CN104560796B - 一种耐受和富集重金属的格氏沙雷氏菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种耐受和富集重金属的格氏沙雷氏菌及其应用，对该细菌进行了16S rRNA基因序列分析，并得出其16S rRNA的基因核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示。通过同源性分析得出该菌种属于格氏沙雷氏菌，将其命名为DJ16，已于2014年11月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2014578。本发明提供的格氏沙雷氏菌DJ16可用于富集土壤和水体重金属。

Description

一种耐受和富集重金属的格氏沙雷氏菌及其应用
技术领域
本发明涉及环境微生物修复技术领域，具体而言，涉及耐受和富集土壤和水体重金属的沙雷氏菌属细菌及其应用。
背景技术
随着工业的发展和化石燃料的广泛使用，重金属在土壤和水源中大量富集，通过污水灌溉等途径加剧其扩散，并通过食物链在人体富集，危害健康，如日本由汞污染引起的水俣病，镉污染导致的骨痛病。随着我国工业的快速发展，由此产生的重金属污染也越来越严重，据国家环境保护部的统计2009年我国重金属污染事件导致4035人血铅超标，182人镉超标，引发群体性事件32起。我国每年缺水超过300亿吨，而水体的重金属污染会引发水质性缺水；重金属污染还会导致土壤微生物活性降低，土壤肥力和质量严重下降。因此，重金属污染的治理迫在眉睫。
微生物在重金属处理方面具有的优势：(1)处理能力强，可通过吸附、转化和活化等多种方式降低环境中重金属的浓度；(2)适应能力强，可迅速适应环境，容易应用于其他领域；(3)成本低，效益高，容易管理，不易造成二次污染。微生物的吸附作用是指利用某些微生物本身的化学成分和结构特性来吸附废水中的重金属离子，通过固液两相分离达到去除废水中的重金属离子的目的。生物吸附剂为自然界中丰富的生物资源，如藻类、地衣、真菌和细菌等。微生物结构的复杂性以及同一微生物和不同金属间亲和力的差别决定了微生物吸附金属的机理非常复杂，至今尚未得到统一认识。根据被吸附重金属离子在微生物细胞中的分布，一般将微生物对金属离子的吸附分为胞外吸附、细胞表面吸附和胞内吸附。
目前，对耐重金属细菌的研究主要集中在以下3个方面：(1)重金属耐性菌株的筛选与鉴定；(2)细菌耐重金属的机理研究；(3)耐重金属细菌在生态治理方面的综合运用。具有耐重金属属性的细菌有许多菌属，如黄单胞菌属(Xanthomonas sp.)、硫杆菌属(Thiobacillus sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、红假单细胞菌属(Rhodopseudomonas sp.)、纤发菌属(Leptothrix)、嘉利翁氏菌属(Gallionella)、嗜酸硫杆菌属(Acidithiobacill us sp.)、硫杆菌属(Thiobacillus sp.)、球衣菌属(Sphaerotilussp.)、节杆菌属(Arthrobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、壤霉菌属(Agromyces sp.)、肠杆菌属(Enterobacter)、埃希氏菌属(Escherichia)、根瘤菌属(Rhizobiumfrank)、青枯菌属(Ralstonia)、气单胞菌属、短杆菌属(Brevibacterium)、无色细菌属(Achromatiumsp.)、红杆菌属(Rhodobacte r)、食烷菌属、产碱菌属(Alcaligenes sp.)、短波单胞杆苗属(Brevundimonas sp.)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas sp.)、伯克霍尔德氏菌属(Burkholderia sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter)、微杆菌属(Microbacterium sp.)、肠球菌属(Enterococcus)、气单胞杆菌(Aeromonas)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas.sp.)。此外还有特殊的如趋磁性细菌(Magnetotactic bacteria)、MTB和工程菌等。
近年来，重金属细菌研究取得了较大的进展，然而在该领域的研究仍不够成熟，应用和耐性机理方面有待深入。细菌耐重金属机理研究作为可以广泛应用理论的前提，一方面有利于揭示细菌生理生化特征，另一方面也有利于以后的研究；此外，各学科人员的协同合作，有利于开拓更大的发展空间。如利用生物工程的技术手段，对耐重金属细菌进行改良，提高细菌的适应力与耐受力。
发明内容
本发明的目的在于通过耐重金属菌株筛选、诱变、富集驯化，从而提供一种能够富集重金属的沙雷氏菌属细菌及其应用。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了一种耐受和富集土壤和水体中重金属的细菌。进一步地，发明人对该细菌进行了16S rRNA基因序列分析，并得出其16S rRNA的基因核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示。通过http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/网页中的比对程序进行同源性分析，得出该菌种属于沙雷氏菌属，发明人将其命名为DJ16。该细菌已于2014年11月19日送往中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)DJ16；保藏编号：CCTCCNO：M 2014578；地址：中国武汉武汉大学。
本发明所筛选的沙雷氏菌属细菌DJ16具有如下培养特征：
沙雷氏菌属细菌DJ16摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30-37℃，发酵时间12-36h，转速150-225r/min。
10L发酵罐中试发酵条件为：装液量4-7L培养基，接种量3-5％，接种液细菌浓度为108CFU/mL，发酵温度25-40℃，pH 6.8-7.8，发酵时间18-36h，转速，200-400r/min，通气量1︰1。
摇瓶发酵和中试发酵的培养基均为Luria-Bertani(LB)培养基，成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、去离子水1000mL，pH 6.8-7.2。
在pH 4-10之间均能生长；盐浓度10％以下均能生长；在15℃-36℃下DJ16菌株能够在平板中生长良好，而在4℃和42℃的环境下，菌株也能够在平板中生长。
另外，本发明人通过耐受重金属实验发现，沙雷氏菌属细菌DJ16对Cu2+的最大耐受能力为6mmol/L，对Zn2+的最大耐受能力在10mmol/L以上，对Cd2+的最大耐受能力为10mmol/L，对Pb2+的最大耐受能力为5mmol/L；本发明人通过吸附重金属实验发现，沙雷氏菌属细菌DJ16干菌体所能吸附Cu2+金属离子的量可达6.8mg/g，Zn2+金属离子的量可达9.0mg/g，Cd2+金属离子的量可达8.8mg/g，Pb2+金属离子的量可达5.0mg/g。目前，关于沙雷氏菌属细菌高效耐重和富集多种重金属方面的研究在国内外没有报道。因此，基于此研究结果，本发明还提供一种工业新用途，即：本发明提供的沙雷氏菌属细菌DJ16在富集土壤和水体重金属中的应用。
与现有技术相比，本发明提供的沙雷氏菌属细菌DJ16具有以下优点和显著的进步：
(1)菌株DJ16为环境微生物，无致病性，生长速度快适应能力强，生物修复应用前景广泛。
(2)菌株DJ16耐受Cd2+、Pb2+、Cu2+、Zn2+浓度高，对Cu2+的最大耐受能力为6mmol/L，对Zn2+的最大耐受能力在10mmol/L以上，对Cd2+的最大耐受能力为10mmol/L，对Pb2+的最大耐受能力为5mmol/L。
(3)每克干菌体吸附Cd2+、Pb2+、Cu2+、Zn2+能力强，干菌体所能吸附Cu2+金属离子的量可达6.8mg/g，Zn2+金属离子的量可达9.0mg/g，Cd2+金属离子的量可达8.8mg/g，Pb2+金属离子的量可达5.0mg/g。
附图说明
图1：基于16S rRNA基因序列的系统发育树。
图2：脂肪酸组分气相色谱图。
图3：2mmol/L Cu2+的胁迫下菌株DJ16的生长曲线。
图4：2mmol/L Zn2+的胁迫下菌株DJ16的生长曲线。
图5：2mmol/L Cd2+的胁迫下菌株DJ16的生长曲线。
图6：2mmol/L Pb2+的胁迫下菌株DJ16的生长曲线。
图7：菌株DJ16耐受重金属试验结果。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用于限制本发明的范围，如未特别说明，本发明所用方法为常规技术，所用试剂均购自生化商店。
实施例1：沙雷氏菌属细菌DJ16的筛选
沙雷氏菌属细菌DJ16原始菌株的分离：污水处理厂土壤中取样，称取1.0g样加入盛有9mL无菌水的试管中，在涡旋器上充分振荡10min使土壤颗粒充分散开，然后静置5min，采用10倍梯度稀释法将上清液制成10-2、10-3、10-4、10-5稀释液分别涂布到LB平板上(加入一定量的Cd2+，选择分离)，倒置于28℃培养箱中培养7d。根据菌落形态特征的不同，从平板上挑取单菌落接种到相应斜面培养基上。如果发现有非纯培养的菌株，再用接种环挑取少许菌苔在平板上划线分离。
沙雷氏菌属细菌DJ16原始菌株的的诱变：LB液体培养基接种上述得到的原始菌株37℃恒温振荡培养过夜，取1mL菌液稀释到10-5倍。分别在6个灭菌平皿上铺上10mL稀释菌液，进行紫外照射(25W，253nm，40cm)并设置不同的时间梯度：0、2、4、6、8、10min，之后分别吸取200μL照射后的菌液在含有S-(2-aminoethyl)-L-cysteine(AEC)6.0mg/L的minimalmedium(MM)固体培养基上涂布，37℃恒温静置培养10h后进行菌落计数，同时以10-5倍稀释，200μL涂布LB固体培养基作为原始对照。挑取多个生长状态好的菌落进行富集重金属(Cd2+、Pb2+、Cu2+、Zn2+)分析，一株富集重金属最高的菌株被命名为沙雷氏菌属细菌DJ16，该细菌已于2014年11月19日送往中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：格氏沙雷氏菌(Serratia grimesii)DJ16；保藏编号：CCTCC NO：M 2014578；地址：中国武汉武汉大学。
实施例2：沙雷氏菌属细菌DJ16(保藏编号：CCTCC M 2014578)，Biolog(GN2/GP2)自动鉴定分析
挑取待测菌株菌苔接种于Biolog平板上，28℃培养至对数生长期。用灭菌棉签蘸取Biolog IF液体后将平板上菌苔刮下，再溶入Biolog IF液体中，振荡混匀；使用Biolog浊度仪调浊度至指定范围(GP板：28％±3％，GN板：52％±3％)；再用移液枪将菌悬液加入Biolog鉴定板中，每孔150μL；然后28℃培养16-24h时取出鉴定板，用Biolog MicroStation分析仪对鉴定板进行数据读取和分析。
表1：Biolog(GN2/GP2)自动鉴定结果
实施例3：细菌DJ16(保藏编号：CCTCC M 2014578)16S rRNA基因序列分析
(1)染色体DNA(小量)的提取:
1.取1.5mL菌液于1.5mL Eppendorf管中，12 000r/min离心5min。
2.弃上清，900μL磷酸缓冲液(PBS)重悬沉淀，4℃12 000r/min离心5min。
3.弃上清，加入300TE和200μL 10mg/mL溶菌酶，吹吸混匀，37℃温育1h，每隔15min颠倒混匀一次。
4.向沉淀加入600TENS裂解液(200mmol/LNaCl，100mmol/L Tril-HCl pH8.0，2.0％SDS，50mmol/L EDTA，0.5％Triton X-100)和20mg/mL蛋白酶K10μL，颠倒混匀，55℃温育1h，每隔15min颠倒混匀一次。
5.4℃12 000r/min离心5min，取上清。
6.向上清中加入等体积的P︰C︰I(25︰24︰1)充分混匀，4℃12 000r/min离心10min。
7.重复步骤6。
8.将上清转入新的EP管中，加入1/10体积的3mol/L醋酸钠，2倍体积的无水乙醇，混匀，-20℃下放置60min，4℃12 000r/min离心10min。
9.弃上清，将离心管倒扣在吸水纸上，吸干液体后风干，加入30μL无菌水和10mg/mL RNaseA 0.5μL，-20℃保存。
1.2 16S rRNA基因序列的PCR扩增
(2)PCR扩增
以刚提取并检测合格的染色体DNA为模板，利用由上海英骏生物公司合成的引物(上游引物27F，5-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3；下游引物1527R，5-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3)进行16S rRNA基因序列的PCR扩增。PCR扩增体系见表2。
表2PCR扩增引物
PCR扩增条件：
(3)16S rRNA基因PCR产物的纯化
(参照Omega Bio-tek公司PCR产物纯化试剂盒说明书)
1.将PCR的产物从琼脂糖胶上相应的位置切下回收至Eppendorf管中，加人Binding buffer(1g/mL)，在65℃水浴7min直到完全溶解。
2.将溶液转移至吸附柱中，10000r/min离心1min，弃去收集管中废液。
3.加入300μL的Binding buffer，10 000r/min离心1min，弃收集管中废液。
4.加入700μL的SPW buffer，室温下放置2-3min，10 000r/min离心1min，弃去收集管中废液。重复一次。
5.10 000r/min空柱离心2min，弃去收集管中废液。
6.将吸附柱放入一个干净的Eppendorf管中，加入30-50μL的Elution buffer，12000r/min离心2min收集产物。
(4)16S rRNA基因的测序
16S rRNA基因序列测定由上海英骏公司完成，测序结果见序列表中的序列1。
(5)16S rRNA基因序列相似度分析
将测序后的16S rRNA基因序列通过http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/和http://eztaxon-e.ezbiocloud.net/网页中的比对程序进行同源性分析。
(6)基于16S rRNA基因序列的系统发育分析
利用Clustalx1.8，MEGA 5.0软件，根据16S rRNA基因序列相似度分析的结果，选取相关模式菌株的16S rRNA基因序列，分别采用neigbor-joining(邻位相接法，NJ)算法得到相应的系统发育树(图1)。
通过http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/网页中的比对程序进行同源性分析，得出同源性排名前十的菌种如下表3，由此可知，该菌种属于沙雷氏菌属，我们将其命名为DJ16。
表3 同源性比对分析
实施例4:细菌DJ16(保藏编号：CCTCC M 2014578)脂肪酸自动鉴定分析
1.获取菌体
采用4区划线将菌株接种在TSB平板上。刮取第三区约40mg的菌量，涂抹在带有Teflon螺盖的试管底部，同时做好标记。
2.皂化
(1)吸取1.0(±0.1)mL的试剂1，注入试管内，将含内垫的螺旋盖旋紧，Vortex振荡5～10s；
(2)将试管浸入95～100℃的水浴锅中5min；
(3)取出试管，不要拧开盖子，用Vortex振荡5～10s；
(4)放回95～100℃的水浴锅中反应25min，注意盖子是否旋紧；
(5)取出试管，放入冷水中冷却。
3.甲基化
(1)拧开螺旋盖，加入2.0(±0.1)mL的试剂2；
(2)拧紧螺旋盖，用Vortex振荡5～10s；
(3)放入80±1℃的水浴锅中反应10(±1)min；
(4)取出试管，放入冷水中冷却。
4.萃取
(1)拧开螺旋盖，加入1.25(±0.1)mL的试剂3；
(2)拧紧螺旋盖，将试管轻柔颠倒混合10min；
(3)拧开螺旋盖，用玻璃吸管取出下层液体，弃去，保留上层液体。
5.洗涤
(1)加入3.0(±0.1)mL的试剂4；
(2)拧紧螺盖，将试管轻柔颠倒混合5min；
(3)静置等待分层，若分层不够清晰，加入4～5滴的饱和NaCl溶液；
(4)用干净玻璃吸管取出约200μL的上层液体，移到GC小管中，准备气相色谱分析。
6.脂肪酸气相分析
利用Agilent气相色谱仪和MIDI Sherlock程序对提取的样品进行脂肪酸组分和系统分析。色谱条件：氢离子火焰检测器(FID)，检测器温度为300℃；色谱柱为HP-ULTRA2型毛细柱；汽化室温度为250℃；载气为H2，30mL/min；进样量为0.2μL；炉温由170℃保持5℃/min上升到260℃。脂肪酸气相分析结果见图2和表4。
表4脂肪酸组分百分比含量
脂肪酸组分 百分含量％
C12:00 2.50
C12:0 2OH 0.39
C14:00 6.54
C16:1w5c 0.22
C16:00 32.92
C17:0cyclo 9.32
C17:00 0.87
C18:1w9c 0.58
C18:00 1.70
C19:0cyclo w8c 0.23
Summed Feature2 7.97
Summed Feature3 25.19
Summed Feature8 11.57
Summed Feature 2(12:0aldehyde？/16:1iso I/14:03OH)
Summed Feature 3(16:1w7c/16:1w6c)
Summed Feature 8(18:1w7c/18:1w6c)
实施例5：沙雷氏菌属细菌DJ16(保藏编号：CCTCC M 2014578)的发酵
沙雷氏菌属细菌DJ16，2mL(活菌浓度为108-1010CFU/mL)，接种于100mL培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为37℃，pH 7.2，转速为200r/min，发酵时间为24h。摇瓶发酵培养基为LB培养基，成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、去离子水1000mL，pH7.2。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐中试试验，取100mL摇瓶发酵种子液(种子液的浓度为108CFU/mL)接种到10L发酵罐中，装液量5L，发酵温度为37℃，pH 7.2，搅拌速度为300r/min，发酵24h，通气比为1︰1。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将发酵培养液置于4℃备用。
实施例6：沙雷氏菌属细菌DJ16菌(保藏编号：CCTCC M 2014578)在一定重金属离子压力下的生长曲线，其实验过程如下：
1)用LB培养基活化DJ16菌株，并配制好100mmol/L Cu2+，100mL；100mmol/L Cd2+，100mL；100mmol/L Pb2+，100mL；100mmol/L Zn2+，100mL的重金属离子溶液；2)配制6份LB培养基300mL，并用高温蒸汽灭菌锅在121℃下灭菌15分钟；3)将事先配好并灭菌的Cu2+、Cd2+、Pb2+、Zn2+金属离子溶液分别加入到培养基中使各管培养基中离子终浓度均为2mmol/L，其中每种浓度的金属离子培养基各两瓶；4)向三角瓶内接种1％培养基量的活化的DJ16菌株，同一浓度的金属离子培养基只接种一瓶，另外一瓶作为对照；5)将接种好的三角瓶放入30℃的恒温摇床内，180r/min下培养24小时；6)每隔2个小时从三角瓶内取一次菌液测其OD数值并记录下来，将取出的菌液用分光光度计在OD600下测其吸光值，每一次都用其空白对照经行调零。
根据图3可知，2mmol/L Cu2+的压力下沙雷氏菌株的生长对数期在10h到12h之间，稳定期在12h之后，适应期较长。
由图4可知，2mmol/L Zn2+的压力下沙雷氏菌生长对数期为7h到11h之间，稳定期在11h之后且适应期较短。
由图5可知，2mmol/L Cd2+的压力下沙雷氏菌生长对数期为8h到13h之间，稳定期在13h之后且适应期较短。
由图6可知，2mmol/L Pb2+的压力下沙雷氏菌生长对数期为6h到12h之间，稳定期在12h之后且适应期较长。
实施例7：沙雷氏菌属细菌DJ16菌的耐盐、耐pH及温度实验
1)用LB培养基活化DJ16菌株；
2)配制LB培养基800mL，分装于21个三角瓶中，将其中9瓶pH分别调为3、4、5、6、7、8、9、10、11，再将其中7瓶的NaCl含量调为2％、4％、6％、8％、10％、11％、12％，再将5瓶加入2％琼脂，并用高温蒸汽灭菌锅在121℃下灭菌15分钟。固体培养基待冷却后倒好平板；
3)向所有三角瓶内接种1％的活化的DJ16菌株，平板上用涂棒涂布200μL的DJ16菌液。
4)将接种好的液体培养基放入30℃的恒温摇床内，180转下培养24小时。将平板分别放入4℃、15℃、28℃、36℃、42℃下静置培养；
5)培养完成后，用分光光度计测量液体培养基的OD600数值，并检查平板中涂布的菌是否生长。
实验结果表明，在pH 4-10之间均能生长；盐浓度10％以下均能生长；在15℃-36℃下DJ16菌株能够在平板中生长良好，而在4℃和42℃的环境下，菌株也能够在平板中生长。
实施例8：沙雷氏菌属细菌DJ16(保藏编号：CCTCC M 2014578)耐受重金属实验
1)用LB培养基活化DJ16菌株，并配制好100mmol/L Cu2+，100mL；100mmol/L Pb2+，100mL；100mmol/L Cd2+，100mL；100mmol/L Zn2+，100mL的重金属离子溶液；
2)配制LB培养基600mL，分装于60支试管中，并用高温蒸汽灭菌锅在121℃下灭菌15min；
3)将事先配好并灭菌的Cu2+、Cd2+、Pb2+、Zn2+金属离子溶液分别加入到培养基中使各管培养基的终浓度按表3所示其中每种浓度的金属离子培养基各两支；
4)向试管内接种1％的活化的DJ16菌株，同一浓度的金属离子培养基只接种一支，另外一支作为对照；
5)将接种好的培养基放入30℃的恒温摇床内，180r/min下培养24小时；
6)将培养好的菌液用分光光度计在OD600下测其吸光值，每一管都用其空白对照经行调零。
通过图7和表5的试验结果表明，菌株DJ16对Cu2+的最大耐受能力为6mmol/L，对Zn2 +的最大耐受能力在10mmol/L以上，对Cd2+的最大耐受能力为10mmol/L，对Pb2+的最大耐受能力为5mmol/L。
表5 菌株DJ16耐受重金属试验结果
试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Cu2+//mmol/L 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
Zn2+//mmol/L 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
Cd2+//mmol/L 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
Pb2+//mmol/L 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
实施例9：沙雷氏菌属细菌DJ16吸附重金属实验
1)在2mmol/L的Cu2+、Zn2+、Cd2+、Pb2+金属离子浓度下培养几批菌体，培养时间分别为6h、12h、24h、36h；2)将培养好的菌体离心、清洗收集备用，烘干后并准确称取干菌体的重量。3)用去离子水多次清洗实验需用到的三角瓶、移液管等仪器，并烘干备用。4)取菌体于三角瓶中，将锥形瓶放在电热板上加热，100℃一小时，120℃两小时，180℃一小时，210℃至冒高氯酸白烟(与水气有明显区别，白烟呈卷曲状上升)，白烟基本散尽，体积约为1-2mL，取下冷却。5)转移定容：将锥形瓶内的溶液转移至50mL容量瓶内，用1％稀硝酸冲洗歪茎漏斗一遍，锥形瓶3遍以上，洗液也转移到容量瓶中，最后用1％稀硝酸定容至刻度线。6)将定容好的溶液用滤膜过滤一次，将滤液收集保存。7)用1000mg/L的铜、锌、镉、铅标准溶液配成2、4、8、12、16mg/L的标准溶液以制作标准曲线。8)用火焰原子分光光度计测出样品和标准品的吸光度值。
DJ16菌株吸收金属离子Cu2+的结果：测得Cu2+金属离子的标准曲线相关系数为0.999 3。结合之前称量的干菌体重量，得出不同培养时间下，每克干菌体所吸附重金属离子的质量(表6)。
表6 每克干菌体吸附Cu2+量
DJ16菌株吸收金属离子Zn2+的结果：测得Zn2+金属离子的标准曲线相关系数为0.999 8。结合之前称量的湿菌体重量，可得出不同培养时间下，每克湿菌体所吸附重金属离子的质量(表7)。
表7 每克干菌体吸附Zn2+量
培养时间(h) 0 6 12 24 36
Zn2+吸附(mg/g干重) 0 0.1 9.0 5.1 4.8
DJ16菌株吸收金属离子Cd2+的结果：测得Cd2+金属离子的标准曲线的相关系数为0.991 1。结合之前称量的湿菌体重量，可得出不同培养时间下，每克干菌体所吸附重金属离子的质量(表8)。
表8 每克干菌体吸附Cd2+量
培养时间(h) 0 6 12 24 36
Cd2+吸附(mg/g干重) 0 0.1 0.5 6.5 8.8
DJ16菌株吸收金属离子Pb2+的结果：测得Pb2+金属离子的标准曲线的相关系数为0.990 3。结合之前称量的湿菌体重量，可得出不同培养时间下，每克干菌体所吸附重金属离子的质量(表9)。
表9 每克干菌体吸附Pb2+量
培养时间(h) 0 6 12 24 36
Pb2+吸附(mg/g干重) 0 0.2 0.7 2.0 5.0

Claims (2)

1.一种耐受和富集重金属的格氏沙雷氏菌DJ16，保藏编号为CCTCC NO：M2014578，该细菌的16S rRNA的基因核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO: 1所示。
2.权利要求1所述的格氏沙雷氏菌DJ16在富集土壤和水体重金属中的应用。
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