CN104628842A - 重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白及制备方法 - Google Patents

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CN104628842A CN201410700412.6A CN201410700412A CN104628842A CN 104628842 A CN104628842 A CN 104628842A CN 201410700412 A CN201410700412 A CN 201410700412A CN 104628842 A CN104628842 A CN 104628842A
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王秀利
孙赛红
马普
姜志强
刘洋
仇雪梅
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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Abstract

本发明公开一种重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2（IRF2）蛋白及制备方法，提取新鲜红鳍东方鲀肾脏总RNA，并反转录进行第一链的cDNA的合成；以所得到的第一链的cDNA为模板、设计引物扩增该基因的蛋白编码序列并与pMD19T载体连接得重组质粒，经双酶切后再与表达载体pET-32a(+)连接，获得重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中；通过IPTG诱导实现了重组蛋白的可溶性表达。该表达质粒表达的融合蛋白带有组氨酸标签，将细胞破碎后取上清纯化，避免了样品的变性和复性，不但操作简单，更主要的是蛋白结构不受破坏；重组蛋白纯度好、得率高且不易降解，适应于工业化生产。

Description

重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白及制备方法
技术领域
本发明属于生物基因工程技术领域，尤其涉及一种操作简便、成本低廉、重组蛋白纯度好、得率高、适应于工业化生产的红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法。
背景技术
红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）是一种重要的近海经济鱼类，由于其肉质细腻、味道鲜美深受人们的喜爱。在红鳍东方鲀的生殖腺和肝脏等内脏中产生的河豚毒素，其高活性和高特异性的生物特征具有潜在的医药开发价值，在临床上具有广阔的前景。然而，水环境中存在的大量细菌和病毒使鱼类的皮肤和黏膜不断受到侵袭，这些病原微生物侵入鱼体后会使鱼体发生病变甚至死亡，给红鳍东方鲀的大规模养殖造成严重损失。细胞因子是脊椎动物机体免疫系统调节免疫应答的一部分，在免疫系统的相关研究中占据重要地位。干扰素调节因子（IRFs）是一类结构上保守的转录因子家族，所有IRF在N端均包含一个由115个氨基酸残基构成的具有螺旋-转角-螺旋的DNA结合域（DNA binding domain, DBD），IRF通过DBD结合到特定的DNA基序上。IRF在干扰素的转录调控、免疫细胞（如树突状细胞、NK细胞和T细胞）的发育、细胞因子的信号转导及抗肿瘤方面起到非常重要的作用。然而，从红鳍东方鲀中直接提取该蛋白的操作复杂、成本高、产量少，不能大规模产业化生产。
发明内容
本发明提供一种操作简便、成本低廉、重组蛋白纯度好、得率高、适应于产业化生产的红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法。
本发明的技术解决方案是：一种重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO：1 所示，氨基酸序列号如SEQ ID NO：2 所示。
 一种上述重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：
a. 提取红鳍东方鲀肾脏总RNA，并反转录进行第一链的cDNA的合成；
b. 以所得到的第一链的cDNA为模板、以具有NcoⅠ和XhoⅠ两个酶切位点的RT-PCR反应引物进行RT-PCR反应；所述RT-PCR反应引物序列如下：
上游引物：5’CATGCCATGGGCATGCCCGCAGAAAGAATGA 3’；
下游引物：5’CCGCTCGAGGGAGGAAGTGACATCAGAGGTC 3’；
c．电泳回收RT-PCR产物与克隆载体pMD19T连接并转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α，在含氨苄青霉素的LB固体培养基上培养，通过蓝白斑筛选阳性克隆，选择957bp大小的条带进行回收；
d．用限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ分别双酶切c步骤所回收的产物和表达载体pET-32a(+)，将得到的两种目的基因片断用DNA连接酶连接，转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α进行培养并提取重组表达质粒；
e．将所提取的重组表达质粒转化入大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）内，挑取单菌落接种于含有氨苄青霉素的5ml LB液体培养基过夜培养得到菌种；
f. 将所收集的菌种进行扩大培养，经IPTG诱导后收集菌体；
g. 将菌体破碎、裂解、纯化，收集纯化液。
所述RT-PCR反应条件为：94℃预变性5分钟后进行94℃变性30秒、57℃复性30秒、72℃延伸30秒的30个循环的扩增，72℃延伸7分钟后保存于4℃。
所述f步骤是将所收集的菌种按1：100的比例接种于Amp LB液体培养基，37℃ 200转/分摇菌2.5小时，至OD600为0.4，所摇菌液加诱导剂IPTG至终浓度为0.5mM，37℃摇菌6小时，收集菌体；
所述g步骤是用磷酸盐缓冲液（PBS）重悬f步骤所得菌体，用超声波破碎细菌并将细菌裂解液12000转，4℃离心20分钟，将上清上样于层析柱，用平衡液洗涤后加入300mM的咪唑洗脱收集洗脱液。
本发明根据克隆得到的红鳍东方鲀干扰素调节因子2基因的cDNA全长序列设计引物扩增该基因的蛋白编码区并与pMD19T载体连接得重组质粒，经双酶切后再与表达载体pET-32a(+)连接，获重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21（DE3）中；通过IPTG诱导实现了重组蛋白的可溶性表达。该表达质粒表达的融合蛋白带有组氨酸标签，将细胞破碎后取上清纯化，避免了样品的变性和复性，不但操作简单，降低了制作成本，更主要的是蛋白结构不受破坏；重组蛋白纯度好、得率高且不易降解，适应于工业化生产，为进一步研究红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的功能奠定基础。
附图说明
图1 本发明实施例红鳍东方鲀肾脏总RNA的琼脂糖凝胶电泳分析图。
图2 本发明实施例红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白目的基因的琼脂糖凝胶电泳分析图。
图3 本发明实施例重组表达质粒的双酶切电泳鉴定图。
图4 本发明实施例纯化柱洗脱组分的SDS-PAGE分析图。
图5本发明实施例重组表达质粒表达产物的SDS-PAGE分析图。
图6本发明实施例重组表达质粒诱导表达的蛋白印迹分析图。
具体实施方式
实施例：
a. 以TRIzol Reagent提取新鲜红鳍东方鲀肾脏总RNA并反转录进行第一链的cDNA的合成，红鳍东方鲀总RNA的琼脂糖凝胶电泳分析图如图1所示，图中M：Maker DL2000； 1：红鳍东方鲀总RNA电泳条带。
b. 根据克隆获得的红鳍东方鲀干扰素调节因子2基因的蛋白编码区设计针对红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白编码序列的引物对，以上述第一链cDNA为模版进行PCR扩增，引物对的核苷酸序列为：
上游引物：5’CATGCCATGGGCATGCCCGCAGAAAGAATGA 3’
下游引物：5’CCGCTCGAGGGAGGAAGTGACATCAGAGGTC 3’
RT-PCR反应条件为：94℃预变性5分钟后进行94℃变性30秒，57℃复性30秒、72℃延伸30秒的30个循环的扩增，72℃延伸7分钟后保存于4℃。
引物对由上海生物工程有限公司合成，划线部分分别为NcoⅠ酶切位点和XhoI 酶切位点。目的基因的琼脂糖凝胶电泳分析图如图2所示，图中M：Maker DL2000；1：红鳍东方鲀干扰素调节因子2基因的RT-PCR产物。
c. 电泳回收RT-PCR产物与克隆载体pMD19T连接并转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α，在含氨苄青霉素的LB固体培养基上培养通过蓝白斑法筛选阳性克隆，选择957bp大小的条带进行回收；
d. 用限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ分别双酶切c步骤所回收的产物和表达载体pET-32a(+)，37℃作用2小时后，酶切产物用DNA胶回收试剂盒回收，pMD19T-TRF2质粒酶切产物和载体酶切产物按1：10的摩尔比混合，T4 DNA连接酶（Takara公司）16℃过夜连接，转化大肠杆菌感受态细胞DH5α于37℃过夜培养。提取重组表达质粒pET32a(+)-IRF2；用NcoⅠ和XhoⅠ对重组表达质粒双酶切鉴定，鉴定结果如图3所示图中M：Maker DL2000；1：IRF2基因； 2：重组质粒pET32a(+)-IRF2经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切产物； 3：重组质粒pET32a(+)-IRF2。测序结果表明，所测序列与拼接得到的红鳍东方鲀干扰素调节因子2编码序列一致，故初步确认所提取的重组表达质粒含有红鳍东方鲀干扰素调节因子2的编码序列。
e. 将所提取的重组表达质粒转化入大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）内，培养菌株得菌液，挑取单菌落接种5ml Amp LB液体培养基过夜培养，即得到菌种。
f. 将所收集的菌种按1：100的比例接种于Amp LB液体培养基，37℃200转/分摇菌2.5小时，至OD600为0.4，所摇菌液加诱导剂IPTG至终浓度为0.5mM，37℃摇菌6小时，收集菌体；
g．用ProteinIsoTM Ni-NTA Resin纯化融合蛋白，具体操作步骤是用PBS重悬f步骤所得菌体，用超声波破碎细菌并将细菌裂解液12000转，4℃离心20分钟。将上清上样于层析柱，用平衡液洗涤后加入300mM的咪唑洗脱，收集洗脱液。SDS-PAGE分析各收集液，其结果如图4所示：图中M：蛋白Marker；1：纯化蛋白部分。
实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册（New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2（IRF2）的鉴定：
1. SDS-PAGE电泳
配制12%的分离胶和5%的浓缩胶。将诱导前的样品和诱导后的样品各取100ml分别加入25ml 5×SDS loading buffer混匀，沸水煮10分钟，12000转/分离心10分钟，留取上清做SDS-PAGE。160 V恒压电泳1 h、考马斯亮蓝R250染色2小时、脱色液脱色。观察，在53.8kDa处有明显条带出现，如图5所示，1：pET32a(+)-IRF2在BL21（DE3）细胞中诱导后表达蛋白（箭头指示处）；2：pET32a(+)-IRF2在BL21（DE3）细胞中诱导前产物；3：pET32a(+)空载在BL21（DE3）细胞中诱导后产物；M：蛋白Marker。
2. Western Blot鉴定
当SDS-PAGE电泳即将结束时，从SDS-PAGE胶上切下需要转膜的部分，切6张滤纸和1张硝酸纤维素膜（NC）。把硝酸纤维素膜浸没于去离子水的水面中，滤纸浸没于转移缓冲液中，平衡5分钟。按纸、膜、胶、纸的顺序从阳极到阴极摆放正确，连接电源，注意正负极。100mA接通电流，电转移1.5h。转移结束后，切断电源，从上至下拆卸装置，逐一拆去各层。在NC膜上标记正反面。将NC膜用PBS漂洗3次，每次5分钟，换封闭液漂洗30分钟。PBS漂洗2次后用TBST Buffer漂洗15分钟。然后加Anti-His Antibody（Anti-His Antibody为1：1000稀释），孵育1小时。用PBS漂洗2次，每次10分钟。用1：2000稀释的HRP标记的羊抗鼠酶标二抗孵育30分钟。取出NC膜，用PBS漂洗3次，每次15分钟。将NC膜放在显色液中避光显色（一般1-5min）。观察结果如图6所示，M：蛋白Marker； 1：目的蛋白。
序列表
 
<110>  大连海洋大学
 
<120>  重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白及制备方法
 
<130>  2014
 
<160>  4    
 
<170>  PatentIn version 3.3
 
<210>  1
<211>  31
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  1
catgccatgg gcatgcccgc agaaagaatg a                                    31
 
 
<210>  2
<211>  31
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  2
ccgctcgagg gaggaagtga catcagaggt c                                    31
 
 
<210>  3
<211>  936
<212>  DNA
<213>  红鳍东方鲀干扰素调节因子2基因
 
<400>  3
atgcccgcag aaagaatgag gatgcgtccg tggttggagg agcagatcga ctcctgtcag     60
 
atacctggac tcaagtgggt taacaaggag aagaggatct tccagattcc ctggatgcat    120
 
gctgctcgtc atggctggga cttggagaaa gatgctccac tcttcatgag atgggccata    180
 
catacaggga aataccagcc tggtattgac catccagatc caaagacatg gaaagctaat    240
 
ttccgatgtg ctatgaacag cctgccagac attgaggagg tgaaggacaa aagcattaaa    300
 
aagggaagca atgccttcag agtgtacaag atgctgtcat cctttgaaag gagcctgaag    360
 
agaggaaaga agaagccaga caaagatggg aagcccaaaa gaaacaagga ggtagtttgt    420
 
cctgagagga ctaacatcga ttatcttgct gaaccgaata taacagataa ggaagtaagc    480
 
aaacaggaac cagtgattgg ctgcacttca gttgctaaca gcccagtgga tgaccatgtg    540
 
atcaccagtg atcagctgcc atttgtctgt cagaccattg aagtgaccac tgagaatgaa    600
 
gagcaggtta tagtttttgc agtaaatacg tatttctact gtttagacag tgacacagac    660
 
agcgacgtgg aggacagcaa aaaggatgtc agtgatgtct ggaagcagga ccacggcaca    720
 
tctctggtca cggttgctac ttgctctctt cctggcatgg ccaccttcat cagctcagga    780
 
aagtctcatt tcagagtgac gagcatgcag gacccaaccc ccctcattag ttatcatgct    840
 
gatacttgga tgcctaccta caaaaacttg tccagtcaca cccatgaggt gcgtgcaagt    900
 
gtcattatga agacctctga tgtcacttcc tcctga                              936
 
 
<210>  4
<211>  311
<212>  PRT
<213>  红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白
 
<400>  4
Met Pro Ala Glu Arg Met Arg Met Arg Pro Trp Leu Glu Glu Gln
1             5                10              15
Ile Asp Ser Cys Gln Ile Pro Gly Leu Lys Trp Val Asn Lys Glu
           20            25              30
Lys Arg Ile Phe Gln Ile Pro Trp Met His Ala Ala Arg His Gly
             35             40              45  
Trp Asp Leu Glu Lys Asp Ala Pro Leu Phe Met Arg Trp Ala Ile
             50              55               60
His Thr Gly Lys Tyr Gln Pro Gly Ile Asp His Pro Asp Pro Lys
            65              70             75
Thr Trp Lys Ala Asn Phe Arg Cys Ala Met Asn Ser Leu Pro Asp
             80               85              90
Ile Glu Glu Val Lys Asp Lys Ser Ile Lys Lys Gly Ser Asn Ala
            95            100             105
Phe Arg Val Tyr Lys Met Leu Ser Ser Phe Glu Arg Ser Leu Lys
            110              115             120
Arg Gly Lys Lys Lys Pro Asp Lys Asp Gly Lys Pro Lys Arg Asn
            125             130            135
Lys Glu Val Val Cys Pro Glu Arg Thr Asn Ile Asp Tyr Leu Ala
                   140                             145                               150
Glu Pro Asn Ile Thr Asp Lys Glu Val Ser Lys Gln Glu Pro Val
                           155                            160                                165
Gly Cys Thr Ser Val Ala Asn Ser Pro Val Asp Asp His Val Ile
                            170                               175                             180
Ile Thr Ser Asp Gln Leu Pro Phe Val Cys Gln Thr Ile Glu Val
                            185                                190                           195
Thr Thr Glu Asn Glu Glu Gln Val Ile Val Phe Ala Val Asn Thr
                              200                             205                              210
Tyr Phe Tyr Cys Leu Asp Ser Asp Thr Asp Ser Asp Val Glu Asp
                              215                              220                               225
Ser Lys Lys Asp Val Ser Asp Val Trp Lys Gln Asp His Gly Thr
                             230                            235                               240
Ser Leu Val Thr Val Ala Thr Cys Ser Leu Pro Gly Met Ala Thr
                              245                            250                                255
Phe Ile Ser Ser Gly Lys Ser His Phe Arg Val Thr Ser Met Gln
                            260                             265                                 270
Asp Pro Thr Pro Leu Ile Ser Tyr His Ala Asp Thr Trp Met Pro
                               275                           280                                 285
Thr Tyr Lys Asn Leu Ser Ser His Thr His Glu Val Arg Ala Ser
                             290                             295                              300
Val Ile Met Lys Thr Ser Asp Val Thr Ser Ser
         305  310

Claims (5)

1.一种重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO：3 所示，氨基酸序列号如SEQ ID NO：4 所示。
2.一种如权利要求1所述重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：
a. 提取红鳍东方鲀肾脏总RNA，并反转录进行第一链的cDNA的合成；
b. 以所得到的第一链的cDNA为模板、以具有NcoⅠ和XhoⅠ两个酶切位点的RT-PCR反应引物进行RT-PCR反应；所述RT-PCR反应引物序列如下：
上游引物：5’CATGCCATGGGCATGCCCGCAGAAAGAATGA 3’；
下游引物：5’CCGCTCGAGGGAGGAAGTGACATCAGAGGTC 3’；
c．电泳回收RT-PCR产物与克隆载体pMD19T连接并转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α，在含氨苄青霉素的LB固体培养基上培养，通过蓝白斑筛选阳性克隆，选择957bp大小的条带进行回收；
d．用限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ分别双酶切c步骤所回收的产物和表达载体pET-32a(+)，将得到的两种目的基因片断用DNA连接酶连接，转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α进行培养并提取重组表达质粒；
e．将所提取的重组表达质粒转化入大肠杆菌表达菌株BL21（DE3）内，挑取单菌落接种于含有氨苄青霉素的5ml LB液体培养基过夜培养得到菌种；
f. 将所收集的菌种进行扩大培养，经IPTG诱导后收集菌体；
g. 将菌体破碎、裂解、纯化，收集纯化液。
3.根据权利要求2所述的重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法，其特征在于所述RT-PCR反应条件为：94℃预变性5分钟后进行94℃变性30秒、57℃复性30秒、72℃延伸30秒的30个循环的扩增，72℃延伸7分钟后保存于4℃。
4.根据权利要求2所述的重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法，其特征在于：所述f步骤是将所收集的菌种按1：100的比例接种于Amp LB液体培养基，37℃ 200转/分摇菌2.5小时，至OD600为0.4，所摇菌液加诱导剂IPTG至终浓度为0.5mM，37℃摇菌6小时，收集菌体。
5.根据权利要求2所述的重组红鳍东方鲀干扰素调节因子2蛋白的制备方法，其特征在于：所述g步骤是用磷酸盐缓冲液（PBS）重悬f步骤所得菌体，用超声波破碎细菌并将细菌裂解液12000转，4℃离心20分钟，将上清上样于层析柱，用平衡液洗涤后加入300mM的咪唑洗脱收集洗脱液。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN102180961A (zh) * 2011-03-17 2011-09-14 中山大学 黑青斑河鲀干扰素IFNγ2及其制备方法和应用
CN103667305A (zh) * 2013-12-04 2014-03-26 大连海洋大学 重组红鳍东方鲀干扰素γ蛋白的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102180961A (zh) * 2011-03-17 2011-09-14 中山大学 黑青斑河鲀干扰素IFNγ2及其制备方法和应用
CN103667305A (zh) * 2013-12-04 2014-03-26 大连海洋大学 重组红鳍东方鲀干扰素γ蛋白的制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BERTRAND COLLET ET AL.,: "Cloning and expression analysis of rainbow trout Oncorhynchus mykiss interferon regulatory factor 1 and 2 (IRF-1 and IRF-2)", 《DEVELOPMENTAL AND COMPARATIVE IMMUNOLOGY》 *
M. CAMINO ORD´AS.,: "Molecular cloning and expression analysis of interferon regulatory factor-1 (IRF-1) of turbot and sea bream", 《MOLECULAR IMMUNOLOGY》 *
MICHAEL P. RICHARDSON ET AL.,: "Molecular Cloning and Genomic Structure of a Gene Encoding Interferon Regulatory Factor in the Pufferfish(Fugu rubripes)", 《MARINE BIOTECHNOLOGY》 *
SUN S.H.: "Takifugu rubripes interferon regulatory factor 2-like protein(IRF2) mRNA,complete cds", 《NCBI GENBANK:KF853391.1》 *

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