CN104498596A - 一种水体游离基因污染物的浓集回收方法 - Google Patents

一种水体游离基因污染物的浓集回收方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104498596A
CN104498596A CN201410737432.0A CN201410737432A CN104498596A CN 104498596 A CN104498596 A CN 104498596A CN 201410737432 A CN201410737432 A CN 201410737432A CN 104498596 A CN104498596 A CN 104498596A
Authority
CN
China
Prior art keywords
water
episome
concentrates
pollutent
liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410737432.0A
Other languages
English (en)
Inventor
金敏
李君文
王大宁
邱志刚
谌志强
杨栋
刘璐
郭旋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Hygiene and Environmental Medicine Academy of Military Medical Sciences of Chinese PLA
Original Assignee
Institute of Hygiene and Environmental Medicine Academy of Military Medical Sciences of Chinese PLA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Hygiene and Environmental Medicine Academy of Military Medical Sciences of Chinese PLA filed Critical Institute of Hygiene and Environmental Medicine Academy of Military Medical Sciences of Chinese PLA
Priority to CN201410737432.0A priority Critical patent/CN104498596A/zh
Publication of CN104498596A publication Critical patent/CN104498596A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Abstract

本发明公开了一种水体游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：(1)核酸吸附颗粒的制备；(2)洗脱液的配制；(3)将核酸吸附颗粒装入过滤柱中；将待测水样流过过滤柱后，再用洗脱液流过过滤柱，收集流出的游离基因污染物为一次浓集液；在无菌条件下，将一次浓集液除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇或异丙醇并静置，离心收集沉淀；用无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；本发明操作简便，不需要任何仪器设备；处理水样体积大；浓集回收基因污染物的效率高；明显提高水环境中耐药基因和转基因成分等游离基因污染物的检测灵敏度，回收率高，为饮水安全提供保证。

Description

一种水体游离基因污染物的浓集回收方法
技术领域
本发明属于环境生物技术领域，涉及一种水体游离基因污染物的浓集方法。
背景技术
核酸，作为生命物质的遗传学基础，在生物死亡后，有可能会释放到环境中并持久性残留。如果该生命为耐药细菌或转基因生物，不论其耐药基因或转基因成分是直接排入水环境中，还是经土壤或空气等其它途径传播，在地表径流或大气沉降作用下，这些游离的耐药基因或转基因成分会最终被迁移到河流、湖泊、水库等水环境中。因此，水环境是大气、土壤、食品等其他介质中耐药基因或转基因成分的“汇”，即水体是耐药基因或转基因成分的储存库。
传统认为，耐药基因或转基因成分只能在特定条件下才能水平转移到受体细菌体内，使该细菌获得耐药性或转基因成分。然而，近几年来，越来越多的报道显示，耐药基因或转基因成分在环境中的转移和传播具有一定特殊性，水质因素、特殊(微)环境、特殊物质均可能在一定条件下诱导转化或转导的发生，使耐药基因或转基因成分转移传播给其它微生物，而导致耐药性或转基因成分转移和传播。例如，生物膜，作为一种广泛存在的特殊水体微环境，其相对的空间稳定及细菌的紧密接触促进了细菌结合转移的发生；纳米颗粒，已经被报道不仅显著促进水中耐药基因的接合转移，而且还可显著促进耐药基因的转化和转导；另外，美国环境医学科学研究院已经确定，转基因成分可以在一定条件下转移到肠道微生物的核酸组成中；陈建等也发现，海河、珠江等地表水均存在一定程度的人工质粒来源耐药基因(转基因成分)污染。因此，游离耐药基因或转基因成分等基因污染物不仅已经成为国内外公认的新型环境污染物，而且其污染已成为重大公共卫生与生态安全问题。
然而，一般情况下，水环境中游离耐药基因或转基因成分等基因污染物含量非常少，远低于现有检测方法如PCR、荧光定量PCR的检测灵敏度。因此，若想有效地检测饮用水、地表水、回用水等各种水体中的基因污染物，首先必须对一定水样进行浓集处理，从不同水体中将少量的基因污染物浓集、回收出来，以供实验室和/或现场检测用。
目前，水中核酸(包括质粒)的浓集，主要采用沉淀法和吸附洗脱法。其中，沉淀法利用等体积乙醇、异丙醇等有机试剂，将水样中游离核酸或质粒沉淀出来，再通过离心而将核酸或质粒浓集；吸附洗脱法则利用硅胶柱，将水中的游离核酸或质粒吸附在硅胶材料表面,然后再利用洗脱液将其洗脱回收。这些方法虽快速、灵敏，但仅适于小体积，一般为几毫升(吸附洗脱法)到几十毫升(有机试剂沉淀法)的水样，而对于100毫升以上的大体积水样，这些方法均不适用，不仅消耗大量有机试剂，而且回收效率易受水质影响。目前，国内外均没有适于大体积水，尤其自来水、饮用水、地表水、回用水等各种水体中核酸，尤其游离基因污染物的浓集技术或方法的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种从大体积的水体游离基因污染物的浓集回收方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种水体游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
(1)核酸吸附颗粒的制备：按比例，将12.6g的氯化铝缓慢加入至2L去离子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸钠水溶液90ml，混匀，调节pH＝7.2，形成凝胶；静置6～12h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗涤凝胶2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氢氧化铝凝胶，灭菌；将粒度在60～100目的层析用硅胶，经过蒸馏水淘洗除去漂在水面上的颗粒后，灭菌，按每300g灭菌后层析用硅胶加入0.5-1L含水氢氧化铝凝胶的比例，使灭菌后层析用硅胶浸透混匀，烤干，得到核酸吸附颗粒；
(2)洗脱液的配制：将15g氯化钠、30g胰蛋白胨、15g牛肉粉和3.75g甘氨酸加水至1L，用0.1M氢氧化钠水溶液调节pH至9；
(3)将所述载核酸吸附颗粒装入长与直径比为5-35的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；将待测水样以300-50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用洗脱液以40-50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇或异丙醇并静置0.5-2小时后，离心收集沉淀；用2.5-50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；所述待测水样与洗脱液的体积比为100：1-5。
待测水样的水源为自来水、纯净水、井水、回用水、二级出水、地表水或生活污水。
本发明的优点是
1.操作简便，不需要任何仪器设备；
2.处理水样体积大，并可根据情况处理不同体积水样；
3.浓集回收基因污染物的效率高；
4.可以明显提高水环境中耐药基因和转基因成分等游离基因污染物的检测灵敏度，可以将待检水样中20个基因拷贝数/mL的游离基因污染物进行浓集回收，回收率可达到95％以上。
5.为饮水安全提供保证。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明：
实施例1
核酸吸附颗粒的制备：
将12.6g的氯化铝缓慢加入至2L去离子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸钠水溶液90ml，混匀，调节pH＝7.2，形成凝胶；静置9h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗涤凝胶2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氢氧化铝凝胶，灭菌；将粒度在60～100目的层析用硅胶，经过蒸馏水淘洗除去漂在水面上的颗粒后，灭菌，按每300g灭菌后层析用硅胶加入0.8L含水氢氧化铝凝胶的比例，使灭菌后层析用硅胶浸透混匀，50℃烤干，得到核酸吸附颗粒。
实施例2
核酸吸附颗粒的制备：
将12.6g的氯化铝缓慢加入至2L去离子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸钠水溶液90ml，混匀，调节pH＝7.2，形成凝胶；静置6h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗涤凝胶2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氢氧化铝凝胶，灭菌；将粒度在60～100目的层析用硅胶，经过蒸馏水淘洗除去漂在水面上的颗粒后，灭菌，按每300g灭菌后层析用硅胶加入1L含水氢氧化铝凝胶的比例，使灭菌后层析用硅胶浸透混匀，60℃烤干，得到核酸吸附颗粒。
实施例3
核酸吸附颗粒的制备：
将12.6g的氯化铝缓慢加入至2L去离子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸钠水溶液90ml，混匀，调节pH＝7.2，形成凝胶；静置12h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗涤凝胶2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氢氧化铝凝胶，灭菌；将粒度在60～100目的层析用硅胶，经过蒸馏水淘洗除去漂在水面上的颗粒后，灭菌，按每300g灭菌后层析用硅胶加入0.5L含水氢氧化铝凝胶的比例，使灭菌后层析用硅胶浸透混匀，45℃烤干，得到核酸吸附颗粒。
实施例4
洗脱液的配制：将15g氯化钠、30g胰蛋白胨、15g牛肉粉和3.75g甘氨酸加水至1L，用0.1M氢氧化钠水溶液调节pH至9。
实施例5
5L自来水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例1制备的核酸吸附颗粒装入长为35cm，长与直径比为35的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌处理后的自来水5L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322(游离基因污染物，购于中国宝生物工程有限公司，大连)，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用100mL洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；用2.5毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对5L自来水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为99％。
实施例6
100L自来水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例2制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的自来水100L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用1L洗脱液以40毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积异丙醇并静置60分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；用50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对100L自来水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为96％。
实施例7
5L地表水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例3制备的核酸吸附颗粒装入长为35cm，长与直径比为35的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的地表水(天津市海河水)5L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用100mL洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；用2.5毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对5L地表水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为98％。
实施例8
100L地表水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例1制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的地表水(天津市海河水)100L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用5L洗脱液以40毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置120分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；用10毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对100L地表水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为95％。
实施例9
5L回用水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例1制备的核酸吸附颗粒装入长为35cm，长与直径比为35的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的回用水5L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用100mL洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；2.5毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对5L回用水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为98％。
实施例10
100L回用水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例2制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的回用水100L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用3L洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对100L回用水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为95％。
实施例11
100L纯净水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例2制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的纯净水100L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用3L洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对100L纯净水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为98％。
实施例12
100L井水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例2制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的井水100L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用3L洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对100L井中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为98％。
实施例13
100L污水处理厂二级出水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例2制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的污水处理厂二级出水100L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用3L洗脱液以50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇并静置30分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对100L二级出水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为96％。
实施例14
20L生活污水中游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：
将实施例2制备的核酸吸附颗粒装入长为100cm，长与直径比为5的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；取灭菌后的生活污水20L加入水样桶中，加入耐药质粒pBR322，获得最终浓度为20 gene copies/mL的待测水样，通过蠕动泵调节流量，将待测水样以300毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用1L洗脱液以40毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积异丙醇并静置60分钟后，10000转/分钟离心15分钟收集沉淀；用50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；最后，取2微升游离基因污染物的最终浓集液，利用荧光定量PCR技术检测浓集液中pBR322上的耐药基因氨苄基因。该方法对20L生活污水中的耐药质粒pBR322(游离基因污染物)的回收率为96％。

Claims (2)

1.一种水体游离基因污染物的浓集回收方法，其特征是包括如下步骤：
(1)核酸吸附颗粒的制备：按比例，将12.6g的氯化铝缓慢加入至2L去离子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸钠水溶液90ml，混匀，调节pH＝7.2，形成凝胶；静置6～12h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗涤凝胶2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氢氧化铝凝胶，灭菌；将粒度在60～100目的层析用硅胶，经过蒸馏水淘洗除去漂在水面上的颗粒后，灭菌，按每300g灭菌后层析用硅胶加入0.5-1L含水氢氧化铝凝胶的比例，使灭菌后层析用硅胶浸透混匀，烤干，得到核酸吸附颗粒；
(2)洗脱液的配制：将15g氯化钠、30g胰蛋白胨、15g牛肉粉和3.75g甘氨酸加水至1L，用0.1M氢氧化钠水溶液调节pH至9；
(3)将所述核酸吸附颗粒装入长与直径比为5-35的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；将待测水样以300-50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用洗脱液以40-50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇或异丙醇并静置0.5-2小时后，离心收集沉淀；用2.5-50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；所述待测水样与洗脱液的体积比为100：1-5。
2.根据权利要求1所述的一种水体游离基因污染物的浓集回收方法，其特征是待测水样的水源为自来水、纯净水、井水、回用水、二级出水、地表水或生活污水。
CN201410737432.0A 2014-12-05 2014-12-05 一种水体游离基因污染物的浓集回收方法 Pending CN104498596A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410737432.0A CN104498596A (zh) 2014-12-05 2014-12-05 一种水体游离基因污染物的浓集回收方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410737432.0A CN104498596A (zh) 2014-12-05 2014-12-05 一种水体游离基因污染物的浓集回收方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104498596A true CN104498596A (zh) 2015-04-08

Family

ID=52940046

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410737432.0A Pending CN104498596A (zh) 2014-12-05 2014-12-05 一种水体游离基因污染物的浓集回收方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104498596A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111394348A (zh) * 2020-03-30 2020-07-10 南华大学 污水中游离态dna的提取及检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0649853A1 (en) * 1993-09-27 1995-04-26 Becton, Dickinson and Company Modified glass fiber membranes useful for DNA purification by solid phase extraction
CN1793344A (zh) * 2005-10-27 2006-06-28 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 污水中肠道病毒回收的方法
CN102616992A (zh) * 2012-03-29 2012-08-01 南京大学 一种去除污水中抗生素抗性基因的方法
CN103159357A (zh) * 2013-03-28 2013-06-19 中国科学院城市环境研究所 一种消除水体中抗生素抗性基因污染的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0649853A1 (en) * 1993-09-27 1995-04-26 Becton, Dickinson and Company Modified glass fiber membranes useful for DNA purification by solid phase extraction
CN1793344A (zh) * 2005-10-27 2006-06-28 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 污水中肠道病毒回收的方法
CN102616992A (zh) * 2012-03-29 2012-08-01 南京大学 一种去除污水中抗生素抗性基因的方法
CN103159357A (zh) * 2013-03-28 2013-06-19 中国科学院城市环境研究所 一种消除水体中抗生素抗性基因污染的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DA-NING WANG ET AL: "A new adsorption-elution technique for the concentration of aquatic extracellular antibiotic resistance genes from large volumes of water", 《WATER RESEARCH》 *
MIN JIN ET AL: "Development of a Novel Filter Cartridge System with Electropositive Granule Media to Concentrate Viruses from Large Volumes of Natural Surface Water", 《ENVIRONMENTAL SCIENCE & TECHNOLOGY》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111394348A (zh) * 2020-03-30 2020-07-10 南华大学 污水中游离态dna的提取及检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ryan et al. Field and laboratory investigations of inactivation of viruses (PRD1 and MS2) attached to iron oxide-coated quartz sand
Thakur et al. Secondary transmission of SARS-CoV-2 through wastewater: concerns and tactics for treatment to effectively control the pandemic
Wong et al. Influence of inorganic ions on aggregation and adsorption behaviors of human adenovirus
Liang et al. Optimum conditions to treat high-concentration microparticle slime water with bioflocculants
Xu et al. Application of magnetic nanoparticles in drinking water purification.
Brown et al. Ceramic media amended with metal oxide for the capture of viruses in drinking water
Liu et al. Enhancement of sludge dewaterability with filamentous fungi Talaromyces flavus S1 by depletion of extracellular polymeric substances or mycelium entrapment
Stevenson et al. Attachment and detachment behavior of human adenovirus and surrogates in fine granular limestone aquifer material
Kokkinos et al. Transport of human adenoviruses in water saturated laboratory columns
CN109012594A (zh) 一种去除废水中铬离子的改性碳纳米管的制备方法
Wong et al. Relative transport of human adenovirus and MS2 in porous media
Mesquita et al. Optimal preparation and purification of PRD1-like bacteriophages for use in environmental fate and transport studies
CN107309270A (zh) 一株BB菌在降低赤泥pH值中的应用
CN104498596A (zh) 一种水体游离基因污染物的浓集回收方法
CN104312984B (zh) 一种水中噬菌体分离方法
CN104513826A (zh) 人乳头瘤病毒基因,及载体,菌株,表达方法
CN101892327A (zh) 一种大体积水样中浓缩病毒的方法
FARRAH et al. Viruses in the soil environment
CN101928668B (zh) 水环境中致病菌高效富集方法
CN103276017A (zh) 一种藻类生物絮凝剂及其制备方法
CN106430627A (zh) 一种微生物絮凝剂的制备方法及应用
CN108993446A (zh) 一种重金属离子吸附剂的制备方法
CN103421702B (zh) 吸附金和锑的赖氨酸芽孢杆菌
CN104805205A (zh) 一种检测生物滤床对胞外微囊藻毒素降解潜能的方法
CN102628764A (zh) 水体中病毒的浓缩分离方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150408