CN104622818B - 冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺‑胺纳米递药系统的制备方法 - Google Patents
冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺‑胺纳米递药系统的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104622818B CN104622818B CN201510056751.XA CN201510056751A CN104622818B CN 104622818 B CN104622818 B CN 104622818B CN 201510056751 A CN201510056751 A CN 201510056751A CN 104622818 B CN104622818 B CN 104622818B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pamam
- borneol
- dox
- solution
- dissolved
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了一种冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺‑胺纳米载药系统的制备方法，基于聚酰胺‑胺（PAMAM）树形大分子，通过化学合成叶酸（FA）介导的、冰片（BO）修饰的新型纳米载体（FA‑BO‑PAMAM），并包载抗癌药物（DOX），达到减轻药物载体、促血脑屏障开放、靶向递送药物至脑胶质瘤部位的功能。提供了一种利用PAMAM作为药物载体的新方法，构建脑胶质瘤靶向递药系统的新思路。
Description
技术领域
本发明基于聚酰胺-胺(poly(amido amine)，PAMAM)树形大分子，通过化学合成叶酸(Folic acid，FA)介导的、冰片(Borneol，BO)修饰的新型纳米载体(FA-BO-PAMAM)，并包载抗癌药物(Doxorubicin，DOX)，制备冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺-胺纳米递药系统。
背景技术
脑胶质瘤是颅内常见的发生于神经外胚层的恶性肿瘤，近年来发病率提升，每1万人中有5-10个人，占原发性中枢神经系统肿瘤的40％。目前临床上脑胶质瘤治疗以手术为主，并结合放疗、化疗等措施综合治疗。然而手术因颅内禁区多难以彻底清除病灶，加之肿瘤浸润性生长，极易复发；放疗因剂量难以控制，易引起不可逆的颅内损伤及诱发继发性恶性肿瘤，使得药物治疗日益显得重要。然而，由于血脑屏障的存在，临床上大多数的药物难以透过入脑。为此研究者尝试了多种脑靶向策略以增加药物的入脑递送，达到治疗脑部疾病的作用。另外，脑组织是人体的中枢，药物入脑之后若到达非脑胶质瘤部位，药物浓度降低的同时还可能产生更严重的中枢系统副作用，因此，开发一种特定的载体既能跨越BBB又能靶向至肿瘤部位是非常必要的。
聚酰胺-胺(PAMAM)是一类合成的、单分散的纳米级大分子化合物，具有高度枝化，结构可控，单分散性等特点。作为药物载体，PAMAM具有以下几个优点：(1)表面有大量的官能团可以连接药物分子，靶向分子或者成像剂。(2)内部具有较大的空腔可以包埋药物分子。(3)PAMAM的粒径较小，是一种纳米材料，近年来纳米材料在肿瘤领域的应用比较广泛。然而，高代数的PAMAM末端具有大量的氨基，在生理pH下氨基易质子化，有一定的细胞毒性。采用PEG修饰PAMAM是一种非常常见的方法来减轻细胞毒性。另外，用脂肪酸修饰PAMAM也可以降低毒性，有报道曾用月桂酰来修饰PAMAM。但是没有报道显示以上修饰在降低毒性的同时具有促血脑屏障开放的作用，另外这些修饰虽然降低了细胞毒性，但是也减弱了细胞对药物的摄取能力。
冰片是一种传统的中药。中医理论中冰片具有“引药上行”的作用，另外现代研究表明冰片与药物共用或者冰片与纳米粒共用具有促进药物入脑递送的作用。这为本项目选择冰片共价偶联到PAMAM表面达到促血脑屏障开放的作用提供了可能性。叶酸是一种广泛应用于肿瘤靶向的水溶性维生素，叶酸受体高表达于肿瘤组织，在正常组织中的表达相对较少，关于叶酸作为肿瘤靶向配体的研究已十分广泛。从而我们构建了以冰片作为促血脑屏障开放的功能基，叶酸作为肿瘤靶向分子的新型药物载体FA-BO-PAMAM。大量冰片修饰PAMAM载体在减轻载体本身表面的氨基浓度降低其细胞毒性的基础上具有促血脑屏障开放增加脑内皮细胞摄取的作用，同时叶酸的修饰增加了肿瘤细胞的摄取能力，从而达到减轻药物载体毒性、促血脑屏障开放和靶向至脑胶质瘤的三重作用，构建了PAMAM作为脑胶质瘤靶向的新思路。
阿霉素是一种蒽环类抗生素，抗肿瘤谱广，在临床上被广泛地应用于乳腺癌、肺癌、膀胱癌等各种癌症的治疗。但是由于阿霉素对心脏、肾等脏器的毒副作用限制了其进一步的临床应用，因此研究者将阿霉素作为模型药物用于考察制剂或给药系统的效果。有研究表明，阿霉素能够诱导脑胶质瘤的凋亡，但是由于血脑屏障的存在，阿霉素难以透过入脑且体内消除快，经全身给药后在肿瘤部位的蓄积量难以达到治疗量，所以对于治疗脑胶质瘤效果不理想。若能使阿霉素在肿瘤部位的蓄积量达到治疗量，对临床脑胶质瘤治疗具有一定的前景。因此我们选择阿霉素作为模型药物，制备了冰片和叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺-胺纳米递药系统(FA-BO-PAMAM/DOX)。目前尚没有使用冰片和叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺-胺用于脑部疾病治疗的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于聚酰胺-胺树形大分子(PAMAM)，通过化学合成叶酸(FA)介导的、冰片(BO)修饰的新型纳米载体并包载抗癌药物阿霉素(DOX)的制备方法，初步研究此递药系统的血脑屏障开放能力和对脑胶质瘤的治疗作用。
为了实现上述技术目的，本发明采用了以下技术方案：
冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺-胺纳米载药系统的合成方法，主要包括以下步骤：
(1)冰片丁二酸酐活性酯(BO-SA-NHS)的合成：称取丁二酸酐(Succinicanhydride)2.0g溶于50mL无水二氯甲烷中，加入等摩尔的DMAP和三乙胺，另外称取500mg冰片(Borneol)溶于无水二氯甲烷后，逐滴加入到上述溶液中，室温下油浴反应2天；取反应所得的产物30mg溶于DMF中，5倍当量的EDC和NHS溶于PBS加入到上述反应液中，室温下活化反应2h；反应结束后，通过正己烷多次萃取获得活性酯产物；
(2)BO-PAMAM的合成：称取10mg PAMAM G5溶液溶于2mL超纯水中，逐滴加入到步骤(1)合成的活性酯的DMF溶液中，室温过夜反应；反应结束后，将反应液转移到透析袋中，用超纯水透析24h，将透析完的溶液冻干得到白色固体产物；
(3)FA-BO-PAMAM的合成：称取叶酸2mg溶于4mL DMF和DMSO的混合溶液中，DMF和DMSO的体积比为3:1，加入5倍当量的EDC，室温下活化反应3h；将活化的反应液逐滴加入到PAMAM的水溶液中，反应24h；反应结束后，用水透析12h，将透析液冻干得到黄色的固体产物；
(4)阿霉素聚酰胺-胺纳米载药系统的制备：准确称取盐酸阿霉素1mg，溶解于2mLDMSO和3倍当量的三乙胺的混合溶剂中，室温搅拌过夜，使盐酸阿霉素脱盐酸成疏水性药物阿霉素；将上述经预处理的阿霉素混合溶液逐滴加入到含10mg步骤3所得FA-BO-PAMAM的1mL DMSO溶液中，避光反应24h；反应结束后，向反应液中加入10mL超纯水，再用乙酸乙酯多次萃取除去游离的阿霉素，冷冻干燥后得到深红色的冻干品。
通过1H-NMR验证载体(FA-BO-PAMAM)的合成以及确定连接到PAMAM表面的冰片和叶酸分子的数目分别为40和5。经透射电镜(transmission electron microscope,TEM)和纳米粒度-电位分析仪分别对药物载体的形貌、粒径和表面电势的测量，药物载体呈类球形，大小分布均匀，BO-PAMAM的粒径为(14.61±4.14)nm，Zeta电位为(11.47±0.46)mV，FA-BO-PAMAM的粒径为(22.28±0.42)nm，Zeta电位为(7.6±0.89)mV。经紫外分光光度计测定载体复合物的载药量为(6.64±0.09)％，包封率为(64.58±0.85)％。透析法考察FA-BO-PAMAM/DOX复合物在磷酸缓冲盐(pH 7.4和pH 5.5)中的体外释药行为显示其体外释放相比于原药具有明显的缓释作用且具有一定的pH敏感性。
本发明的有益效果体现在：本发明采用冰片和叶酸共修饰的PAMAM载体包载抗肿瘤药物盐酸阿霉素，制备递药系统(FA-BO-PAMAM/DOX)，可以有效地降低PAMAM表面的毒性，可以有效的促进DOX跨过BBB模型而提高对脑胶质瘤的抑制作用，对C6脑胶质瘤细胞具有较高的抑制效果，有望应用于脑胶质瘤的治疗。
附图说明
图1是FA-BO-PAMAM的合成路线图。
图2是核磁图谱：A.冰片，B.叶酸，C.FA-BO-PAMAM。
图3是药物载体的粒径图和透射电镜图：A和C：BO-PAMAM，B和D：FA-BO-PAMAM。
图4是FA-BO-PAMAM/DOX在pH 7.4和pH 5.5的介质中的体外释放曲线图。
图5是各载体PAMAM、BO-PAMAM、FA-BO-PAMAM对HBMEC细胞(A)和C6细胞(B)的毒性示意图。
图6是DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX的体外跨BBB模型转运率示意图。
图7是DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX的C6细胞摄取能力示意图。
图8是DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX对C6细胞抑制曲线图。
具体实施例
实施例1：FA-BO-PAMAM的合成
(1)冰片丁二酸酐活性酯(BO-SA-NHS)的合成：称取丁二酸酐2.0g(0.02mol)溶于50mL无水二氯甲烷中，加入等摩尔的DMAP和TEA，另外称取500mg冰片溶于无水二氯甲烷后，逐滴加入到上述溶液中，室温下油浴反应2天。取反应所得的产物30mg溶于DMF中，5倍当量的EDC和NHS溶于PBS(pH＝5.7)加入到上述反应液中，室温下活化反应2h。反应结束后，通过正己烷多次萃取获得活性酯产物。
(2)BO-PAMAM的合成：称取10mg PAMAM G5溶液溶于2mL超纯水中，然后逐滴加入到上述合成的活性酯的DMF溶液中，室温过夜反应。反应结束后，将反应液转移到透析袋中(截留分子量3500KDa)，用超纯水透析24h，每4h换一次的水。将透析完的溶液冻干得到白色固体产物。
(3)FA-BO-PAMAM的合成：称取叶酸2mg(4.5μmol)溶于4mL DMF和DMSO的混合溶液中(v：v＝3:1)，然后加入5倍当量的EDC,室温下活化反应3h。将活化的反应液逐滴加入到PAMAM的水溶液中，反应24h。反应结束后，用大量的水透析12h，将透析液冻干得到黄色的固体产物。整个合成的路线见图1。
将Borneol溶于CDCl3，Folic acid溶于DMSO-d6，FA-BO-PAMAM溶于D2O中，配成10mg·mL-1溶液，进行1H-NMR表征。将BO-PAMAM，FA-BO-PAMAM配置成0.5mg·mL-1的水溶液，用过滤器过滤(0.45μm)，弃去初滤液，收集续滤液，用纳米粒度-电位分析仪测定粒径和电位，每种样品平行操作三份。另取少量复合物溶液滴加在铜网上，待挥干后，采用透射电镜观察粒子的形貌特征。
产物FA-BO-PAMAM，原料Borneol和Folic acid的核磁图谱见图2A、2B和2C。图2A中0.8-1.2ppm峰属于冰片上的三个甲基峰(-C-(CH3)2-C-(CH3)-C-O)；另外与叶酸相关的三个单峰出现在6.5,7.5,8.5三个位置上；其他位置的峰在2.2-3.5ppm归属为PAMAM上的甲基质子峰。根据核磁图的结果，共价偶联到PAMAM的上的冰片和叶酸的数目分别为40和5。
复合物BO-PAMAM和FA-BO-PAMAM经粒径仪测定后，BO-PAMAM的平均粒径为14
nm；接上靶头叶酸后，FA-BO-PAMAM的粒径增加到22nm(图3A和图3B)。在图3A中，可以看到132nm和167nm的光强比较高，但是复合物粒径在14nm和22nm的粒子占大多数，主要是因为散射光强与粒子直径的6次方成正比。通过TEM(图3C和3D)观察，复合物BO-PAMAM和FA-BO-PAMAM外观呈球形，形态规整，大小基本均匀，但是从TEM图中观察得到的粒径比用粒径仪测定的粒径稍大一些。各种粒子的主要参数见表1。
表1各种粒子的主要表征参数
实施例2：载药
准确称取盐酸阿霉素1mg(记为W0)，溶解于2mL DMSO和3倍当量的三乙胺的混合溶剂中，室温搅拌过夜，使盐酸阿霉素脱盐酸成疏水性药物阿霉素。将经预处理的阿霉素混合溶液逐滴加入到含10mg BO-PAMAM或者FA-BO-PAMAM的1mL DMSO溶液中，避光反应24h。反应结束后，向反应液中加入10mL超纯水，再用乙酸乙酯多次萃取除去游离的阿霉素，冷冻干燥后得到深红色的冻干品，称重(记为W)。用紫外分光光度法在501nm处测定复合物BO-PAMAM/DOX和FA-BO-PAMAM/DOX的吸光度，计算出载体中所含的药量(记为W1)，从而计算载药量和包封率。
取各复合物冻干粉适量，用水溶解后采用紫外分光光度计测量在501nm的吸光度，从而计算载药量和包封率，具体的数据见表2。
表2载药量和包封率数据统计
实施例3：体外释放实验
2mL FA-BO-PAMAM/DOX复合物的磷酸盐缓冲液，放入经预处理的透析袋中，再将透析袋置于50mL的pH 7.4和pH 5.5的PBS溶液中，在37℃，100rpm的条件下避光振荡，分别于10min，30min，1h，2h，4h，6h，8h，12h，24h，30h，48h，50h各个时间点，取出1mL释放介质，并补充同温等量的释放介质。作为对比，同时在相同条件下考察游离的盐酸阿霉素的体外释放行为。释放到介质中的DOX的浓度用HPLC测定。所有实验重复三次。
HPLC色谱条件
色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.01mol·L-1磷酸二氢钠(磷酸调pH至3.0)(29:71)；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：激发波长498nm，发射波长556nm；进样量20μL。以盐酸阿霉素的峰面积为纵坐标(Y)，其浓度为横坐标(X)，进行线性回归，得到pH为5.5的线性方程为：Y＝0.0742X-0.079，R2＝0.9996；pH为7.4的线性方程为：Y＝0.0472X-0.0037，R2＝0.9999，两者均在0.5～50μg·mL-1内线性关系良好。考察其高中低3种浓度溶液的日内精密度RSD小于2％，日间精密度RSD小于2％。
体外释放实验考察了FA-BO-PAMAM/DOX在模拟生理环境(PBS，pH＝7.4)和模拟肿瘤环境(PBS，pH＝5.5)的释药行为。由体外释药曲线(图4)看出，阿霉素在体外的释放具有pH敏感性，随着释放介质pH值的降低，阿霉素的累积释放量增多。原药盐酸阿霉素释放迅速，在pH为7.4的介质中，4h内已释放近90％，在pH为5.5的介质中，4h内基本释放完全。相比于原药，FA-BO-PAMAM/DOX释药缓慢，在pH为7.4和pH为5.5的介质中，24h内的累积释放量分别为28.2％和48.8％，并且24h后平稳释药，在50h内的累积释药量分别为38.5％和62.1％。
实施例4：复合物的细胞毒性实验和体外跨BBB实验
HBMEC细胞培养在DMEM培养基中，含20％灭火的胎牛血清，100μg·mL-1内皮细胞生长因子(ECGF)，2mmol·L-1的L-谷氨酸盐，20μg·mL-1的肝素，40μU·mL-1的胰岛素，100U·mL-1青霉素、100μg·mL-1链霉素，37℃和5％CO2下培养。C6胶质瘤细胞培养于DMEM培养基，含10％灭火的胎牛血清，100U·mL-1青霉素、100μg·mL-1链霉素，37℃和5％CO2下培养。
取处于对数生长期的C6和HBMEC细胞，以5×103个/孔接种于96孔板，37℃培养24h后移弃培养液，分别加入不同浓度的PAMAM、BO-PAMAM、FA-BO-PAMAM，继续培养48h后，吸去含药培养液，每孔加入0.2mL含0.5mg·mL-1MTT的无血清培养液，于37℃继续孵育4h，吸去含有MTT的培养液，用PBS清洗2次后，每孔加入0.1mL DMSO，待溶解均匀后用酶标仪测定吸光度值(λ＝570nm)，计算细胞活力抑制50％时的浓度(IC50)。细胞存活率＝(给药孔的OD指/正常孔的OD指)×100％。所有实验重复三次。
体外BBB模型的建立参照文献中所述的方法。HBMEC接种于12孔transwell板(膜嵌套直径12mm，平均孔径3μm，比表面积1.12cm2，美国康宁公司)，细胞密度1×105个/孔。培养3天后，用细胞电阻仪(Millicell-RES，美国Millipore公司)监控并检测跨细胞电阻(TEER)，只有细胞单层跨细胞电阻超过200Ω/cm2才能用于实验研究。
采用D-Hank’s缓冲液作为转运介质研究各个样品的跨膜转运率(％)。实验时用预先37℃保温的D-Hanks溶液冲洗供体池3次，在供体池中分别加入含DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX的DMEM培养液(终浓度折DOX为20μmol·L-1)，受体池中加入空白缓冲液，平行6孔，继续孵育，于0.5、1、2、4、8、12h在受体池中吸取出200μL样品，并及时补充等量空白介质。样品经HPLC检测DOX的浓度。
采用MTT法测定了PAMAM、BO-PAMAM和FA-BO-PAMAM对HBMEC和C6细胞的毒性。如图5所示，PAMAM对于HBMEC和C6细胞的毒性都比较大，IC50值分别为1.01μmol·L-1和1.37μmol·L-1。通过冰片修饰后，对两种细胞的毒性显著降低，在实验所设置的浓度范围内没有得到BO-PAMAM和FA-BO-PAMAM的IC50值。另外，关于BO-PAMAM和FA-BO-PAMAM对于细胞的毒性没有显著的差别。
采用HBMEC细胞建立体外的BBB模型来评价DOX,PAMAM/DOX,BO-PAMAM/DOX,FA-BO-PAMAM/DOX不同组的跨膜转运能力。图6的实验结果显示了不同组在相同的DOX浓度的情况下，不同时间的跨BBB转运的比率。体外跨BBB转运的比率具有时间依赖性。跨膜BBB转运12h后，DOX,PAMAM/DOX,BO-PAMAM/DOX,FA-BO-PAMAM/DOX的转运率分别为4.71％，4.82％，14.17％和13.35％。另外根据统计学的结果显示，相比于DOX和PAMAM/DOX组，BO-PAMAM/DOX组的跨BBB膜转运率高，且具有显著性差异。
实施例5：细胞摄取实验和体外抗肿瘤实验
取处于对数生长期的C6细胞，以2.5×105个/孔接种于6孔板，贴壁生长培养24h，然后与含有DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX的无血清培养液(含有20μmol·L-1DOX)于37℃孵育2h，用4℃的PBS(pH7.4)清洗并消化，用流式细胞仪(Ex488nm；Em550nm)测定平均荧光强度对细胞内吞的DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX进行定量。
取处于对数生长期的C6细胞，以5×103个/孔接种于96孔板，37℃培养24h后移弃培养液，分别加入不同浓度的DOX、PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX、FA-BO-PAMAM/DOX，继续培养48h后，吸去含药培养液，每孔加入0.2mL含0.5mg·mL-1MTT的无血清培养液，于37℃继续孵育4h，吸去含有MTT的培养液，用PBS清洗2次后，每孔加入0.1mL DMSO，待溶解均匀后用酶标仪测定吸光度值(λ＝570nm)，计算细胞活力抑制50％时的浓度(IC50)。细胞存活率＝(给药孔的OD指/正常孔的OD指)×100％。所有实验重复三次。
采用流式细胞仪来定量药物载体的摄取量从而评价叶酸的靶向性。图7的结果显示DOX组的荧光强度比其余三组高，FA-BO-PAMAM/DOX组的荧光强度比BO-PAMAM/DOX组的荧光强度高，两组之间的差异有统计学意义，显示了叶酸对肿瘤细胞的靶向性；另外，BO-PAMAM/DOX组的细胞摄取量比PAMAM/DOX组少，统计学结果显示两组之间有显著性差异，说明冰片修饰后降低了PAMAM表面氨基的浓度，减弱了细胞摄取的能力。
原药DOX,制剂PAMAM/DOX、BO-PAMAM/DOX和FA-BO-PAMAM/DOX对于C6细胞的毒性见图8。各载体复合物的毒性降低，IC50值分别为0.73,6.17和2.48μmol·L-1，而DOX的IC50值为0.17μmol·L-1。叶酸修饰的载体复合物显示出了对C6细胞更大的毒性，另外对比各组的数据进一步证明了冰片修饰后降低了PAMAM的毒性。叶酸修饰后的载药复合物比叶酸未修饰的载药复合物对于C6细胞的毒性大，这主要跟叶酸与C6脑胶质瘤细胞表面的受体有较高的亲和力有关。另外，虽然在实验结果中原药DOX对于C6细胞的毒性最大，但是在具体的肿瘤治疗中，DOX并不能发挥完美的效果，主要原因有三：第一，DOX半衰期短，到达病变部位的药量相较于给药剂量少；第二，原药DOX对于正常组织的毒性大，比如说肾脏、心等部位，从我们实验结果(图7)中也可得知，DOX对正常细胞毒性大，因此会产生严重的副作用；第三，原药DOX不能透过血脑屏障而入脑，因此无法达到治疗脑部疾病的目的。
由以上的实验结果可知，冰片修饰的PAMAM减轻了药物载体的毒性，增加了药物的入脑递送，另外叶酸的修饰进一步靶向至脑胶质瘤，该发明了提供了一种利用PAMAM作为药物载体的新方法和脑胶质瘤靶向治疗的新思路。
Claims (1)
1.冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺-胺纳米载药系统的制备方法，所述方法包括以下步骤：
（1）冰片丁二酸酐活性酯（BO-SA-NHS）的合成：称取丁二酸酐（Succinic anhydride）2.0 g溶于50 mL 无水二氯甲烷（DCM）中，加入等摩尔的4-二甲氨基吡啶（DMAP）和三乙胺(TEA)，另外称取500 mg冰片（Borneol）溶于无水二氯甲烷后，逐滴加入到上述溶液中，室温下油浴反应2天；取反应所得的产物30 mg溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，5倍当量的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）溶于PBS，加入到上述反应液中，室温下活化反应2 h；反应结束后，通过正己烷多次萃取获得活性酯产物；
（2）BO-PAMAM的合成：称取10 mg PAMAM G5溶于2 mL超纯水中，逐滴加入到步骤（1）合成的活性酯的DMF溶液中，室温过夜反应；反应结束后，将反应液转移到透析袋中，用超纯水透析24 h，将透析完的溶液冻干得到白色固体产物；
（3）FA-BO-PAMAM的合成：称取叶酸2 mg溶于4 mL DMF和二甲亚砜（DMSO）的混合溶液，DMF和DMSO的体积比为3:1，加入5倍当量的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，室温下活化反应3h；将活化的反应液逐滴加入到BO-PAMAM的水溶液中，反应24 h；反应结束后，用水透析12 h，将透析液冻干得到黄色的固体产物；
（4）阿霉素聚酰胺-胺纳米递药系统的制备：准确称取盐酸阿霉素1 mg，溶解于2 mLDMSO和3倍当量的TEA的混合溶剂中，室温搅拌过夜，使盐酸阿霉素脱盐酸成疏水性药物阿霉素；将上述经预处理的阿霉素混合溶液逐滴加入到含10 mg 步骤（3）所得FA-BO-PAMAM的1 mL DMSO 溶液中，避光反应24 h；反应结束后，向反应液中加入10 mL超纯水，再用乙酸乙酯多次萃取除去游离的阿霉素，冷冻干燥后得到深红色的冻干品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510056751.XA CN104622818B (zh) | 2015-02-04 | 2015-02-04 | 冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺‑胺纳米递药系统的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510056751.XA CN104622818B (zh) | 2015-02-04 | 2015-02-04 | 冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺‑胺纳米递药系统的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104622818A CN104622818A (zh) | 2015-05-20 |
| CN104622818B true CN104622818B (zh) | 2017-12-08 |
Family
ID=53202383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510056751.XA Active CN104622818B (zh) | 2015-02-04 | 2015-02-04 | 冰片与叶酸共修饰的阿霉素聚酰胺‑胺纳米递药系统的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104622818B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107029247B (zh) * | 2016-04-25 | 2020-06-26 | 上海中医药大学 | 脑部引经药修饰的脑靶向纳米给药系统及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103232347A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-08-07 | 合肥工业大学 | 一种cns药物的脑靶向前药及其制备方法以及冰片在cns药物脑靶向前药中的用途 |
-
2015
- 2015-02-04 CN CN201510056751.XA patent/CN104622818B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103232347A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-08-07 | 合肥工业大学 | 一种cns药物的脑靶向前药及其制备方法以及冰片在cns药物脑靶向前药中的用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Synthesis and Characterization of G5 PAMAM Dendrimer Containing Daunorubicin for Targeting Cancer Cells;YuanYue etal;《Arch Pharm Res》;20121231;第35卷(第2期);第343-349页 * |
| Targeted delivery of doxorubicin into cancer cells using a folic acid-dendrimer conjugate;Yin Wang etal;《Polymer Chemistry》;20111231;第2卷;第1754-1760页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104622818A (zh) | 2015-05-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhao et al. | Simultaneous inhibition of growth and metastasis of hepatocellular carcinoma by co-delivery of ursolic acid and sorafenib using lactobionic acid modified and pH-sensitive chitosan-conjugated mesoporous silica nanocomplex | |
| Wang et al. | Target delivery selective CSF-1R inhibitor to tumor-associated macrophages via erythrocyte-cancer cell hybrid membrane camouflaged pH-responsive copolymer micelle for cancer immunotherapy | |
| Jia et al. | Multi-functionalized hyaluronic acid nanogels crosslinked with carbon dots as dual receptor-mediated targeting tumor theranostics | |
| Lee et al. | Mitochondria targeting and destabilizing hyaluronic acid derivative-based nanoparticles for the delivery of lapatinib to triple-negative breast cancer | |
| Hu et al. | pH-responsive and charge shielded cationic micelle of poly (L-histidine)-block-short branched PEI for acidic cancer treatment | |
| CN104231193B (zh) | 一种pH与氧化还原双敏感的层交联纳米粒及其制备方法和应用 | |
| CN102060991B (zh) | 7-乙基-10-羟基喜树碱的两亲性药物前体及其制备方法 | |
| Huang et al. | Amphiphilic prodrug-decorated graphene oxide as a multi-functional drug delivery system for efficient cancer therapy | |
| Cheng et al. | Construction and evaluation of PAMAM–DOX conjugates with superior tumor recognition and intracellular acid-triggered drug release properties | |
| CN104888235A (zh) | 具有共递送多个药物的pH敏感纳米粒前药及其制备方法与应用 | |
| Shang et al. | Enhancing cancer chemo-immunotherapy by biomimetic nanogel with tumor targeting capacity and rapid drug-releasing in tumor microenvironment | |
| Khan et al. | Advancements in dextran-based nanocarriers for treatment and imaging of breast cancer | |
| Du et al. | A multiple environment-sensitive prodrug nanomicelle strategy based on chitosan graftomer for enhanced tumor therapy of gambogic acid | |
| CN105315455A (zh) | 谷氨酸修饰的聚乙二醇单硬脂酸酯的制备及其在靶向药物传递中的应用 | |
| Wan et al. | Polymeric micelles with reduction-responsive function for targeted cancer chemotherapy | |
| Yan et al. | Carboxymethyl chitosan based redox-responsive micelle for near-infrared fluorescence image-guided photo-chemotherapy of liver cancer | |
| Guo et al. | Doxorubicin-loaded natural daptomycin micelles with enhanced targeting and anti-tumor effect in vivo | |
| Zhang et al. | Co-delivery of rose bengal and doxorubicin nanoparticles for combination photodynamic and chemo-therapy | |
| Nagesetti et al. | Polyethylene glycol modified ORMOSIL theranostic nanoparticles for triggered doxorubicin release and deep drug delivery into ovarian cancer spheroids | |
| Jing et al. | Synthesis and characterization of folic acid‐modified carboxymethyl chitosan‐ursolic acid targeted nano‐drug carrier for the delivery of ursolic acid and 10‐hydroxycamptothecin | |
| Feng et al. | Hypoxia-responsive polymeric micelles for enhancing cancer treatment | |
| Khan et al. | Chondroitin sulfate-based redox-responsive nanoparticles for melanoma-targeted drug delivery | |
| Yuan et al. | Development of (G3-C12)-mediated camptothecin polymeric prodrug targeting to Galectin-3 receptor against androgen-independent prostate cancer | |
| Lu et al. | Construction of carboxymethyl chitosan-based nanoparticles of hypoxia response for co-loading doxorubicin and tanshinone IIA | |
| CN107982217A (zh) | 一种包载疏水性药物的具靶向和放疗增敏双重功能脂质-聚合物、其制备方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |