CN104487073A

CN104487073A - 改善肝功能的方法

Info

Publication number: CN104487073A
Application number: CN201380033568.7A
Authority: CN
Inventors: 肯·瓦尔德; 盖伊·克里普纳; 杰夫·尼克尔森
Original assignee: Verva Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Nayar metabolism Co., Ltd.
Priority date: 2012-05-24
Filing date: 2013-03-15
Publication date: 2015-04-01
Also published as: BR112014029308A2; SG10201705388XA; CN109498623A; RU2653478C2; US20150150855A1; ZA201408704B; JP6412241B2; WO2013173859A1; RU2014152196A; EP2854807A1; NZ723206A; CA2874513A1; SG11201407787VA; JP2018090589A; JP6360826B2; US20180333399A1; MX2014014317A; CO7160082A2; EP2854807A4; NZ702645A

Abstract

本公开内容一般地涉及醋甲唑胺在治疗中的用途。本公开内容还涉及在患者中治疗肝功能不良或改善肝功能。

Description

改善肝功能的方法

技术领域

本公开内容一般地涉及醋甲唑胺在治疗中的用途。本公开内容还涉及在患者中治疗肝功能不良，或改善肝功能，和/或降低或减少ALT。本公开内容还涉及醋甲唑胺以及含有它的组合物和药剂在患者中治疗肝功能不良或改善肝功能的用途。

背景技术

本说明书中引用的任何现有出版物(或从其来源的信息)或任何已知内容不是且不应被认为是认可或承认或任何形式地建议所述现有出版物(或从其来源的信息)或已知内容形成本说明书涉及之努力领域的公知常识的一部分。

血清丙氨酸转氨酶，也称为丙氨酸转氨酶(ALT)，是以高浓度见于肝细胞溶质并以低浓度见于其他地方的转氨酶。由于肝细胞受到损伤，ALT释放到血清中，因此，血清ALT水平升高一般(但不是唯一的)被认为是肝细胞损伤或坏死的标志物。因此，在多种肝疾病和病症(例如，由药物、毒素和另一些药物引起的硬化、肝炎和损伤)中，ALT水平通常升高。ALT的正常参考范围在实验室间略有不同，但是据报道其一般在约0U/L至40U/L，以及约7U/L至56U/L的范围内。然而，血清ALT水平在一天之内可上下波动，并且观察到其随剧烈的身体运动或某些药物而升高。

肝脂肪变性是甘油三酯以脂滴的形式在肝细胞的胞质中沉积，并且反映了肝摄取、合成及处理甘油三酯的失衡。对瘦的、健康的肝而言，脂肪变性可被限定为肝的甘油三酯水平超过第95个百分位数(即，＞55mg/g肝)，或更一般地，此时细胞内脂质超过肝组织的5％。脂肪变性的证据一般通过成像或组织学获得。

在不存在引起继发性脂肪积累的其他原因(例如，显著酒精消耗、使用产生脂肪的药物(steatogenic medication)和/或遗传因素)的情况下，肝脂肪变性的存在被诊断为非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liverdisease，NAFLD)。

可按组织学将NAFLD进一步分为两个亚类：

-非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver，NAFL)，其中存在肝脂肪变性，但是无肝细胞膨胀和细胞死亡之形式的肝细胞损伤的迹象：以及

-非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)，其中存在肝脂肪变性，同时伴有炎症和肝细胞损伤，有或无纤维化(胶原蛋白沉积)。

脂肪变性是否总是发生在NASH之前或者NASH是否为一种不同的疾病尚不清楚。

在很多患者中，单纯脂肪变性(NAFL)是相对良性的。患有单纯脂肪变性的患者具有非常慢的组织学进程(如果有的话)，并且患者发生晚期疾病的风险一般较低。

与NAFL相比，NASH显示出显著更差的预后，并且患有NASH的患者可表现出向肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌的组织学进展。10％至29％的患有NASH的个体在10年内发生肝硬化，并且4％至27％的患有NASH诱导之肝硬化的个体发生肝细胞癌。与匹配的对照人群相比，患有NASH的患者总死亡率升高(主要通过升高的心血管死亡率)、肝相关死亡率升高、并且发生肝癌的风险升高。已表明，与无纤维化的NASH相比，具有纤维化的NASH具有更差的预后。NASH的纤维化进程与多种代谢因素有关，包括糖尿病、严重胰岛素抗性、BMI升高、体重增长超过5kg、以及血清转氨酶水平升高。

在西方国家，NAFLD是肝酶偶然升高最常见的原因。NAFLD的患病率根据研究人群变化较大。然而，在世界范围的普通人群中，NAFLD的中值患病率为20％(范围为6.3％至33％)。估计NASH的患病率较低，为普通人群的3％至5％。非白种西班牙人(non-white Hispanics)具有最高的NAFLD患病率，其次是白种人(Caucasians)和非西班牙裔黑人(non-Hispanic blacks)。值得注意的是，当只用转氨酶(AST和ALT)评估时(不使用成像或组织学)，NAFLD的患病率仅为7％至11％，反映出以下事实：患有NAFLD的个体的转氨酶水平可以是正常的。

尽管肝病的病因很多，但是观察到患者普遍具有不受控的或高于正常的血糖水平，例如当易患或患有代谢风险因素或代谢疾病(例如，胰岛素抗性或糖尿病)时。很多种肝病见于糖尿病患者中，其包括非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、肝硬化、肝细胞癌、肝炎和急性肝衰竭。特别地，NAFLD与包括肥胖(过度BMI和内脏性肥胖两种)在内的代谢风险因素以及诸如糖尿病和血脂异常的代谢疾病高度相关。在全部糖尿病患者的60％至76％中以及100％的同时也是肥胖者的糖尿病患者中观察到NAFLD。NASH存在于至少22％的糖尿病患者中。代谢疾病的存在是从NAFL发展为NASH的强预测因子。通过肝活组织检查，与未患糖尿病的NASH患者相比，患有糖尿病性NASH的患者具有更严重的炎症和纤维化并且倾向于示出更快速地发展成纤维化。糖尿病提高了来自NASH的肝硬化相关并发症的风险，并且糖尿病性NASH患者之肝细胞癌的患病率升高4倍。

糖尿病是以慢性升高的血糖水平(大于约126mg/dL或7.0mmol/L)为特征的代谢疾病。血糖源自从饮食吸收的葡萄糖和由肝产生并释放到血流中的葡萄糖(产生肝葡萄糖)的组合。一旦进入血流中，葡萄糖需要胰岛素的协助以进入肝细胞、肌细胞和脂肪细胞，从而被储存或利用。胰岛素的另一主要作用是抑制肝葡萄糖产生。在健康个体中，葡萄糖稳态主要受胰岛素控制。当血糖水平上升时(例如在饮食后)，胰腺内的特化β-细胞释放胰岛素，其抑制肝葡萄糖产生并促进体内靶组织的葡萄糖摄取、细胞内代谢和糖原合成。因此，在健康个体中，血糖浓度一般被严格控制在80至110mg/dl的范围内。然而，当胰腺不产生充足的胰岛素应答，或靶细胞不对所产生的胰岛素适当地应答时，这会导致葡萄糖在血流中迅速积累(高血糖)。

随着时间的推移，较高的血糖水平可导致心血管疾病、视网膜损伤、肾衰竭、神经损伤、勃起功能不良和坏疽(具有截肢的风险)。此外，在不存在可获得的葡萄糖的情况下，细胞转向将脂肪作为替代能源。得到的酮体(脂肪水解的产物)可在血流中积累从而导致低血压和休克、昏迷、以及甚至死亡。

慢性升高的血糖水平可由胰岛素分泌不足(1型糖尿病)和/或身体组织对胰岛素作用的不适当应答或敏感性(2型糖尿病)引起。糖尿病的主要诊断特征之一是个体失去对葡萄糖稳态的控制，致使膳食后血糖水平在餐后保持升高并且可在长时间内保持较高。糖尿病可以以持续高血糖、多尿、烦渴(polydipsia)和/或饮食过度(hyperphagia)、慢性微血管并发症(例如视网膜病、肾病和神经病)和大管并发症(例如高血脂和高血压)为特征，其可导致失明、末期肾病、截肢和心肌梗死。

三种最常见的糖尿病类型为1型糖尿病、2型糖尿病和妊娠糖尿病。

1型糖尿病，也称为胰岛素依赖型糖尿病(insulin dependent diabetesmellitus，IDDM)或青少年发作型糖尿病，占所有糖尿病病例的10％至15％。1型糖尿病最常在儿童和青少年中被诊断出，但是也可在年轻成人中发生。1型糖尿病以导致胰岛素分泌功能丧失的β-细胞破坏为特征。大多数病例与β-细胞的自身免疫破坏有关。通过注射胰岛素进行治疗，并且必须要无限期地持续下去。

2型糖尿病，也称为非胰岛素依赖型糖尿病(non-insulin dependentdiabetes mellitus，NIDDM)或迟发型糖尿病，胰岛素水平初始正常，但是体内靶细胞丧失其对胰岛素的应答。这也称为胰岛素抗性或胰岛素不敏感性。为了补偿这种抗性，胰腺分泌过量的胰岛素。随着时间的推移，胰腺产生足够胰岛素的能力变弱，从而导致慢性高血糖。2型糖尿病的初始症状一般比1型糖尿病温和，并且该病症可在很多年内不能被确诊，直至观察到更严重的症状。生活方式(吸烟、饮食不良和不运动)被认为是发生2型糖尿病的主要决定因素，但是遗传倾向提高了发生该疾病的风险。

全部妊娠者的约2％至5％发生妊娠糖尿病。妊娠糖尿病是暂时的，但是如果不经治疗的话其可导致胎儿并发症。大多数患者在分娩后完全恢复。但是，一部分发生妊娠糖尿病的女性继续发展成2型糖尿病。

糖尿病的另一些不常见病因包括β-细胞的遗传缺陷、遗传上相关的胰岛素抗性、胰腺疾病、激素缺乏、营养不良以及化学物质或药物影响。

糖耐量减低(impaired glucose tolerance)和空腹血糖异常(impairedfasting glucose)是与2型糖尿病紧密相关的前驱型2型糖尿病状态，并且发生在血糖水平高于正常，但是又不足够高以归类为糖尿病(约100至125mg/dL；5.6至6.9mmol/L)时。与2型糖尿病一样，身体产生胰岛素，但是其量又不足够，或者靶组织不对所产生的胰岛素应答。

糖耐量减低、空腹血糖异常和胰岛素抗性是综合征X(Syndrome X)(也称为胰岛素抗性综合征(Insulin Resistance Syndrome，IRS)或代谢综合征)的组成部分，其是心脏疾病的风险因素集群(cluster of riskfactor)，所述风险因素集群还包括：肥胖、动脉粥样硬化、高甘油三酯血症、低HDL胆固醇、高胰岛素血症、高血糖以及高血压。

在过去二十年内，2型糖尿病的患病率提高了一倍多，并且继续以惊人的速率增长。世界卫生组织(World Health Organization，WHO)估计，在世界范围内，有3.46亿人患有2型糖尿病(约占世界人口的4.9％)，其中至少50％的糖尿病患者人群未意识到他们的病症(World HealthOrganization.Diabetes.Fact sheet N°312August 2011，(www.who.int))。估计每年会有另外的7百万人成为糖尿病患者。在世界范围内，糖尿病发病率的升高特别影响儿童：30年前，1％至2％的儿童被诊断患有2型糖尿病，但是现在其占已报道的儿科糖尿病病例的高达80％。目前，印度具有最高的糖尿病患者人数，随后是中国、美国、俄罗斯和德国。约170万澳大利亚人(人口的7.5％)患有2型糖尿病，并且每天有275个澳大利亚成人成为糖尿病患者。另有200万澳大利亚人患有前驱糖尿病，并且具有发生2型糖尿病的风险(Diabetes Australia-Vic(www.diabetesvic.org.au/health-professionals/diabetes-facts))。在美国，估计有2580万人(人口的8.3％)患有糖尿病，并且另有7900万人为前驱糖尿病患者(U.S.Department of Health and Human Services，Centers for Disease Controland Prevention(2011).National diabetes fact sheet：national estimatesand general information on diabetes and prediabetes in the United States(www.cdc.gov/diabetes))。在美国，每年新诊断出190万成人糖尿病病例，并且至少一种预测表明，目前已诊断和未诊断糖尿病患者的增长意味着到2020年，50％的美国人口可能患有糖尿病或前驱糖尿病(UnitedHealth Group’s Center for Health Reform和Modernization.The United States of Diabetes.Working paper 5.November，2010)。糖尿病及相关病症的经济费用是显著的。据估计，澳大利亚医疗保健系统之估算的糖尿病的直接和间接费用为至少30亿澳元。与美国相比，这显得相形见绌，据估计，2007年美国糖尿病的直接费用为1160亿美元，间接费用占另外580亿美元。如果美国糖尿病发病率的预测增长继续下去，那么医疗保健费用可达到3.35万亿美元(至少占总医疗保健支出的10％)。

理想地，通过改变生活方式(特别是饮食和运动)来治疗2型糖尿病。综合临床和流行病学研究证明，体重减轻5至11kg可使糖尿病风险降低50％，且体重减轻≥10kg与糖尿病相关死亡之30％至40％的降低相关。对很多患者而言，体重减轻20至30kg可治愈糖尿病和高血压(Labib M.(2003)The investigation and management of obesity.J Clin Path ol.56：17-25)。已表明，减轻体重和运动还可降低肥胖患者的肝酶水平和脂肪变性(Bayard等，American Family Physician，73，1961-1968，2006)。

遗憾的是，大多数患者不能保持这种生活方式改变，并且需要药物介入来适当地控制葡萄糖。目前，国际治疗指导方针包括二甲双胍以及饮食和运动作为2型糖尿病的一线治疗(Inzucchi SE等(2012)Medicalmanagement of hyperglycemia in type 2diabetes：a patient-centeredapproach.Position statement of the American Diabetes Association(ADA)and the European Association for the Study of Diabetes(EASD).DiabetesCare 35：1364-79；在印刷前以电子文档公开，2012年4月19日)。糖尿病病理学的多因素性质意味着大多数患者需要进行联合治疗以在其有生之年保持有效地控制葡萄糖。如果二甲双胍和改变生活方式不足以建立葡萄糖控制，表明需要添加磺酰脲类、DPP4抑制剂(例如西他列汀)、GLP-1激动剂(例如利拉鲁肽)(二线)或三药组合(三线)。先前已推荐将噻唑烷二酮类(thiazolidinedione，ZD)胰岛素敏化剂罗格列酮和匹格列酮作为二线治疗剂；然而目前，显著的安全问题严重限制了它们的应用。使用联合治疗不能保持葡萄糖控制的患者最后需要使用胰岛素。尽管之前胰岛素被认为是糖尿病的末线治疗，但是医生越来越愿意将基础胰岛素添加为二线治疗。

目前，糖尿病治疗常常受较差的安全性限制。一线治疗二甲双胍导致包括剂量限制性腹泻在内的胃肠副作用。二线治疗磺酰脲类(其提高胰岛素分泌)以及美格列奈类(meglitinide)可导致危险的低血糖并加速胰腺β-细胞破坏。随着时间的推移，磺酰脲类、美格列奈类和二甲双胍均发生耐受并丧失效力。TZD胰岛素敏化剂与严重水肿、体重增长、骨折、心血管副作用(包括心肌梗死的死亡风险升高)、膀胱癌以及糖尿病性黄斑水肿的风险升高相关。就急性胰腺炎以及潜在致命的变态反应(allergicreaction)Stevens-Johnson综合征而言，已对DPP4抑制剂西他列汀发出了安全警告。已表明，相关分子维达列汀可升高肝酶水平。用GLP-1激动剂艾塞那肽治疗可导致恶心、胰腺炎和低血糖。产生针对艾塞那肽的抗体同样可限制其在一些患者中的应用。GLP-1激动剂利拉鲁肽具有较高的胃肠副作用(包括恶心和呕吐)发生率，并且导致大鼠和小鼠在临床相关暴露时发生剂量依赖性和治疗持续依赖性甲状腺C细胞肿瘤。对于更新的治疗，费用同样是一个显著问题。例如，西他列汀在降低血糖水平方面并不比二甲双胍有效，但是却比其贵20倍(VanDeKoppel S等(2008)Managed care perspective on three new agents for type 2diabetes.JManag Care Pharm 14：363-80.)。

当前非胰岛素糖尿病药物存在的局限性表明迫切需要开发具有如下特征之经济有效的新治疗：改善的安全性和有效性特征、高患者依从性、以及保持/改善β-细胞功能和延迟二次治疗失败的潜力。特别需要新型安全的胰岛素敏化剂来取代TZD。

疾病(例如NAFLD，特别是患有的或易患的代谢疾病或风险因素的患者)之药理治疗是显著未被满足的医疗需要。事实上，不存在经FDA批准的治疗或用于批准针对NAFLD之药物的指导方针。

需要针对患有肝病之患者(例如还患有糖尿病或前驱糖尿病的那些患者)的新型药剂和治疗。

发明概述

目前，出乎意料地观察到施用醋甲唑胺可导致血清ALT水平降低，由此反映其可改善肝功能或者改善或治疗肝疾病。首次表明，向糖尿病患者(不管是否经历过其他抗糖尿病剂治疗)施用醋甲唑胺可导致血清ALT(肝疾病或损伤的标志物)降低。目前，同样出乎意料地显示醋甲唑胺能够降低肝脂质水平。因此，可将醋甲唑胺用作用于肝功能不良和疾病的有用独立治疗或辅助治疗(例如，针对已接受诸如二甲双胍的抗糖尿病剂的患者)，并且还可有利地通过改善胰岛素抗性，和/或保持正常或降低升高的血糖水平来在患者中治疗糖尿病或前驱糖尿病病症或疾病。

因此，在一个实施方案中，本公开内容涉及在有此需要的患者中降低血清ALT水平的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

在一个实施方案中，本公开内容还涉及在有此需要的患者中治疗或预防肝功能不良的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

在另一些实施方案中，本公开内容还涉及用于在有此需要的患者中降低肝脂质含量的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

在另一些实施方案中，本公开内容涉及治疗诸如NAFL的肝病，或者治疗或预防NASH或纤维化的NASH。因此，在一些实施方案中，本公开内容还涉及在有此需要的患者中治疗或预防肝病(例如NAFL或NASH)的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

在另一些实施方案中，本公开内容还涉及醋甲唑胺在制备药物中的用途。在一些实施方案中，所述药物用于在患者中降低血清ALT水平，和/或治疗或预防肝功能不良，和/或降低升高的肝脂质水平，和/或治疗或预防肝病。

本公开内容还涉及将醋甲唑胺应用于治疗中。在一些实施方案中，所述治疗用于在患者中降低血清ALT水平，和/或治疗或预防肝功能不良，和/或降低升高的肝脂质水平，和/或治疗或预防肝病。

在一些实施方案中：

(a)患者具有升高的ALT水平，例如大于约50U/L，例如≥80U/L或≥100U/L或≥200U/L；和/或

(b)患者患有有症状的或无症状的肝功能不良；和/或

(c)患者易患或患有前驱糖尿病或糖尿病病症。

在一些实施方案中，要进行治疗的患者的初始血红蛋白A_1c(HbA_1c)水平≥6.5％。在一些实施方案中，本公开内容的治疗将血红蛋白A_1c(HbA_1c)水平降低或控制至6.5％或更低。

在另一些实施方案中，患者患有上述(a)、(b)或(c)中的一种或更多种，例如，在一些实施方案中，患者可显示出(a)和(b)之一或二者，而不显示出(c)。在另一些实施方案中，患者可显示出(a)和/或(b)，并且还可易患或患有前驱糖尿病或糖尿病病症(c)。在另一些实施方案中，患者不显示出(a)或(b)，但是易患或患有前驱糖尿病或糖尿病病症(c)。

本文中提及到的前驱糖尿病和糖尿病病症包括糖耐量减低、空腹血糖异常和胰岛素抗性、综合征X(也称为胰岛素抗性综合征(IRS)或代谢综合征)、2型糖尿病和风险因素，例如肥胖、动脉粥样硬化、高甘油三酯血症、低HDL胆固醇、高胰岛素血症、高血糖以及高血压。在一些实施方案中，使用醋甲唑胺的治疗可与使用抗糖尿病剂(例如二甲双胍)的治疗同时进行。

在另一些实施方案中，患者先前已开始或正进行使用抗糖尿病剂的治疗。

本公开内容还涉及用于在患者中降低血清ALT水平，和/或治疗或预防肝功能不良，和/或降低升高的肝脂质水平，和/或治疗或预防肝病的组合物，其包含醋甲唑胺以及一种或更多种可药用添加剂。

本公开内容还涉及用于在患有糖尿病或前驱糖尿病病症的患者中降低血清ALT水平，和/或治疗或预防肝功能不良，和/或降低升高的肝脂质水平，和/或治疗或预防肝病的组合，所述组合包含醋甲唑胺和抗糖尿病剂。所述组合可以以分开、同时或先后施用之单独的制剂存在，或者可配制成单次单一剂量。

另一些实施方案涉及醋甲唑胺在治疗诸如NAFLD(例如NAFL或NASH，有或无纤维化)的肝病中的用途。

在一些实施方案中，醋甲唑胺以每日少于100mg，例如每日约90、85、80、75、70、65、60、55或50mg的量作为单次剂量或分次剂量向患者施用。

在一些实施方案中，抗糖尿病剂为胰岛素敏化剂，例如二甲双胍或其可药用盐，例如盐酸二甲双胍。

附图说明

图1图示了醋甲唑胺治疗在糖尿病患者中降低血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平的效果，所述患者在进行醋甲唑胺治疗之前未正接受任何其他糖尿病药物或已用二甲双胍稳定至少3个月。

图2(A)-(D)示出了经载剂处理的db/db小鼠的肝脂质水平。

图3(A)-(D)示出了经醋甲唑胺处理的db/db小鼠的肝脂质水平。

发明详述

除非上下文另有要求，否则在本说明书通篇以及所附权利要求书中，词语“包含”及其变化形式(例如“包括”和“含有”)应被理解为指包括/包含所述整数或步骤或整数组，但不排除其他任何整数或步骤或整数组。

除非上下文另有要求，否则在本说明书通篇以及所附权利要求书中，短语“基本上由…组成”及其变化形式，例如“基本由…组成”应被理解为表示所记载的要素是必要的，即本发明的必需要素。短语允许存在不对本发明的特征产生实质影响的其他未被记载要素，但是排除影响所限定方法的基本特征和新特征的其他未指明要素。

除非上下文另有明确指出，否则没有数量词修饰的名词表示一个/种或更多个/种。

术语“发明”包括本文所述的所有方面、实施方案和实施例。

本文所述患者可具有正常的或升高的ALT水平。在一些实施方案中，患者显示出升高的ALT水平，即为至少高于正常水平上限(upper limit ofnormal，ULN)的水平，即约≥50U/L。升高的ALT水平的实例包括在约50至100U/L(例如约70U/L或更大)，或约100至200U/L或约250至500U/L的范围内的水平。对于严重的或晚期的肝病，ALT水平可超过1000或2000U/L，即升高的ALT水平可以是约1.5、2至3或4至5或10至20或50至100倍的ULN。然而，甚至具有正常ALT水平的患者也可患有潜在的肝病或肝功能不良。根据本公开内容，患者可具有或可不具有升高的ALT水平。

本文所用的肝功能不良旨在涵盖存在肝病，其中肝组织可受到损伤和/或正常肝功能受到损伤，所述肝病包括以下病症：NAFLD(例如脂肪变性、升高的肝脂质水平、NASH和具有纤维化的NASH)、肝硬化、肝炎(例如乙型或丙型)、脂肪肝炎(steatohepatitis)、酒精性、毒素性或药物性肝损伤、肝炎症、肝坏死和肝纤维化、急性肝衰竭和肝细胞癌。因此，在一些实施方案中，本文中的公开内容涉及治疗或预防肝功能不良。患有肝功能不良的患者可以是有症状(存在症状，例如升高的ALT水平)的肝功能不良，或者另一方面，为无症状的肝功能不良。因此，肝病的存在可通过本领域中公知的方法确定，例如测试升高的肝酶(例如ALT和/或天冬氨酸转氨酶(AST))水平，和/或肝活组织检查，和/或成像技术(例如超声检查、核磁共振和计算机断层摄影术)。因此，在一些实施方案中，本公开内容提供了在患者中对肝病(例如本文中所述)的治疗或预防，例如对NAFLD的治疗。

肝功能不良或肝病的治疗旨在包括改善、停止或减慢进程、逆转或以其他方式改善肝功能或者病理学或与潜在疾病相关的任何其他症状。

如本文所用，升高的肝脂质水平包括约或大于55mg/g肝，或大于约5％的肝组织的水平。

醋甲唑胺被批准用于治疗降低眼内压可能具有治疗益处的眼部病症，例如慢性开角型青光眼、继发性青光眼，并且在手术前用于手术前需要降低眼内压的急性闭角型青光眼。醋甲唑胺通过抑制酶碳酸酐酶来发挥其对眼部病症的作用，然而，这看来并非其在糖尿病中作为胰岛素敏化剂之活性的机制。醋甲唑胺的治疗有效的(碳酸酐酶抑制的)眼内压降低剂量为50mg至100-150mg，每日2或3次，即每日100mg至450mg。一些代谢酸中毒和电解质失衡可随使用碳酸酐酶抑制有效量而发生，但是在剂量处于标准剂量范围的较低端时，甚至可发生导致不适、疲劳、体重减轻、抑郁和厌食的症状复合征的过度酸中毒(Epstein和Grant，Arch.Opthamol.，95，1380，1977)。尽管通常将其描述为利尿剂，但是醋甲唑胺仅具有弱的短暂利尿活性，并且产品标签明确声明其不应被用作利尿剂。

根据本公开内容以及根据主治医生确定的期望给药方案，醋甲唑胺以有效获得期望的治疗性治疗或预防水平的量，例如，以有效降低ALT水平和/或治疗或预防肝功能不良的量施用。在一些实施方案中，施用的量单独或者与一种或更多种抗糖尿病剂联合(例如，与一种或更多种抗糖尿病剂以协同或相加方式联合)还应足以降低升高的血糖水平或者维持正常的或期望的血糖水平。在一些实施方案中，本文公开的醋甲唑胺的治疗效果可通过如下剂量获得，所述剂量使得它们可避免或最小化临床上有意义的碳酸酐酶抑制，例如，对眼部病症进行治疗性治疗所需的剂量，同时使用的剂量避免或最小化可能与标准碳酸酐酶抑制有效剂量方案有关之临床上有意义的酸中毒。因此，在一些实施方案中，醋甲唑胺有利地以每日少于100mg的剂量率向患者施用。在另一些实施方案中，醋甲唑胺以每日约90、85、80或75mg或更少，或每日约70、65、60、55或50mg或更少的剂量率施用。在另一些实施方案中，醋甲唑胺以每日约40mg或更少的剂量率施用。在另一些实施方案中，醋甲唑胺以每日约30mg或更少的剂量率施用。在另一些实施方案中，醋甲唑胺以每日约25mg或更少的剂量率施用。在另一些实施方案中，醋甲唑胺以每日约20mg或更少，例如每日约15、10或5mg的剂量率施用。这些剂量中任意剂量的施用可作为单次剂量每日一次，或者作为分次剂量，例如每日两次或三次或根据主治医生确定的任意其他给药方案。醋甲唑胺的合适单位剂量可包含约1.0、2.5、5.0、10、20、25、30、40、50、60、75、80或90mg的醋甲唑胺。

在一些实施方案中，本文中所考虑的患者还患有糖尿病或前驱糖尿病病症，其包括由胰岛素抗性或细胞或组织摄取葡萄糖异常引起或这些起重要作用或显示这些的任意疾病或病症，或者其症状或致病因素，并且其可利用使用抗糖尿病剂(本文中也称为抗高血糖剂)的治疗来进行治疗。其非限制性实例包括NIDDM(2型糖尿病)、妊娠糖尿病、糖耐量减低、空腹血糖异常、综合征X、高血糖、动脉粥样硬化、高甘油三酯血症、血脂异常、高胰岛素血症、肾病、神经病、缺血和卒中。

因此，在一些实施方案中，本公开内容所考虑的患者已被诊断为患有或易患上述疾病，并且可建立针对所述病症的治疗方案，例如用抗糖尿病剂(例如二甲双胍)治疗。在一些实施方案中，所述患者在开始进行醋甲唑胺治疗前至少1或2周，已开始进行治疗。在另一些实施方案中，所述患者在开始进行醋甲唑胺治疗前至少4周(或1个月)，已开始进行治疗。在另一些实施方案中，所述患者在开始进行醋甲唑胺治疗前至少6、8、10或12周(例如至少约2或约3个月)，已开始进行治疗。在一些实施方案中，对患者有利的是患者在开始进行醋甲唑胺治疗之前已用抗糖尿病剂稳定，也就是说，已确定并开始进行给药方案从而已获得稳定的期望血糖水平，如主治医生所确定的。血糖水平可通过本领域中常用的任意合适的方法测量，例如空腹血糖，HbA_1c水平等。示例性的稳定水平包括HbA_1c水平为6.5％或更低，或空腹状态血糖水平低于约6.1mmol/L(110mg/dL)。

在一些实施方案中，不管患者是否患有糖尿病或前驱糖尿病病症，均在不存在辅助抗糖尿病剂的情况下施用醋甲唑胺。因此，在一些实施方案中，本文中的方法、药物、组合和组合物基本由用于向患者施用的醋甲唑胺组成。

用于治疗与糖尿病和前驱糖尿病状态相关之疾病(例如心血管疾病)的药剂(例如抗高血压药剂、抗血脂异常药剂)还可与醋甲唑胺(以及任选的抗糖尿病剂)联合施用(同时或分开)。如主治医生所确定的，任何这样的相关症状或病症均可用合适的药剂(例如诸如利尿剂、ACE抑制剂或β-阻断剂的抗高血压药剂)来治疗。在一些实施方案中，本文中的公开内容可有利地避免对所述药剂剂量的需要或降低所述药剂的剂量。因此，应当理解的是，患者可不必患有或发生与糖尿病或前驱糖尿病疾病或病症相关的所有症状或病症，或者所述病症未严重到需要进行额外的治疗性治疗，特别是如果该疾病或病症在早期阶段检测到并进行治疗。

在一些实施方案中，醋甲唑胺可分开、同时或先后地与一种或更多种其他药剂(例如维生素E和/或其他抗氧化剂)组合施用，以在患者中降低血清ALT水平，和/或治疗或预防肝功能不良，和/或降低升高的肝脂质水平，和/或治疗或预防肝病。在一些实施方案中，提供了醋甲唑胺和抗氧化剂(例如维生素E)的组合物或组合。

在醋甲唑胺与使用其他抗糖尿病治疗剂的治疗方案联合施用的一些实施方案中，醋甲唑胺可与抗糖尿病治疗剂同时或先后(之前或之后)共施用，在同时施用的情况下，每种药剂可分开配制，或者两者可一起配制成紧密组合物。合适的抗糖尿病剂可包括胰岛素敏化剂、胰岛素促分泌葡萄糖吸收/摄取抑制剂以及US 2005/0037981(特别是其表2)中鉴定的类别和化合物，其内容整体并入本文。使用的药剂的一些实例包括双胍类、磺酰脲类、美格列奈类、胰岛素和胰岛素类似物以及噻唑烷二酮类。其他的非限制性实例包括噻唑烷二酮类(包括罗格列酮和匹格列酮)、二甲双胍及其可药用盐(例如盐酸盐)、胰岛素、磺酰脲类(包括格列美脲、格列本脲、格列吡嗪、氯磺丙脲、妥拉磺脲和甲苯磺丁脲)、美格列奈类(包括瑞格列奈和那格列奈)、α-葡萄糖苷酶抑制剂(包括阿卡波糖和米格列醇)、GLP类似物(例如艾塞那肽)以及DPPIV抑制剂(例如西他列汀)。

在一些实施方案中，抗糖尿病剂为二甲双胍或其可药用盐。

在一些实施方案中，与初始单药治疗相比，一旦患者建立使用抗糖尿病剂(例如二甲双胍)的治疗，通过共同施用醋甲唑胺可随后降低抗糖尿病剂的剂量。这可有利地避免、改善或以其他方式降低与用于单药治疗的剂量和方案相关的不期望副作用和缺点的严重程度、风险或发生。因此，在一些实施方案中，一旦开始进行醋甲唑胺治疗或已进行一段时间，可对在进行醋甲唑胺治疗之前开始的抗糖尿病剂的剂量方案进行调整。

当在涉及葡萄糖稳态而使用时，本文所用的术语“调控”或“调节”及其变化形式指调节或控制所述葡萄糖水平，在一些具体实施方案中，指调节或维持正常的血糖水平。因此，“调控/调节葡萄糖稳态”包括调节或控制血糖水平以降低高血糖，或有利地获得或维持正常的空腹状态血糖水平。正常的空腹状态血糖水平一般低于6.1mmol/L(110mgd/L)。高血糖水平(本文中也称为升高的血糖水平)指空腹血糖水平大于或等于6.1mmol/L(110mgd/L)。

空腹血糖异常(impaired fasting glycermia，IFG)的特征在于空腹血浆葡萄糖浓度大于或等于6.1mmol/L(110mgd/L)，但是低于7.0mmol/L(126mgd/L)，并且口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerancetest，OGTT)期间的2小时血浆葡萄糖浓度(如果测量的话)低于7.8mmol/L(140mgd/L)。糖耐量减低(Impaired glucose tolerance，IGT)的特征在于空腹血浆葡萄糖浓度低于7.0mmol/L(126mgd/L)，并且OGTT期间的2小时血浆葡萄糖浓度大于或等于7.8mmol/L(140mgd/L)，但是低于11.1mmol/L(200mgd/L)。糖尿病的特征在于空腹血浆葡萄糖浓度大于或等于7.0mmol/L(126mgd/L)；或OGTT期间的2小时血浆葡萄糖浓度大于11.1mmol/L(200mgd/L)；或血红蛋白A_1c(HbA_1c)水平≥6.5％。在一些实施方案中，患者的血红蛋白A_1c(HbA_1c)水平≥7.0％。根据本公开内容的治疗还可降低血糖水平，尤其是糖尿病或前驱糖尿病患者的血糖水平。因此，在一些实施方案中，根据本公开内容的治疗导致血红蛋白A_1c(HbA_1c)水平低于约6.5％，例如约6.4％至6.0％或更低。

本文中考虑的患者包括哺乳动物对象：人、灵长类动物、家畜动物(包括牛、马、绵羊、猪和山羊)、伴侣动物(包括狗、猫、兔、豚鼠)和捕获的野生动物。还考虑诸如兔、小鼠、大鼠、豚鼠和仓鼠的实验室动物，因为它们可提供方便的测试系统。特别地考虑人患者。

如上所述，与针对所述药剂的公知治疗(特别是单药治疗)相比，根据本发明的使用其他抗糖尿病剂(例如二甲双胍或其可药用盐)的组合可有利地允许降低所述药剂的剂量。在一些实施方案中，组合的剂量应为使得它们可提供相加或协同效果。合适的剂量和给药方案可由主治医生确定，并且可取决于所治疗的特定病症、病症的严重程度以及对象的一般年龄、健康状况和体重。

在本公开内容的一些实施方案中，其中抗糖尿病剂为二甲双胍，组合中二甲双胍(或可药用盐，例如盐酸盐)的施用日剂量等于或小于二甲双胍单药治疗所需日剂量的约90％。在另一些实施方案中，所述剂量等于或小于二甲双胍单药治疗所需剂量的约80％、70％、60％或50％。针对成人之二甲双胍的示例性日剂量可以是每日约100mg至约1500或2000mg的活性物，例如约250mg、500mg、750mg、850mg、1000mg、1100mg或1250mg。针对儿科患者(10至16岁)的示例性日剂量可以是每日约50mg至1000mg或1500mg，例如每日约100mg、250mg、500mg、750mg、850mg、1100mg或1250mg。活性成分可以单次剂量或一系列剂量施用。合适的剂型可包含约50、75、100、150、200、250、500、750、850或1000mg的二甲双胍活性物。

尽管醋甲唑胺与任选的抗糖尿病剂可在不存在任何其他药剂或添加剂的情况下施用，但是优选使每种药剂或其紧密组合物以与一种或更多种可药用添加剂的组合物的形式存在。

此类组合物的制剂为本领域的技术人员所公知，参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第21版。所述组合物可包含任何合适的添加剂，例如载体、稀释剂或赋形剂。所述添加剂包括所有常规溶剂、分散介质、填料、固体载体、包衣剂、抗真菌剂和抗细菌剂、皮肤渗透剂、表面活性剂、等渗剂和吸收剂等。应当理解的是，本发明的组合物还可包含其他补充的生理活性剂。

载体必须是可药用的，即与组合物中的其他成分相容并且对对象无害。组合物包括适于经口、直肠、吸入、鼻、局部(包括皮肤、口腔和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)施用的这些组合物。组合物可方便地以单位剂型的形式存在，并且可通过药学领域中公知的任意方法制备。

适于经口施用之本公开内容的组合物可以呈现为分散的单元(例如每个包含预定量活性成分的胶囊剂、药囊剂(sachet)或片剂)、散剂或颗粒剂、水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂，或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。

片剂可通过任选地与一种或更多种辅助成分压制或模制来制备。压制片剂可通过在合适的机器内压制任选地与诸如以下混合之自由流动形式的活性成分(例如粉末或颗粒)来制备：黏合剂(例如惰性稀释剂)、防腐剂崩解剂(例如羟乙酸淀粉钠、交联的聚乙烯吡咯烷酮、交联的羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂。模制片剂可通过在合适的机器内模制润湿的粉末化合物与惰性液体稀释剂的混合物来制备。所述片剂可被任选地包衣或刻痕，并且可利用合适的包衣(例如不同比例的羟丙基甲基纤维素)将其配制成提供其中活性成分缓慢或受控的释放以提供期望的释放特性。片剂可任选地具有肠溶包衣，使得其能够在除胃之外的消化道部分中释放。

适于肠胃外施用的组合物包括可包含抗氧化剂、缓冲剂、杀菌剂以及使得所述组合物与预期接受者的血液等张的溶质的水性或非水性等张无菌注射溶液，和可包含助悬剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬剂。组合物可存在于单位剂量或多剂量密封容器(例如，安瓿瓶和小瓶)中，并且可储存于冷冻干燥(冻干)条件下，仅需在临用前加入无菌液体载体(例如注射用水)即可。即用注射溶液和混悬剂可由先前所述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。

应当理解的是，除上文特别提及的活性成分之外，本公开内容的组合物还可包含与所讨论组合物类型相关的领域中常规的其他试剂，例如，适于经口施用的那些还可包含例如以下的其他试剂：黏合剂、甜味剂、增稠剂、矫味剂、崩解剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂和/或延时剂。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄原胶、膨润土、褐藻酸或琼脂。合适的矫味剂包括薄荷油、冬青油、樱桃、橙子或覆盆子矫味剂。合适的包衣剂包括丙烯酸和/或甲基丙烯酸和/或其酯的聚合物或共聚物、蜡、脂肪醇、玉米蛋白、虫胶或谷蛋白。合适的防腐剂包括苯甲酸钠、维生素E、α-生育酚、抗坏血酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石。合适的延时剂包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

根据本公开内容，在适当时，用于施用的化合物可任选地以可药用盐或前药的形式存在。

术语“前药”以其最广泛的含义使用，并且涵盖经酶解或水解在体内转化为本发明化合物的那些衍生物。本领域技术人员容易想到这些衍生物，其包括，例如游离巯基或羟基转化为酯(例如，醋酸酯或硫酯)或游离氨基转化为酰胺的化合物。酰化本发明化合物例如以制备酯和酰胺前药的方法是本领域中公知的，并且可包括在存在合适的催化剂或碱的情况下，用合适的羧酸、酸酐或氯化物来处理所述化合物。还包括羧酸(羧基)基团的酯。合适的酯包括C_1-6烷基酯、C_1-6烷氧基甲基酯(例如，甲氧基甲基酯或乙氧基甲基酯)、C_1-6烷酰氧基甲基酯(例如新戊酰氧基甲基酯)、酞基酯(phthalidyl ester)、C_3-8环烷氧基羰基C_1-6烷基酯(例如1-环己基羰氧基乙基酯)、1，3-二氧杂环戊烯-2-酮基甲基酯(例如5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-酮基甲基酯)以及C_1-6烷氧基羰氧基乙基酯(例如1-甲氧基羰氧基乙基酯)。氨基官能团的前药包括酰胺(参见，例如，Adv.BioSci.，1979，20，369，Kyncl，J.等)、烯胺(参见，例如，J.Pharm.Sci.，1971，60，1810，Caldwell，H.等)、Schiff碱(参见，例如，美国专利No 2,923,661和Antimicrob.Agents Chemother.，1981，19，1004，Smyth，R.等)、唑烷(参见，例如，J.Pharm.Sci，1983，72，1294，Johansen，M.等)、Mannich碱(参见，例如，J.Pharm.Sci.1980，69，44，Bundgaard，H.等和J.Am.Chem.Soc.，1959，81，1198，Gottstein，W.等)、羟甲基衍生物(参见，例如，J.Pharm.Sci，1981，70，855，Bansal，P.等)和N-(酰氧基)烷基衍生物和氨基甲酸酯(参见，例如，J.Med.Chem.，1980，23，469，Bodor，N.等，J.Med.Chem.，1984，27，1037，Firestone，R.等，J.Med.Chem.，1967，10，960，Kreiger，M.等，美国专利No 5,684,018以及J.Med.Chem.，1988，31，318-322，Alexander，J.等)。用于选择和制备合适的前药的其他常规方法是本领域中公知的，并且在例如以下中进行了描述：WO 00/23419；Design of Prodrugs，H.Bundgaard编著，Elsevier Science Publishers，1985；Methods inEnzymology，42：309-396，K.Widder编著，Academic Press，1985；ATextbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编著，第5章，第113-191页(1991)；Advanced Drug DeliveryReviews，8；1-38(1992)；Journal of Pharmaceutical Sciences，77；285(1988)，H.Bundgaard，等；Chem Pharm Bull，32692(1984)，N.Kakeya等和TheOrganic Chemistry of Drug Desig and Drug Action，第8章，第352-401页，Academic press，Inc.，1992。

合适的可药用盐包括但不局限于可药用无机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸，或者可药用有机酸的盐，所述有机酸例如醋酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、马来酸、柠檬酸、乳酸、黏酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、天冬氨酸、谷氨酸、乙二胺四乙酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、单宁酸、抗坏血酸、芬地柞酸(fendizoic acid)、4-4’-亚甲基双-3-羟基-2-萘甲酸、0-(对-羟基苯甲酰基)苯甲酸、4’-4”-二羟基三苯基甲烷-2-羧酸和戊酸。碱盐包括但不局限于与诸如以下可药用阳离子形成的那些盐：钠离子、钾离子、锂离子、钙离子、镁离子、铵离子和烷基铵离子。碱性含氮基团可以被诸如以下试剂季铵化，例如低级烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物、以及碘化物)、二烷基硫酸盐(如二甲基和二乙基硫酸盐)等。

本发明的化合物还可应用于兽医组合物中。所述组合物可通过本领域中已知的任何合适方法制备。所述组合物的实例包括适用于以下的那些组合物：

经口施用，例如用于与饲料混合的片剂、大丸剂(bolus)、散剂、颗粒剂、丸粒剂，用于向舌头施用的糊剂，包括水性和非水性溶液剂或混悬剂的兽用顿服药(drench)；

肠胃外施用，例如皮下、肌内或静脉内注射的无菌溶液剂或混悬剂。

现在将参考下述实施例对本发明进行描述，所述实施例是出于举例说明本发明的一些实施方案的目的而提供，不应解释为是对上文所述一般性的限制。

实施例

实施例1-醋甲唑胺对2型糖尿病患者ALT水平的影响

在24周随机的、安慰剂对照的、双盲临床试验中评价醋甲唑胺(每日两次，施用40mg)作为2型糖尿病的潜在治疗的安全性和有效性。临床试验的主要有效性终点是在治疗24周后，相对于安慰剂，使用醋甲唑胺时，HbA_1c从基线降低(ΔHbA_1c)。主要安全性量度是与安慰剂相比，醋甲唑胺对静脉血气体参数的影响，即酸中毒的量度。

起初参与临床试验的是在进入试验前未经历过任何抗糖尿病剂治疗的2型糖尿病患者。试验扩展到包括在进入试验前(MET)已经二甲双胍治疗至少3个月并且已有至少8周的稳定二甲双胍剂量的受试者。在整个试验期间，不改变二甲双胍剂量。受试者基线人口统计数据提供于表1_-1中。

向临床试验中随机分配的受试者施用日剂量的醋甲唑胺(40mgb.i.d.)或安慰剂，持续24周。在早餐和晚餐时，以每剂量1×30mg胶囊剂和1×10mg胶囊剂摄取醋甲唑胺。以相同形式施用安慰剂(微晶纤维素)。在到诊所初次随机访视(第0天)后，受试者在第1、2、4、8、12、18和24周返回诊所以进行身体检查、实验室分析、体内组合物测量、血糖参数(空腹血糖、空腹胰岛素、HbA_1c)评价和静脉血气体分析测量。

醋甲唑胺对ALT的影响示出于表1-2中。随时间变化的平均ALT水平示于图1(A)和1(B)中。

出乎意料的是，经醋甲唑胺治疗的患者在经醋甲唑胺治疗后1周显示其血液ALT水平发生明显的降低。在治疗2周后，降低的ALT水平达到平台期，并且在24周治疗期剩余的时间内保持。醋甲唑胺对ALT的影响以及醋甲唑胺治疗肝功能不良的潜在作用完全在意料之外。经批准的醋甲唑胺产品标签和处方信息声明在显著肾或肝疾病或功能不良的情况下禁用醋甲唑胺治疗，并且在患有肝硬化的患者中使用醋甲唑胺可加速肝性脑病的发生(Methazolamide(methazolamide)Tablet.Prescribinginformation.2006.TEVA PHARMACEUTICAIS USA)。

表1-1：醋甲唑胺(MTz)临床试验受试者的基线(第0天)人口统计数据。Met＝二甲双胍。

^an＝18。在随机化前筛选访视时，^bHbA_1c＝6.5％。在随机化前筛选访视时，^cHbA_1c为8.4％。^dn＝36。

表2：从基线(第0天)到第12周和第24周的ALT及ALT变化(ΔALT)

MTZ＝醋甲唑胺；Met＝二甲双胍；ANCOVA＝协方差分析

＊治疗效果MTZ-安慰剂(ANCOVA)＝-15.9(95％CI-25.4，-6.3)p＝0.0008

§相对于安慰剂(ANOV和未配对的2侧t-检验)，§p＜0.005。

治疗效果MTZ-安慰剂(ANCOVA)＝-10.1(95％CI-14.0，-6.1)p＜0.0001

实施例2-醋甲唑胺对db/db小鼠肝脂质的影响

所有的试剂均购买自Sigma-Aldrich(Australia)。每日在65∶35(v/v)的无菌盐水：PEG400中新鲜制备醋甲唑胺的给药溶液，避光并在室温下保存。在可自由获取水和食物(标准啮齿动物饮食：Barastoc Rat和Mouse，Ridley Agriproducts，Australia)的条件下，饲养雄性db/db小鼠(AnimalResource Centre，Australia)。室温保持在21±2℃，湿度为40％-70％，同时进行12小时的光照/黑暗周期。每天通过单剂量经口管饲法，用醋甲唑胺(50mg/kg/日)或载剂处理小鼠(每组n＝4)，持续9天。

每日从每只小鼠的尾顶端获取血样，并用血糖测计(AccuCheck II；Roche，Australia)测量其葡萄糖水平。在研究结束时，人道地处死动物，取出部分肝组织(左叶)，并将其固定在10％中性缓冲福尔马林中。将所述肝组织经石蜡包埋、切片(5um)、封片并用苏木精和曙红染色。

将肝的分离部分(右叶)用于测量肝脂质含量。使用改进的Folch方案提取脂质。使组织在2∶1氯仿/甲醇溶液(10mL)中匀浆，并将其过滤到15ml玻璃离心管中。再添加5mL的2∶1氯仿/甲醇溶液，然后添加2.5ml的0.9％NaCl。彻底混合后，在10℃下，以2,000g离心提取物5分钟。弃去水层后，在氮气下干燥有机层，并通过称重来评估总脂质含量。

结果示于表2-1以及图2和3中。

1.相对于经载剂处理的对照，醋甲唑胺处理使空腹血糖水平降低47％。

2.经载剂处理的动物的体重趋向于降低(约6％)，但是这种情况并不显著。在9天给药期间内，组间的体重变化不同；经醋甲唑胺处理的动物体重减轻，而经载剂处理的动物体重增长。

3.在处理9天后，与经载剂处理的对照相比，经醋甲唑胺处理的动物的肝脂质含量(w/w)下降48％。

4.肝组织学(图2)显示经醋甲唑胺处理的动物与经载剂处理的动物之间存在差异：

●4只经载剂处理的动物中有3只具有高度肝脂肪变性。与来自文献的图像相比，这些特定的db/db小鼠似乎具有相对严重的脂肪肝疾病。

●4只经醋甲唑胺处理的db/db小鼠中有2只看来具有大幅降低的肝脂肪变性。

表2-1：

使用双侧t-检验对组进行比较。＊与第0天统计学上不同(p＜0.05)。^§与经载剂处理的动物统计学上不同(p＜0.05)。

Claims

1.在有此需要的患者中降低血清ALT水平的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

2.在有此需要的患者中治疗或预防肝功能不良的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

3.用于在有此需要的患者中降低肝脂质含量的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

4.用于在有此需要的患者中治疗或预防NAFLD的方法，其包括向所述患者施用有效量的醋甲唑胺。

5.根据权利要求4所述的方法，其用于治疗或预防NAFL。

6.根据权利要求4所述的方法，其用于治疗或预防NASH。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述患者具有升高的ALT水平。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述患者还患有前驱糖尿病或糖尿病。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述患者的HbA_1c水平≥6.5％。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述醋甲唑胺与抗糖尿病剂组合施用。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗糖尿病剂为二甲双胍或其可药用盐。

12.醋甲唑胺在制备用于在患者中降低血清ALT水平的药物中的用途。

13.醋甲唑胺在制备用于在患者中治疗或预防肝功能不良的药物中的用途。

14.醋甲唑胺在制备用于在患者中降低肝脂质含量的药物中的用途。

15.醋甲唑胺在制备用于治疗或预防NAFLD的药物中的用途。

16.根据权利要求15所述的用途，其用于治疗或预防NAFL。

17.根据权利要求15所述的用途，其用于治疗或预防NASH。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的用途，其中所述患者还患有前驱糖尿病或糖尿病。

19.根据权利要求12至18中任一项所述的用途，其中所述患者的HbA_1c水平≥6.5％。

20.根据权利要求12至19中任一项所述的用途，其中所述醋甲唑胺与抗糖尿病剂组合施用。

21.根据权利要求20所述的用途，其中所述抗糖尿病剂为二甲双胍或p。

22.组合物，其用于在患者中治疗或预防肝功能不良和/或降低ALT水平和/或降低肝脂质水平，所述组合物包含醋甲唑胺以及一种或更多种可药用添加剂。

23.用于在正接受使用抗糖尿病剂治疗的患者中治疗或预防肝功能不良和/或降低ALT水平和/或降低肝脂质水平的组合，所述组合包含醋甲唑胺和抗糖尿病剂。