。如表9中所列出，使用二元0.1％磷酸的纯化水溶液(流动相A)和乙腈(流动相B)梯度用于洗脱。将柱流速设定在穿过Luna C18柱1ml/min下，其中柱温为40℃。将UV检测器设定为在210nm处读取吸光度。
表17 迷迭香梯度洗脱方案
时间(min) 流动相A 流动相B
0 40 60
5 20 80
30 0 100
34 0 100
时间(min) 流动相A 流动相B
35 40 60
40 40 60
鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸标准物购自Sigma并且溶解于DMSO中。使鼠尾草酚和鼠尾草酸的最高水平对照浓度制备为0.1mg/ml。使熊果酸的最高水平对照浓度制备为0.3mg/ml并且使用甲醇稀释至(0.065mg/ml或0.02mg/ml)。在容量瓶中用甲醇将测试样品浓度调节至约1mg/ml并且超声处理直到样品溶解(大约20分钟)。然后将样品瓶冷却至室温、充分混合并且通过0.45um尼龙注射器式过滤器过滤，然后将10ul样品注射到HPLC中。HPLC结果显示在表10中。
表18 迷迭香叶提取物的HPLC结果
样品提取物 鼠尾草酚％ 鼠尾草酸％熊果酸％ 总共％
22 8.84 4.377.83 21.04
23 6.52 5.3210.47 22.31
24 4.07 2.6914.53 21.30
实施例26
巴拉圭茶乙醇提取物26的制备
巴拉圭茶(巴拉圭冬青)EtOH提取物如下产生：切割、压碎1kg干燥的巴拉圭冬青叶，并且用20倍体积(20L)的95％乙醇在85℃下提取4小时。过滤所得到的残余物以获得在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。用20倍体积(20L)的95％乙醇(v/v)在85下第二次提取所得到的残余物持续4小时并且过滤以获得在40℃下用蒸发器浓缩的第二上清液。在真空下干燥所得到的浓缩的滤饼以获得260g的巴拉圭茶EtOH提取物粉末。提取产率为约26％(w/w)。
实施例27
巴拉圭茶乙醇提取物27的制备
巴拉圭茶EtOH提取物如下产生：切割、压碎150kg干燥的巴拉圭茶(巴拉圭冬青)叶，并且用大约7倍体积(1050L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取并在100℃下将提取溶剂保持4小时。过滤残余物以获得在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。上述工序重复两次。然后将提取溶液合并在一起并且浓缩直到体积变为原始体积的1/25。通过真空冷冻干燥来干燥浓缩的溶液以获得26.7kg的冬青茶70％EtOH提取物粉末。提取产率为约17.8％(w/w)。如实施例29中所描述的HPLC分析确定了巴拉圭茶提取物27中的咖啡因量为2.44重量％。
实施例28
定量巴拉圭茶叶提取物中的咖啡因
使用以下分析方法来确定巴拉圭茶叶提取物中的咖啡因量。使用描述于实施例25中的包括C18反相柱(Phenomenex，USA)的相同Agilent HPLC/PDA系统用于检测咖啡因和微量组分。如表11中所描述，使用二元0.1％磷酸的纯化水溶液(流动相A)和甲醇(流动相B)梯度用于洗脱冬青茶样品组分。将流速设定为穿过Luna C18柱的1ml/min，其中柱温为35℃。将UV检测器设定为在275nm处读取吸光度。
表19 巴拉圭茶梯度洗脱方案
时间(min) 流动相A 流动相B
0 95 5
时间(min) 流动相A 流动相B
5 95 5
65 0 100
75 0 100
80 95 5
90 95 5
定量标准物-咖啡因购自Sigma。二咖啡酰奎尼酸(DCYA)标准物购自成都Biopurify Phytohemicals Ltd.并且溶解于DMSO中。咖啡因和4，5-DCYA的最高浓度水平为0.05mg/ml并且使用甲醇从L1稀释至L5(0.0031mg/ml)。3，4-DCYA的最高浓度水平为0.02mg/ml并且使用甲醇从L1稀释至L5(0.00125mg/ml)。3，5-DCYA的最高浓度水平为0.025mg/ml并且使用甲醇从L1稀释至L5(0.0016mg/ml)。在容量瓶中用甲醇将巴拉圭茶叶提取物样品的浓度调节至约1mg/ml并且超声处理直到溶解(大约20分钟)，然后冷却至室温、充分混合并且通过0.45um尼龙注射器式过滤器过滤。通过HPLC检验10μl样品。巴拉圭茶提取物27和体重减轻组合物1和3(分别在实施例38和实施例39中举例说明)的HPLC活性物定量结果提供于表20中。
表20 巴拉圭茶提取物和体重减轻组合物的HPLC定量
样品 咖啡因 3-4DCYA 3-5DCYA 4-5DCYA 总共％
27 2.44 0.77 1.24 2.09 6.55
组合物1 1.80 0.58 0.94 1.56 4.88
组合物3 1.29 0.41 0.69 1.43 3.82
实施例29
木兰提取物29和29A的制备
木兰(厚朴)提取物29如下产生。切割、压碎70kg干燥的厚朴茎皮，并且用70％乙醇提取并在80℃下处理提取溶剂持续4小时。过滤所得到的残余物以获得在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。上述工序重复两次。然后将提取溶液合并在一起并且浓缩直到体积变为原始体积的1/25。将氢氧化钠(NaOH)添加到浓缩的溶液中以获得1％NaOH的最终浓度。在80℃下皂化30min之后，使用搅拌器用2倍体积的己烷提取溶液1小时。然后收集所得到的己烷可溶性级分并且上述工序重复三次。合并正己烷可溶性级分并且在真空下蒸发直到体积变为原始体积的1/6。在重结晶真空干燥之后获得高纯度木兰提取物。70kg干燥的厚朴茎皮产生652g高纯度木兰提取物。提取效率为0.93％。还根据相同工序产生第二批木兰提取物(29A)。这两种提取物中的活性物含量的定量提供于以下实施例中。
实施例30
用于分析木兰茎皮提取物的分析方法
使用以下分析方法来确定木兰茎皮提取物中的木兰醇和和厚朴酚的量。使用描述于实施例25中的包括C18反相柱(Phenomenex，USA)的相同Agilent HPLC/PDA系统用于检测木兰醇和和厚朴酚。如表13中所描述，使用二元纯化水(流动相A)和乙腈(流动相B)梯度用于检测木兰醇和和厚朴酚。将流速设定为穿过Luna C18柱的1ml/min，其中柱温为35℃并且在290nm处读取吸光度。
表21 木兰梯度洗脱方案
时间(min) 流动相A 流动相B
0.0 23 77
18.0 23 77
18.1 0 100
25.0 0 100
25.1 23 77
30.0 23 77
木兰醇和和厚朴酚标准物购自广州Honsea Sunshine Bio Science andTechnology co.，Ltd.并且用甲醇提取。和厚朴酚和木兰醇的最高标准物浓度为0.2mg/ml并且使用甲醇从L1稀释至L3(0.05mg/ml)。将木兰茎皮提取物样品浓度调节至约0.2mg/ml，并且合并样品浓度为2mg/ml的甲醇溶液。在样品制备中使用容量瓶并且超声处理直到溶解(大约10分钟)，将烧瓶冷却至室温并用提取物方法进行QS，充分混合，并且通过0.45um尼龙注射器式过滤器过滤，并且通过HPLC分析20μl样品。HPLC定量结果提供于表22中。
表22 木兰茎皮提取物中的木兰醇和和厚朴酚的HPLC结果
实施例31
槟榔70％ETOH提取物31的制备
将研磨的槟榔种子(7kg)分成3kg和4kg的两个部分，压碎并且放入两个提取单元中并且用约8倍体积(约240L和320L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取，并且将提取溶剂保持在90℃下持续4小时。在过滤提取物溶液之后，在50℃下用蒸发器浓缩滤液直到仅剩下水溶液，然后收集所述水溶液并且在-70℃下冷冻。然后如前面所述再次提取剩下的压碎的种子材料。然后在冷冻干燥器装置中干燥第1冷冻提取物溶液和第2冷冻提取物溶液。合并干燥的提取物并且研磨成细粉末以获得930g。最终提取产率为约13.2％(w/w)。
实施例32
MUTAMBA(GUAZUMA ULMIFOILA)茎皮ETOH提取物32的制备
Mutamba EtOH提取物32如下产生：切割、压碎500g干燥的Mutamba(Guazumaulmifolia)茎皮并且用20倍体积(10L)的95％乙醇在85℃下提取4小时。过滤残余物以获得上清液。然后如前面所述第二次提取残余物量，并且将两种EtOH上清液合并在一起并在40℃下用蒸发器浓缩。通过真空干燥来干燥浓缩的滤饼以获得70g的Mutamba茎皮EtOH提取物粉末。提取产率为约14％(w/w)。HPLC分析显示此提取物含有1.31％原花青素B2和0.86％表儿茶素。
实施例33
MUTAMBA提取物33、33-1和33-2的制备
Mutamba EtOH提取物33如下产生：切割、压碎两个不同批次的2.3kg干燥的Mutamba茎皮，然后用15倍体积(30L)的95％乙醇在85℃下提取每个批次持续4小时。过滤残余物以获得两个批次的上清液。合并两种上清液并且用蒸发器在40℃下浓缩。然后通过真空来干燥所得到的浓缩滤饼以获得370g的Mutamba EtOH提取物粉末33。提取产率为约8.04％(w/w)。
然后用约15倍体积(30L)的95％乙醇(v/v)在85℃下再次提取来自以上提取的两种残余物，持续4小时。过滤残余物以获得在40℃下用蒸发器浓缩的上清液。通过真空干燥来干燥所得的浓缩滤饼以获得290g的Mutamba EtOH提取物粉末33-1并且提取产率为约6.3％(w/w)。
Mutamba EtOH提取物33-2如下产生：将Mutamba EtOH粉末提取物33和33-1合并在一起并且磨成粉产生660g的Mutamba EtOH提取物33-2。最终提取产率为约14.34％(w/w)。HPLC分析显示此提取物含有0.96％原花青素B2和0.62％表儿茶素。
实施例34
MUTAMBA ETOH提取物级分34、34-1和34-2的制备。
Mutamba EtOH提取物衍生的级分34、34-1和34-2如下产生：将来自实施例33的500g Mutamba茎皮EtOH提取物33-2悬浮于5L蒸馏水中，并且将悬浮液与5L乙酸乙酯剧烈混合以分成乙酸乙酯可溶性级分和水溶性级分。收集乙酸乙酯可溶性级分并且使残余溶液受到第二次乙酸乙酯提取。上述工序重复三次。汇集所收集的乙酸乙酯可溶性级分并且然后在真空中蒸发以得到117g的Mutamba茎皮乙酸乙酯可溶性提取物34。HPLC分析显示此提取物含有2.57％原花青素B2和2.24％表儿茶素。
将实施例33中制备的Mutamba茎皮EtOH提取物33-2的水溶性级分与等体积丁醇和水剧烈混合，并且允许分离成丁醇可溶性级分和水溶性级分。收集丁醇可溶性级分并且使残余溶液受到再次的丁醇提取。此工序重复三次。汇集相应的级分并且在真空中蒸发以获得Mutamba茎皮的260g丁醇可溶性提取物34-1和130g水溶性提取物34-2。HPLC分析显示Mutamba提取物级分34-1含有：1.31％原花青素B2和0.86％表儿茶素。HPLC分析不是在Mutamba提取物级分34-2上进行的。
实施例35
MUTAMBA ETOH提取物35的制备
Mutamba EtOH提取物35如下产生：切割、压碎920g干燥的Mutamba茎皮，并且用20倍体积(20L)的95％乙醇在85℃下提取4小时。过滤残余物以获得上清液并且然后用20L的95％乙醇(v/v)再次提取留下的残余物并如前面所述过滤。将所得到的上清液合并在一起并且用蒸发器在40℃下浓缩。在真空下干燥所得到的浓缩滤饼以获得132g的Mutamba EtOH提取物粉末35。提取产率为约14.34％(w/w)。HPLC分析显示提取物35含有1.03％原花青素B2和0.60％表儿茶素。
实施例36
MUTAMBA ETOH提取物36的制备
Mutamba EtOH提取物36如下产生：切割、压碎85.7kg干燥的Mutamba茎皮，并且在100C下在提取溶剂中孵育之后用大约8倍体积(720L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取4小时。过滤残余物以获得留下的上清液，然后使用相同提取工序再提取残余物两次以上。然后将留下的上清液合并在一起并且浓缩直到体积为原始的初始体积的1/25。然后通过真空冷冻干燥来干燥此浓缩的溶液以获得13.9Kg的Mutamba茎皮70％EtOH提取物粉末36。提取产率为约16.2％(w/w)。提取产率为约14.34％(w/w)。HPLC分析显示提取物36含有1.03％原花青素B2和0.60％表儿茶素。
实施例37
HPLC定量各种MUTAMBA提取物
使用Agilent HPLC/PDA系统用于检测和定量从生长于不同地方的树、使用不同树部分、不同树性别和不同树年龄而获得的Mutamba植物提取物中的原花青素B2和表儿茶素化合物。使用C18反相柱(Agilent，USA)(Zorbax eclipse XDB-C18，3.5um，150mm X 4.6mm。使用二元柱梯度用于使材料从柱上洗脱下来。使用流动相A：0.01％三氟乙酸的纯化水溶液，并且流动相B：乙腈梯度用于洗脱(表23)。将流速设定为穿过Luna C18柱的0.8ml/min，其中柱温为35℃。将UV检测器设定为在275nm处记录吸光度。
表23 HPLC分析方法的梯度表
时间(min) 流动相A 流动相B
0 92 8
10 83 17
20 80.6 19.4
25 77.4 22.6
28 70.0 29.8
30 35 65
38 0 100
40 0 100
42 92 8
45 92 8
纯表儿茶素参比样品购自Sigma。纯原花青素B2购自成都BiopurifyPhytohemicals，Ltd。这两种参比样品均溶解于DMSO中。表儿茶素的最高水平浓度范围为0.05mg/ml并且用50％甲醇水溶液从L1稀释至L5(0.003mg/ml)。原花青素B2的最高水平浓度为0.05mg/ml并且用50％甲醇水溶液从L1稀释至L5(0.003mg/ml)。在容量瓶中用50％甲醇水溶液将Mutamba提取物样品的浓度调节至约2mg/ml并且超声处理直到溶解(大约20分钟)，然后冷却至室温、充分混合并且通过0.45um尼龙注射器式过滤器过滤。通过将10μl样品注射到HPLC中进行HPLC分析。
1.伯利兹
切割、压碎所有植物材料并且用70％EtOH提取，并且如上所述通过HPLC来分析原花青素B2和表儿茶素含量。HPLC结果呈现于表24中。
表24 来自伯利兹的Mutamba树中的原花青素B2和表儿茶素含量
2.印度
来自不同树部分的五种不同Mutamba样品购自印度供应商。切割、压碎植物材料并且用MeOH/CH2Cl2(1:1体积比)提取，并且如上所述通过HPLC来分析原花青素B2和表儿茶素含量。HPLC结果呈现于表25中。
表25 来自印度的Mutamba树中的原花青素B2和表儿茶素含量
3.六个不同国家。
来自六个不同国家的Mutamba茎皮样品购自一个供应商。切割、压碎植物材料并且用100％EtOH(E)或70％EtOH(70E)或MeOH/CH2Cl2(1:1体积比)(OE)提取，并且如本文所述通过HPLC来分析原花青素B2和表儿茶素含量。HPLC结果呈现于表26中。
表26 来自不同国家的Mutamba茎皮中的原花青素B2和表儿茶素含量
实施例38
木兰:桑属:巴拉圭茶组合物1的制备
三组分(木兰:桑属:巴拉圭茶)组合物1通过从以下三种植物提取物组分来产生：用v型混合器(Seo-kang Engineering,Korea)在30rpm下将1.02kg干燥的木兰提取物粉末29、2.01kg桑树根皮提取物粉末18以及10.08kg巴拉圭茶提取物粉末27共混1小时。最终共混重量比为1:2:10的木兰:桑属:巴拉圭茶并且导致产生12.65kg体重减轻组合组合物1。组合物1中的主要活性化合物特征通过如实施例11、20、25、28和30中所述的HPLC分析来确定。定量结果示于表27。
表27 组合物1中的活性组分的概述
实施例39
桑属:迷迭香:巴拉圭茶组合物3的制备
三组分(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)组合物3如下产生：用v型混合器(Seo-kangEngineering,Korea)在30rpm下将2.4kg干燥的桑属根皮提取物粉末18、6.0kg干燥的迷迭香提取物粉末23以及12.04kg干燥的巴拉圭茶提取物粉末27共混1小时。最终的共混重量比为2:5:10下的桑属:迷迭香:冬青茶并且产生20.4kg组合物3。组合物中的活性含量用实施例11、20、25、28和30中说明的HPLC来定量。定量结果示于表28。
表28 组合物3的活性含量的概述
实施例40
桑属:ACCELERIS:LOESYN:BAKUTROL组合物6的制备
四组分(桑属:Acceleris:Loesyn:Bakutrol)组合物6产生如下：将968.6g的桑树根皮提取物20、484.3g的人参属人参提取物(Acceleris)以及387.4g的库拉索芦荟内叶胶粉末(Loesyn)中的标准化芦荟色酮合并在加盖1加仑广口瓶中，然后振荡并且在广口瓶中转动以产生均匀粉末(粉末1)。将96.9g的补骨脂属种子提取物(Bakutrol)放入2升烧杯中，并且逐渐地将一半粉末1添加至Bakutrol液体直到实现颗粒样混合物。然后将此混合物添加至剩余的一半粉末1中并且彻底混合。最后，将全部混合物放入混合器中用于磨成粉。最终组合的组合物6的桑属:Acceleris:Loesyn:Bakutrol的共混重量比为10:5:4:1。组合物9的活性含量示于表29。
表29 组合物6中的活性含量的概述
实施例41
桑属:迷迭香:槟榔组合物9的制备
三组分(桑属:迷迭香:槟榔)组合物9产生如下：用带式混合器(Hankook P.M.EMG,Korea)在30rpm下将153.2g的干燥桑树根皮提取物18、382.2g的迷迭香提取物粉末22-1以及765.8g的槟榔果实提取物粉末31共混在一起持续1小时以获得1.301kg的UP609。桑属:迷迭香:槟榔的共混比为2:5:10(重量比)。组合物9的活性含量示于表30。
表30 组合物9中的活性含量的概述UP609(lot#RAM-1201)
实施例42
木兰:桑属:MUTAMBA组合物2的制备
三组分(木兰:桑属:Mutamba)组合物2产生如下：用v型混合器(Seo-kangEngineering,Korea)在30rpm下将1.02Kg的干燥木兰提取物粉末29、2.04Kg的干燥桑树根皮提取物粉末18以及10.05Kg的干燥Mutamba茎皮提取物粉末36共混在一起持续1小时以获得13.05Kg的组合物2。木兰:桑属:Mutamba的共混比为1:2:10(重量比)。
表31 组合物2中的活性成分的概述
实施例43
MUTAMBA:迷迭香:冬青茶组合物4的制备
三组分(Mutamba:迷迭香:冬青茶)组合物4产生如下：用带式混合器(Seo-kangEngineering,Korea)在30rpm下将352.3g的Mutamba茎皮提取物粉末36、352.1g的迷迭香提取物粉末22以及352.1g的冬青茶提取物粉末27共混1小时以获得1.04Kg的组合组合物4。Mutamba:迷迭香:冬青茶的共混比为1:1:1(重量比)。
表32 组合物4的活性成分的概述
实施例44
MUTAMBA:迷迭香:冬青茶组合物8的制备
三组分(Mutamba:迷迭香:冬青茶)组合物8产生如下：用带式混合器(Seo-kangEngineering,Korea)在30rpm下将640.2g的Mutamba茎皮提取物粉末36、320.1g的迷迭香提取物粉末22以及640.2g的冬青茶提取物粉末27共混1小时以获得1.52Kg的组合组合物8。Mutamba:迷迭香:冬青茶的共混比为2:1:2(重量比)。
表33 组合物8的活性成分的概述
实施例45
作为胃口抑制措施的斯普拉格-道来大鼠中的急性食物摄入
此实施例描述用于评价膳食和测试化合物对禁食期后的大鼠食物摄入的量和速率的作用的急性食物摄入大鼠动物模型。
方法：在实验开始时在本研究中使用八周龄的雄性斯普拉格-道来(SD)大鼠(Koatech,Korea)。在驯化期间，将动物维持在正常大鼠饲料饮食(2018S,Harlan,USA)。将大鼠饲养在维持12小时/12小时反向光/暗循环的气候控制的房间中。在开始黑暗阶段饲养循环之前30分钟，给大鼠施用作为媒介物或与测试组合物组合的0.5％CMC(羧甲基纤维素)水溶液。在12小时黑暗循环开始时开始实验测试。在测试循环开始之前，使大鼠禁食过夜(小于约16小时)以增强它们的饥饿。另外，动物具有无限获得45％高脂肪膳食(Harlan,USA)和自来水。在实验开始的0、1、2、4、6、8、10和24小时下测量食物摄入以确定研究中的每个动物的急性食物摄入，并且还在2、8和24小时下测量总体重。
实施例46
斯普拉格-道来(SD)大鼠中的桑树提取物的急性食物摄入研究
此实施例提出根据实施例45进行24小时食物摄入测试以确定施用桑树植物提取物15对大鼠食物摄入的作用。在黑暗阶段饲养循环之前30分钟，给SD大鼠施用在0.5％CMC(羧甲基纤维素)溶液中的根据实施例15产生的桑树提取物15。在250、500和1000mg/动物体重的kg数的剂量下施用桑树提取物，每组7个动物。
表34示出与对照动物相比，在三种不同量下用单一剂量桑树提取物15处理的大鼠的食物摄入测试结果。
表34 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的累积食物摄入
表34中呈现的数据显示所有桑树处理组均在累积食物摄入上表现出统计学显著的减少。此外，通过完成研究在食物摄入测量的第一个小时中观察到食物摄入的剂量依赖型减少。这些结果显示桑树提取物对大鼠中的食物摄入具有统计学显著的作用，这表明桑树提取物可用作通过抑制食物摄入的体重控制组合物。而且，来自单一口服剂量的桑树提取物的减少的食物摄入持续多于10小时。因此，通过每天一次或两次经口施用桑树提取物实现胃口下降、饱腹感增强或食物或热量摄入减少是可行的。
实施例47
SD大鼠中的大绿柄桑木提取物8的急性食物摄入研究
根据实施例45进行此24小时食物摄入研究。在黑暗阶段饲养循环开始之前30min，向SD大鼠施用1000mg/动物体重的kg数剂量的0.5％CMC(羧甲基纤维素溶液)溶液中的根据实施例8产生的大绿柄桑木提取物8。
如表35和表36所示，在8小时和24小时研究时间点下体重和体重增加显著减少。通过在研究的每个连续样品时间点之间测量每个研究组的体重差异来确定体重增加。大绿柄桑木提取物处理组还在1小时、4小时、6小时和8小时时间点下表现出减少的食物摄入(表37)。大绿柄桑木提取物饲养的处理SD大鼠还在累积食物摄入上显著减少持续24小时(表38)。
表35 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的体重
表36 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的体重增加变化
表37 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的每个时间点的食物摄入
表38 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的累积食物摄入
这些数据显示大绿柄桑木提取物有效于显著减少体重和体重增加。另外，在禁食之后正常饲料饮食饲养的SD大鼠减少食物的摄入。因此，本结果表明大绿柄桑木提取物可用作通过抑制食物摄入的体重控制剂。
实施例48
高脂肪膳食诱导的肥胖(DIO)小鼠模型
将4-6周龄的C57CL/6J小鼠(Korea Research Institute of Biosci ence&Biotechnology,Ohchang,Korea)饲养于具有12小时:12小时亮-暗循环的房间中的聚碳酸酯笼子(每个笼子5只小鼠)中，并且环境温度为24℃。在到达动物设施之后饲养所有小鼠商业上的饲料饮食持续1周。然后将小鼠分成正常组和肥胖组并且分别用正常膳食(ND)和高脂肪膳食(HFD)饲养。将HFD组分成多个处理组：高脂肪膳食媒介物组(HFD)、奥利司他(购买的OTC药物)阳性对照处理组(O RI，40mg/动物体重的kg数，2次/天)以及任选地西布曲明阳性对照处理组(10mg/kg，1次/天)。HFD含有340g脂肪/kg HFD(310g猪油加上30g大豆油；Harlan Laboratories,USA)。配制HFD以提供由将碳水化合物能量替换为猪油和大豆油的来自脂肪的膳食而产生的60％总能量，而正常膳食(ND)组进食仅提供来自脂肪的18％总膳食能量的膳食(Harlan Laboratories,USA)。
每周测量一次体重并且每周测量两次进食摄入。在实验期结束时，在12小时禁食期之后，用乙醚使动物麻醉，并且从腹静脉抽取血液。从每个动物中去除肝脏和肾脏和脂肪组织(附睾组织、腹膜后组织、肾周脂肪组织)，用生理盐水冲洗，并且称重。使用自动分析器(INTEGRA 400,Roche,Germany)确定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯和LDL-胆固醇的血清浓度。使用学生t-检验测量测试结果的统计学显著性。
实施例49
高脂肪膳食诱导的肥胖(DIO)大鼠模型
将4-6周龄雄性斯普拉格-道来大鼠(OrientBio,Inc.；Seongnam,Korea)单独饲养于具有12小时:12小时亮-暗循环的房间中的聚碳酸酯笼子中并且环境温度为24℃。在到达动物设施之后饲养所有大鼠商业上的饲料饮食1周。然后将大鼠分成正常组和肥胖组并且分别用正常膳食(ND)和高脂肪膳食(HFD)饲养。将HFD组分成多个处理组：高脂肪膳食媒介物组(HFD)、奥利司他(购买的OTC药物)阳性对照处理组(ORI，80mg/动物体重的kg数，2次/天)。在一些实施例中，西布曲明用作阳性对照(SIB，针对大鼠研究为3mg/kg并且针对小鼠研究为10mg/ml)。
每周测量一次或两次体重并且每周测量两次进食摄入。通过测量研究的每个连续周之间的每个研究组的体重差异来确定每个研究组的体重增加。在实验期结束时，在12小鼠进食期之后，用乙醚使动物麻醉，并且从腹静脉抽取血液。从每个动物中去除肝脏和肾脏和脂肪组织(附睾组织、腹膜后组织、肾周脂肪组织)，用生理盐水冲洗，并且称重。使用自动分析器(INTEGRA 400,Roche,Germany)确定葡萄糖、总胆固醇和LDL-胆固醇的血清浓度。使用学生t-检验进行测试结果的统计学显著性。
实施例50
桑树乙醇提取物19-2对DIO小鼠的作用
如实施例48中所述，向DIO小鼠经口施用根据实施例19产生的桑树70％乙醇提取物19-2。在两种剂量水平下施用桑树提取物：在500mg/动物体重的kg数下的G1组和在1000mg/动物体重的kg数下的G2组。通过每天管饲两次向动物给予口服剂量。动物体重测量的研究结果示于表39中。
表39 桑树提取物19-2对DIO小鼠的总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表39中的数据显示G1组(低剂量的桑树提取物19-2)与HFD组相比没有表现出显著的体重差异。相比之下，G2组(高剂量的桑树提取物19-2)与HFD组相比时表现出在第3周、第4周、第5周、第6周和第7周时体重统计学上显著减少。阳性对照组(ORI，用40mg/体重的kg数的奥利司他处理)显示与HFD组比较时表现出在第2周、第3周、第4周和第7周时体重统计学上显著减少。
表40示出每组的体重增加的作用。
表40 桑树对高脂肪膳食饲养的小鼠中的体重增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表40中的数据显示均表明以相对于HFD组从第4周下降至第7周的体重减轻速率在第2周与第3周之间的体重增加最大变化的高剂量组(G2)和阳性对照组(ORI)的体重增加变化。
表41显示桑树提取物对体重增加、食物摄入和食物效率比(FER)的作用，所述食物效率比为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表41 桑树对高脂肪膳食饲养的小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表41中呈现的数据显示高剂量桑树处理组(G2)和阳性对照处理组(ORI)均显示与HFD组相比研究的每天体重增加统计学上显著减小。另外，G2和ORI组还显示与HFD组相比FER统计学上显著减小。令人感兴趣地，ORI组和G2组还显示研究的每天食物摄入统计学上显著变化，其中ORI显示与HFD组相比食物摄入增加，而G2组显示与HFD组相比研究的每日平均食物摄入减小，从而表明作用机理在两个组合物之间不同。
总之，此实施例中呈现的数据表明当每天两次摄取1000mg/受试者体重的kg数的剂量时，桑树70％乙醇提取物19-2有效于帮助控制高脂肪膳食的受试者的食物摄入和体重。
实施例51
桑树提取物沉淀物19-1对DIO小鼠的作用
使用描述于实施例48中的方法，向DIO小鼠经口施用通过从实施例189的浓缩的70％乙醇提取物中沉淀产生的桑树沉淀物19-1。在两种剂量水平下施用桑树提取物沉淀物：在250mg/动物体重的kg数下的G1组和在500mg/动物体重的kg数下的G2组。通过每天管饲两次向动物给予口服剂量。动物体重测量的研究结果示于表42。
表42 桑树提取物沉淀物19-1对总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
如表42所示，在桑树处理组中体重以剂量依赖型方式显著降低。具体来说，G1组(低剂量的桑树提取物沉淀物19-1)表现出与HFD组相比对于第2周和第3周的体重显著不同。此外与HFD组相比的体重增加趋势表明与HFD组相比的降低速率的体重增加，即使第4周、第5周、第6周和第7周的数量不能达到统计学显著性。而G2组(高剂量的桑树提取物沉淀物19-1)表现出当与HFD组相比时第2周至第7周时的体重统计学上显著减少。阳性对照组ORI(用奥利司他处理)显示当与HFD组相比时第2周、第3周、第4周和第7周时的体重统计学上显著减少。
表43显示每个研究组中的体重增加的作用。
表43 桑树提取物沉淀物19-1对高脂肪膳食饲养的小鼠的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表43中的数据显示桑树处理组和阳性对照ORI组均表现出与HFD组相比在处理的第一周之后每周体重增加统计学上显著减小。另外，数据还显示桑树处理组的体重减轻作用为剂量依赖型的。
表44显示桑树提取物沉淀物19-1对体重增加、食物摄入和食物效率比(FER)的作用，所述食物效率比为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表44 桑树提取物沉淀物19-1对高脂肪膳食饲养的小鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表44中呈现的数据显示桑树处理组(G1和G2)和阳性对照处理组(ORI)所有均显示研究的每天体重增加统计学上显著减小。ORI处理组和G2处理组还显示与HFD组相比每天的食物摄入的平均量统计学上显著减小。另外，G1处理组、G2处理组和ORI处理组还显示与HFD组相比FER统计学上显著减小。
表45显示桑树提取物沉淀物19-1对已知在高脂肪膳食的受试者中具有增加的脂肪含量的若干特定组织的作用。
表45 桑树提取物沉淀物19-1对器官重量的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表45中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常营养膳食)与HFD组之间肝脏重量、附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪之间存在统计学上显著的差异。令人感兴趣地，与HFD组相比，高剂量提取物沉淀物组(G2)在所有分类的脂肪测量中显示统计学上显著的减小，而OPI处理组在任何所测量的值中未显示统计学上显著的变化。
表46显示桑树提取物沉淀物19-1对作为研究结束时获得的血液样品中的测量的空腹血糖(F-Glu)、总胆固醇(T-chol)和LDL-胆固醇(LDL-C)的作用。
表46 桑树提取物沉淀物19-1对生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表46中的数据显示低剂量桑树提取物沉淀物组(G1)与HFD组相比在LDL-胆固醇中具有统计学上显著的减小。高剂量桑树提取物沉淀物组(G2)与HFD组相比在总葡萄糖、胆固醇和LDL-胆固醇中具有统计学上显著的减小。
总之，此实施例中呈现的数据表明当每天两次在500mg/受试者体重的kg数的剂量下摄取时，桑树沉淀物提取物19-1有效于帮助食用高脂肪膳食的受试者的食物摄入和体重。另外，摄取500mg/kg剂量的桑树沉淀物提取物19-1的受试者还表现出与HFD组中的对照受试者相比血液化学终点和组织脂肪水平中的统计学上显著的改进。这些结果表明富含查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物桑酮G和桑白皮素G的桑树提取物可用来控制体重、降低食物摄入、降低组织脂肪含量、降低血糖水平、减少总胆固醇和减少LDL-胆固醇。
实施例52
桑树乙酸乙酯提取物16对DIO大鼠的作用
使用描述于实施例40中的方法，向DIO大鼠经口施用如在实施例16中所述产生的桑树乙酸乙酯提取物16。研究时间周期为42天。使用500mg/动物体重的kg数的剂量向组G1施用桑树提取物。通过每天管饲两次向研究动物给予口服剂量。所有研究组的总动物体重测量的研究结果示于表47中。表48显示对当与研究的每个时间点天数结束时测量的体重相比计算为研究的第0天称重的受试者动物之间的差异时的体重增加的影响。
表47中呈现的数据显示当在500mg/动物体重的kg数的剂量下，桑树乙酸乙酯提取物16与HFD组相比在第2天至第14天、第21天和第28天产生体重的统计学上显著的减小。阳性对照SIB(3mg/kg剂量的西布曲明)组在第2天至研究的剩余天数(第42天)时产生体重的统计学上显著的减少。
表48中的数据显示与HFD组相比，G1桑树乙酸乙酯提取物16处理组从研究的第2天至第21天并且然后第28天表现出体重增加的统计学上显著的减小。阳性对照SIB(3mg/kg剂量的西布曲明)显示与HFD组相比从第2天至第42天研究完成体重增加的统计学上显著的减小。
表49显示桑树提取物乙酸乙酯提取物16针对以下终点对DIO大鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)，所述食物效率比计算为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表49 桑树乙酸乙酯提取物16对高脂肪膳食饲养的大鼠的作用
食物效率比(FER)＝(体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：与HFD组比较
表49中的数据显示当向组G1施用时桑树的乙酸乙酯提取物显示与HFD组相比的统计学上显著的较低食物效率比率比。SIB阳性对照处理组显示比HFD组统计学上更低的每天重量增加、每天食物摄入和食物效率比的值。
表50 桑树提取物16对高脂肪膳食饲养的大鼠中的脂肪沉积重量的作用
p值：与HDD组比较
表50中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪之间存在统计学上显著的差异。桑树提取物处理的组(G1)和阳性对照处理组(SIB)显示与HFD组相比所有分类的脂肪测量中的统计学上显著的减小，从而表明桑树提取物16有效于减少存在于DIO大鼠中的脂肪的量。
表51显示桑树提取物16对作为研究结束时获得的血液样品中的测量的空腹血糖(F-Glu)、总胆固醇(T-chol)和LDL-胆固醇(LDL-C)的作用。
表51 桑树提取物16对DIO大鼠中的生物化学参数的作用
p值：与HFD组比较
表51中的数据显示与HFD组相比，桑树提取物16处理组在总胆固醇和空腹血糖中具有统计学上显著的减小。与HFD组相比，针对任何所测量的终点SIB处理组未显示统计学上显著的变化。
这些数据显示当每天两次在500mg/体重的kg数的剂量下摄取时，桑树提取物16有效于降低高脂肪膳食饲养的大鼠中的体重增加速率。另外，摄取500mg/kg剂量提取物16的受试者还表现出与HFD组中的对照受试者相比在血液化学终点(表51)和组织脂肪水平(表50)中具有统计学上显著的改进。这些结果表明富含桑酮G和桑白皮素G的桑树提取物可用来控制体重增加、降低组织脂肪含量、降低空腹血糖水平以及减小总胆固醇水平。
实施例53
MUTAMBA乙醇提取物32对DIO小鼠的作用
如在实施例48中所说明，向DIO小鼠模型经口施用根据实施例32产生的Mutamba乙醇提取物32。在每天1000mg/动物重量的kg数下向处理组G1施用Mutamba提取物。通过每天管饲两次向G1处理组动物给予500mg/kg的口服剂量。动物体重测量的研究结果示于表52中。
表52 Mutamba提取物32对DIO小鼠中的总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表52中的数据显示Mutamba乙醇提取物32(1000mg/kg/天处理组)显示与HFD组相比从研究的第3周至第7周体重的统计学上显著的减小。阳性对照SIB(10mg/kg剂量的西布曲明)显示与HFD组相比从研究的第1周、第2周、第3周和第7周总体重的统计学上显著的减小。
动物体重增加测量的研究结果示于表53中。
表53 Mutamba提取物32对DIO小鼠中的体重增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表53中的数据显示Mutamba乙醇提取物32(1000 mg/kg/天处理组)和阳性对照处理组SIB和ORI均在研究的所有周数中显示体重增加的统计学上显著的减小。
针对处理对体重增加、食物摄入和食物效率比(FER)的作用的研究结果示于表54中。
表54 Mutamba提取物32对DIO小鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表54中呈现的数据显示当与高脂肪膳食组相比时，每天的平均体重增加和食物效率比(FER)终点在Mutamba处理组和SIB处理组中显著降低。ORI处理导致每天的平均体重增加、每天的平均食物摄入和FER统计学上显著的减小。
针对处理对血液生物化学参数的作用的研究结果示于表55中。
表55 Mutamba提取物32对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表55中的数据显示与HFD组相比，Mutamba处理组、ORI处理组和SIB处理组均表现出LDL-胆固醇的统计学上显著的减小。
表56显示Mutamba乙醇提取物32处理对DIO小鼠中脂肪肝的若干组织病理学测量中的测量值和所得到的计算的肝脏非酒精性脂肪性肝炎(NASH)分数的作用。
表56 Mutamba提取物32对DIO小鼠中的肝脏病理学作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表56中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间存在脂肪变性、小叶炎症、肝细胞气球样变和NASH分数的量的统计学上显著的差异。处理组G1显示与HFD组相比脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的统计学上显著的减小。SIB处理组显示与HFD组相比脂肪变性、小叶炎症、肝细胞气球样变和NASH分数的统计学上显著的减小。ORI处理组与HFD组相比未显示任何统计学上显著的变化。这些数据表明Mutamba提取物32有效于减少存在于高脂肪膳食饲养的小鼠中的肝损害的量。
总之，在本实施例中呈现的数据显示Mutamba乙醇提取物32有效于降低高脂肪膳食饲养的小鼠中的体重、LDL血液胆固醇和脂肪肝。
实施例54
MUTAMBA乙醇提取物33-2对DIO小鼠的作用
如在实施例48中所说明，向DIO小鼠模型经口施用根据实施例33产生的Mutamba乙醇提取物33-2。在每天1000mg/动物重量的kg数下向处理组G1施用Mutamba提取物。通过每天管饲两次向G1处理组动物给予1000mg/kg的Mutamba 33-2的口服剂量。通过每天管饲两次向G2处理组动物给予500mg/kg的Mutamba乙醇提取物33-2的口服剂量。动物体重增加测量的研究结果示于表57中。
表57 Mutamba提取物33-2对DIO小鼠中的体重增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表57中的数据显示Mutamba乙醇提取物33-2(1000mg/kg/天处理组)在研究的第5周、第6周和第8周时显示出体重增加的统计学上显著的减小。G2(500mg/kg/天处理组)在研究的第1周和第2周时显示出体重增加的统计学上显著的减小。
针对处理对体重增加、食物摄入和食物效率比(FER)的作用的研究结果示于表58中。
表58 Mutamba提取物33-2对DIO小鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表58中呈现的数据显示与高脂肪膳食组相比，每天的平均体重增加和食物效率比(FER)终点在Mutamba乙醇提取物33-2(1000mg/kg/天处理组)中统计学上显著降低。
针对处理对血液生物化学参数的作用的研究结果示于表59中。
表59 Mutamba提取物33-2对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表59中的数据显示Mutamba提取物33-2(1000mg/kg/天处理组)与HFD组相比以统计学上显著的方式减小LDL-胆固醇。
在本实施例中呈现的数据显示当在1000mg/受试者体重的kg数下施用时，Mutamba提取物33-2显示使体重增加、食物效率比和LDL-胆固醇显著减小。因此，本结果表明Mutamba提取物33-2可用作体重和血液胆固醇控制剂。
实施例55
MUTAMBA级分34、34-1和34-2对DIO小鼠模型的功效研究
如在实施例48中所述，向DIO小鼠经口施用根据实施例34产生的Mutamba级分34、34-1和34-2。三个Mutamba级分处理组为：250mg/kg EtOA级分34的G1；250mg/kg BuOH级分34-1的G2；以及250mg/kg水级分34-2的G3。通过每天管饲两次经口给予处理物品。
Mutamba处理组(G1)的EtOA级分对体重未示出任何作用。然而，BuOH级分处理组(G2)在第4周、第6周、第7周和第8周时显示使体重显著减小。水级分处理组(G3)显示当与HFD组比较时在第2周时使体重显著减小(表60)。
表60 Mutamba级分34、34-1和34-2对高脂肪膳食饲养的小鼠中的体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
BuOH级分34-1处理组(G2)体重增加在第6周、第7周和第8周时显著减小。另外，当与HFD组相比时，EtOA级分34处理组(G1)在第1周时显示使体重显著减小并且水级分34-2处理组(G3)在第2周时显示使体重显著减小(表61)。
表61 Mutamba级分34、34-1和34-2对高脂肪膳食饲养的小鼠中的体重增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
当用EtOA级分34和水级分34-1处理小鼠时FER不存在显著变化，但是BuOH级分34-1处理组显示边界线变化(表62)。
表62 Mutamba级分34、34-1和34-2对高脂肪膳食饲养的小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
在Mutamba处理组(G2)的BuOH级分34-1中，ALT、HDL-C和TG显示出显著变化(表63)。
表63 Mutamba级分34、34-1和34-2对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
BuOH级分34-1(G2)和水级分34-2(G3)处理组显示当与高脂肪膳食相比时显著减小的NASH分数(表64)。
表64 Mutamba级分34、34-1和34-2对高脂肪膳食饲养的小鼠中的肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
如从结果中证明，250mg/kg BuOH级分34-1处理组显示显著减小的体重增加、FER、TG和NASH分数。因此，Mutamba BuOH提取物34-1可用作体重和血液胆固醇以及脂肪肝的控制剂。
实施例56
MUTMABA ETOH提取物32(在DIO大鼠中的功效研究
一天两次以500mg/kg的剂量通过向DIO模型(如在实施例49中所述)中的大鼠管饲来经口施用根据实施例32产生的Mutamba乙醇提取物32。
在Mutamba处理组(G3)中，当与高脂肪膳食组相比时在第87天、第91天、第94天和第98天时体重显著减小(表65)。
当与高脂肪膳食组相比时，在Mutmaba处理组中体重增加(克/天)和食物效率比(FER)显著降低(表67)。
表67 Mutamba乙醇提取物32对DIO大鼠的作用
FET(食物效率比)＝(体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：与HFD组比较
当与高脂肪膳食组相比时，在Mutamba处理组中的绝对器官重量、肾周围、腹膜后和总脂肪垫显著减小(表68)。
表68 Mutamba乙醇提取物32对高脂肪膳食饲养的大鼠中的绝对器官重量的作用
p值：与HFD组比较
这些结果显示在Mutamba处理组中体重和体重增加均显著减小。在处理组中，FER(食物效率比)和内脏脂肪重量也显著减小。因此，本结果表明Mutamba提取物可被用作体重控制剂。
实施例57
与巴拉圭茶提取物29组合的桑树乙酸乙酯提取物15对DIO小鼠的作用
将如实施例15中所述产生的桑树乙酸乙酯提取物15和根据实施例29产生的木兰提取物29组合并且共混至2:1重量比。如在实施例48中所述，以300mg/动物重量的kg数的剂量(200mg/kg桑属和100mg/kg木兰)向DIO小鼠经口施用组合的组合物。研究时间周期为七周。表69显示组合的组合物对体重增加的作用，即，与研究的每个时间点的天数上测量的重量相比研究开始时所测量的每个研究组中的体重变化。
表69 与木兰提取物29组合的和巴拉圭茶提取物15对高脂肪膳食饲养的小鼠中的体重增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表69中的数据显示用包含与木兰提取物29组合的桑树15的组合物(处理组G1)表现出与HFD组相比从研究的第2周至第7周体重增加统计学上显著的减小。阳性对照ORI(奥利司他)显示与HFD组相比从研究的第1周至第7周体重增加统计学上显著的减小。
表70显示桑树提取物15和木兰提取物29组合的组合物针对以下终点对DOI小鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)，所述食物效率比计算为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表70 与木兰提取物29组合的桑树提取物15对DIO小鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表70中的数据显示与HFD组相比，具有与木兰提取物29组合的桑树15的组合物(处理组G1)显示出对降低体重增加、食物摄入和降低食物效率比的统计学上显著的作用。ORI阳性对照处理组显示比HFD组统计学上更低的每天体重增加和食物效率比的值。
表71显示桑树提取物15和木兰提取物29组合的组合物针对总肝脏器官重量(三种脂肪沉积的重量：附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪)和总脂肪(先前三种脂肪组织的总和)对DIO小鼠的作用。
表71 与木兰提取物29组合的桑树提取物15对DIO小鼠中的绝对肝脏重量和脂肪沉积重量的作用
*总脂肪为三种脂肪沉积(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
表71中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间在肝脏重量、附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪中存在统计学上显著的差异。另外，获得与木兰提取物29组合的桑树15的组合物的处理组G1连同阳性对照处理组(ORI)显示与HFD组相比两种脂肪沉积(附睾脂肪和腹膜后脂肪)和总脂肪的统计学上显著的减小。这些数据表明与木兰提取物组合的桑树提取物的组合物有效于减少存在于DIO小鼠中的脂肪的量。
表72显示包含与木兰提取物29组合的桑树15的组合物对作为研究结束时所获得的血液样品中的测量的空腹血糖(F-Glu)、总胆固醇(T-chol)和LDL-胆固醇(LDL-C)的DIO小鼠中的测量值的作用。
表72 与木兰提取物29组合的桑树提取物15对生物化学参数的作用
表46中的数据显示组合的组合物处理组G1和阳性对照处理组(ORI)显示在总胆固醇、LDL-胆固醇和空腹血糖方面的统计学上显著的减小。这些数据表明当以300mg/体重的kg数施用时，桑树和木兰组合的组合物有效于减少DIO小鼠中的胆固醇水平和空腹血糖水平。
实施例58
与巴拉圭茶提取物26组合的桑树乙酸乙酯提取物15对DIO小鼠的作用。
将如实施例15中所述产生的桑树乙酸乙酯提取物15和根据实施例26产生的巴拉圭茶提取物26组合并且共混至1:5重量比。如实施例48中所述，以1200mg/动物重量的kg数的剂量(200mg/Kg桑属和1000mg/Kg巴拉圭茶)向DIO小鼠经口施用组合的组合物。研究时间周期为七周。表73显示组合的组合物对总体重的作用并且表74显示组合的组合物对体重增加的作用。
表73 与巴拉圭茶提取物26组合的和桑树乙酸乙酯级分15对DIO小鼠中的总重量的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表74 与巴拉圭茶提取物26组合的和桑树乙酸乙酯级分15对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表73中的数据显示在桑树提取物15和巴拉圭茶提取物26处理组(G1)的组合的组合物中的动物表现出与HFD组相比从研究的第3周至第7周总体重的统计学上显著的减小。阳性对照ORI(40mg/kg剂量的奥利司他)显示与HFD组相比从研究的第2周至第7周总体重的统计学上显著的减小。
表74中的数据显示在桑树提取物15和巴拉圭茶提取物26处理组(G1)的组合的组合物中的动物和阳性对照ORI组的动物均表现出与HFD组相比从研究的第1周至第7周体重增加的统计学上显著的减小。
表75显示桑树提取物15和巴拉圭茶提取物26的组合的组合物针对以下终点对DIO小鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)，所述食物效率比计算为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表75 与巴拉圭茶提取物26组合的和桑树乙酸乙酯级分15对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表75中的数据显示桑树提取物15和巴拉圭茶提取物26的组合的组合物处理组G1对降低体重增加、食物摄入和降低食物效率比与HFD组相比显示出统计学上显著的作用。ORI阳性对照处理组显示比HFD组统计学上更低的每天体重增加和食物效率比的值。
表76显示桑树提取物15和巴拉圭茶提取物26的组合的组合物针对腹膜后脂肪对DOI小鼠的作用。
表76 桑树和巴拉圭茶组合的组合物对DIO小鼠中的腹膜后脂肪的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表76中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间在腹膜后脂肪的重量上存在统计学上显著的差异。另外，桑树提取物15和巴拉圭茶提取物26的组合的组合物处理组G1和阳性对照处理组(ORI)与HFD组相比显示腹膜后脂肪的统计学上显著的减小。这些数据表明桑树和巴拉圭茶组合的组合物有效于减少存在于DIO小鼠中的腹膜后脂肪的量。
表77显示桑树15和巴拉圭茶提取物26的组合的组合物对作为研究结束时所获得的血液样品中的测量的空腹血糖(F-Glu)、总胆固醇(T-chol)、甘油三酯和LDL-胆固醇(LDL-C)的DIO小鼠中的测量值的作用。
表77 桑树和巴拉圭茶组合的组合物对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表77中的数据显示组合的组合物处理组G1和阳性对照处理组(ORI)显示在总胆固醇、LDL-胆固醇和空腹血糖方面的统计学上显著的减小。
总之，在本实施例中呈现的数据显示主要由桑树乙酸乙酯提取物15(200mg/Kg)和巴拉圭茶提取物26(1000mg/Kg)组成的组合的组合物有效于降低高脂肪膳食饲养的小鼠中的总体重和体重增加速率。
实施例59
与迷迭香提取物21组合的桑树乙酸乙酯提取物14对DIO小鼠的作用
将如实施例14中所述产生的桑树乙酸乙酯提取物14和根据实施例21产生的迷迭香提取物21组合并且共混至2:5重量比。如在实施例48中所述，以700mg/动物重量的kg数的剂量(200mg/Kg桑属和500mg/Kg迷迭香)向DIO小鼠经口施用组合的组合物。研究时间周期为七周。表78显示组合的组合物对总体重的作用并且表79显示组合的组合物对体重增加的作用。
表78 与迷迭香提取物21桑树提取物14的组合对重量的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表79 具有与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14的组合对DIO小鼠中的体重增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表78中的数据显示与HFD组相比，用与迷迭香提取物21组合的组合的桑树提取物14(处理组G1)表现出从研究的第1周至第7周总体重的统计学上显著的减小。阳性对照ORI(40mg/kg剂量的奥利司他)显示与HFD组相比从研究的第2周至第6周，但不是研究的第1周和第7周总体重的统计学上显著的减小。
表79中的数据显示在接受与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14组合的桑树提取物14的处理组(G1)中的和阳性对照ORI组中的动物均表现出与HFD组相比从研究的第1周至第7周体重增加的统计学上显著的减小。
表80显示与迷迭香提取物21组合的组合的桑树提取物14组合的组合物针对以下终点对DIO小鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)，所述食物效率比计算为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表80 与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14对DIO小鼠的作用
进食物效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表80中的数据显示与HFD组相比，与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14组合的组合物处理组G1显示出对降低每天的平均重量增加和降低食物效率比的统计学上显著的作用。ORI阳性对照处理组显示比HFD组统计学上更低的每天平均重量增加、每天平均食物摄入和食物效率比的值。
表81显示与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14组合的组合物针对肾周脂肪的重量对DIO小鼠的作用。
表81 与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14对DIO小鼠中的肾周脂肪的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表81中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间在肾周脂肪的重量上存在统计学上显著的差异。另外，与迷迭香提取物21组合的桑树提取物14组合物处理组G1和阳性对照处理组(ORI)显示与HFD组相比肾周脂肪统计学上显著的减小。这些数据表明桑树和迷迭香组合的组合物有效于减少存在于DIO小鼠中的肾周脂肪的量。
总之，在本实施例中呈现的数据显示主要由桑树乙酸乙酯提取物14(200mg/Kg)和迷迭香提取物21(500mg/Kg)组成的组合的组合物有效于降低高脂肪膳食饲养的小鼠中的总体重和体重增加速率。
实施例60
与乙醇提取物15的桑树ETOAC级分组合的MUTAMBA乙醇提取物35在DIO小鼠中的功效研究
通过以5:1的比率共混根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35和根据实施例15产生的乙醇提取物15的桑树EtOAc级分。如在实施例48中所述，每天两次通过管饲向DIO小鼠经口施用1200mg/kg(G1)剂量的组合的组合物。
处理组(G1)显示与高脂肪膳食组相比重量增加在第4周、第5周、第6周和第7周时显著减小(表82)。
表82 与桑树提取物15组合的Mutamba提取物35对DIO小鼠中的总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
处理组(G1)，在实验的第二周处理之后体重增加显著减小(表83)并且所述作用持续到处理结束。
表83 与桑树提取物15组合的Mutamba提取物35对DIO小鼠中的重量增加的作用
p较：通过t-检验与HFD比较
当与高脂肪膳食组相比时，处理组(G1)的FER显著减小(表84)
表84 与桑树提取物15组合的Mutamba提取物35对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，处理组(G1)的葡萄糖、总胆固醇和LDL-C显著减小(表85)。
表85 与桑树提取物15组合的Mutamba提取物35对生物化学参数的作用
与高脂肪膳食组相比，处理组(G1)中的附睾脂肪垫、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪垫的绝对重量显著减小(表86)。
表86 与桑树提取物15组合的Mutamba提取物35对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
总之，数据显示在用与桑树提取物15组合的Mutamba提取物35处理的DIO小鼠中体重和体重增加显著减小。FER(食物效率比)和脂肪重量也显著减小。此外，通过样品处理，空腹血糖、总胆固醇和LDL-胆固醇水平显著减小。因此，本实施例表明Mutamba提取物与桑树提取物的组合可用作体重、葡萄糖水平和胆固醇水平控制剂。
实施例61
与巴拉圭茶提取物26组合的MUTAMBA乙醇提取物35在DIO小鼠中的功效研究
通过以1:1的比率共混根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35和根据实施例26产生的冬青茶提取物26。如在实施例48中所述，一天两次以2000mg/kg(G1)的剂量向DIO小鼠经口施用双重组合的组合物。
在处理的第三周之后，在处理组(G1)中重量增加显著减小(表87)，并且所述作用持续到处理结束。
表87 与巴拉圭茶组合的Mutamba对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中FER显著减小(表87)。
表87 与巴拉圭茶组合的Mutamba对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝休重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
这些数据显示体重增加和FER在处理组(G1)中显著减小。因此，本实施例表明Mutamba提取物和巴拉圭茶提取物的组合可用作体重控制剂。
实施例62
与木兰提取物29组合的MUTAMBA乙醇提取物35在DIO小鼠中的功效研究
通过以10:1的比率共混根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35和根据实施例29产生的木兰提取物29。如在实施例48中所述，一天两次以1100mg/kg(G1)的剂量向DIO小鼠经口施用双重组合的组合物。
在处理的第三周之后，在处理组(G1)中重量增加显著减小(表88)，并且所述作用持续到处理结束。
表88 与木兰提取物组合的Mutamba提取物对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中FER变化(表89)。
表89 与木兰提取物组合的Mutamba提取物对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，TG在处理组(G1)中显著减小(表90)。
表90 与木兰提取物组合的Mutamba提取物对生物化学参数的作用
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中NASH分数显著减小(表91)。
表91 处理组(G1)的肝脏病理学在DIO小鼠中的影响
p值：通过t-检验与HFD比较
这些数据显示体重增加和FER在处理组(G1)中显著减小。此外，TG和NASH分数在处理组中也显著减小。因此，本实施例显示与木兰提取物组合的Mutamba提取物可用作体重、胆固醇水平和脂肪肝控制剂。
实施例63
与木兰提取物29和巴拉圭茶提取物26组合的桑树乙酸乙酯提取物17对DIO小鼠的作用
如在实施例48中所述，在DIO小鼠模型上单独或组合测试根据实施例17产生的桑树乙酸乙酯级分17、根据实施例29产生的木兰提取物29、根据实施例26产生的巴拉圭茶提取物26以及根据实施例21产生的迷迭香提取物21。将桑属提取物、木兰提取物和巴拉圭茶提取物的组合共混至2:1:5重量共混比以制得组合的组合物1A。
将DIO小鼠分成八个处理组；HFD(高脂肪膳食组)、ORI(奥利司他，40mg/kg/天，每天两次)、组合的组合物处理组G1(800mg/kg/天的桑属、木兰、冬青茶组合物1A)、处理组G2(木兰提取物29，100mg/kg/天)、处理组G3(巴拉圭茶提取物26，500mg/kg/天)、处理组G4(桑属提取物，200mg/kg/天)以及两个迷迭香提取物21处理组(G5，500mg/kg/天和G6，1000mg/kg/天)。如在实施例48中所述向DIO小鼠经口施用所有测试样品。用于每个处理组的每日剂量分成一半并且每天施用两次。研究时间周期为八周。这些处理针对总体重在DIO小鼠中的作用示于表92中并且针对体重增加在DIO小鼠中的作用示于表93中。
表92 各种单独的提取物或组合的提取物对DIO小鼠中的总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表93 各种单独的提取物或组合的提取物对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表92显示与HFD组相比，用桑属-木兰-冬青茶组合物1A(处理组G1)和阳性对照ORI处理的小鼠均表现出从第2周至第8周总重量的统计学上显著的减小。木兰处理组(G2)与HFD组相比从第3周至第8周表现出重量统计学上显著的减小。桑属处理组(G4)与HFD组相比从第4周至第5周表现出重量统计学上显著的减小。高剂量迷迭香(1000mg/Kg/天)处理组(G6)与HFD组相比从第4周至第8周表现出重量统计学上显著的减小。巴拉圭茶处理组(G3)和低剂量迷迭香(500mg/Kg/天)处理组(G5)与HFD组相比在研究过程中没有表现出重量上的任何统计学上显著的减小。
表93显示与HFD组相比，桑属-木兰-冬青茶组合的组合物1A(处理组G1)、木兰处理组(G2)、迷迭香(1000mg/Kg/天)处理组G6以及阳性对照ORI组中的动物均表现出从第1周至第8周重量增加的统计学上显著的减小。桑属处理组(G4)与HFD组相比从第1周至第6周表现出重量增加的统计学上显著的减小。低剂量迷迭香(500mg/Kg/天)处理组(G5)与HFD组相比从第2周至第7周表现出重量增加的统计学上显著的减小。巴拉圭茶处理组(G3)与HFD组相比在研究过程中没有表现出重量增加上的任何统计学上显著的减小。
表95显示与HFD组相比，桑属-木兰-冬青茶组合的组合物1A(处理组G1)、木兰处理组(G2)、高剂量迷迭香(1000mg/Kg/天)处理组G6中的动物以及阳性对照ORI组的动物均表现出平均重量增加和FER的统计学上显著的减小。巴拉圭茶处理组(G3)和低剂量迷迭香(500mg/Kg/天)处理组(G5)与HFD组相比表现出食物摄入的统计学上显著的减小。桑属处理组(G4)与HFD组相比在平均每日重量增加、FER或食物摄入上没有表现出任何统计学上显著的减小。
表95.各种单独的提取物或混合的提取物对平均重量增加的影响
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表96显示与高脂肪膳食组相比，附睾脂肪垫、腹膜后脂肪和肾周脂肪的绝对重量在桑属处理组(G4)和木兰处理组(G2)中显著减小。与高脂肪膳食组相比，肾周脂肪的绝对重量也在桑属-木兰-冬青茶组合物1A处理组(G1)和低剂量迷迭香(500mg/Kg/天)处理组(G5)中显著减少。与高脂肪膳食组相比，绝对肝脏重量在桑属-木兰-冬青茶组合物1A处理组(G1)、木兰处理组(G2)以及阳性对照ORI组中显著减少。
表96 各种单独的提取物或组合的提取物对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
表97显示相对器官重量显示出与针对绝对器官重量所看见的那些类似的结果(示于表96中)。
表97 DIO小鼠中的相对器官重量变化的结果
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
实施例64
与木兰提取物29A和组合巴拉圭茶提取物27组合的桑树乙酸乙酯提取物18对DIO小鼠的作用
将如实施例18中所述产生的来自乙醇提取物18的桑树沉淀物、如实施例29中所述产生的木兰提取物29A和根据实施例27产生的巴拉圭茶提取物27组合并且共混至2:1:10重量比以制得如实施例38中所述的组合的组合物1。组合物1在两种不同剂量下如实施例48所述每天两次向DIO小鼠经口施用组合物1。向处理组G1施用650mg/动物重量的kg数(100mg/Kg桑属、50mg/Kg木兰以及500mg/Kg冬青茶)并且向处理组G2施用1300mg/动物重量的kg数(200mg/Kg桑属、100mg/Kg木兰以及1000mg/Kg冬青茶)。研究时间周期为七周。表98显示组合物1对体重增加的作用。
表98 组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表98中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理组(G1)和阳性对照ORI组中的动物与HFD组相比均表现出从第1周至第7周体重增加的统计学上显著的减小。处理组(G2)表现出与HFD组相比从第2周至第7周体重增加的统计学上显著的减小。
表99显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)针对以下终点对DIO小鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)。
表99 组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO小鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表99中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理组G1与HFD组相比显示出对降低每天的平均重量增加和降低食物效率比的统计学上显著的作用。处理组G2与HFD组相比显示出对降低每天的平均重量增加和食物摄入的统计学上显著的作用。但是，对食物效率比的作用不是统计学上显著的。ORI阳性对照处理组显示出比HFD组统计学上更低的每天平均重量增加、每天平均食物摄入和食物效率比的值。
表100显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对研究结束时获得的血液样品中所测量的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-chol)和LDL-胆固醇(LDL-C)的DIO小鼠中的测量值的作用。
表100 组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表100中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理组G1与HFD组相比表现出ALT、AST、甘油三酯和LDL-胆固醇的统计学上显著的减小。处理组G2与HFD组相比显示出ALT、AST、甘油三酯的统计学上显著的减小。而ORI处理组与HFD组相比显示出ALT和LDL-胆固醇的统计学上显著的减小。
表101显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO小鼠中脂肪肝的若干组织病理学测量中的测量值和所得到的计算的肝脏非酒精性脂肪性肝炎(NASH)分数的作用。
表101组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表101中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间存在脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的量的统计学上显著的差异。处理组G1和ORI处理组均显示与HFD组相比脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的统计学上显著的减小。处理组G2与HFD组相比显示出肝细胞气球样变的统计学上显著的减小。这些数据表明组合物1(桑属、木兰和冬青茶)有效于减少存在于高脂肪膳食饲养的小鼠中的肝损害的量。
总之，此实施例48中呈现的数据显示桑属-木兰-冬青茶组合的组合物有效于降低高脂肪膳食饲养的小鼠中的体重和体重增加速率。
实施例65
与木兰提取物29和巴拉圭茶提取物27组合的桑树乙酸乙酯提取物18对DIO大鼠的作用
将如实施例18中所述产生的来自乙醇提取物18的桑树沉淀物、如实施例29中所述产生的木兰提取物29A和根据实施例27产生的巴拉圭茶提取物27组合并且共混至2:1:10重量比以制得如实施例38中所述的组合的组合物1。组合物1在两种不同剂量下如实施例49所述每天两次向DIO大鼠经口施用组合物1。向处理组G1施用650mg/动物重量的kg数(100mg/Kg桑属、50mg/Kg木兰以及500mg/Kg冬青茶)并且向处理组G2施用1300mg/动物重量的kg数(200mg/Kg桑属、100mg/Kg木兰以及1000mg/Kg冬青茶)。研究时间周期为55天。表102显示桑属-木兰-冬青茶组合物1对重量增加的作用。
表102中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理(G1)中的动物与HFD组相比表现出从研究的第14天至第55天体重增加的统计学上显著的减小。处理组(G2)与HFD组相比表现出在研究的第3天、第10天、第14天和第21天至第55天时体重增加的统计学上显著的减小。处理组(ORI)与HFD组相比表现出在研究的第7天至第55天时体重增加的统计学上显著的减小。
表103显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)针对以下终点对DOI大鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)。
表103 组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO大鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：与HFD组比较
表103中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理组G1和G2与HFD大鼠组相比均显示出对降低每天的平均体重增加和降低食物效率比的统计学上显著的作用。ORI阳性对照处理组显示比HFD组统计学上更低的每天平均体重增加、每天平均食物摄入和食物效率比的值。
表104显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对已知在受到高脂肪膳食的大鼠中具有增加的脂肪含量的若干特定脂肪组织的作用。
表104 组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO大鼠中的脂肪组织重量的作用
p值：与HFD组比较
表104中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪之间存在统计学上显著的差异。处理组ORI、G1和G2与HFD组相比均显示所有分类的脂肪测量的统计学上显著的减小，从而表明组合物1(桑属、玉兰和冬青茶)对降低高脂肪膳食饲养的大鼠中的脂肪沉积累积具有统计学上显著的作用。
表105显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)在脂肪肝的若干组织病理学测量和所得到的计算的肝脏非酒精性脂肪性肝炎(NASH)分数上对DOI大鼠的作用。
表105组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对肝脏病理学的作用
p值：与HFD组比较
表105中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理组G1和G2以及阳性对照处理组(ORI)与HFD组相比均显示脂肪变性、小叶炎症、肝细胞气球样变和NASH分数的统计学上显著的减小。这些数据表明组合物1(桑属、木兰和冬青茶)有效于减少存在于高脂肪膳食饲养的大鼠中的肝损害的量。
表106显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对研究结束时获得的血液样品中所测量的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)的DIO小鼠中的测量值的作用。
表106 组合物1(桑属、木兰和冬青茶)对DIO大鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表106中的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)处理组G1和G2与HFD组相比表现出AST和总葡萄糖的统计学上显著的减小。而ORI处理组与HFD组相比在任何所测量的血液组分中没有显示出统计学上显著的减小。
总之，本实施例中呈现的数据显示组合物1(桑属、木兰和冬青茶)有效于降低高脂肪膳食饲养的大鼠中的体重和体重增加速率并且有效于降低高脂肪膳食对大鼠生理学作用的许多测量。
实施例66
与迷迭香提取物24和巴拉圭茶提取物27组合的桑树乙酸乙酯提取物18对DIO小鼠的作用
将如实施例18中所述产生的来自乙醇提取物18的桑树沉淀物、如实施例24中所述产生的迷迭香提取物24和根据实施例27产生的巴拉圭茶提取物27组合并且共混至2:5:10重量比以制得如实施例39中所述的组合的组合物3。如实施例48中所述，每天两次向DIO小鼠经口施用桑属-迷迭香-冬青茶组合的组合物3。每天向处理组G1施用分在两个剂量之间的1700mg/动物重量的kg数的组合的组合物(200mg/Kg桑属、500mg/Kg迷迭香和1000mg/Kg冬青茶)。研究时间周期为七周。表107显示组合物3对体重增加的作用。
表107 组合物3对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表107中的数据显示组合物3处理组(G1)和阳性对照处理组(ORI)中的动物与HFD组相比均表现出从第1周至第7周体重增加的统计学上显著的减小。
表108显示组合物3针对以下终点对DIO小鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)，所述食物效率比计算为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表108 组合物3对DIO小鼠的作用
进食功效比(FER)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
表108中的数据显示组合物3处理组G1和ORI处理组与HFD组相比均显示对降低每天平均重量增加、每天食物摄入和降低食物效率比的统计学上显著的作用。
表109显示组合物3处理对作为研究结束时获得的血液样品中的测量的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)的DIO小鼠中的测量值的作用。
表109 组合物3对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表109中的数据显示组合的组合物处理组G1与HFD组相比表现出ALT、AST和总葡萄糖的统计学上显著的减小。相比之下，ORI处理组与HFD组相比显示ALT的统计学上显著的减小。
表110显示组合物3处理对DIO小鼠中脂肪肝的若干组织病理学测量中的测量值和所得到的计算的肝脏非酒精性脂肪性肝炎(NASH)分数的作用。
表110 组合物3对肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表110中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间存在脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的重量的统计学上显著的差异。处理组G1和ORI处理组均显示与HFD组相比脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的统计学上显著的减小。这些数据表明组合物3有效于减少存在于高脂肪膳食饲养的小鼠中的肝损害的量。
总之，本实施例中呈现的数据显示桑属-迷迭香-冬青茶组合的组合物3有效于降低体重和体重增加速率，并且有效于降低高脂肪膳食对小鼠生理学作用的许多测量。
实施例67
与迷迭香提取物24和巴拉圭茶提取物27组合的桑树乙酸乙酯提取物18对DIO大鼠的作用
将如实施例18中所述产生的来自乙醇提取物18的桑树沉淀物、如实施例24中所述产生的迷迭香提取物24和根据实施例27产生的巴拉圭茶提取物27组合并且共混至2:5:10重量比以制得如实施例39中所进一步描述的组合的组合物3。如实施例40中所述每天两次向DIO小鼠经口施用组合物3。每天向处理组G1施用分在两个剂量之间的850mg/动物重量的kg数(100mg/Kg桑属、250mg/Kg迷迭香和500mg/Kg冬青茶)的组合的组合物。每天向处理组G2施用分在两个剂量之间的1700mg/动物重量的kg数(200mg/Kg桑属、500mg/Kg迷迭香和1000mg/Kg冬青茶)的组合物3。研究时间周期为55天。表111显示组合物3对DIO大鼠中的重量增加的作用。
表111中的数据显示组合物3处理组(G1)和(G2)中的动物与HFD组相比均表现出从研究的第3天至第55天体重增加的统计学上显著的减小。对照处理组(ORI)与HFD组相比表现出在研究的第7天至第55天时体重增加的统计学上显著的减小。
表112显示组合物3针对以下终点对DOI大鼠的作用：研究的每天平均体重增加、研究的每天平均食物摄入以及食物效率比(FER)，所述食物效率比计算为研究期间每天的平均体重增加除以研究期间每天的平均食物摄入。
表112 组合物3对DIO大鼠的作用
p值：与HFD组比较
表112中的数据显示组合物3处理组G1和G2与HFD大鼠组相比均显示出对降低每天的平均重量增加和降低食物效率比的统计学上显著的作用。ORI阳性对照处理组显示比HFD组统计学上更低的每天平均重量增加、每天平均食物摄入和食物效率比的值。
表113显示桑属-迷迭香-冬青茶组合的组合物(批号IRM-1101)对已知在受到高脂肪膳食的大鼠中脂肪含量增加的若干特定脂肪组织的作用。
表113 桑属-迷迭香-冬青茶组合的组合物(批号IRM-1101)对高脂肪膳食饲养的大鼠中的脂肪组织重量的作用
*总脂肪为三种脂肪沉积(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
表113中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间在附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪中存在统计学上显著的差异。另外，组合物3处理组G1和G2以及阳性对照处理组(ORI)与HFD组相比均显示出附睾脂肪、腹膜后脂肪、肾周脂肪和总脂肪的统计学上显著的减小。这些数据表明组合物3有效于减少存在于DIO大鼠中的脂肪的量。
表114显示组合物3在脂肪肝的若干组织病理学测量和所得到的计算的肝脏非酒精性脂肪性肝炎(NASH)分数上对DIO大鼠的作用。
表114 组合物3对DIO大鼠中的肝脏病理学的作用
p值：与HFD组比较
表114中的数据显示在ND对照组(进食具有中等热量完整脂肪的正常膳食)与HFD组之间存在脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的量的统计学上显著的差异。组合物3处理组G1显示出小叶炎症的统计学上显著的减小。组合物3处理组G2和ORI阳性对照处理组与HFD组相比均显示出脂肪变性、肝细胞气球样变和NASH分数的统计学上显著的减小。这些数据表明组合物3有效于减少存在于高脂肪膳食饲养的大鼠中的肝损害的量。
表115显示组合物3处理对研究结束时获得的血液样品中所测量的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(T-chol)、甘油三酯(T-Glu)以及LDL-胆固醇(LDL-C)的DIO小鼠中的测量值的作用。
表115 组合物3对DIO大鼠中的生物化学参数的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
表115中的数据显示组合的组合物处理组G1与HFD组相比表现出AST、ALP、总胆固醇和LDL-胆固醇的统计学上显著的减小。处理组G2与HFD组相比显示出AST、ALT、AST、ASP、总胆固醇、甘油三酯以及LDL-胆固醇的统计学上显著的减小。而ORI处理组与HFD组相比在任何所测量的血液化学组分中没有显示出任何统计学上显著的减小。
总之，本实施例中呈现的数据显示桑属-迷迭香-冬青茶组合的组合物3有效于降低体重和体重增加速率，并且有效于降低高脂肪膳食对大鼠生理学作用的许多不同测量。
实施例68
与木兰提取物29和巴拉圭茶提取物26组合的MUTAMBA乙醇提取物35在DIO小鼠中的功效研究
通过以5:1:5的比率共混三种组分来组合根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35和根据实施例29产生的木兰提取物29以及根据实施例26产生的巴拉圭茶提取物26以产生组合物10。如实施例48中所述，一天两次以1,100mg/kg的剂量(G1)向DIO小鼠经口施用组合的三种成分组合物。
在用Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10处理的组(处理组G1)中，第三周之后小鼠的总体重显著减小(表116)。
表116 Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10on对DIO小鼠中的总重量的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10处理组(G1)中的重量增加在处理的第一周之后显著减小(表117)。
表117 Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中食物效率比(FER)显著降低(表118)。
表118 Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10对DIO小鼠的作用
FER（进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10处理组(G1)中血糖和TG显著减小(表119)。
表119 Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中肝脏脂肪垫和肾周脂肪垫的绝对重量显著减小(表120)。
表120 Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪沉积(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中NASH分数显著减小(表121)。
表121 Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10对DIO小鼠中的肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
这些数据显示通过Mutamba:木兰:巴拉圭茶组合物10使体重、体重增加、FER(食物效率比)、内脏脂肪重量和肝脏中的NASH分数显著减小。而且，通过用此三元组合处理使TG减小。因此，本实施例显示如在组合物10中所提供的Mutamba:木兰:巴拉圭茶的组合可用作体重减少剂以及血脂异常和脂肪肝减少剂。
实施例69
与木兰提取物29和桑树乙酸乙酯级分15组合的MUTAMBA ETOH提取物35在DIO小鼠中的功效研究
通过以5:1:2的比率共混三种组分来组合根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35、根据实施例29产生的木兰提取物29以及根据实施例15产生的桑树乙酸乙酯级分15以产生组合物2。如实施例48中所述，一天两次以800mg/kg的剂量(G1)向DIO小鼠经口施用组合的三种成分组合物2。
在处理的第2周之后，在Mutamba:木兰:桑属组合物2处理组(G1)中体重显著减小(表122)。
表122 Mutamba:木兰:桑属组合物2对DIO小鼠中的总重量的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在处理的第1周之后在Mutamba:木兰:桑属组合物2处理组G1中体重增加显著减小(表123)。
表123 Mutamba:木兰:桑属组合物2对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:木兰:桑属组合物2处理组(G1)中食物效率比(FER)显著降低(表124)。
表124 Mutamba:木兰:桑属组合物2对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:木兰:桑属组合物2处理组(G1)中ALP和总胆固醇显著减小(表125)。
表125 Mutamba:木兰:桑属组合物2对DIO小鼠中的生物化学参数的作用
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中肝脏和肾周脂肪垫的绝对重量显著减小(表126)。
表126 Mutamba:木兰:桑属组合物2对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪沉积(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食相比，在Mutamba:木兰:桑属组合物2处理组(G1)中NASH分数显著减小(表127)。
表127 Mutamba:木兰:桑属组合物2对DIO小鼠中的肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
总之，这些结果显示通过用Mutamba:木兰:桑属组合物2处理使总体重、重量增加、FER(食物效率比)、内脏脂肪重量和肝脏中的NASH分数显著减小。另外，通过此组合的处理使ALP和总胆固醇减小。因此，Mutamba:木兰:桑属组合物2可用作体重减少剂、血脂异常和脂肪肝减少剂。
实施例70
与巴拉圭茶提取物26和桑树乙酸乙酯级分15组合的MUTAMBA ETOH提取物35在DIO小鼠中的功效研究
通过以5:5:2的比率分别共混三种组分来组合根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35和根据实施例26产生的巴拉圭茶提取物26以及根据实施例15产生的桑树乙酸乙酯级分15。如实施例48中所述，一天两次以1,200mg/kg的剂量(G1)向DIO小鼠经口施用三种成分Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2。
在实验的第2周处理之后，在Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2处理组(G1)中体重显著减小(表128)。
表128 Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2对DIO小鼠中的总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
在处理的第1周之后，Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2处理组(G1)的小鼠中的重量增加显著减小(表129)。
表129 Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2处理组(G1)中食物效率比(FER)显著降低(表130)。
表130 Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2处理组(G1)中TG显著减小(表131)。
表131 Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2对生物化学参数的作用
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2处理组(G1)中肝脏和肾周脂肪垫的绝对重量显著减小(表132)。
表132 Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
当处理组(G1)与高脂肪膳食相比时，NASH分数显著减小(表133)。
表133 Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合物2对DIO小鼠中的肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
总之，数据显示在用Mutamba:木兰:桑属组合物2处理的小鼠中总体重、重量增加、FER(食物效率比)、内脏脂肪重量和肝脏中的NASH分数显著减小。而且，通过用此三元组合处理使TG减小。因此，本结果表明Mutamba:巴拉圭茶:桑属组合(如组合物2)可用作体重减少剂以及血脂异常和脂肪肝减少剂。
通过以10:1:2的实施例71
MUTAMBA、桑树和木兰组合的组合物2在DIO小鼠中的功效研究
比率分别共混三种组分来制得根据实施例36产生的Mutamba乙醇提取物36、来自根据实施例18产生的乙醇提取物18的桑树沉淀物以及根据实施例29产生的木兰提取物29A的组合。如实施例48中所述，一天两次以650mg/kg(G1处理组)和1,300mg/kg(G2处理组)的两种不同剂量向DIO小鼠经口施用组合的三成分组合物2。
低剂量处理组(G1)在总体重上未显示任何变化，但在处理的第3周之后在高剂量处理组(G2)中总体重显著减小(表134)。
表134 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO小鼠中的总重量的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
低(G1)剂量处理组和高(G2)剂量处理组的体重增加在施用周期过程中显示显著的减小(表135)。
表135 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与HFD组相比，仅在高剂量处理组(G2)中FER显著更低(表136)。低剂量处理组(G1)仅显示食物摄入(克/天)显著变化。
表136 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO小鼠的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在低剂量处理组(G1)中AST和TG显著减小。对于高剂量处理组(G2)，与高脂肪膳食组相比ALT、AST、葡萄糖、TG和LDL-胆固醇显著减小(表137)。
表137 Mutamba:桑属:木兰组合物2对生物化学参数的作用
与HFD组相比，高剂量处理组(G2)的内脏脂肪垫重量显著减小(表138)。
表138 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p值：通过t-检验与HFD比较
对于低剂量处理组(G1)，NASH分数未显示任何变化，但高剂量处理组(G2)显示显著减小(表139)。
表139 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO小鼠中的肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
总之，这些数据显示在用Mutamba:桑树:木兰提取物组合(如组合物2)处理的小鼠中体重、体重增加、FER(食物效率比)、内脏脂肪重量和肝脏中的NASH分数显著减小。而且，通过用Mutamba:桑树:木兰组合物2处理使ALT、AST、血糖、TG和LDL-胆固醇减小。因此，本例子表明Mutamba:桑树:木兰组合可用作体重、血脂异常和脂肪肝减少剂。
实施例72
MUTAMBA、桑树和木兰组合的组合物2在DIO大鼠中的功效研究
通过以10:1:2的比率分别共混三种组分来制得根据实施例36产生的Mutamba乙醇提取物36、来自根据实施例18产生的乙醇提取物18的桑树沉淀物以及根据实施例29产生的木兰提取物29A的组合。如实施例49中所述，一天两次以650mg/kg(S3)和1,300mg/kg(S4)的两种不同剂量向DIO大鼠经口施用组合的三成分组合物2。
这两个处理组与高脂肪膳食组相比在处理周期过程中均显示显著减小的重量增加(表140)。
与高脂肪膳食组相比，在低剂量S3处理组和高剂量S4处理组中重量增加(克/天)和食物效率比(FER)显著减小(表141)。
表141 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO大鼠的作用
p值：与HFD组比较
在用与高脂肪膳食组相比的低剂量组合物2(S3)组处理的大鼠中，绝对器官重量以及附睾、腹膜后、肾周和总脂肪垫显著减小。与高脂肪膳食组相比，在用高剂量组合物2(S4)处理的小鼠中绝对器官重量以及附睾、肾周和总脂肪垫显著减小(表142)。
表142 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO大鼠中的绝对器官重量的作用
p值：与HFD组比较
与高脂肪膳食组相比，在低剂量S3处理组和高剂量S4处理组中小叶炎症、肝细胞气球样变和NASH分数减小(表143)。
表143 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO大鼠中的肝脏病理学的作用
p值：与HFD组比较
与高脂肪膳食组相比，在低剂量S3处理组和高剂量S4处理组中T-胆固醇、甘油三酯(TG)和LDL-胆固醇减小(表144)。
表144 Mutamba:桑属:木兰组合物2对DIO大鼠中的生物化学参数的作用
p值：与HFD组比较
总之，这些数据显示在用Mutamba、桑树和木兰提取物处理的小鼠中总体重、重量增加、FER(食物效率比)、内脏脂肪重量和肝脏中的NASH分数显著减小。而且，通过用Mutamba、桑树和木兰的三元组合处理使总胆固醇、甘油三酯(TG)和LDL-胆固醇减小。因此，本实施例表明如组合物2的组合可用作体重减少剂以及血脂异常和脂肪肝减少剂。
实施例73
MUTAMBA乙醇提取物35、木兰提取物29、巴拉圭茶提取物26和
桑属ETOAC级分15混合的组合物11在DIO小鼠中的功效
通过以5:1:5:2的比率分别共混四种组分来组合根据实施例35产生的Mutamba乙醇提取物35、根据实施例29产生的木兰提取物29、根据实施例26产生的巴拉圭茶提取物26和根据实施例15产生的桑树乙酸乙酯级分15。如实施例48中所述，一天两次以1,300mg/kg的总剂量(G1)向DIO小鼠经口施用组合的四成分组合物11。
在实验过程中，在第2周处理之后，给予Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物11的处理组(G1)的小鼠中总体重显著减小(表145)。
表145 四元组合物11对DIO小鼠中的总体重的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
在实验过程中，在第1周处理之后，在Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物11处理组(G1)中重量增加显著减小(表146)。
表146 四元组合物11对DIO小鼠中的重量增加的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在处理组(G1)中食物效率比(FER)显著降低(表147)。
表147 Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物对DIO小鼠的作用
FER(进食功效比)＝体重增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食组相比，在Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物11处理组G1中肝脏和总脂肪垫的绝对重量显著减小(表149)。
表149 Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物11对DIO小鼠中的绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后和肾周脂肪)的总和
p付：通过t-检验与HFD比较
与高脂肪膳食小鼠相比，在Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物11处理(G1)中NASH分数显著减小(表150)。
表150 Mutamba:木兰:巴拉圭茶:桑属组合物11对DIO小鼠中的肝脏病理学的作用
p值：通过t-检验与HFD比较
总之，这些数据显示在用Mutamba、木兰、巴拉圭茶和桑树提取物处理的小鼠中总体重、重量增加、FER(食物效率比)、内脏脂肪重量和肝脏中的NASH分数显著减小。而且，在用此组合处理的小鼠中血糖、总胆固醇和TG减小。因此，本实施例表明如组合物11的组合可用作体重减少剂以及血脂异常和脂肪肝控制剂。
实施例74
三元提取物组合显示对减少重量增加的协同作用
在此研究中，如实施例48中所述，在膳食诱导的肥胖(DIO)小鼠中测试四种不同的三元组合的组合物和一种四元组合的组合物以检测它们对总体重和重量增加的作用。所测试的五种组合物如下：
(1)实施例63的组合物1A(3种组分)–木兰(100mg/kg):桑树(200mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg)；
(2)组合物2A(3种组分)–木兰(100mg/kg):桑树(200mg/kg):Mutamba(500mg/kg)；
(3)实施例68的组合物10(3种组分)–木兰(100mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg):Mutamba(500mg/kg)；
(4)组合物12(3种组分)–桑树(200mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg):Mutamba(500mg/kg)；以及
(5)实施例73的组合物11(4种组分)–木兰(100mg/kg):桑树(200mg/kg):巴拉圭茶(500mg/kg):Mutamba(500mg/kg)。
所测试的每种提取物单独对体重减轻的作用
如图1中所示，与高脂肪膳食(HFD)组相比，对于木兰提取物在第2-8周和对于桑树提取物在第3-5周看出总重量的统计学上显著的差异。与HFD组相比，对于其它处理组的总重量差异不是统计学上显著的。然而当检测重量增加的减少值时，木兰处理组、桑树处理组和迷迭香处理组与HFD组相比在更多的时间点时显示统计学上显著的减少值。巴拉圭茶处理组和Mutamba处理组当与HFD组相比时在重量增加上未显示明显的减少，但在8周处理的过程中这两个组均观察到逐渐较少重量增加的趋势(虽然不是统计学上显著的)。
多组分组合物对平均体重的作用
如图2中所示，五种组合中的四种与HFD组相比在经口处理的一周内显示出统计学上显著的重量差异。在第1周时不具有统计学上显著的体重减轻的仅有组为用组合物10处理的组(指出此组不包括桑树提取物)，但当与HFD组相比时，对于此组和剩余的处理组从第2周至实验结束观察到统计学上显著的较少体重(图2)。另外，在处理之后一周开始在所有组合的组中重量增加减少并且所述作用持续到实验结束(参见图2和表151)。由每种组合的组合物引起的这样一种快速开始连同长期持续的体重减轻和减少的重量增加为出乎意料的。
基于来自用单独组分处理的DIO小鼠的数据，得到相加的重量增加的理论计算并且这些计算的值提供于表151中。所有五种组合物显示出乎意料的协同作用，因为每种组合物引起比从每种单独组分的相加效应所预测的更大程度的体重减轻。
表151 在用多组分组合物处理之后2周DIO小鼠中的重量增加
此外，处理结束(8周)时，用组合物1A、组合物2A和组合物11处理的小鼠比阳性对照奥利司他显示出更小的平均体重，而用组合物10和组合物12处理的小鼠具有与奥利司他处理的组基本上相同的重量和稍微高于奥利司他处理的组的重量(图2)。在8周处理结束时，用组合物1A、组合物2A和组合物11处理的小鼠显示出约0.73g至约3.6g范围内的重量减少，这优于在奥利司他组中看见的稍微重量减小(0.23克)。用组合物10和12处理的小鼠的边界体重增加分别为1.73g和1.78g，这比在8周处理结束时用组分单独处理的小鼠中所观察到的3.5g至7.3g重量增加要小很多(参见图1和图2)。
总之，这些数据显示与高脂肪膳食饲养的小鼠相比，含有查耳酮和异戊烯基苯酚的狄尔斯-阿德耳加成物的三组分或四组分的组合在体重和重量增加上均显示出乎意料的更快和持久性长的减少。其它出乎意料的益处包括减小的食物效率比、减小的甘油三酯和总胆固醇水平、改进的NASH分数以及减少的肝脏中的脂肪沉积(数据未示出)。
实施例75
分离的桑属提取物活性成分对斯普拉格-道来大鼠中的急性食物摄入的作用
本实施例呈现出根据实施例45进行的24小时食物摄入测试以确定被施用分离自EtOAc桑树根皮提取物的活性成分(桑酮G和桑白皮素G)的大鼠的食物摄入的作用。向S-D大鼠施用含有48.3％桑酮G和46.6％桑白皮素G的桑树分离物组合物A其中组合的查耳酮和异戊烯基苯酚的狄尔斯-阿德耳加成物具有约94.9％纯度，所述组合物A使用类似于实施例5中描述的方法产生，在开始黑暗阶段进食循环之前30分钟处于0.5％CMC(羧甲基纤维素)的溶液中。以92.5mg/kg和185mg/kg的剂量向每组10个动物施用桑树分离物组合物A(此剂量基本上与存在于实施例15中描述的500mg/kg和1000mg/kg的桑树EtOAc提取物15中的活性含量相同)。
表152显示与对照动物相比，在两种不同量下用单一剂量的桑树分离物组合物A处理的大鼠的食物摄入测试结果。
表152 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的重量增加
表152的数据显示桑树分离物组合物A(其包括94.9％总桑酮G和桑白皮素G)能够在处理之后至少8小时诱导重量增加的统计学上显著的减少。
表153显示与对照动物相比，在两种不同量下用单一剂量的桑树分离物组合物A处理的大鼠的食物摄入测试结果。
表153 高脂肪膳食饲养的非肥胖禁食大鼠中的累积食物摄入
这些数据在一起显示桑树处理组表现出累积食物摄入的统计学上显著的减少。此外，通过完成研究在食物摄入测量的第2小时中观察到食物摄入的剂量依赖型减少。这些结果表明分离自桑树提取物的活性成分桑酮G和桑白皮素G对大鼠中的食物摄入具有统计学上显著的作用，从而表明来自桑树提取物的桑酮G和桑白皮素G可用于抑制食物摄入的体重控制组合物中。而且，来自单一口服剂量分离的桑树活性成分的减少的食物摄入持续多于10小时。因此，通过每天一次或两次经口施用包含分离自桑树根皮提取物的查耳酮和异戊烯基苯酚的狄尔斯-阿德耳加成物桑酮G和桑白皮素G的组合物实现减少的胃口、增强的饱腹感或减少的食物或热量摄入是可行的。
实施例76
具有桑属提取物的各种组合物对DIO小鼠中的重量增加、进食摄入和瘦素、生长素和CCK肽水平的作用
用各种三组分组合物处理肥胖小鼠以测试所述组合物的抗肥胖和胃口作用。如实施例48中所述，向DIO小鼠各自分开经口施用根据实施例38产生的三组分组合物1(木兰:桑属:巴拉圭茶)、根据实施例42产生的三组分组合物2(木兰:桑属:Mutamba)、根据实施例39产生的三组分组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)以及根据实施例41产生的三组分组合物9(桑属:迷迭香:槟榔)。高脂肪膳食(HFD)小鼠被分成多个处理组，其中每组总共10个动物。用以下之一处理小鼠：组合物1(1300mg/kg/天)、组合物2(1300mg/kg/天)、组合物3(1700mg/kg/天)或组合物9(1700mg/kg/天)。对照组包括仅给予媒介物的正常膳食组(ND，阴性对照)、仅给予媒介物的高脂肪膳食组(HFD，阴性对照)、奥利司他组(ORI，40mg/kg，2次/天，阳性对照)和西布曲明组(10mg/kg，1次/天，阳性对照)。在处理之后2周每日测量体重和进食摄入，然后一周两次直到7周研究结束。在处理之后的第2周和第7周，使小鼠禁食16小时，然后检测五个动物以测量瘦素和生长素的血浆浓度。通过使用特异于瘦素或生长素(Millipore Co.,Billerica,MA)的商用ELISA试剂盒根据制造商的说明书来测量瘦素和生长素。使用酶标仪(VictorTM X3,PerkinElmer Inc.,USA)取得测量值并且用PerkinElmer2030工作站计算机软件分析。
在处理的2周之后，所有处理组均显示出具有减小的体重增加的趋势。在研究结束时，用组合物1、组合物2和组合物9处理的小鼠显示显著减小的体重增加(表154)。类似地，在7周时奥利司他阳性对照显示出体重增加的显著减少，但用西布曲明处理的那些对照未显示所述结果。
表154 不同桑属组合物对重量增加的作用
在处理7周之后，除了奥利司他之外的所有处理组与HFD组相比时均显示出减小的进食摄入的趋势。具体来说，用西布曲明、组合物1和组合物9处理的组在处理7周之后显示出平均食物摄入的统计学上显著的减少(表155)。
表155 不同桑属组合物对进食摄入的作用
此外，在整个给药周期过程中，所有组合物处理组中的食物效率比(FER)减小。用组合物2处理的组在处理的2周和7周之后均显示显著的减小，而组合物1在处理的2周之后显示显著的变化，并且组合物9仅在处理的7周之后显著。阳性对照奥利司他使FER显著减小，而西布曲明和组合物3处理组中观察到的变化不是统计学上显著的(表156)。
表156 不同桑属组合物对FER的作用
*进食效率比(FER)＝重量增加(克/天)/进食摄入(克/天)
p值：通过t-检验与HFD比较
在用组合物1、组合物2、组合物3和组合物9处理的2周和7周之后，DIO小鼠中的血浆瘦素和活性生长素水平列于表157中。在第2周和第7周时，与正常膳食对照(ND)动物相比HFD动物具有急剧增加的瘦素水平。与ND小鼠相比，HFD动物中的活性生长素水平急剧减少，其中与处理的2周之后的减少相比，在处理的7周之后可检测到甚至更急剧的减少。与HFD阴性对照组相比，在处理的2周之后的奥利司他阳性对照使瘦素水平显著减少，但在7周时显示类似的水平。与HFD阴性对照组相比，在第2周或第7周时奥利司他对活性生长素水平不具有作用。其中在用奥利司他处理之后观察到瘦素水平显著变化的相同时间范围(处理之后2周)也为观察到重量增加最多减少的相同时间范围，而在整个处理周期中没有观察到平均进食摄入减少。西布曲明阳性对照与HFD组相比在处理的2周之后显示稍微减少的瘦素水平，并且在第7周时未显示瘦素水平变化。类似于奥利司他，与HFD阴性对照组相比，西布曲明在第2周或第7周时对活性生长素水平不具有作用。
表157 不同桑属组合物对瘦素水平和生长素水平的作用
组合物2显示与针对奥利司他所观察到的类似水平的瘦素减少，并且与组合物1、组合物3和组合物9处理组相比在第7周时具有最减少的瘦素水平。此外，在7周结束时，组合物2处理的组与组合物1、组合物3和组合物9处理组相比显示出重量增加的最大减少(或最少量的重量增加)。来自所有四个组合物处理组的瘦素水平减少与所观察到的重量增加、进食摄入和FER的减少相似，其中组合物2显示最佳的功效，接着是组合物9、组合物1和组合物3。
胆囊收缩素(CCK)为促胃液素/CCK-B受体的生理性配体的肽激素，而CCK-A受体仅结合硫酸化的CCK肽。主要在小肠内分泌I-细胞中产生的CCK肽调节胰酶分泌和生长、胆囊收缩、肠运动性、饱腹感并且抑制胃酸分泌。CCK肽还刺激脂肪和蛋白质的消化。通过进入十二指肠的富含脂肪或富含蛋白质的食糜来刺激十二指肠和肠粘膜对CCK的分泌。然后CCK抑制胃排空、胃酸分泌并且介导十二指肠中的消化。CCK刺激胰腺的腺泡细胞以释放水和离子并且刺激催化脂肪、蛋白质和碳水化合物消化的胰腺消化酶的分泌。
因此，从用根据实施例42产生的组合物2(木兰:桑属:Mutamba)或根据实施例39产生的组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)处理检测对小鼠中的CCK肽水平的作用来确定通过此肽激素途径影响重量增加和/或胃口的程度。简而言之，如实施例48中所述，在向小鼠施用组合物1和组合物3的7周之后对高脂肪膳食测量CCK肽水平。阴性对照包括正常膳食(NC)的小鼠和高脂肪膳食(HFD)的小鼠，每个组仅施用媒介物。阳性对照为奥利司他和西布曲明。根据制造商的说明书(Abnova,Taipei City,Tiawan)使用CCK ELISA测定试剂盒检测CCK水平。使用酶标仪VictorTM X3(PerkinElmer Inc.,Waltham,MA)和在PerkinElmer 2030工作站上的计算机软件进行测量。
表158 含桑属的组合物对CCK肽水平的作用
*P＜0.05与HFD对照组
如表158中所示，与阴性对照(HFD)组的那些CCK水平相比，处理的组的CCK水平增加，从而表明组合物2和组合物3的至少一种组分影响小鼠中的CCK调节。
实施例77
含桑属的组合物和迷迭香提取物对脂质积累的作用
调节脂肪细胞的细胞循环和分化的能力在肥胖的发展和生理学上至关重要。脂肪细胞由致力于变为前成脂肪细胞的多能间充质前体细胞而产生，所述前成脂肪细胞可保持休眠或分化成脂肪细胞。在终末分化过程中，成纤维细胞样前成脂肪细胞经历一系列形态变化和生物化学变化以最终使脂滴积累。这些体外分化的脂肪细胞与体内脂肪细胞共有类似的形态。小鼠胚胎成纤维细胞细胞系3T3-L1为用来检测胰岛素诱导的葡萄糖摄取和肥胖发展(例如，脂质积累)机理的表征良好的细胞系。
检测根据实施例39产生的三组分组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)根据实施例42产生的三组分组合物2(木兰:桑属:Mutamba)以及根据实施例22产生的迷迭香EtOH提取物22对3T3-L1脂肪细胞中的脂质积累的作用。简而言之，3T3L1细胞(美国典型培养物保藏中心)培养于含有10％小牛血清的Dulbecco氏改良型伊格尔培养基(DMEM)(GIBCO)中直到其融合。融合后两天(D0)，用含有10％胎牛血清(FBS)、5μg/ml胰岛素、0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)和1μM地塞米松的DMEM刺激细胞以分化，持续两天(D2)。然后将分化的细胞维持于具有5μg/ml胰岛素的10％FBS/DMEM培养基中再持续两天(D4)，接着用10％FBS/DMEM培养基培养持续四天(D8)。
表159 组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)对脂质积累的作用
为了检测脂质积累，从脂肪形成的第0天至第8天用培养基测试四种不同浓度的组合3(40ug/ml、80ug/ml、120ug/ml和160ug/ml)。每两天替换培养基，并且在第8天用油红O染色。脂质染色显示在分化周期过程中用组合物3孵育8天显著地以剂量依赖的方式抑制3T3-L1脂肪形成(表159)。
表160 组合物2(木兰:桑属:Mutamba)对脂质积累的作用
在10μg/ml、80μg/ml、120μg/ml和160μg/ml下使用的组合物2还显示高水平功效的抑制脂质积累，特别在约120μg/ml或更高的浓度下(表160)。
表161 迷迭香EtOH提取物22对脂质积累的作用
类似地，在20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml下用迷迭香EtOH提取物22处理的细胞中的脂质积累还显示出对抑制脂质积累的高水平、剂量依赖型功效(表161)。
实施例78
桑属:迷迭香:巴拉圭茶组合物对甘油三酯积累的作用
如实施例77中所述使用相同的脂肪细胞分化模型，根据制造商的说明书(CaymanChemical Co.,Ann Arbor,MI)使用酶促ELISA测定来分析甘油三酯水平。简而言之，在脂肪细胞分化的8天过程中在6孔板中以80μg/ml、120μg/ml和160μg/ml的浓度用根据实施例39产生的三组分组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)处理3T3-L1细胞。用PBS洗涤细胞，用均质溶液刮下细胞，将残余的细胞裂解液在3,000g下离心5分钟以去除脂肪层，并且测定上清液的甘油三酯水平。
表162 组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)对细胞内甘油三酯积累的作用
随着脂肪细胞分化，其细胞内的甘油三酯水平连续增加。本研究显示组合物3有效抑制分化的3T3-L1前成脂肪细胞中的甘油三酯积累，其中约120μg/ml或更高的浓度显著减小甘油三酯积累(表162)。
实施例79
含桑属的组合物对脂解的作用
为了确定由含桑属的组合物诱导的脂解程度，用根据实施例38产生的三组分组合物1(木兰:桑属:巴拉圭茶)或用根据实施例39产生的三组分组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)处理完全分化的3T3-L1脂肪细胞(成熟脂肪细胞)持续24小时并且用无血清DMEM处理48小时。异丙肾上腺素(10μM)用作阳性对照。回收调节的培养基并且根据制造商的说明书通过使用脂解测定试剂盒(Sigma-Aldrich Inc.,USA)来测定所释放的游离甘油。
表163 含桑属的组合物对脂解的作用
组合物1以剂量依赖的方式诱导脂解并且还可诱导早期脂解，而组合物3以剂量和时间依赖的方式诱导脂解(表163)。
实施例80
预期在肥胖受试者中增加的各种不同提取物和各种含桑属的组合物氧自由基的抗氧化作用
对许多疾病的发病机理具有重要作用。当自由基形成大幅度增加或保护性抗氧化机理受到危害时，氧化应激产生。细胞发展了对抗在氧化代谢过程中产生的反应性氧物质(ROS)的酶促抗氧化途径：首先，通过超氧化物歧化酶(SOD)催化使超氧化物阴离子(O2 -)歧化为过氧化氢(H2O2)；然后，通过谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)或催化酶(CAT)使H2O2转化为H2O(Dalle-Donne等,Clin.Chem.52:601,2006)。必须使第一步抗氧化酶和第二步抗氧化酶的活性平衡以防止细胞中的氧化损害，这可有助于各种病理过程。
DPPH(2,2-二苯基-1-苦基偕腙肼)测试为用于测量抗氧化活性的快速简单的测试。DPPH自由基在溶液中具有紫色，但当与自由基反应之后还原成DPPH-H(2,2-二苯基-1-苦基偕腙肼)时变化为淡黄色或无色。可在517nm处分光光度法跟踪颜色变化以确定组合物的抗氧化潜力。简而言之，将DPPH在DMSO中的0.2mM溶液与各自浓度为20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml的测试样品混合。抗坏血酸用作阳性对照。在黑暗中孵育30分钟之后，用分光光度计在517nm处测量颜色变化(即，吸光度减小)。DPPH抑制活性表示为抑制百分比(表164)。
测试以下样品：(1)根据实施例22产生的迷迭香EtOH提取物22、(2)根据实施例29产生的木兰提取物29、(3)根据实施例35产生的Mutamba提取物35、(4)根据实施例26产生的巴拉圭茶EtOH提取物、(5)根据实施例35产生的桑属EtOH沉淀物提取物18、(6)根据实施例38产生的三组分组合物1(木兰:桑属:巴拉圭茶)、(7)根据实施例42产生的三组分组合物2(木兰:桑属:Mutamba)以及(8)根据实施例39产生的三组分组合物3(桑属:迷迭香:巴拉圭茶)。
表164 各种提取物和组合物的抗氧化活性
所有测试样品显示DPPH抑制作用(表164)。测试样品的DPPH清除活性(降序)如下：桑属提取物>迷迭香提取物>组合物2、组合物3和组合物1以及冬青茶、Mutamba和木兰的所有其它提取物。
实施例81
组合的组合物用于人中的体重减轻的临床安全和功效剂量递增评价
在每个研究分组六个受试者中在三个剂量水平下各自测试组合物1A(参见实施例63)、组合物2A(参见实施例74)和组合物3(参见实施例39)的安全和功效剂量递增研究。以胶囊形式配制每种组合物，其中每个胶囊含有250mg的组合物1A、组合物2A或组合物3。组合物1A为分别以1:2:5比率的木兰提取物、桑树提取物和巴拉圭茶提取物的组合。组合物2A为分别以1:2:5比率的木兰提取物、桑树提取物和Mutamba提取物的组合。组合物3为分别以2:5:10比率的桑树提取物、迷迭香提取物和巴拉圭茶提取物的组合。配制用于研究的安慰剂胶囊含有CMC(羧甲基纤维素)并且在外观上与组合物1A、组合物2A和组合物3的胶囊相同。
每天三次进餐时取得测试组合物(组合物1A、组合物2A或组合物3)。研究参与者接受测试产品的剂量和储存条件的说明。研究群体包括年龄在18周岁与50周岁之间、具有约30至约40范围内的体重指数(BMI)并且如通过医学史所确定的总体上健康的总共54个受试者(男性和女性)。在750mg/天、1,500mg/天和2,250mg/天下评价测试组合物。研究不包括除了稳定以外的安慰剂对照，如下进一步解释。研究为周期六周的双盲研究，前两周研究用于稳定的安慰剂，然后交叉至低剂量活性分组。在三个个体完成研究分组之后，评价所有安全参数并且作出决定是否继续登记参与所述剂量水平。如果所述较低剂量水平为安全的，则用于下一个更高剂量的受试者登记参与。对于每个参与者，用组合物1A、组合物2A和组合物3处理的持续时间为六周(包括两周安慰剂稳定周期)。每个患者的研究的总持续时间为约8-10周，其包括筛选、随机化和活性处理。
研究的最初目的是为了建立研究产品的最大耐受剂量(MTD)、剂量限制性毒性和/或最大可行剂量。评价了以下参数：具有人工差异的CBC、EKG、血压、活命器官、CMP(包括肾脏和肝脏功能测试)以及不良事件分析。
第二个目的是为了评价各种剂量对脂质特征(TG、Chol、HDL、LDL)以及空腹血糖和胰岛素水平的作用。
第三个目的是为了评价多个剂量对安全和饮食摄入的作用。
第四个目的是为了评价研究产品对人体测量的功效，所述人体测量如各自均与基线相比的重量变化、BMI变化、腰围/臀围比、臂围和大腿围变化。
在开始任何研究相关的工序之前试验方案由IRB批准并且所有受试者均签署IRB审查知情同意书。
统计学分析
研究包括三个剂量水平(剂量1、剂量2和剂量3)，并且针对每个终点分析了每个分组时间周期内(所测试的组内)的差异、每个时间点的三个剂量水平中的两个剂量水平之间(所测试的组之间)的差异以及每个时间点的三个剂量水平之间(所测试的组之间)的差异。
针对所有类型变量的所有终点，测试了非参数统计学方法。使用Kruskal-Wallis测试了剂量水平之间的差异的名义显著性。使用Wilcoxon Mann-Whitney检验测试了剂量水平之间(即，剂量1与剂量2、剂量1与剂量3以及剂量2与剂量3)的差异的名义显著性。使用Wilcoxon符号秩检验或符号检验测试了每个剂量水平的时间周期内的差异的名义显著性。对于分类终点，使用非参数卡方检验测试了剂量水平之间的分布差异。
进行改良的符合方案(Mod PP)分析并且用来测评研究的功效变量。Mod PP群体涉及在一起分析所有随机分配至处理之一的受试者，不包括没有取得研究产品的受试者。具有所完成的至少一个剂量后随访的受试者包括在分析中。
使用非参数统计学方法分析所有安全终点。使用Kruskal-Wallis分析了具有人工差异的CBC、EKG、血液、活命器官、CMP(包括肾脏和肝脏功能测试)用于在剂量水平之中进行比较，并且使用Wilcoxon Mann Whitney用于在剂量水平之间进行比较。使用Wilcoxon符号秩检验或符号检验测评每个剂量水平的时间周期内的比较。
在获得不良事件(AE)的可比较文件中，调查者在每次随访时询问了受试者以下开放、标准的问题。基于每次随访过程中的受试者面谈，详细记录了AE和严重AE的频率和强度。通过总体类型的事件(身体系统)使记录的AE分组。通过Cochran-Q检验测评产品组之间的AE形式的差异。此外，使用McNemar变更检验来测评产品组之间的AE形式的差异。
使用非参数方法分析所有功效终点。使用Kruskal-Wallis分析了脂质小组、空腹血糖和胰岛素变化、体重、BMI、腰围/臀围比、手臂和大腿围、安全和饮食摄入变化用于剂量水平之中进行比较，使用Wilcoxon Mann Whitney用于在剂量水平之间进行比较。使用Wilcoxon符号秩检验或符号检验测评每个剂量水平的时间周期内的比较。
临床结果
在完成所有受试者的处理之后，在所有三种组合物的所有三个剂量下从基线直到处理结束对所有CBC、综合代谢罚分(CMP)、EKG、收缩和舒张血液、体温、脉搏率和呼吸率测量上不存在显著变化。在研究过程中不没有报道严重不良事件(SAE)。
其它临床研究显示中等体重减轻足以在超重和肥胖受试者中产生临床上显著的心血管危险因子的改进。在多个体重减轻研究中观察到血压、血糖控制和脂质的改进，显著例外的是LDL胆固醇。在所有三个剂量水平下在组合物1A、组合物2A和组合物3的此临床小规模测试中观察到这些相同的积极趋势，具体是在脂质特征的改进上，其中高密度脂蛋白增加并且甘油三酯、LDL和胆固醇减少。来自三种不同组合物的空腹血糖和胰岛素水平的减少表明改进的葡萄糖代谢。针对所有三种组合物所观察到的脂质和葡萄糖代谢的正变化与本文所描述的动物功效研究中的观察一致。
观察了具有评价参数主要变化的组合物，组合物2A-高剂量(表C)、组合物1A-低剂量(表B)以及组合物3-高剂量(表D)。
表B 组合物1A对重量和心血管危险因子的作用
终点 低剂量(750毫克/天)作用
总胆固醇 减小
高密度脂蛋白 增加
甘油三酯 减小
葡萄糖 减小
重量 减小
终点 中等剂量(1,500毫克/天)作用
高密度脂蛋白 增加
低密度脂蛋白 减小
甘油三酯 减小
葡萄糖 减小
终点 高剂量(2,250毫克/天)作用
高密度脂蛋白 增加
低密度脂蛋白 减小
甘油三酯 减小
葡萄糖 减小
在用组合物1A处理的4周之后(总共6周，包括用安慰剂稳定的两周)，所有三个剂量组中的受试者显示高密度脂蛋白增加；甘油三酯和葡萄糖减小。用1,500mg/天和2,250mg/天处理的受试者还经历低密度脂蛋白减少。低剂量组受试者具有呈现出减小的体重和减少的总胆固醇的趋势。
表C 组合物2A对重量和心血管危险因子的作用
终点 低剂量(750毫克/天)作用
高密度脂蛋白 增加
葡萄糖 减小
重量 减小
终点 中等剂量(1,500毫克/天)作用
高密度脂蛋白 增加
甘油三酯 减小
葡萄糖 减小
重量 减小
终点 高剂量(2,250毫克/天)作用
总胆固醇 减小
高密度脂蛋白 增加
低密度脂蛋白 减小
甘油三酯 减小
胰岛素 减小
重量 减小
在用组合物2A处理的4周之后(总共6周，包括用安慰剂稳定的两周)，用2,250mg/天处理的受试者显示具有增加的高密度脂蛋白和减小的总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯、胰岛素的最正向变化；以及呈现出减小的体重的趋势。用1,500mg/天的组合物2A处理的受试者显示增加的高密度脂蛋白和减小的甘油三酯、葡萄糖以及呈现出减小的体重的趋势。用750mg/天的组合物2A处理的受试者显示增加的高密度脂蛋白；减小的葡萄糖以及呈现出减小的体重的趋势。
表D 组合物3对重量和心血管危险因子的作用
终点 低剂量(750毫克/天)作用
高密度脂蛋白 增加
葡萄糖 减小
胰岛素 减小
重量 减小
终点 中等剂量(1,500毫克/天)作用
总胆固醇 减小
高密度脂蛋白 增加
葡萄糖 减小
重量 减小
终点 高剂量(2,250毫克/天)作用
高密度脂蛋白 增加
低密度脂蛋白 减小
甘油三酯 减小
葡萄糖 减小
胰岛素 减小
在用组合物3口服处理的4周之后，用2,250mg/天处理的受试者显示增加的高脂肪脂蛋白和减小的低密度脂蛋白、甘油三酯、葡萄糖和胰岛素。用1,500mg/天的组合物3处理的受试者显示增加的高密度脂蛋白和减小的总胆固醇、葡萄糖以及呈现出减小的体重的趋势。用750mg/天的组合物3处理的受试者显示增加的高密度脂蛋白；减小的葡萄糖和胰岛素；以及呈现出减小的体重的趋势。
实施例82
来自各种植物部分和各自来源的MUTAMBA ETOH提取物
将来自Mutamba(Guazuma ulmifolia)的植物材料研磨成不大于两毫米(mm)的粒径，并且转移(150g)至1升圆底烧瓶。将大约5倍体积的95％乙醇或70％乙醇水溶液(v/v)添加至烧瓶。用回流进行提取持续1小时，过滤以去除生物质，然后受到回流2次以上。合并滤液并且在50℃下在真空下用旋转蒸发仪浓缩，然后真空冷冻干燥以获得提取物。表165列出来自各种植物部分和各种不同国家的Mutamba的提取结果。
表165 来自不同Mutamba植物部分和来源的提取产率
提取物 ％EtOH 植物部分 植物来源 产率
82P1 95 茎皮 巴拿马 16％
82P2 95 树皮 巴西 14％
82D1 70 茎 伯利兹 9％
82D2 70 树皮 伯利兹 17％
82D3 70 茎 伯利兹 7％
提取物 ％EtOH 植物部分 植物来源 产率
82D4 70 树皮 伯利兹 12％
82D5 70 树皮 伯利兹 17％
82D6 70 茎 伯利兹 7％
82D7 70 树皮 伯利兹 15％
82D8 70 茎 伯利兹 7％
82D9 70 树皮 伯利兹 12％
82D10 70 茎 伯利兹 5％
82D11 70 茎皮 秘鲁高地 10％
82D12 70 茎皮 秘鲁高地 10％
82D13 70 茎皮 秘鲁高地 15％
82D14 70 树皮 秘鲁高地 9％
82D15 70 树皮 秘鲁低地 16％
82D16 70 树皮 秘鲁低地 20％
82D17 70 树皮 秘鲁低地 6％
82D18 70 茎 秘鲁低地 16％
82D19 70 茎 秘鲁低地 15％
来自秘鲁的植物趋向于从Mutamba中提供最佳产率的活性成分，无论使用哪个植物部分(例如，来自秘鲁低地的树皮的最高产率为20％)。对于来自伯利兹的Mutamaba，从树皮获得的产率与茎相比更大。使用70％乙醇与使用95％乙醇来提取活性成分一样有效。
实施例83
HPLC分析MUTAMBA ETOH提取物活性成分
使用具有C18反相柱(Agilent,USA,Eclipse 3.5um,150mm x 4.6mm)的高效液相色谱法偶联光电二极管阵列(HPLC/PDA)来检测和定量Mutamba EtOH提取物的组分，如原花青素B2、表儿茶素、原花青素C1和其它微量组分(包括四聚体Arecatannin A2)。如表166中所述，使用0.05％三氟乙酸的纯化水溶液(流动相A)和乙腈(流动相B)的二元梯度来洗脱Mutamba提取物组分。在35℃的柱温下将流速设定为穿过Eclipse C18柱的0.8ml/min。将UV检测器设定为在275nm处读取吸光度。
表166 Mutamba HPLC梯度洗脱方案
时间(min) 流动相A％ 流动相B％
0 3 97
3 3 97
8 9 91
25 16 84
35 60 40
45 100 0
50 100 0
52 3 97
60 97 3
定量标准物包括纯参比样品表儿茶素、原花青素B2和原花青素C1(分别为Sigma-Aldrich Co.，USA；Chendu Biopurify Phytochemicals，Ltd.，China；以及ChromaDexInc.，USA)。表儿茶素的最高浓度水平为0.05mg/ml并且使用50％甲醇水溶液从L1稀释至L5(0.003mg/ml)。原花青素B2和原花青素C1的最高浓度范围为0.05mg/ml并且使用50％甲醇水溶液从L1稀释至L5(0.003mg/ml)。将Mutamba提取物样品的浓度调节至约2mg/ml的50％甲醇水溶液并且超声处理直到溶解(大约20分钟)，冷却至室温，充分混合，然后通过0.45um尼龙注射器式过滤器过滤。通过HPLC检测10μl体积的各样品。Mutamba提取物的原花青素B2、表儿茶素和原花青素C1含量的HPLC定量结果提供于表167和表168中。
表167 来自不同植物部分、年龄和性别的Mutamba提取物的HPLC
如表167中所示，分析总共9个样品来比较不同年龄、性别和植物部分下的Mutamba植物的提取物含量。
表168 来自不同植物部分和国家的Mutamba提取物的HPLC
从来源于不同国家/地区的植物中收集和从不同植物部分中提取的Mutamba提取物的另外定量分析提供于表168中以鉴定最佳原料来源。
实施例84
MUTAMBA茎皮ETOH提取物和提取物级分的制备
Mutamba(Guazuma ulmifolia)EtOH提取物84如下产生：切割、压碎97.4kg干燥的Mutamba茎皮并且用大约8倍体积(800L)的70％乙醇水溶液(v/v)提取；在100℃下进行提取持续4小时。过滤残余物以获得提取溶液。上述工序重复两次。合并提取溶液并且在40℃下在真空下用旋转蒸发仪浓缩直到体积为1/25体积，然后将浓缩的溶液通过真空冷冻干燥处理来干燥以获得来自Mutamba茎皮的70％EtOH提取物粉末。从97.4kg原材料中获得总共13.1kg的Mutamba EtOH提取物84，并且提取产率为大约13.47％(w/w)。
将此粗Mutamba茎皮EtOH提取物84(200g)悬浮于0.6升的20％乙醇水溶液中，然后加样于用20％乙醇水溶液预先调节的HP-20凝胶柱(具有7L HP-20树脂的10x 150cm柱，DiaionTM，Mitsubishi Chemical，Japan)上。用逐步梯度溶剂混合物洗脱柱并且如下收集总共20个级分：10L的20％EtOH洗脱来收集2个级分(F1-2)、10L的40％EtOH洗脱来收集5个级分(F3-7)、10L的60％EtOH洗脱来收集5个级分(F8-12)、10L的80％EtOH洗脱来收集3个级分(F13-15)、10L的100％EtOH洗脱来收集2个级分(F16-17)、10L的丙酮-MeOH(1:1)洗涤来收集3个级分(F18-20)。
表169 Mutamba EtOH提取物的HP-20柱级分
如表169中所示，基于HPLC化学特征合并级分，并且大多数重量分布在早期洗脱部分，其中质量平衡的优良回收率为约95％。进一步合并级分7、级分8和级分9-12用于体内测定。在膳食诱导肥胖(DIO)小鼠模型中检测三个Mutamba茎皮EtOH提取物84级分84/F1-5、84/F6和84/F7-12的体内功效。
实施例85
另外的MUTAMBA ETOH提取物级分的HPLC分析
将Mutamba(Guazuma ulmifolia)70％EtOH提取物(2g)溶解于4ml 20％EtOH/水中，与13.5g的HP-20树脂(Sigma)混合，并且加样于预填充的SNAP HP-20柱(Biotage,38x157mm)的顶部空间上。在样品加样之前，以通过Hitachi高通量纯化(HTP)系统递送的20ml/min流速用20％EtOH/水调节HP-20柱持续30min。在50min内用20％EtOH/水至100％EtOH范围内的线性梯度洗脱柱，并且用100％EtOH再保持16分钟以洗涤掉柱的所有组分。收集总共97个级分。合并化学特征和颜色类似的级分以得到等效的前F6、F6和后F6的最佳池。柱回收率在88％至100％范围内。
表170 来自各种Mutamba EtOH提取物的级分6的HPLC分析
实施例86
MUTAMBA ETOH提取物级分的NMR分析
在Varian VNMRS-500MHz光谱仪上收集HP-20级分F1-F20的NMR数据以进行理解何活性组分存在于每个级分中。通过具有1H-19F/15N-31P 5mm PFG AutoX DB探针的VNMR-J2.2c获得1H-NMR谱并且通过ACD/Labs 10.0软件处理。基于NMR数据分析，级分1-5主要含有在3-5ppm区周围的巨大重叠峰的寡糖和多糖。级分6、级分7和级分8的质子NMR谱显示非常类似的图案并且这些与原花青素类型的化合物匹配(例如，凝缩单宁)。级分9、级分10和级分11的质子数据分析表明存在凝缩单宁和可水解单宁的混合物，其中在3.5-4.5ppm区中质子信号增加并且在6.0ppm周围信号减小。级分12、级分13和级分14的质子NMR谱显示这些级分的主要组分为可水解单宁。级分17和级分18主要含有脂肪分子。
基于NMR数据，级分6、级分7和级分8为含有总比率为39.3％的凝缩单宁的三个主要级分，其中这些组分为Mutamba提取物的主要活性成分。
实施例87
MUTAMBA级分84/F6的MALDI-TOF质谱分析
在Bruker Autoflex II MALDI上记录MALDI-TOF质谱法(MS)谱。将样品溶解于MeOH中，而将CsCl溶解于H2O(约1.5mg/mL)中。将样品溶液(20μL)与CsCl溶液(5uL)混合，然后将0.5μl的溶液混合物放置于MALDI板上，接着是2μL的DHB在丙腈中的饱和溶液。干燥之后，将板放入MALDI中。以线性正模式下进行获取。在实施例84中产生的Mutamba级分84/F6的MALDI-TOF质谱(其以正模式记录为[M+Cs]+和[M+H]+)显示出一系列群集在288Da的间隔下的峰，对应于添加一个儿茶素/表儿茶素单位(图3)。
表171 Mutamba提取物级分84/F6的MALDI-TOF数据
这些结果表明Mutamba树皮中的活性组分主要含有由二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、刘聚体、七聚体、八聚体和九聚体(高达至十聚体或甚至更高分子量聚合物)组成的原花青素。
实施例88
MUTAMBA提取物活性级分的硫解和色谱法
根据Torres和Selga(Chromatographia 57:441,2003)的方法稍加修改进行硫解。选择半胱胺盐酸盐作为解聚反应的替代硫醇试剂。将实施例84中产生的Mutamba级分84/F6或实施例85中产生的Mutamba级分82D4/F6各自单独地溶解于甲醇中以产生10mg/mL溶液。将等分试样(50μL)置于具有50μL盐酸甲醇溶液(3.3％,v/v)的小瓶中，然后添加半胱胺盐酸盐甲醇溶液(50mg/mL,100μL)。在65℃下加热混合物20分钟，用0.1％(v/v)水性TFA0.3mL淬灭反应，然后冷却至室温。在通过0.45μm膜过滤器过滤之后，通过HPLC色谱法分析溶液。
在具有ODS柱(Phenomex,Luna C18,4.6X 250mm,10μm)的LC-MS(Hitachi M-8000)和PDA(Hitachi L-4500A)系统上进行分析性HPLC色谱法，具有流动相A(0.1％FA水溶液)和流动相B(乙腈)。梯度洗脱为3％B持续5分钟，10分钟内3％至9％，30分钟内9％至16％，1分钟内16％-100％，并且以1mL/min的流速用100％B洗涤7分钟，其中UV波长为280nm。鉴定儿茶素、表儿茶素、儿茶素-半胱胺和表儿茶素-半胱胺衍生物的峰。基于峰面积计算原花青素级分的mDP。计算的mDP(平均聚合度)值对于Mutamba级分84/F6为4.12并且对于Mutamba级分82D4/F6为6.27。
此结果表明充当Mutamba原花青素和表儿茶素的末端和延伸单位的儿茶素和表儿茶素为来自Mutamba树皮的聚合原花青素中的主要组分。Mutamba树皮中的活性组分主要包括具有平均数量为四个表儿茶素/儿茶素单位的原花青素，而且包括二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体和高达至十聚体或甚至更高分子量聚合物。
实施例89
MUTAMBA提取物级分84/F6的分级分离和硫解
通过大小排阻色谱法进一步分级分离称为84/F6的从Mutamba提取物84中获得的活性级分6。将级分84/F6(100.5mg)加样于具有用水预先调节的5g LH-20Sephadex凝胶珠的LH-20凝胶柱上。用125mL水、125mL 20％MeOH水溶液、200mL 50％MeOH洗脱柱，并且最后用200mL 70％丙酮水溶液洗涤掉。收集五个亚级分(84/F6-01–84/F6-05)。如实施例88所述，用半胱胺-HCl解聚每个级分以确定平均聚合度。
表172 Mutamba提取物级分84/F6的亚级分
亚级分84/F6-01(6.17％)和84/F6-02(12.04％)含有mDP值分别为8.33和6.87的聚合原花青素。亚级分84/F6-03(16.6％)用50％MeOH洗脱并且主要含有表儿茶素、原花青素B2、原花青素C1，并且一小部分聚合原花青素具有在1.71下的mDP值。主要级分84/F6-06(64.48％)通过70％Me2CO-H2O洗脱并且含有在6.23下的mDP值的原花青素。
实施例90
分级分离MUTAMBA提取物级分82D4/F6和硫解
通过大小排阻色谱法进一步分级分离称为82D4/F6的从Mutamba提取物82D4(参见实施例82)中获得的活性级分6等效物。将级分82D4/F6(620.8mg)加样于具有用水预先调节的5g LH-20Sephadex凝胶珠的LH-20凝胶柱上。用150mL水、250mL 20％MeOH水溶液、100mL40％MeOH并且最后300mL 100％MeOH洗脱柱(回收率为77.6％)。收集五种亚级分(82D4/F6-01–82D4/F6-05)。来自级分的约22％的物质保留在LH-20柱上。如实施例88所述，用半胱胺-HCl解聚每个级分以确定平均聚合度。
表173 Mutamba提取物级分82D4/F6的亚级分
亚级分82D4/F6-01含有10.9％聚合的原花青素，其中mDP值在13.43下。
实施例91
分析MUTAMBA提取物中的凝缩单宁含量
丁醇-HCl测定为通常用来确定样品中的凝缩单宁(具体是原花青素)的量的一种比色法。由Porter等(Phytochemistry 25:223,1986)描述的方法被遵循为用于确定Mutamba提取物中的凝缩单宁含量的标准方法。通过将950mL的正丁醇与50mL浓HCl混合来制备丁醇-HCl试剂。通过将0.5g FeNH4(SO4)溶解于25mL的2N HCl中来制备铁试剂。在试管中并且一式两份，将70％丙酮中的0.2mg/mL浓度1mlMutamba提取物添加至6mL酸丁醇试剂，然后添加0.2mL铁试剂并且在550nm处测量吸光度。将试管加盖、振荡然后放入沸水浴中持续50分钟。在使试管冷却之后，在550nm处测量吸光度。从加热的混合物的吸光度减去加热之前每个样品的吸光度作为空白。亚级分84/F6-04(单宁级分)用作定量的标准物。基于在550nm处的吸光度计算与单宁标准物等效物相比的凝缩单宁(％干物质)。
表174 Mutamba EtOH提取物中的凝缩单宁含量
*表示单宁标准化合物等效物
取决于植物部分、植物年龄、植物收集位置和季节，Mutamba EtOH提取物的凝缩单宁含量变化极大，在20％至多达73％范围内(参见表174)。成熟树皮和茎皮趋向于具有最高水平的凝缩单宁。基于所测量的Mutamba提取物中的凝缩单宁含量和校正提取产率，计算植物原材料中的含量在约2％至约14％范围内。
对根据实施例42产生的两批组合物2(木兰:桑属:Mutamba)使用此方法，两批中的每一批中的凝缩单宁含量分别为35.26％和31.63％。
实施例92
分析MUTAMBA提取物级分中的凝缩单宁含量
制备0.1mg/mL浓度在70％丙酮中的来自Mutamba 70％EtOH提取物84的Mutamba级分用于实施例91中描述的丁醇-HCl测定。通过与实施例91中描述的相同方法来定量凝缩单宁含量，其中数据示于表175中。
表175 Mutamba EtOH提取物级分中的凝缩单宁含量
*表示单宁标准化合物等效物
最具活性的级分84/F6与其它级分相比具有较高的凝缩单宁含量。
实施例93
MUTAMBA ETOH提取物级分中的短期体内功效
使用14天研究来评价Mutamba EtOH提取物级分84/F6对高脂肪膳食(HFD)饲养的C57Bl/6J小鼠中的体重增加的作用。6周龄的雄性C57BL/6J小鼠购自查尔斯河实验室(Wilmington,MA)并且使其适应环境一周。在第0天(处理开始)，取得所有小鼠的体重并且随机分配至四个处理组的组中，如下：(1)8个小鼠/组接受阳性对照＝Alli；(2)15个小鼠/组接受Mutamba级分84/F6；(3)8个小鼠/组仅接受给予HFD对照的媒介物(0.5％羧甲基纤维素)；以及(4)8个小鼠/组仅接受给予未处理的正常膳食对照的媒介物。小鼠接受30mg/kg每日口服剂量的Alli和1g/kg的Mutamba 84/F6持续14天。一旦小鼠接受第一次相应的剂量，对它们提供随机喂食60％千卡高脂肪膳食，除了正常膳食组以外。除了在周末以外，在研究持续时间中每日取得体重。在研究结束时(在第15天)，使小鼠禁食5小鼠并且取得血糖、甘油三酯和总胆固醇水平。使用Contour血糖监测试剂盒(Bayer Health Care)测量血糖水平。使用具有PTS面板测试条的CardioChek分析器(Polymer Technology System,Inc,Indianapolis,IN)测量总甘油三酯和胆固醇水平。
如表176中所见，接受Mutamba 84/F6的小鼠与媒介物处理的HFD组相比在处理之后第9天开始显示统计学上显著的较少重量增加。另一方面，阳性对照Alli处理的小鼠与媒介物处理的HFD组相比仅在处理的第14天显示重量增加的减小。
类似地，在经口处理的第14天之后，与媒介物处理的HFD组相比观察到用Mutamba84/F6处理的小鼠的空腹血液总胆固醇和葡萄糖水平统计学上显著的减小(表177)。这些低水平的空腹血糖和总胆固醇与正常膳食饲养的小鼠所观察到的水平可比较。在Mutamba与媒介物处理的HFD组之间观察到甘油三酯水平没有差异。相比之下，Alli和媒介物处理的常规膳食饲养的小鼠与HFD组相比显示统计学上显著的较高水平的空腹甘油三酯。
实施例94
MUTAMBA茎皮ETOH提取物和级分的体内功效
如实施例48中所述，在DIO小鼠模型中测试Mutamba 70％EtOH提取物84和根据实施例84产生的三种柱级分Mutamba 84/F1-5、84/F6和84/F7-12。通过每天管饲两次以1000mg/kg的剂量经口施用Mutamba 70％EtOH提取物处理组(G1)、Mutamba级分84/F1-5(G2)、Mutamba级分84/F6(G3)和Mutamba级分84/F7-12(G4)。
表178Mutamba EtOH提取物和级分对体重的作用
*p值：通过t-检验与HFD比较
表178显示在处理的第5周、第6周和第7周之后，1000mg/kg处理组G3显示显著的体重减小。
表179 Mutamba EtOH提取物和级分对重量增加的作用
*p值：通过t-检验与HFD比较
在处理的第2周之后来自1000mg/kg Mutamba级分84/F6组(G3)的体重增加显著减小并且所述作用持续直到处理周期结束。
表180 Mutamba EtOH提取物和级分对食物摄入和FER的作用
*FER(进食功效比)＝重量增加(克/天)/食物摄入(克/天)
p值通过学生t-检验与HFD比较
当与仅用媒介物处理的高脂肪膳食组相比时，通过用1000mg/kg的Mutamba级分84/F6(G3)口服处理DIO小鼠来显著减少食物摄入和食物效率比(FER)。
表181 Mutamba EtOH提取物和级分对绝对器官重量的作用
*总脂肪为三种脂肪垫(附睾、腹膜后、肾周)的总和
p值通过学生t-检验与HFD比较
在Mutamba级分84/F6处理的组(G3)中，当与高脂肪膳食对照组相比时肾周脂肪和总脂肪垫显著减小。
表182 Mutamba EtOH提取物和级分对生物化学参数的作用
通过学生t-检验与HFD比较的*p-值
当与高脂肪膳食组相比时，Mutamba级分84/F6处理(G3)使总胆固醇和LDL-胆固醇显著减少。
总之，1000mg/kg Mutamba级分84/F6处理组(G3)显示显著减小的体重、体重增加、食物效率比(FER)、总胆固醇、LDL-胆固醇以及肾周脂肪和总脂肪垫的绝对器官重量。这些数据在一起表明Mutamba级分84/F6含有来自Mutamba茎皮的主要活性抗肥胖组分，Mutamba提取物中的所述组分或在Mutamba提取物中标准化的所述组分可用于控制体重、血液胆固醇、身体脂肪或其任何组合。
可组合以上所述的各种实施方案来提供另外的实施方案。本说明书中提到或列于申请数据表中的所有美国专利、美国专利申请出版物、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利出版物均以引用的方式整体并入本文。如果需要采用各种专利、申请和出版物的想法来提供又另外的实施方案，可修改实施方案的方面。根据以上详细说明，可对实施方案进行这些和其它变化。
通常，在以下权利要求书中，所使用的术语不应该解释为将权利要求限制于本说明书和权利要求书中公开的具体实施方案，而应该解释为包括连同与所述权利要求所规定的全部范围等效物一起的所有可能的实施方案。因此，权利要求并不受公开内容所限定。

Claims (12)

1.一种用于控制体重的组合物，其包含含有查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物的桑属提取物、木兰提取物和巴拉圭茶提取物，
其中所述查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物是具有下述式(Ib)或(IIb)的结构的化合物：
其中R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b各自独立地为H、羟基、卤素、C1-12烷氧基、C1-12烷基或杂芳基，或R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a或R15b之一与相同环上的R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b中的另一个连接以形成杂芳环。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含药学上或营养学上可接受的载体，其中所述组合物包含0.5wt％至90wt％的所述提取物混合物的活性成分。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含药学上或营养学上可接受的赋形剂，其中所述组合物包含0.5wt％至90wt％的所述提取物混合物的活性成分。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述赋形剂是稀释剂。
5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物被配制成片剂、胶囊剂、粉剂或颗粒剂。
6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物在制造用于治疗、预防或控制哺乳动物中的体重增加的药物中的用途。
7.根据权利要求1-5任一项所述的组合物在制造用于治疗、预防或控制有需要哺乳动物中的肥胖的药物中的用途。
8.根据权利要求1-5任一项所述的组合物在制造用于维持哺乳动物中的体重的药物中的用途。
9.根据权利要求1-5任一项所述的组合物在制造用于通过在哺乳动物中降低LDL胆固醇、降低总胆固醇、降低甘油三酯或增加HDL来促进健康脂质特征的药物中的用途。
10.根据权利要求6-9中任一项所述的用途，其中所述哺乳动物为人。
11.权利要求1-5任一项所述的组合物，其中所述查耳酮和异戊烯基苯基部分的至少一种狄尔斯-阿德耳加成物是具有式(Ib)或(IIb)的结构的化合物：
其中R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a或R15b之一与相同环上的R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a、R7b、R8a、R8b、R9a、R9b、R10a、R10b、R11a、R11b、R12a、R12b、R13a、R13b、R14a、R14b、R15a和R15b中的另一个连接以形成杂芳环。
12.权利要求11所述的组合物，其中一种或多种查耳酮和异戊烯基苯基部分的狄尔斯-阿德耳加成物选自：桑呋喃素C、桑白皮素F、桑酮G、桑白皮素D；12,13-二氢,13-羟基桑白皮素G、桑酮H、桑白皮素A、查耳桑拉素、光桑酮L、桑酮醇E、桑酮J；16”-脱氧桑酮J；2-脱氧桑酮J；2,16”-二脱氧桑酮J；1”-差向异构体桑酮L、桑酮L；2,3-二脱氢3-(3-甲基-2-丁烯基)、桑酮X；3”-差向异构体桑酮Z、桑白皮素C、桑呋喃E、桑呋喃O、桑呋喃P、桑呋喃Q、桑呋喃S、桑呋喃T、桑根酮醇G、桑根酮醇J、桑根酮醇M、桑根酮B；7-O-(2,4-二羟基苯甲酰基)桑根酮S、桑根酮E、桑根酮G。
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