CN104698104B - 一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法 - Google Patents
一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种液相色谱－质谱联用技术分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法。其特征在于：它包括如下步骤：1)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱分离；2)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的液相色谱-质谱分离；3)在分析油脂样品(富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品)时，采用的液相色谱分离条件为步骤2)的方法，根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析。该方法具有操作简单，分析时间短的优点，可实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体的高效、高通量的检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种液相色谱－质谱联用技术分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法及其在富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品分析中的应用。
技术背景
长链多不饱和脂肪酸(Long-chainpolyunsaturatedfattyacids，LC-PUFAs)是指含有两个或两个以上双键且碳链长度为18-22个碳原子的直链脂肪酸，根据第一个不饱和键位置不同，PUFAs可分为ω-3、ω-6、ω-7、ω-9等系列。ω-3系多不饱和脂肪酸主要包括α-亚麻酸(α-Linolenicacid，α-Ln)、二十碳五烯酸(Eicosapentaenoicacid，EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoicacid，DHA)；ω-6系多不饱和脂肪酸主要有亚油酸(Leinoleicacid，L)、γ-亚麻酸(Linolenicacid，γ-Ln)和花生四烯酸(ARA)。多不饱和脂肪酸与人体健康息息相关，尤其是DHA,EPA,ARA等长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)，在维护细胞膜的结构和功能，预防和治疗心血管疾病，动脉硬化，癌症，肥胖等疾病方面具有明显效果。而甘油三酯(Triacylglycerols，TAGs)作为脂肪酸最主要的存在形式，由1个甘油分子和3个脂肪酸分子脱水缩合而成。脂肪酸在甘油三酯中甘油骨架上的分布位置有两类：sn-1,3(α)和sn-2(β)。长链多不饱和脂肪酸在TAGs中的分布位置决定着油脂的吸收代谢情况。例如，二十二碳五烯酸(EPA)及二十二碳六烯酸(DHA)处于sn-2位比处于sn-1,3位的吸收利用要有效得多。因此，对LC-PUFAsTAGs中脂肪酸酰基位置进行剖析对于揭示LC-PUFAs的营养学特性有着重要的意义。
HPLC法不受热稳定性和挥发性的限制，已广泛用于油脂分析中。迄今为止，非水反相液相色谱和正相银离子液相色谱是分离油脂中甘油三酯组成的两种主要方法。甘油三酯在非水反相液相色谱(商品化的C18柱)中的保留取决于当量碳数(equivalentcarbonnumber,ECN)，即甘油三酯中酰基链总碳数(CNs)减去两倍的双键数(DBs)。但非水反相液相色谱很难分离具有相同ECN值的甘油三酯；对甘油三酯位置异构体的分离选择性也较差。银离子正相液相色谱利用银离子(Ag+)与甘油三酯分子中不饱和脂肪酸双键的π络合吸附作用来提高对甘油三酯化合物的分离选择性。甘油三酯在银离子色谱中的保留取决于甘油三酯的双键数目、双键位置等因素。但双键数越多，TAG在银离子色谱柱上的保留时间越长甚至根本不能被洗脱；且即使将多根银离子色谱柱串联使用，仍无法实现双键数大于7的LC-PUFATAG位置异构体的分离。
LC-PUFAsTAGs碳链长，双键数目多，结构复杂，同时存在大量的同分异构体和位置异构体，其在色谱柱上的保留行为与低碳链数、低饱和度的甘油三酯有所不同，传统的分析低碳链数、低饱和度的甘油三酯的液相色谱方法并不适合用于LC-PUFAsTAGs的分析。因此建立一种液相色谱－质谱联用技术分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法，该方法操作简单，能够实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的高效、高通量的检测。
为实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法，使用的色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH色谱柱，该色谱柱具有“槽式结构”和疏水相互作用，可以实现单柱液相色谱分离长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体，其特征在于：它包括如下步骤：
1)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱分离：
长链多不饱和脂肪酸甘油三酯标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用相应的流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％(v/v)乙腈，10％异丙醇(v/v)；液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×150mmi.d.)色谱柱，进样体积为10μL；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-30min(不含0min)，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)，保持1min；31-31.1min(不含31min)，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；31.1–35min(不含31.1min)，90％(v/v)A(30％B，v/v)；流速1mL/min；在该条件下同时实现8种双键数不同、当量碳数相同和不同的甘油三酯标准品的分离；
2)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的液相色谱-质谱分离：
长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％(v/v)乙腈，10％(v/v)异丙醇；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×250mmi.d.)色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；61.1–65min，90％(v/v)A(10％B，v/v)；流速1mL/min；在该条件下实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体EpEpP/EpPEp标准品的分离；
3)在分析油脂样品(富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品)时，包括如下步骤：
(1)富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，采用步骤2)的方法，测试富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品，得到富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱数据；
(2)根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析；
其中：
a)所得的数据为富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中甘油三酯的谱图和谱峰数据；
b)所述的富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品包括海豹油、鱼油或微生物油等。
所述步骤3)包括如下具体步骤：富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离检测：油脂样品用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×250mmi.d.)色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；61.1–65min，90％(v/v)A(10％B，v/v)；流速1mL/min；柱温35℃；在该条件下实现富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离，得到富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱数据；进一步根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析。
对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样本进行液相色谱-质谱数据采集，液相色谱-质谱分析得到油脂样品中甘油三酯的定性数据。其中，液相色谱分析条件为美国Agilent公司Agilent1200液相色谱仪，配有美国AppliedBiosystems公司4000Q-Trap质谱检测器。质谱APCI(atmosphericpressurechemicalionization)模式：正离子；温度(Temperature,TEM)：450℃；扫描模式：EMS-EPI；扫描速度：1000u/s；离子源气体1(IonSourceGas1,GS1)：344.75kPa；去簇电压(declusteringpotential,DP)：80V；碰撞能量(collisionenergy,CE)：35V和50V；碰撞电压摆幅(CollisionEnergySpread,CES)：5V；碰撞室输出电压(CollisionCellExitProtential，CXP)：17V；质量范围：450-1100m/z。油脂样品用正己烷稀释到5mg/mL，使用前用初始流动相稀释到需要浓度。
解决常规液相色谱(常规C18色谱柱和银离子液相色谱柱)无法实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体分离的问题；提出采用具有“槽式结构”和疏水相互作用的稠环芳烃(PAH)色谱柱分析油脂中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体的液相色谱分析方法。同时验证了长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体在二级质谱中的碎裂机理，即丢失sn-2位脂肪酸所产生的甘二酯碎片离子丰度比丢失sn-1/3位脂肪酸所产生的甘二酯离子丰度要低，从而鉴定出sn-2位的酰基脂肪酸，并利用所建立的方法对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行分离鉴定。
本发明的有益效果是：采用具有“槽式结构”和疏水相互作用的稠环芳烃(PAH)色谱柱实现了长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体的快速分离(具有相同酰基碳数的甘油三酯在该色谱柱上的保留取决于甘油三酯的双键数，双键数目越多，保留越弱，出峰时间越快，因此该色谱柱非常适合用于长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的快速分离；此外由于该色谱柱同时具有“槽式结构”和疏水相互作用，因此还成功实现了长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的分离)；并结合质谱检测，对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂进行定性分析。本发明的方法操作简单，能够实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的高效、高通量的检测，解决长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体的液相色谱分离中分离难的问题，对于揭示长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的营养学特性，拓展富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯油脂的应用范围有着重要的意义。
附图说明
图1是本发明分离双键数不同的8种甘油三酯标准品(OOO、LLP、LLO、LLL、LnLnLn、ArArAr、EpEpEp、DhDhDh)的液相色谱图。
图2是本发明分离长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体标准品(EpEpP/EpPEp)的液相色谱图。
图3是本发明长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体对的二级质谱图。
图3中：a为EpPEp的二级质谱图，b为EpEpP的二级质谱图。
图4是本发明海豹油样品的液相色谱图。
脂肪酸缩写说明：TAGs的缩写是由三个分别对应甘油骨架上的脂肪酸的缩写字母组成的。本发明中用到的缩写如下——P：C16:0，棕榈酸；Ln：C18:3，亚麻酸；L：C18:2，亚油酸；O：C18:1，油酸；Ar：C20:4，二十碳四烯酸；Ep：C20:5，二十碳五烯酸；Dh：C22:6，二十二碳六烯酸。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法，使用的色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH色谱柱，该色谱柱具有“槽式结构”和疏水相互作用，可以实现单柱液相色谱分离长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体，它包括如下步骤：
1)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱分离：
长链多不饱和脂肪酸甘油三酯标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用相应的流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×150mmi.d.)色谱柱，进样体积为10μL；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-30min(不含0min)，90％-30％A(v/v)(10％-70％B，v/v)，保持1min；31-31.1min(不含31min)，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；31.1–35min(不含31.1min)，90％(v/v)A(30％B，v/v)；流速1mL/min；在该条件下同时实现8种双键数不同、当量碳数相同和不同的甘油三酯标准品的分离；
2)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的液相色谱-质谱分离：
长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×250mmi.d.)色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；61.1–65min，90％(v/v)A(10％B，v/v)；流速1mL/min；在该条件下实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体EpEpP/EpPEp标准品的分离；
3)在分析油脂样品(富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品)时，包括如下步骤：
(1)油脂样品用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，采用步骤2)的方法，测试富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品，得到富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱数据；
(2)根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析；
其中：
a)所得的数据为富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中甘油三酯的谱图和谱峰数据；
b)所述的富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品包括海豹油、鱼油或微生物油等。
实施例1：
1)油脂样品中双键数不同的8种甘油三酯的分离检测
油脂样品中双键数不同的8种甘油三酯的分离检测：长链多不饱和脂肪酸甘油三酯标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用相应的流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×150mmi.d.)色谱柱，进样体积为10μL；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-30min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min；31.-31.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；31.1–35min，90％(v/v)A(30％B，v/v)；流速1mL/min；柱温35℃；在该条件下同时实现8种双键数不同、当量碳数相同和不同的甘油三酯标准品的分离。图1是分离油脂样品中双键数不同的8种甘油三酯(OOO、LLP、LLO、LLL、LnLnLn、ArArAr、EpEpEp、DhDhDh)的液相色谱图，图中总分离图下面不同的行：C52，C54，C60和C66表示将这8种甘油三酯中具有相同酰基总碳数的组分按其碳数为C52，C54，C60和C66分别进行提取的提取色谱图。
2)油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的分离检测
油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的分离检测：长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×250mmi.d.)色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；61.1–65min，90％(v/v)A(10％B，v/v)；流速1mL/min；柱温35℃；在该条件下实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的分离。图2是分离油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体对(EpEpP/EpPEp)的液相色谱图。
在长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体对(EpEpP/EpPEp)的二级质谱图中，由于空间位阻效应，sn-2位的脂肪酸比sn-1,3位的更难丢失，因此丢失sn-2位脂肪酸所产生的甘二酯碎片离子丰度比丢失sn-1,3位脂肪酸所产生的甘二酯离子丰度要低，因此根据其形成甘二酯碎片离子的丰度比值可鉴定长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的酰基位置异构体。图3为长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体对(EpEpP/EpPEp)的二级质谱图。
3)海豹油样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离检测
海豹油样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离检测：海豹油用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×250mmi.d.)色谱柱。采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；61.1–65min，90％(v/v)A(10％B，v/v)；流速1mL/min；柱温35℃；在该条件下实现海豹油样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离。图4是海豹油样品的色谱分离图。进一步根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析。
实施例2：
步骤1)同实施例1；
步骤2)同实施例1；
3)鱼油样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离检测：
鱼油样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离检测：鱼油用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％乙腈，10％异丙醇(v/v)；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦ZorbaxEclipsePlusPAH(4.6mm×250mmi.d.)色谱柱。采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A(10％-70％B，v/v)；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A(70-10％B，v/v)；61.1–65min，90％(v/v)A(10％B，v/v)；流速1mL/min；柱温35℃；在该条件下实现海豹油样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离。进一步根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析。
Claims (2)
1.一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
1)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱分离：
长链多不饱和脂肪酸甘油三酯标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％(v/v)乙腈，10％(v/v)异丙醇；液相色谱柱为安捷伦4.6mm×150mmi.d.ZorbaxEclipsePlusPAH色谱柱，进样体积为10μL；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-30min，90％-30％(v/v)A、10％-70％(v/v)B，保持1min；31-31.1min，30-90％(v/v)A、70-10％(v/v)B；31.1–35min，90％(v/v)A、30％(v/v)B；流速1mL/min；在该条件下同时实现8种双键数不同、当量碳数相同和不同的甘油三酯标准品的分离；
2)长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体的液相色谱-质谱分离：
长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体标准品用异丙醇溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.01mg/mL，此处流动相为：90％(v/v)乙腈，10％(v/v)异丙醇；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦4.6mm×250mmi.d.ZorbaxEclipsePlusPAH色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A、10％-70％(v/v)B；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A、70-10％(v/v)B；61.1–65min，90％(v/v)A、10％(v/v)B；流速1mL/min；在该条件下实现长链多不饱和脂肪酸甘油三酯酰基位置异构体EpEpP/EpPEp标准品的分离；
3)在分析富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品时，包括如下步骤：
(1)富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％(v/v)乙腈，10％(v/v)异丙醇；进样体积为10μL；采用步骤2)的方法，测试富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品，得到富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱数据；
(2)根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析；
其中：
a)所得的数据为富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中甘油三酯的谱图和谱峰数据；
b)所述的富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品包括海豹油、鱼油或微生物油。
2.根据权利要求1所述的一种液相色谱－质谱联用分析长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的方法，其特征在于：所述步骤3)包括如下具体步骤：富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离检测：油脂样品用丙酮溶解，配成1mg/mL的溶液，进样前用流动相稀释成0.05mg/mL，此处流动相为：90％(v/v)乙腈，10％(v/v)异丙醇；进样体积为10μL，液相色谱柱为安捷伦4.6mm×250mmi.d.ZorbaxEclipsePlusPAH色谱柱；采用梯度洗脱，流动相为A：乙腈、B：异丙醇；梯度洗脱：0-60min，90％-30％(v/v)A、10％-70％(v/v)B；保持1min，61.0-61.1min，30-90％(v/v)A，70-10％(v/v)B；61.1–65min，90％(v/v)A，10％(v/v)B；流速1mL/min；柱温35℃；在该条件下实现富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的分离，得到富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的液相色谱-质谱数据；进一步根据液相色谱－质谱数据对富含长链多不饱和脂肪酸甘油三酯的油脂样品中的长链多不饱和脂肪酸甘油三酯及其酰基位置异构体进行鉴定和定性分析。
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