CN104719208A - 一种无毒暗纹东方鲀良种的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种无毒暗纹东方鲀良种的选育方法，基础群体建立：指将控毒的暗纹东方鲀通过在淡水条件下养殖，投喂无毒河豚饲料，经过人工养殖后形成可繁殖后代的亲本；家系繁殖：挑选生长速度快、形态特征优良的暗纹东方鲀作为亲鱼，在低浓度海水中驯养并人工繁殖，利用小鼠生物分析法检测毒素含量，挑选毒素含量小的作为下一代繁殖的亲本，以此类推进行家系育种；幼苗及成鱼培育：在幼苗和成鱼阶段均采用淡水养殖环境，投喂不含毒素的河豚饲料，并在养殖过程中加强无毒化鉴别。本发明采用家系育种的方法，结合小鼠生物分析检测方法，将毒性逐渐降低的趋势延续下去，直至毒性消失，在控制无毒的基础上选育出生长速度快、抗逆性强的暗纹东方鲀良种。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼类的培育方法，尤其涉及一种无毒化暗纹东方鲀的良种培育方法。
背景技术
暗纹东方鲀属鲀形目(Tetraodontiformes)，鲀亚科(Tetraodontoidei)，鲀科(Tetraodontidae)，东方鲀属(Takifugu)，是一种江海洄游性的鱼类，其肉味腴美，口感细腻，富含鲜味氨基酸以及维生素B1、B12、锌、硒等微量元素，具有很高的营养价值，它的美味自古以来就倾倒了无数食客。据《山海经·北山经》记载，早在4000多年前大禹治水时代，人们就开始品尝河豚，2000多年前春秋战国时期吴越属地，人们在品尝河豚精巢时，对其洁白如乳、丰腴鲜美、入口即化、美妙绝伦的感觉所吸引，不禁使人联想到美女西施，而“西施乳”就此在民间传开。此后诸如“春洲生荻芽，春岸飞杨花，河豚当是时，贵不数鱼虾”等赞美河豚的诗句也出现在历代文人的笔下，植入人们的心中。
暗纹东方鲀虽然肉质鲜美，但是其体内含有毒性强烈的河豚毒素，不过这丝毫没有抹杀人们对其的喜爱，每当“清明”时节，暗纹东方鲀的生殖群体溯河游入长江时，其肉味特别鲜美，吸引了各地食客争相食之，于是就出现了河豚渔汛与“拼死吃河豚的”的饮食文化相映交辉成趣。河豚毒素(tetrodotoxin，TTX)其实是一种生物碱，其具体作用机制是通过与钠离子通道受体结合，阻断电压依赖性钠通道，从而阻滞动作电位，导致与之相关的生理活动的阻碍，主要是神经肌肉的麻痹，河鲀毒素对呼吸和心血管的抑制是对中枢和外周神经共同作用的结果。研究发现野生暗纹东方鲀除肌肉和精巢组织河豚毒素未检出外，脾脏、消化道、肝脏为强毒，卵巢为剧毒。特别是在性腺发育时期，卵巢内的河豚毒素有着显著的增加，其它部位河豚毒素提升并不明显。
暗纹东方鲀毒性虽然强烈，但是美味的诱惑依旧吸引着无数食客，每年都有许多人不惜拼死食用，河豚中毒事件也屡见不鲜。由此，选育无毒暗纹东方鲀，解决食用暗纹东方鲀的中毒风险迫在眉睫。
针对暗纹东方鲀毒性的问题，目前出现了通过人工繁育、淡水养殖、无毒饵料投喂等养殖措施实现了对暗纹东方鲀的控毒养殖，这使得家化的暗纹东方鲀毒素含量得到了显著的降低。但即使这样，暗纹东方鲀还是存在一定毒性，仍存在一定危险。
发明内容
发明目的：本发明为了解决以上问题，在对暗纹东方鲀控毒的基础上，对其培育方法进行改进，从而实现了无毒暗纹东方鲀的养殖。
技术方案：一种无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其特征包括以下三方面：
a.基础群体建立：首先将控毒后的暗纹东方鲀群体，养殖在淡水条件下养殖，并投喂不含毒素的河豚饲料，在繁育前三个月的时间转入低浓度海水中养殖，并给予弱水流刺激，以使其生理功能正常发育，但又不产生河豚毒素，达到可繁殖条件；
b.家系繁殖：挑选生长速度快、形态特征优良的暗纹东方鲀成鱼作为亲鱼，在低浓度海水中驯养并人工繁殖，建立多个家系，利用小鼠生物分析法检测家化暗纹东方鲀群体体内河豚毒素含量，挑选毒素较低的家系作为下一代繁殖的亲本，以此类推进行家系育种；
c.幼苗及成鱼培育：在幼苗和成鱼阶段均采用淡水养殖环境，投喂不含毒素的河豚饲料，在养殖过程中加强无毒化鉴别。
作为优化，所述步骤a中所述暗纹东方鲀需在低浓度海水中养殖3个月使其生理功能正常发育，并投喂无毒河豚饲料。
所述步骤a及c中投喂的不含毒素的河豚饲料，其由以下成分组成：
鱼粉：55％～75％
淀粉：10％～20％
螺旋藻：1.5～3％
L蛋氨酸和/或L赖氨酸：0.1％～0.5％
其余为辅料。
所述辅料是谷元粉、大豆、维生素A、B1、B2、B6、C、D、E、大黄、黄岑、板蓝根、金银花中的一种或几种。
所述步骤c中，幼苗和成鱼均养殖在水源为300～800米的深井水的淡水环境下；投喂不含毒素的河豚饲料，幼苗每天投喂3～6次，投喂率为6％～10％，成鱼每天投喂2～4次，投饵率为1～4％。
所述步骤b中小鼠生物分析法的具体内容包括，取繁育的暗纹东方鲀的血、肝脏、鱼肉、卵巢样品，分别经口灌输给予小鼠，观察14天，观察动物反应状况以确定各组织河豚毒素含量情况。
本发明所揭示的一种无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，由于暗纹东方鲀属江海洄游性鱼类，在自然条件下每年3-6月亲本结群由海入江河产卵，产卵后返回大海，而幼鱼则继续在江河中生活，至秋季或下年春季入海，在性腺快成熟时参加溯河繁殖；在暗纹东方鲀的整个生长繁殖过程中，幼鱼及生长时期产生河豚毒素较少，产生河豚毒素主要在繁殖时期，由于环境海水盐度较高及水流刺激较大，由于海水高盐度及水流刺激会使产生河豚毒素的相关酶激活，从而产生大量的河豚毒素，且海水中的食物也会是河豚毒素的来源，因此在我们人工养殖过程中，可通过控制繁殖期水体盐度及水流使其即可生存又可抑制产生河豚毒素的相关酶基因的表达，并控制食物饵料来达到抑制河豚毒素的产生，如此通过4代以上的控毒繁育来抑制产生河豚毒素的基因表达，由于“用进废退”最终达到产生相关毒素的基因衰退，从而培育出无毒河豚。
有益效果：本发明通过在控制暗纹东方鲀毒素产生的基础上，采用家系育种的方法，结合小鼠生物分析检测方法，将毒性逐渐降低的趋势延续下去，直至毒性消失。在挑选毒性减少亲鱼的同时选育生长性状优良的群体，在控制无毒的基础上选育出生长速度快、抗逆性强的暗纹东方鲀良种。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述。
本发明所揭示的一种无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，以控毒养殖的暗纹东方鲀为基础群体，在繁殖季节通过低浓度海水及微水流刺激使其性腺发育良好，性成熟后挑选生长速度快、形态特征优良的暗纹东方鲀成鱼作为亲鱼，在低浓度海水中驯养并人工繁殖，建立多个家系，苗种经过开口饵料及养殖环境的控制，养殖至性成熟后采用小鼠生物分析检测法进行毒性鉴定，然后挑选生长快、抗病强的个体繁殖下一代，如此经过4代以上家系繁育培育出无毒优良后代。
一种无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其具体步骤为：
基础群体建立：指将控毒的暗纹东方鲀通过在淡水条件下养殖，投喂无毒河豚饲料，有效控制其毒素含量产生，经过人工养殖后形成可繁殖后代的亲本。
毒素控制：通过控制养殖水体盐度值、饵料成分从而防止毒素的产生，具体为在养殖暗纹东方鲀的过程中采用淡水养殖，保持盐度为零，采用不含毒素的暗纹东方鲀配合饲料喂养，杜绝外源刺激产生河豚毒素。
繁殖：在繁殖季节通过低浓度海水及微水流刺激使其性腺发育良好，由于暗纹东方鲀属江海洄游性鱼类，12月～次年2月属于繁殖季节，可在12月将淡水中养殖的暗纹东方鲀转入浓度为xx的低浓度海水中进行海水养殖，并控制水流速度刺激其性腺发育，达到可人工繁殖条件。
亲鱼选择及繁殖：将性发育成熟的暗纹东方鲀通过小鼠生物分析检测法进行毒素鉴定后选取毒素较低、且生长快、抗逆性强的个体繁殖后代，以选育出无毒、生长速度快、抗逆性强的可稳定遗传特征，在人工繁殖过程中，经过温控盐度等生理生态学方法处理，促进性腺发育成熟，每批受精卵都留一部分用于小鼠无毒化鉴定，验证该批受精卵不带毒素。
苗种，幼苗及成鱼培育：苗种用纯种淡水臂尾轮虫作为开口饵料，在幼苗和成鱼阶段均养殖在水源为300～800米的深井水的淡水环境下，投喂不含毒素的河豚饲料，且幼苗每天投喂3～6次，投喂率为6％～10％，成鱼每天投喂2～4次，投饵率为1～4％，在养殖过程中加强无毒化鉴别。
上述步骤中，不含毒素的河豚饲料，其由以下成分组成：鱼粉：55％～75％；淀粉：10％～20％；螺旋藻：1.5～3％；L-蛋氨酸和/或L-赖氨酸：0.1％～0.5％；其余为辅料，所述辅料是谷元粉、大豆、维生素A、B1、B2、B6、C、D、E、大黄、黄岑、板蓝根、金银花中的一种或几种。
上述步骤中，小鼠生物分析检测法是养殖至性成熟后，取雄鱼血液、肝、肌肉、精巢样品，取雌鱼血液、肝、肌肉、卵巢样品，然后经口灌输给予小鼠做急性毒性试验，观察14天，观察动物反应状况以确定各组织河豚毒素含量情况。
一种无毒暗纹东方鲀良种培育方法所述挑选生长快、抗病强的个体繁殖下一代，如此经过4代以上家系繁育培育出无毒优良后代是指在经控毒养殖后繁殖的后代群体中挑选出无毒、生长速度快、抗病强的个体进行交配繁殖，产生下一代F2代，并检测F2代的河豚毒素，如此在F2代中挑选出无毒、生长快、抗病强的同一对亲本的后代群体作为亲本，繁殖下一代F3代，然后繁殖第四代F4及第五代F5，经过4代以上的家系选育后可得到无毒的暗纹东方鲀优良品种，具体毒性参数参照表1，生产速度参照表2。
表1 各代暗纹东方鲀选育后各组织毒性检测
注：按照国际上通用的对河豚毒素强弱的分类法，体内各器官组织毒素含量2.2μg/g以下可视为无毒，2.2～22μg/g为弱毒，22～220μg/g为强毒，220μg/g以上为剧毒。
表2 暗纹东方鲀选育第五代F5和第四代F4和对照组F0生长比较
本发明是在对暗纹东方鲀控毒的基础上经过家系选育最终得到完全无毒的暗纹东方鲀，通过人工选育繁殖，每代暗纹东方鲀都比上一代的河豚毒素低，以此经过4代以上的选育已完全无毒，且在选育无毒暗纹东方鲀的同时进行了家系选育，得到生长、抗病强的可遗传性状。
Claims (5)
1.一种无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其特点是包括以下步骤：
a.基础群体建立：首先将控毒后的暗纹东方鲀群体，在淡水条件下养殖，并投喂不含毒素的河豚饲料，在繁育前三个月的时间转入低浓度海水中养殖3个月，并给予水流刺激，以使其生理功能正常发育，达到可繁殖条件；
b.家系繁殖：挑选生长速度快、形态特征优良的暗纹东方鲀成鱼作为亲鱼，在低浓度海水中驯养并人工繁殖，建立多个家系，利用小鼠生物分析法检测家化暗纹东方鲀群体体内河豚毒素含量，挑选毒素含量小的家系作为下一代繁殖的亲本，以此类推进行家系育种；
c.幼苗及成鱼培育：在幼苗和成鱼阶段均采用淡水养殖环境，投喂不含毒素的河豚饲料，并在养殖过程中加强无毒化鉴别。
2.根据权利要求1所述的无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其特征是：所述步骤a及c中投喂的不含毒素的河豚饲料，其由以下成分组成：
鱼粉：55％～75％
淀粉：10％～20％
螺旋藻：1.5～3％
L-蛋氨酸和/或L-赖氨酸：0.1％～0.5％
其余为辅料。
3.根据权利要求2所述的无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其特征是：所述辅料是谷元粉、大豆、维生素A、B1、B2、B6、C、D、E、大黄、黄岑、板蓝根、金银花中的一种或几种。
4.根据权利要求所述1所述的无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其特征是：所述步骤c中，幼苗和成鱼均养殖在水源为300～800米的深井水的淡水环境下；投喂不含毒素的河豚饲料，幼苗每天投喂3～6次，投喂率为6％～10％，成鱼每天投喂2～4次，投饵率为1～4％。
5.根据权利要求1无毒暗纹东方鲀良种的培育方法，其特征是：所述步骤b中小鼠生物分析法的具体内容包括，取繁育的暗纹东方鲀的血、肝脏、鱼肉、卵巢样品，分别经口灌输给予小鼠，观察14天，观察动物反应状况以确定各组织河豚毒素含量情况。
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