CN104560732B - 一种可在碱性条件下高效预处理木质素原料的云芝栓孔菌及其应用 - Google Patents

一种可在碱性条件下高效预处理木质素原料的云芝栓孔菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种可在碱性条件下高效预处理木质素原料的新菌种：云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T‑4。该菌于2014年09月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No.9582。本发明的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T‑4能够解决木质纤维素原料生物预处理效率低、周期长等一系列问题，在利用木质纤维素原料制备燃料乙醇、沼气等方面具有很大的潜力，为实现木质纤维素原料的清洁、高效及低成本的预处理奠定基础。

Description

一种可在碱性条件下高效预处理木质素原料的云芝栓孔菌及 其应用
技术领域：
本发明属于环境与新能源技术领域，具体涉及一种可在碱性条件下预处理木质素原料的云芝栓孔菌及其应用。
背景技术：
木质纤维素是一种可再生资源并且是地球上最丰富的有机物之一。我国的木质纤维素原料非常丰富，每年仅农作物秸秆就有7亿多吨，加上数量巨大的林业纤维废料和工业纤维废渣，每年可利用的木质纤维原料总量可达20亿吨以上。因此，木质纤维素在生物材料领域和生物能源领域具有巨大的潜在应用价值。
木质纤维素主要由纤维素、半纤维素及木质素这三种成分组成，其中木质素约占15％-30％左右。木质素本身结构复杂，分子量大，不含易水解的单元，是公认的最难以化学和生物降解的天然高聚物之一。在木质纤维素中，木质素以一种物理屏障存在，紧密地包裹在纤维素和半纤维素的外面，成为许多工业化过程中有效利用木质纤维素材料的一个主要障碍。因此，木质素的降解是能否有效利用木质纤维素原料的关键。目前针对木质纤维素原料中的木质素的去除或者降解主要有三种方法：物理法、化学法及生物法等。物理法主要包括机械粉碎法、高温液态水法等，这些方法一般都需要高温高压条件及较高的能耗，对条件要求比较苛刻、对设备要求也比较高，很难被真正应用于实际生产。化学法主要包括酸(如硫酸、盐酸及一些有机酸等)、碱预处理法包(包括氢氧化钠、氢氧化钾、氨水等)等，因为成本低廉，因此化学法是目前实际应用中最常用的方法，但化学法一般对设备要求比较高、容易引起环境污染、发酵前需要用大量的酸碱中和、易产生发酵抑制剂等。生物法是是从20世纪20年代起开始研究的，采用降解木质素的微生物在培养过程中可以产生分解的酶类，从而可以专一性降解木质素，除去木质素以解除其对纤维素的包裹作用。此法具有作用条件温和、能耗低、专一性强，不存在环境污染，处理成本低等优点，具有很大的发展潜力。但是，目前生物法预处理木质纤维素存在木质素降解微生物种类少，降解条件苛刻，木质素降解酶类的酶活力低，作用周期长等问题。
从目前已有的报道来看，大部分的木质素降解菌降解木质素都是在酸性或者中性条件下进行的，最适pH范围都在3.0-7.0之间，而在碱性条件下利用微生物进行木质纤维素的预处理还未见报道。由于木质素本身具有在碱性条件下溶解性较高的生理学特性，因此利用嗜碱性微生物在温和碱性条件下预处理木质纤维素，微生物对木质素的降解作用与碱性条件对木质素的溶解作用有望形成协同效应，从而提高降解效率，缩短作用周期。
利用嗜碱性微生物在温和碱性条件下进行木质纤维素原料的预处理将能很好地解决生物预处理所遇到的效率低、周期长等问题。这主要基于以下几个方面的原因：(1)在碱性条件下，微生物在预处理木质纤维素时，不容易被染杂菌，能减少纤维素和半纤维素的损失；(2)反应条件相对温和(常温常压条件)且成本较低，可以采用低浓度并且可重复利用的碱性物质如碱石灰或者氨水调节pH；(3)最重要的是木质素本身具有在碱性条件下溶解性较高的生理学特性，因此微生物对木质素的降解与碱性条件木质素的溶解作用，有望形成协同效应，提高降解效率，缩短作用周期。
发明内容：
本发明的第一个目的是提供一种在碱性条件下高效预处理木质素原料的新菌种：云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4。该菌于2014年09月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No.9582。
对菌株的形态特征观察：菌落白色，绒毛状，气生菌丝较发达，在适宜的琼脂培养基上长时间培养不形成完整的子实体，能够形成菌管。菌丝管状透明，有明显的锁状联合。担孢子短圆柱形，无色，薄壁，光滑。
用真菌DNA提取试剂盒提取云芝栓孔菌(Trametes versicolor)的全基因，然后以提取的基因为模板，以通用引物NS1：5’-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3’；NS4：5’-CTTCCGTCAATTCCTTTAAG-3’进行PCR扩增，T-4的18S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。将获得的序列提交NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)进行Megablast，获取同源性高的相关序列，用ClustalX软件进行比对，Mega软件进行系统发育分析，采用邻接法构建系统发育树。根据18S rDNA序列所作的系统发育树如图1所示。扩增得到1.7kbp的基因序列，在GenBank核酸序列数据库中进行同源序列搜索，T-4与Trametes versicolor(AY705965.1)的同源性为99％，T-4为云芝栓孔菌的新菌株，将其命名为云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4，GenBank接受号为KP208683。
对云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4的研究表明：在碱性条件下，15天内对甘蔗渣中木质素的降解率达到34.7％，并且其致密结构基本被完全破坏；15天内对玉米秸秆中木质素的降解率达到28.3％，并且其致密结构基本被完全破坏。因此，本发明的第二个目的是提供云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下预处理木质素原料的应用。
所述的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下预处理木质素原料的应用，具体预处理方法包括以下步骤：
(1)、在碱性条件下制备云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4作为降解木质素的接种物；
(2)、往木质纤维素原料中加入步骤(1)制备的云芝栓孔菌(Trametesversicolor)T-4接种物，静置培养，定期取样测定木质纤维素原料中各成分变化情况。
优选，步骤(1)的制备方法为：将云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4从斜面挑取一小块接入于PDA固体培养基平板上，28-35℃静置培养120h，即得到碱性条件下预处理木质纤维素原料的接种物。
本发明中的用于预处理的木质纤维素原料的配制方法为：称取一定重量的粉碎至60～80目左右的木质纤维素原料，然后按质量比1:2～1:6加入pH8.0～11.0的碱性营养液，混合均匀后，在温度121℃条件下，灭菌20分钟，冷却后备用。
所述的碱性营养液的制备方法为：分别称量NH4NO3 1.5g，K2HPO4 1g，KH2PO4 1.2g，MgSO40.2g，CaCl2 0.1g，FeSO4 0.05g，MnSO4 0.02g，以蒸馏水定容至1L，然后用NaOH调节pH值到8～11之间。
步骤(2)所述的加入步骤(1)制备的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4接种物，优选方法为：用灭过菌的打孔器将平板内长满菌丝的固体培养基切成约直径0.5mm大小的块状，每1g木质纤维素原料降解底物接入2块。
所述的PDA固体培养基为本领域技术人员所熟知的常规培养基。
本发明提供了一种在碱性条件下高效预处理木质素原料的新菌种：云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4，能够解决木质纤维素原料生物预处理效率低、周期长等一系列问题，在利用木质纤维素原料制备燃料乙醇、沼气等方面具有很大的潜力，为实现木质纤维素原料的清洁、高效及低成本的预处理奠定基础。
本发明的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4于2014年09月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCC No.9582。
附图说明：
图1为云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4的18S rDNA系统发育树；
图2为云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在不同pH值条件下的对甘蔗渣中木质素的降解率变化情况；
图3为经过云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4预处理后甘蔗渣结构变化的环境扫描电镜(SEM)图，其中，A为原料预处理前扫描电镜图，B为原料预处理后扫描电镜图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
1、菌株分离
在内蒙、宁夏等地盐碱地或者盐碱湖附近，采集腐木周围距地表10cm处土壤样品，放入4℃冰箱备用。
配制以甘蔗渣为唯一碳源的碱性液体培养基100mL，灭菌冷却后接入1g采集的土壤样品，30℃，150rpm条件下摇床培养。5天后取培养好的菌液1mL转入新鲜的以甘蔗渣为唯一碳源的碱性液体培养基中，同样条件下培养。如此反复转接3-5次。然后取培养好的菌液梯度稀释后涂布到含甘蔗渣为唯一碳源的碱性固体培养基上，30℃静置培养3-5天，观察菌落特征，分别挑取生长良好且菌落形态不同的菌划线培养，3-5天后重新挑取单菌落划线培养，如此反复3-5次得到纯化的菌种。
挑取纯化好的菌种接入碱性土豆固体培养基，30℃温度条件下静置培养5天。然后用灭过菌的打孔器将平板内长满菌丝的固体培养基切成约直径0.5mm大小的块状，并将这些含菌丝的土豆培养基块接入到用于预处理的木质纤维素原料中，每1g30℃温度条件下静置培养，每间隔2天取样一次，测定其中木质素、纤维素、半纤维素含量变化情况。根据木质素的降解情况，进一步筛选出在碱性条件下高效预处理木质纤维素原料的菌种。
其中，以甘蔗渣为唯一碳源的碱性液体培养基的组分为：甘蔗渣(60-80目)5g/L，NH4NO3 1.5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 1.2g/L，MgSO4 0。2g/L，CaCl2 0.1g/L，FeSO4 0.05g/L，MnSO4 0.02g/L，蒸馏水1000mL，以NaOH调节pH值为8～11之间。以甘蔗渣为唯一碳源的碱性固体培养基在液体培养基组份基础上添加2％的琼脂。
2、云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4的鉴定
通过形态特征观察及18S rDNA基因序列分析对实施例1得到的T-4菌株进行鉴定。
(1)、形态特征观察：菌落白色，绒毛状，气生菌丝较发达，在适宜的琼脂培养基上长时间培养不形成完整的子实体，能够形成菌管。菌丝管状透明，有明显的锁状联合。担孢子短圆柱形，无色，薄壁，光滑。
(2)、18S rDNA系统进化分析：用真菌DNA提取试剂盒(由广州健仑生物科技有限公司生产)提取T-4的全基因，然后以提取的基因为模板，以通用引物(由生工生物工程(上海)股份有限公司合成)NS1：5’-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3’；NS4：5’-CTTCCGTCAATTCCTTTAAG-3’进行PCR扩增。
PCR反应体系为：DNA模板1μL，10×PCR缓冲液2μL，上、下游引物各1μL，Taq DNA聚合酶1μL，10×dNTP 2μL，补水至20μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃40s、42℃1min、72℃1min，30个循环，最后于72℃延伸10min，4℃保存。
扩增产物进行10g/L琼脂糖凝胶电泳分析，纯化和回收PCR产物，送生物公司进行序列测定，T-4的18S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。将获得的序列提交NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)进行Megablast，获取同源性高的相关序列，用ClustalX软件进行比对，Mega软件进行系统发育分析，采用邻接法构建系统发育树。根据18S rDNA序列所作的系统发育树如图1所示。
扩增得到1.7kbp的基因序列，在GenBank核酸序列数据库中进行同源序列搜索，T-4与Trametes versicolor(AY705965.1)的同源性为99％，T-4为云芝栓孔菌的新菌株，命名为云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4，GenBank接受号为KP208683。
3、芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下对甘蔗渣的预处理
将纯培养的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4单克隆菌落斜面挑取一小块接入于pH值范围在8.0-11.0之间的土豆固体培养基平板上，30℃静置培养120h后，用灭过菌的打孔器将长满菌丝的培养基切成直径0.5cm的小圆块，然后用接种针将这些带菌丝的培养基小圆块接入含有甘蔗渣培养基的三角瓶中，每1g甘蔗渣原料接种2块。用于预处理的甘蔗渣原料的配制方法为：称取一定重量的粉碎至60-80目左右的甘蔗渣原料，然后按质量比1:5与pH9.0的碱性营养液进行混合，混合均匀后，在温度121℃条件下，灭菌20分钟，冷却后备用。所述的碱性营养液的制备方法为：分别称量NH4NO3 1.5g，K2HPO4 1g，KH2PO4 1.2g，MgSO4 0.2g，CaCl2 0.1g，FeSO4 0.05g，MnSO4 0.02g，以蒸馏水定容至1L，然后用NaOH调节pH值到9.0。
接种之后的甘蔗渣培养基放入恒温培养箱中在30℃温度的条件下静置连续培养。在培养过程中，每隔3天取一次样品，将每天所取的样品，利用NREL法测定甘蔗渣原料组分的含量。由图2可知15天内甘蔗渣中木质素的的降解率达到34.7％，并且其致密结构基本被完全破坏。
4、芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下对玉米秸秆的预处理
实验方法和实验步骤同实施例3，仅将降解底物改为玉米秸秆。云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4能够很好地预处理玉米秸秆，15天内降解率达到28.3％，并且其致密结构基本被完全破坏。

Claims (5)

1.一种云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4，其保藏编号为：CGMCC No.9582。
2.权利要求1所述的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下预处理木质素原料的应用。
3.根据权利要求2所述的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下预处理木质素原料的应用，其特征在于，预处理方法包括以下步骤：
(1)、碱性条件下制备云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4作为降解木质素的接种物；
(2)、往木质纤维素原料中加入步骤(1)制备的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4接种物，静置培养，定期取样测定木质纤维素原料中各成分变化情况。
4.根据权利要求3所述的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下预处理木质素原料的应用，其特征在于，步骤(1)的制备方法为：将云芝栓孔菌(Trametesversicolor)T-4从斜面挑取一小块接入于土豆固体培养基平板上，28-35℃静置培养120h，即得到碱性条件下预处理木质纤维素原料的接种物。
5.根据权利要求3所述的云芝栓孔菌(Trametes versicolor)T-4在碱性条件下预处理木质素原料的应用，其特征在于，步骤(2)所述的加入步骤(1)制备的云芝栓孔菌(Trametesversicolor)T-4接种物，方法为：用灭过菌的打孔器将平板内长满菌丝的固体培养基切成约直径0.5mm大小的块状，每1g木质纤维素原料降解底物接入2块。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104830701A (zh) * 2015-05-21 2015-08-12 河北省微生物研究所 变色栓菌发酵液的制备方法及变色栓菌发酵液在降解黄曲霉毒素b1中的应用
CN104830741A (zh) * 2015-05-28 2015-08-12 陕西科技大学 一种造纸废水复合微生物菌剂的制备方法
CN108384825A (zh) * 2018-05-15 2018-08-10 何治伟 一种沼气生产方法
CN112374615B (zh) * 2020-11-26 2022-06-10 浙江大学 一种优化云芝腐解秸秆提升腐解液抑藻效果的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101280277A (zh) * 2008-04-14 2008-10-08 山东大学 一种粗毛栓菌及其培养方法与应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101280277A (zh) * 2008-04-14 2008-10-08 山东大学 一种粗毛栓菌及其培养方法与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Evaluation of white-rot fungi-assisted alkaline/oxidative pretreatment of corn straw undergoing enzymatic hydrolysis by cellulase;Hongbo Yu et al.;《Journal of Bioscience and Bioengineering》;20100903;第110卷(第6期);第661页右栏第3段，表1 *
耐碱性真菌纤维素酶生产菌的筛选及酶学性质的初步研究;陈冠军等;《工业微生物》;20001231;第30卷(第4期);第24页右栏第6段 *
黑液体生物处理研究进展;彭园花等;《中国造纸学报》;20061231;第21卷(第3期);全文 *

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