CN104651263A - 一种提高质粒dna含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基 - Google Patents

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崔强军
张政
刘新亮
余炼
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Abstract

本发明公开了一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，涉及生物医学领域，每升含有下列配比组分：酵母粉5g、蛋白胨或牛肉膏5g、氯化钠9g、甘油10ml、乳糖5g、柠檬酸1g、磷酸氢二钠10g、透明质酸钠0.2g、硫酸铵3g、氯化钙12g，在原本的基础LB培养基的基础上减少蛋白胨或牛肉膏的含量，9g的氯化钠加入到1L中，得到与细胞等渗的培养液，氯化钙减少细菌的沉降，帮助阻止细菌絮凝，相互抑制生长，在培养基中通入部分CO2营造稍厌氧环境，增加大肠杆菌耐受性，透明质酸和硫酸铵的加入调节细胞膜通透性，维持水电解质的扩散和运转，提供细胞代谢微环境。

Description

一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基
技术领域
本发明涉及生物医学领域，特别是涉及一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基。
背景技术
随着近些年来将重组DNA技术和基因组测序的发展，基因治疗和DNA疫苗的研究和使用已经取得了很多进展，其中PCR技术已经投入到了实际的医疗检测中。在研究过程中，携带有外源基因的质粒DNA为基因治疗和DNA疫苗研究开发中使用的主要药物载体，大量质粒DNA的制备需要大量的培养大肠杆菌来实现制备目的，大肠杆菌的大量繁殖需要有好的培养基，现有的培养基不能有效的提高大肠杆菌的存活率和生长速度。
发明内容
为克服现有技术上的不足，本发明目的是提供一种加厚耐用橡胶膜片的制造方法。
为实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：
一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，每升含有下列配比组分：
加去离子水稀释定容至1L，
所述培养基搅拌溶解后，通入少量CO2进入溶液中。
上述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其中，将所述培养基置于高压灭菌锅中121℃,30min流通蒸汽灭菌。
上述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其中，所述培养基灭菌后，自然放冷至60～70℃时，加入5％的乙醇20ml，混匀后分装。
上述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其中，在所述分装培养基中，根据需要可加入4-甲基伞酮-β-D-葡萄糖甘酸。
本发明的有益效果：在原本的基础LB培养基的基础上减少蛋白胨或牛肉膏的含量，9g的氯化钠加入到1L中，得到与细胞等渗的培养液，加入磷酸氢二钠，磷酸氢二钠可以分解成葡萄糖和苷元，并能够帮助细胞修复，保护细胞，在大肠杆菌复制繁殖时，补充能量，增加细菌成活率，甘油的加入增加培养基的流动性，柠檬酸的加入抑制革兰氏阳性菌的生长，增加了培养基的选择性，保证了大肠杆菌的纯度，透明质酸和硫酸铵的加入调节细胞膜通透性，维持水电解质的扩散和运转，提供细胞代谢微环境，氯化钙减少细菌的沉降，帮助阻止细菌絮凝，相互抑制生长，在培养基中通入部分CO2营造稍厌氧环境，增加大肠杆菌耐受性，灭菌后加入5％的乙醇20ml，增加培养基的抗微生物能力，在移动分装培养基时可以短时间内不置于无菌环境下操作，减少污染，加入4-甲基伞酮-β-D-葡萄糖甘酸，经大肠杆菌分解后成4-甲基伞酮，有荧光效应。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
实施例1：
一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，每升含有下列配比组分：
加去离子水稀释定容至1L，
所述培养基搅拌溶解后，通入少量CO2进入溶液中。
上述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其中，将所述培养基置于高压灭菌锅中121℃,30min流通蒸汽灭菌。
上述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其中，所述培养基灭菌后，自然放冷至60～70℃时，加入5％的乙醇20ml，混匀后分装。
上述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其中，在所述分装培养基中，根据需要可加入4-甲基伞酮-β-D-葡萄糖甘酸。在原本的基础LB培养基的基础上减少蛋白胨或牛肉膏的含量，9g的氯化钠加入到1L中，得到与细胞等渗的培养液，加入磷酸氢二钠，磷酸氢二钠可以分解成葡萄糖和苷元，并能够帮助细胞修复，保护细胞，在大肠杆菌复制繁殖时，补充能量，增加细菌成活率，甘油的加入增加培养基的流动性，柠檬酸的加入抑制革兰氏阳性菌的生长，增加了培养基的选择性，保证了大肠杆菌的纯度，透明质酸和硫酸铵的加入调节细胞膜通透性，维持水电解质的扩散和运转，提供细胞代谢微环境，氯化钙减少细菌的沉降，帮助阻止细菌絮凝，相互抑制生长，在培养基中通入部分CO2营造稍厌氧环境，增加大肠杆菌耐受性，灭菌后加入5％的乙醇 20ml，增加培养基的抗微生物能力，在移动分装培养基时可以短时间内不置于无菌环境下操作，减少污染，加入4-甲基伞酮-β-D-葡萄糖甘酸，经大肠杆菌分解后成4-甲基伞酮，有荧光效应。
实施例2：其余与所述实施例1相同，不同之处在于，将实施例1中制得培养基，选用大肠杆菌菌种DH5α，在37℃摇床中摇菌。
实施例3：其余与所述实施例2相同，不同之处在于，培养基选用酵母粉5g、蛋白胨或牛肉膏10g、氯化钠10g这种原始的LB培养基，进行大肠杆菌的摇菌，将实施例2和3进行OD600值比较，实施例2达到OD600＝1.0～2.0的时间更快。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (4)

1.一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其特征在于，每升含有下列配比组分：
加去离子水稀释定容至1L，
所述培养基搅拌溶解后，通入少量CO2进入溶液中。
2.根据权利要求1所述一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其特征在于，将所述培养基置于高压灭菌锅中121℃,30min流通蒸汽灭菌。
3.根据权利要求2所述的一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其特征在于，所述培养基灭菌后，自然放冷至60～70℃时，加入5％的乙醇20ml，混匀后分装。
4.根据权利要求3所述的一种提高质粒DNA含量在大肠杆菌中菌比含量的培养基，其特征在于，在所述分装培养基中，根据需要可加入4-甲基伞酮-β-D-葡萄糖甘酸。
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