CN104522466A - 一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用 - Google Patents
一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用 Download PDFInfo
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,尤其是在保健食品中的应用,还公开了该淫羊藿酸性多糖的制备方法,其方法如下:以淫羊藿为原料,经脱脂、水提醇沉、去除蛋白、离子交换、透析和干燥工序制备获得。该方法操作简单、多糖得率较高,成本低、材料易于获取、高效实用、适合工业化生产。本发明中的淫羊藿酸性多糖对秀丽线虫衰老相关的神经退行性疾病模型的试验证实,其不仅能够显著增强体外清除自由基的能力,提高体内抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化物产生,提高氧化胁迫条件下秀丽线虫的存活率,还能缓解氧化胁迫条件下,多聚谷氨酰胺毒性蛋白异常聚集引起的神经损伤,表明其具有良好的神经保护作用。
Description
技术领域
本发明属于食品技术领域,进一步属于健康食品(也称之为保健食品或功能食品)技术领域,具体涉及一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用。
技术背景
目前,随着全球老龄化进程的加快,与年龄相关的神经退行性疾病(例如:阿尔兹海默病,肌肉萎缩性侧索硬化症,亨廷顿氏病)已经成为严重危害人类生命健康和降低生活质量的重大疾病,深入了解此类疾病的发病机制,开发缓解此类疾病病症的产品都将为人类的健康做出重要贡献。现代研究表明,机体处于应激环境会加剧神经退行性疾病相关毒性蛋白质的异常聚集,促使内源性活性氧聚集加剧、胞内抗氧化代谢失衡、相关酶活性降低、生物大分子(脂质、蛋白质、DNA等)损伤、细胞凋亡。同时,蛋白质异常聚集在机体内进一步将诱发氧化、炎症等多种应激反应而导致神经元损伤和神经退行性病变。因此,缓解相关蛋白质的错误折叠和异常聚集、清除活性氧都将在神经保护方面起着重要的作用。
我国传统而又丰富的中药材资源,为缓解衰老相关的神经退行性疾病的症状提供了物质基础,目前已发现部分中药提取物在神经保护方面具有潜在的研究和开发价值。淫羊藿为小檗科淫羊藿属的植物,除具补肾壮阳,祛风除湿,治阳痿不举,小便淋沥,筋骨挛急,半身不遂,腰膝无力,风湿痹痛,四肢不仁和更年期高血压等作用,具有显著的药用保健价值。作为一味重要的传统中药,现代临床试验和研究表明淫羊藿活性成分具有广泛的药理活性和药效功能:抗炎、抗病原微生物、抗氧化、抗肿瘤和抗衰老等作用,但是目前人们对淫羊藿多糖尤其是淫羊藿酸性多糖在神经保护方面的研究和应用尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,采用该淫羊藿酸性多糖作为活性成分制成的食品或保健食品具有抗神经退行性疾病功效。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的:一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用。
本发明所述的食品优选为保健食品。
本发明所述的淫羊藿酸性多糖可以单独或者与其它活性成分合用。
本发明所述的保健食品是以具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖作为唯一活性成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的辅料制备获得的。
其中所述的抗神经退行性疾病作用是指对以氧化胁迫损伤和蛋白质异常聚集为主要病理特征的神经系统疾病的防治作用。
本发明中所述的淫羊藿酸性多糖优选通过以下方法制备获得:一种淫羊藿酸性多糖的制备方法,以淫羊藿为原料,经包括脱脂、水提、醇沉、去除蛋白质、离子交换和透析工序制备获得,制备获得的淫羊藿酸性多糖具有抗神经退行性疾病作用,能制备具有神经保护作用的保健食品。
作为本发明的一种优选的实施方式,本发明中的淫羊藿多糖具体通过以下方法制备获得:取原料淫羊藿,经脱脂处理,将脱脂处理后的淫羊藿采用水提取,得淫羊藿水提取液,将淫羊藿水提取液进行浓缩后得浓缩液,将浓缩液采用乙醇进行醇沉获得沉淀物,将沉淀物进行去除蛋白质处理,获得淫羊藿粗多糖,将淫羊藿粗多糖过阳离子交换柱,用水洗脱,洗脱液再过阴离子交换柱,采用洗脱溶液洗脱,得到的洗脱液经透析袋透析,浓缩和干燥处理后,获得淫羊藿酸性多糖。
在该淫羊藿酸性多糖的制备方法中:
脱脂处理时采用体积百分含量优选为70~95%的乙醇水溶液,其与原料淫羊藿的用量关系优选为2~30mL:1g,脱脂处理时的温度优选为50~90℃,脱脂时间优选为1~20h。
将脱脂处理后的淫羊藿采用水提取时,水的用量与脱脂处理后的淫羊藿的用量关系优选为2~30mL:1g,水提取温度优选为50~100℃,水提取时间优选为3~20h,提取1~5次。
将沉淀物进行去除蛋白质处理时优选采用Sevage法,Sevage法中溶剂采用三氯甲烷和正丁醇,二者的体积比优选为2~8:1,Sevage法中溶剂和沉淀物的体积比优选为1:3~6,去除蛋白处理时优选充分震荡2~10h。
所述的阴离子交换柱优选为纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶或树脂,所述的洗脱液为醋酸盐、磷酸盐、巴比妥酸盐、柠檬酸盐、钠盐、钾盐、铵盐或甘氨酸,其浓度优选为0.1~4.0mol/L。阳离子柱优选为强酸苯乙烯阳离子交换树脂。
透析袋的截留分子量优选为1~5kDa。
本发明具有如下优点:
(1)本发明中的淫羊藿酸性多糖对秀丽线虫衰老相关的神经退行性疾病模型的试验证实,其不仅能够显著增强体外清除自由基的能力,提高体内抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化物产生,提高氧化胁迫条件下秀丽线虫的存活率,还能够缓解氧化胁迫条件下,多聚谷氨酰胺毒性蛋白的异常聚集引起的神经损伤,表明其具有良好的神经保护作用;
(2)本发明的淫羊藿酸性多糖在整体动物水平上可缓解氧化应激诱发的毒性蛋白聚集引起的神经退行性病变,可应用于开发具有抗神经退行性疾病的保健食品中,同时可以推进中药现代化发展和多糖产品的广泛应用,为人类神经退行性疾病做出重大贡献;
(3)本发明的淫羊藿酸性多糖的制备方法简易、周期短、成本低、工艺流程简单、安全有效、适合工业化生产。
附图说明
下面通过具体的实施方式及药效学研究结果对本发明作进一步说明。
图1是实施例1中淫羊藿酸性多糖的制备方法流程图;
图2为实施例4制备的淫羊藿酸性多糖能够提高亨廷顿疾病的秀丽线虫模型HA759的避化率,说明淫羊藿酸性多糖能够有效的缓解神经毒性蛋白质的异常聚集所引起的神经毒性,其中*表示p<0.05,**表示p<0.01;
图3为实施例5中淫羊藿酸性多糖在一定的范围内对DPPH·和·OH的清除能力随的体外抗氧化作用;
图4为实施例6中淫羊藿酸性多糖降低机体内ROS总体水平的能力,其中A图表示淫羊藿酸性多糖对DPPH自由基的清除率;B图表示淫羊藿酸性多糖对羟基自由基的清除率;
图5为实施例7中当利用百草枯进行造模后,淫羊藿酸性多糖处理组的秀丽线虫的存活率与对照组比较,结果显示有显著性的提高(p<0.05);
图6为实施例8中淫羊藿酸性多糖对亨廷顿疾病相关的多聚谷氨酰胺模型的HA759和野生型秀丽线虫体内抗氧化酶活和MDA含量的作用效果,各组结果分别以与未给药组的相应指标的倍数关系来呈现。
具体实施方式
实施例1
本实例提供的淫羊藿酸性多糖,其通过以下方法制备获得,如图1中所示,取原料淫羊藿,采用体积百分含量为95%的乙醇水溶液进行脱脂处理,料液比为1g:10mL,提取温度为60℃,脱脂时间为4h,共脱脂处理3次,取脱脂后的淫羊藿,加入水提取,料液比为1g:10mL,提取温度为80℃,提取时间4h,共提取4次,合并提取液,将提取液在50℃采用减压浓缩处理,获得浓缩液,将浓缩液采用体积百分含量为95%的乙醇水溶液进行醇沉处理,体积百分含量为95%的乙醇水溶液与浓缩液的体积比为1:4,取沉淀物,水溶解后,采用Sevage法去除蛋白,其中溶剂为三氯甲烷和正丁醇,二者的体积比为5:1,Sevage法中溶剂和沉淀物的体积比为1:3,去除蛋白处理时充分震荡2h,将去除蛋白后产物采用体积百分95%的乙醇水溶液醇沉3次,冻干,获得淫羊藿粗多糖,将淫羊藿粗多糖采用50℃水溶解后,过滤,滤液上强酸苯乙烯阳离子交换柱,然后先采用3倍柱体积的水洗脱,洗脱液经减压浓缩,得浓缩液,将浓缩液上阴离子柱,采用体积3倍于柱床体积的氯化钠(0.5M)溶液洗脱,洗脱液采用3.5kD透析袋进行透析、50℃减压浓缩、冻干,获得酸性多糖。
本实施例中的淫羊藿酸性多糖,可以单独或者与其它活性成分合用,用于食品或保健食品中,当用于保健食品时,可以作为唯一活性成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的辅料剂型制成保健食品,保健食品的剂型可以为粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、泡腾剂、合剂、口服液或膏剂等。
实施例2
本实例提供的淫羊藿酸性多糖,其通过以下方法制备获得,如图1中所示,取原料淫羊藿,采用体积百分含量为80%的乙醇水溶液进行脱脂处理,料液比为1g:20mL,提取温度为70℃,脱脂时间为4h,共脱脂处理3次,取脱脂后的淫羊藿,加入水提取,料液比为1g:20mL,提取温度为90℃,共提取3次,合并提取液,将提取液在50℃采用减压浓缩处理,获得浓缩液,将浓缩液采用体积百分含量为95%的乙醇水溶液进行醇沉处理,体积百分含量为95%的乙醇水溶液与浓缩液的体积比为1:4,取沉淀物,水溶解后,采用Sevage法去除蛋白,其中溶剂为三氯甲烷和正丁醇,二者的体积比为4:1,Sevage法中溶剂和沉淀物的体积比为1:4,去除蛋白处理时充分震荡6h,将去除蛋白后产物采用体积百分95%的乙醇水溶液醇沉3次,冻干,获得淫羊藿粗多糖,将淫羊藿粗多糖采用50℃水溶解后,过滤,滤液上强酸苯乙烯阳离子交换柱,然后采用3倍柱体积的水洗脱,洗脱液经减压浓缩,得浓缩液,将浓缩液上阴离子柱,采用体积3倍于柱床体积的氯化钠(1M)溶液洗脱,洗脱液采用3.5kD透析袋进行透析透析、50℃减压浓缩、冻干,获得酸性多糖。
本实施例中的淫羊藿酸性多糖,可以单独或者与其它活性成分合用,用于食品或保健食品中,当用于保健食品时,可以作为唯一活性成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的辅料剂型制成保健食品,保健食品的剂型可以为粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、泡腾剂、合剂、口服液或膏剂等。
实施例3
本实例提供的淫羊藿多糖,其通过以下方法制备获得,如图1中所示,取原料淫羊藿,采用体积百分含量为70%的乙醇水溶液进行脱脂处理,料液比为1g:30mL,提取温度为90℃,脱脂时间为4h,共脱脂处理3次,取脱脂后的淫羊藿,加入水提取,料液比为1g:30mL,提取温度为100℃,共提取2次,合并提取液,将提取液在50℃采用减压浓缩处理,获得浓缩液,将浓缩液采用体积百分含量为95%的乙醇水溶液进行醇沉处理,体积百分含量为95%的乙醇水溶液与浓缩液的体积比为1:4,取沉淀物,水溶解后,采用Sevage法去除蛋白,其中溶剂为三氯甲烷和正丁醇,二者的体积比为6:1,Sevage法中溶剂和沉淀物的体积比为1:5,去除蛋白处理时充分震荡10h,将去除蛋白后产物采用体积百分95%的乙醇水溶液醇沉3次,冻干,获得淫羊藿粗多糖,将淫羊藿粗多糖采用50℃水溶解后,过滤,滤液上强酸苯乙烯阳离子交换柱,然后采用3倍柱体积的水洗脱,洗脱液经减压浓缩,得浓缩液,将浓缩液上阴离子柱,采用3倍柱体积氯化钾(2M)洗脱,洗脱液采用2.5kD透析袋进行透析透析、50℃减压浓缩、冻干,获得酸性多糖。
本实施例中的淫羊藿酸性多糖,可以单独或者与其它活性成分合用,用于食品或保健食品中,当用于保健食品时,可以作为唯一活性成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的辅料剂型制成保健食品,保健食品的剂型可以为粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、泡腾剂、合剂、口服液或膏剂等。
实施例4
转基因秀丽线虫HA759可以在ASH神经元中表达HtnQ(polyQ)150蛋白,而polyQ蛋白是亨廷顿疾病中关键的致病毒性蛋白,其异常聚集会引起神经毒性损害ASH神经元功能,导致秀丽隐杆线虫对高渗环境的敏感度下降,导致回避能力减退。因此,抑制其聚集能够有效缓解神经毒性。将实施例1中制得的淫羊藿酸性多糖,按照0.5mg/mL,1mg/mL,2mg/mL浓度分别加入L1期的转基因秀丽线虫HA759幼虫中,对照组加入等体积的S Medium,置于20℃培养3天后,收虫备用。将趋化板中间用30μL 8M甘油划一条直线,将平板分为A和B区。A区距边缘0.5cm处点上2μL 1M的NaN3,同侧距边缘1cm处点上2μL0.5%的苯甲醛乙醇溶液。在B区距甘油1cm处的平行线上均匀标记4个虫液位点。放入23℃培养箱60~150min后将板子转入55℃电烘箱放置5~30min后,取出板子,计算A区和B区线虫条数。并用公式计算其避化率(Avoidance index)=B区线虫条数/A区线虫条数+B区线虫条数。避化率以mean±SD表示,采用T检验比较多糖组合对照组的差异性。
图2显示淫羊藿酸性多糖在1mg/mL和2mg/mL浓度时均能够提高转基因秀丽线虫HA759的避化率,说明淫羊藿酸性多糖能够有效的缓解蛋白质异常聚集引起的神经毒性,抑制ASH神经元功能的损坏,起到神经保护作用。
实施例5
氧自由基是身体的代谢产物,其大量聚集使得抗氧化代谢失衡,抗氧化酶活性降低,导致机体细胞及组织氧化性损伤。因此,抑制其对细胞的氧化损伤能够有效缓解神经毒性。将实施例1制得的淫羊藿酸性多糖用于测定体外抗氧化活性。分别取浓度0~8mg/mL的多糖的无水乙醇溶液,加入0.2mmol/mL的DPPH·的无水乙醇溶液2mL,摇匀后在室温下黑暗处反应30min,测定517nm处吸光值A样。同时测定2mL多糖乙醇溶液和2mL乙醇混合液(A空白)、2mL DPPH·乙醇溶液与2mL乙醇溶液(A对照)在517处吸光值。
DPPH·清除率=[1-(A样品-A空白)/A对照]×100%
分别取0~16mg/mL的多糖溶液,加入1mL 9mmol/mL的FeSO4溶液,1mL9mmol/mL的水杨酸-乙醇溶液,最后加入1mL 8.8mmol/mL的H2O2溶液启动整个体系,37℃水浴反应30min。蒸馏水作空白。
·OH的清除率=[A空白-(A样品-A本底)]/A空白×100%
图3显示了淫羊藿酸性多糖在一定的范围内对DPPH·和·OH的清除能力随着样的浓度增加而增加,12mg/mL的淫羊藿酸性多糖溶液对·OH的清除率可达到约80%,2mg/mL的淫羊藿酸性多糖溶液对DPPH·的清除率可达到约95%。
实施例6
过氧自由基过量的存在于机体内将造成生物膜系统损伤以及细胞内氧化磷酸化障碍,促使蛋白质的异常聚集,与许多衰老相关疾病的发生相关。比如,突变亨廷顿蛋白的过表达损伤氧化磷酸化增加氧化应激导致细胞死亡。因此,降低氧化损坏是抵抗神经毒性的有效策略。将实施例1制得的淫羊藿酸性多糖2mg/mL加入到L1期HA759的幼虫中,20℃下培养3天,取出线虫,加入350μL的磷酸缓冲盐(pH 7.8),冰上匀浆充分,离心,收集上清液备用。用BCA工作液测定上清液蛋白含量。DCFH-DA作为一种用氧化敏感的荧光探针,可穿过细胞膜进入细胞内,与胞内ROS反应可转变为发出荧光型的DCF。通过荧光酶标仪检测虫体内DCF荧光强度可以间接反映细胞氧化应激的程度。即荧光值越大说明体内的氧化DCFH-DA探针的ROS水平越高。
图4表明淫羊藿酸性多糖能有效的降低机体内ROS总体水平,具有很好的体内抗氧化作用。
实施例7
将同步化后处于成虫初期的秀丽线虫用FUDR(抑制产卵剂)处理24h,在微孔板的每组中加入约100条线虫,其中样品组加入淫羊藿多糖溶液(实施例1制备获得)使其终浓度达到2mg/mL,对照组加入等体积的S Medium。在20℃的条件下培养2天后,向对照组和样品组分别加入百草枯(一种体内ROS诱导剂)使终浓度达到70mM,同时补加食物NA22使OD570≈0.6,放置20℃摇床。以加入百草枯为第0h,每隔12h统计秀丽线虫的存活状况,直至其全部死亡。统计过程中将身体僵直不懂并对微微震动无反应的秀丽线虫判断为死亡状态。
图5表明,当利用百草枯进行造模后,给药组的秀丽线虫的存活率与对照组相比,有显著性的提高(p<0.05)。表明淫羊藿酸性多糖能够延长百草枯氧化胁迫条件下的秀丽线虫的存活时间。
实施例8
将准备好的成虫初期的HA759和N2秀丽线虫,调整虫密度50条/100μL,将虫液0.9mL/孔加入24孔板中。多糖组(实施例1制备的淫羊藿酸性多糖)终浓度为2mg/mL,对照组加入等体积的S Medium,在20℃摇床下培养2天后,收集虫液,离心获得秀丽线虫。然后加入1mL PBS重悬秀丽线虫,在冰浴中匀浆,离心后收集上清液,采用BCA蛋白质定量法测定蛋白质浓度,分别对各组进行SOD活力、CAT活力和MDA含量测定。
取1M PBS(pH 7.4)、130mmol/L甲硫氨酸溶液、0.75mmol/L NBT溶液、20μmol/L核黄素溶液和100μmol/L EDTA-Na2溶液各150μL,混匀后加入0.75mL酶液,在80μE/(m2s)的光照强度下反应20min。对照组相同处理,用等体积的PBS代替酶液。空白组与对照组同样处理,但避光反应20min。反应结束后,在560nm处测定各组的吸光值。SOD活力计算公式如下:
SOD活力(U/mg protein)=[2×(Acontrol–Aenzyme)/(Acontrol–Ablank)]/Cp
式中,Aenzyme、Acontrol和Ablank分别表示酶液组、对照组和空白组的吸光值,Cp表示蛋白质浓度。SOD活力以mean±SD表示,采用T检验比较多糖组和对照组的差异性。
取20μL样品至1.5mL EP离心管中,加入过氧化氢酶检测缓冲液至40μL,混匀。再加入10μL过氧化氢溶液,混匀后于25℃反应1~5min后,加过氧化氢酶反应终止液以终止反应。于另一洁净的EP离心管内加入40μL过氧化氢酶检测缓冲液,再加入10μL已终止并混匀的上述反应体系,取出10μL加入到96孔板中的一个孔内,加入200μL显色工作液于25℃至少孵育15min后测定A520。样品过氧化氢酶CAT酶活力=[消耗过氧化氢微摩尔数]×[稀释倍数]/([反应分钟数]×[样品体积]×[蛋白浓度]),比较淫羊藿多糖处理后线虫体内CAT活力与对照组的差异。
取0.6mL 5%三氯乙酸溶液、0.4mL 0.67%TBA溶液和0.6mL细胞裂解液,混匀后置于100℃反应30min。反应结束后迅速置于冰上冷却,离心后取上清,在450nm、532nm和600nm处测定吸光值。各组脂质过氧化产物MDA含量计算公式为:MDA含量(nmol/mg protein)={[6.45×(A532-A600)]-0.56×A450}/Cp。式中,A450、A532和A600分别表示各组在450nm、532nm和600nm处的吸光值,Cp表示蛋白质浓度。MDA含量以mean±SD表示,采用T检验比较多糖处理组和对照组线虫MDA含量的差异性大小。
图6的结果表明,淫羊藿酸性多糖对亨廷顿疾病相关的多聚谷氨酰胺模型的HA759有显著地提高抗氧化酶活和降低MDA含量的作用,而在正常的N2组的SOD活力也有显著的增强作用。说明淫羊藿多糖通过提升机体的抗氧化酶活和减少脂质过氧化物的产生来缓解聚集的神经毒性蛋白的损伤作用。
实施例9
将实施例1制得的淫羊藿多糖,根据需要添加适量乳清蛋白、麦芽糊精等制备成为具有神经保护功效的粉末状态健康食品或保健食品,还可以添加其它常规辅料制成常规剂型。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围,实际上,除了采用本发明中提供上述方法制备获得淫羊藿酸性多糖具有上述抗神经退行性疾病功效外,采用本领域内常规的其它方法制备获得的淫羊藿酸性多糖(包括含有淫羊藿酸性多糖的淫羊藿提取物),作为唯一活性成分或主要活性成分用于制备的食品或保健食品也具有上述抗神经退行性疾病功效,此处不再一一赘述。
Claims (10)
1.一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:所述的食品为保健食品。
3.根据权利要求2所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:所述的淫羊藿酸性多糖单独或者与其它活性成分合用。
4.根据权利要求3所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:所述的保健食品是以具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖作为唯一活性成分或主要活性成分加上保健食品上可接受的辅料制备获得的。
5.根据权利要求1-4任一项所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:所述的抗神经退行性疾病作用是指对以氧化胁迫损伤和蛋白质异常聚集为主要病理特征的神经系统疾病的防治作用。
6.根据权利要求1-4任一项所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是所述的淫羊藿酸性多糖通过以下方法制备获得:以淫羊藿为原料,经包括脱脂、水提、醇沉、去除蛋白质、离子交换和透析工序制备获得。
7.根据权利要求6所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是所述的淫羊藿酸性多糖具体通过以下方法制备获得:取原料淫羊藿,经脱脂处理,将脱脂处理后的淫羊藿采用水提取,得淫羊藿水提取液,将淫羊藿水提取液进行浓缩后获得浓缩液,将浓缩液采用乙醇进行醇沉获得沉淀物,将沉淀物进行去除蛋白质处理,获得淫羊藿粗多糖,将淫羊藿粗多糖过阳离子交换柱,用水洗脱,洗脱液过阴离子交换柱,采用洗脱溶液洗脱后,洗脱液经透析袋透析、浓缩和干燥处理,获得淫羊藿酸性多糖。
8.根据权利要求7所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:脱脂处理时采用体积百分含量为70~95%的乙醇水溶液,其与原料淫羊藿的用量关系为2~30mL:1g,脱脂处理时的温度为50~90℃,脱脂时间为1~20h。
9.根据权利要求7所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:将脱脂处理后的淫羊藿采用水提取时,水的用量与脱脂处理后的淫羊藿的用量关系为2~30mL:1g,水提取温度为50~100℃,水提取时间为3~20h,提取1~5次。
10.根据权利要求7所述的具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用,其特征是:将沉淀物进行去除蛋白质处理时采用Sevage法,Sevage法中溶剂采用三氯甲烷和正丁醇,二者的体积比为2~8:1,Sevage法中溶剂和沉淀物的体积比为1:3~6,去除蛋白处理时充分震荡2~10h;所述的阳离子交换柱为强酸苯乙烯阳离子交换树脂,所述的阴离子交换柱为纤维素、葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶或树脂,所述的洗脱溶液为醋酸盐、磷酸盐、巴比妥酸盐、柠檬酸盐、钠盐、钾盐、铵盐或甘氨酸,其浓度为0.1~4.0mol/L;透析袋的截留分子量为1~5kDa。
Priority Applications (1)
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CN201410804803.2A CN104522466A (zh) | 2014-12-19 | 2014-12-19 | 一种具有抗神经退行性疾病作用的淫羊藿酸性多糖在制备食品中的应用 |
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Citations (2)
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CN102464726A (zh) * | 2010-11-05 | 2012-05-23 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 淫羊藿多糖及其组分和它们用于疫苗佐剂的用途 |
CN103550306A (zh) * | 2013-09-26 | 2014-02-05 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种延缓衰老和抗疲劳的药物组合物及其制备方法和应用 |
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2014
- 2014-12-19 CN CN201410804803.2A patent/CN104522466A/zh active Pending
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