CN104605209A

CN104605209A - 一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂

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Publication number: CN104605209A
Application number: CN201510088800.8A
Authority: CN
Inventors: 刘备
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-02-26
Filing date: 2015-02-26
Publication date: 2015-05-13

Abstract

本发明公开了一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子；所述双链小RNA分子的正向序列为：5′-UACGUAUAACUAAGCGUGTCAACUAGAG-3′；双链小RNA分子的反向序列为：5′-CsUsCGUUACGAUAACGUCCGTAACUTsGsUsAs-Chol3′，所述反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰CsUs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsUsAs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。本发明的突出优点是人工合成了促进鲤鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鲤鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鲤鱼肉质更加鲜美。

Description

一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂

技术领域

本发明涉及一种新颍的具有抑制肌肉生成抑制素(myostatin，MSTN)表达的化学合成剂，其在鲤鱼幼鱼肌肉生长中起促进作用。

背景技术

肌肉生成抑制素(myostatin，MSTN)作为一种新的生长因子在1997年被发现，被命名为生长分化因子-8(GDF-8)。McPherron和Grobet等报道Myostatin编码序列发生突变的牛肌肉质量增加显著，呈现所谓的“双肌现象”。敲除myostatin基因的转基因小鼠的骨骼肌重量比正常的小鼠增加2-3倍。近年来人们试图找到myostatin的抑制物来降低myostatin对肌肉成长抑制功能的发挥。Bogdanovich和Kim等分别在鸡和小鼠体内注射myostatin蛋白抗体，实验结果发现鸡、小鼠的体重和肌肉量都增加。Lee等在2010年报道将虹鳟鱼浸泡在含有体外表达MSTN抑制物的溶液中，鱼体重能够提高42％。Amali等在2004年通过给斑马鱼注射morpholino抑制MSTN表达观察到鱼体皆增大现象。

中国专利于2014.04.09授权公告了一种鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂，其授权公告号为CN103211099 B。所述鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂的成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子，双链小RNA分子的正向序列为：5′-AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3′；双链小RNA分子的反向序列为：5′-AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-Chol3′，反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰AsAs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsTsTs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。其突出优点是人工合成了促进鳜鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鳜鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鳜鱼肉质不受影响。

鲤鱼，中文别名：鲤拐子、鲤子。鲤科(Cyprinidae)中粗强的褐色鱼，学名Cyprinus carpio。原产亚洲，后引进欧洲、北美以及其他地区，杂食性。鳞大，上腭两侧各有二须，单独或成小群地生活于平静且水草丛生的泥底的池塘、湖泊、河流中。鲤鱼体态丰满，肉质肥厚，细嫩鲜美，营养丰富，深受广大消费者欢迎。目前我国鲤鱼养殖年产量超过40万吨，其产值每年在200亿人民币以上，而且近几年其价格稳中有升，人工养殖获经济效益较大，现已成为水产品市场中重要中高档产品。如何提高鲤鱼养殖产量满足市场需求稳定鲤鱼价格已成为当务之急，也是保持我国鲤鱼养殖业沿着优质高效方向持续快速健康发展的必要前提。开发MSTN抑制剂是促鱼肉生长新途径，因此本发明通过化学合成一对特异抑制鲤鱼MSTN表达的核苷酸短链，从抑制肌肉生成抑制素方面来促进鲤鱼鱼肉生长，为保持我国鲤鱼高效健康养殖持续发展奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子；所述双链小RNA分子的正向序列为：5′-UACGUAUAACUAAGCGUGTCAACUAGAG-3′；双链小RNA分子的反向序列为：5′-CsUsCGUUACGAUAACGUCCGTAACUTsGsUsAs-Chol3′，所述反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰CsUs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsUsAs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。

本发明的有益效果是：

(1)本发明是综合运用分子生物学、动物营养学和化学合成原理，对影响鲤鱼肌肉生长深入研究基础上，研究开发的具有高效、稳定等特点的肌肉生长促进剂。

(2)本发明生产工艺成熟、产品质量稳定、价格合理、核心技术先进和经济效益显著，是目前比较理想的鲤鱼肌肉生长促进剂，具有广阔的市场前景。

(3)本发明的突出优点是人工合成了促进鲤鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鲤鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鲤鱼肉质更加鲜美。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。

实施例1

鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼生长性能的影响

通过对鲤鱼肌肉局部注射的方式，测试鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂在促进鲤鱼幼鱼肌肉生长中的作用，具体试验如下：

(1)试验材料：选用人工饲养的等长等重的健康河南黄河鲤幼鱼为试验对象，随机分为阴性对照组、阳性对照组、试验组和对比组，每组20条。所述河南黄河鲤与陕西黄河鲤、宁夏黄河鲤、山东黄河鲤、山西天桥黄河鲤并列阴性对照组为黄河干流的“五大名鲤”；黄河鲤又同长江鲥鱼、松江鲈鱼、太湖银鱼被共誉为我国四大名鱼。

(2)试验方法：1.阴性对照组的河南黄河鲤幼鱼不注射任何试剂；2.阳性对照组的河南黄河鲤幼鱼注射PBS(磷酸盐缓冲液)；3.试验组的河南黄河鲤幼鱼注射鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂；4.对比组的河南黄河鲤幼鱼注射中国专利CN 103211099B公告的鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂；其中，阳性对照组、试验组和对比组的注射剂量均为10μg/g体重，且每天一次，连续注射三天，然后在相同条件下人工饲养一周。

(3)饲养一周后测定鱼体生长指标，具体结果请见表1。

表1：鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼生长性能的影响(平均值±标准差)

项目	阴性对照组	阳性对照组	试验组	对比组
					体长增加(cm)	2.85±0.38	2.81±0.62	4.96±0.82	2.92±0.36
体重增加(g)	18.56±3.16	18.22±3.53	3.81±5.27	18.96±3.05

由表1可知：试验组的鲤鱼的体长增加和体重增加与阳性对照组、阴性对照组以及对比组相比，均显著提高；阳性对照组、阴性对照组和对比组的鲤鱼的体长增加和体重增加均差异不显著。因此注射鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂能改善鲤鱼生长性能。

实施例2

鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌肉MSTN表达的影响

取实施例1中饲养一周后的河南黄河鲤幼鱼，然后取四组鲤鱼背部肌肉，并对MSTN表达进行荧光定量分析，具体结果请见表2。

表2：鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌肉MSTN表达的影响

项目	阴性对照组	阳性对照组	试验组	对比组
					MSTN相对表达量	1	1	8	1

由表2可知：试验组的鲤鱼肌肉MSTN表达量与阴性对照组、阳性对照组和对比组相比，显著降低。阴性对照组、阳性对照组和对比组的鲤鱼MSTN表达量差异不显著。因此注射鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂能降低鲤鱼肌肉MSTN表达量。

实施例3

鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肉质指标的影响

取实施例1中饲养一周后的河南黄河鲤幼鱼，然后取四组鲤鱼背部肌肉，并对测量其水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量，具体结果请见表3。

表3：鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌肉营养成分的影响(平均值±标准差)

成分	阴性对照组	阳性对照组	试验组	对比组
					水分(g/100g)	76.25±0.48^a	76.36±0.46	69.15±0.37	77.05±0.44
粗蛋白(g/100g)	17.61±0.26^a	17.50±0.27	25.49±0.35	16.81±0.38
					粗脂肪(g/100g)	4.15±0.35	4.36±0.34	3.37±0.37	4.22±0.24
粗灰分(g/100g)	1.72±0.23	1.61±0.24	1.74±0.24	1.65±0.25

由表3可见，试验组与阳性对照组、阴性对照组以及对比组相比，试验组鲤鱼的粗蛋白显著提高，试验组鲤鱼的水分和粗脂肪有所降低，所有组鲤鱼的粗灰分差异不显著。因此注射鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂能改善鲤鱼肌肉营养成分，提高粗蛋白含量。

实施例4

鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌纤维性状的影响

通过对鲤鱼肌肉局部注射的方式，测试鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌纤维性状的影响，具体试验如下：

(1)试验材料：选用人工饲养的等长等重的健康河南黄河鲤幼鱼为试验对象，随机分为阴性对照组、阳性对照组、试验组和对比组，每组10条。

(2)试验方法：1.阴性对照组的河南黄河鲤幼鱼不注射任何试剂；2.阳性对照组的河南黄河鲤幼鱼注射PBS(磷酸盐缓冲液)；3.试验组的河南黄河鲤幼鱼注射鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂；4.对比组的河南黄河鲤幼鱼注射中国专利CN 103211099B公告的鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂；其中，阳性对照组、试验组和对比组的注射剂量均为10μg/g体重，且每天一次，连续注射三天，然后在相同条件下人工饲养三个月。

(3)饲养三个月后观察鱼体生长指标，试验组的河南黄河鲤明显大于其他组，捕获后称重，实验组的河南黄河鲤全部达到1000g以上，其他组没有一条达到1000g的河南黄河鲤。

(4)宰杀所有河南黄河鲤，测试鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌纤维性状的影响，具体结果请见表4。

表4：鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂对鲤鱼肌纤维性状的影响(平均值±标准差)

项目	阴性对照组	阳性对照组	试验组	对比组
					弹性	2.55±0.03	2.46±0.04	3.11±0.04	2.56±0.05
耐折力	0.24±0.04	0.35±0.04	0.42±0.05	0.36±0.06
					硬度	36.16±0.48	35.25±0.60	39.60±0.56	35.47±0.62
咀嚼度	37.68±2.71	37.45±2.21	40.93±2.46	37.52±2.54

由表4可见，试验组与阳性对照组、阴性对照组以及对比组相比，试验组鲤鱼肌肉的弹性、耐折力、硬度和咀嚼度均显著提高，试验组鲤鱼肉质较其他组鲤鱼紧而有韧性，口感更好。

实施例5

采用与上述实施例1-4类似的方法，仅将试验材料换成其他品种的鲤鱼，得到了与上述实施例1-4类似结果。

实施例6

采用与上述实施例1-4类似的方法，将试验材料分别换成长江鲥鱼、松江鲈鱼和太湖银鱼，发现实验组与阳性对照组相差均不大；说明鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂不在其他品种的鱼类上发挥作用。

上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下做出各种变化。

Claims

1.一种鲤鱼专用肌肉生长改善促进剂，其特征在于，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA 分子；所述双链小RNA 分子的正向序列为：5′-UACGUAUAACUAAGCGUGTCAACUAGAG-3′；双链小RNA 分子的反向序列为：5′-CsUsCGUUACGAUAACGUCCGTAACUTsGsUsAs-Chol3′，所述反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰CsUs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsUsAs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。