CN104397025A - 一种含有石榴葡聚糖与咪鲜胺锰盐的杀细菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杀细菌组合物，其特征在于，所述组合物含有活性成分石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐，其中二者的重量比为30:1-1:30。所述杀细菌组合物不但可以有效的用于水果保鲜，而且具有环境相容性好、不易产生抗性、物理化学稳定性好、药效时间长、低毒、低残留等优点，是一种新型的保鲜剂。该药剂相比单剂具有良好的增效作用，且能延缓单剂的抗药性，同时安全无毒、环境友好。

Description

一种含有石榴葡聚糖与咪鲜胺锰盐的杀细菌组合物及其应用

技术领域

本发明涉及农药领域，特别是农用保鲜领域；具体而言，涉及一种农用保鲜杀细菌组合物及其制备方法和应用，特别是涉及一种含有石榴葡聚糖与咪鲜胺锰盐的保鲜杀细菌组合物及其保鲜应用。

技术背景

石榴为石榴科石榴属植物，在我国栽培广泛，栽植面积达64668hm²，居世界首位，产量达38万多吨，主要分布于陕西、山东、安徽、四川和云南五省。石榴是一种药食两用植物，石榴果实不仅营养丰富，而且是历代药典中的重要中药。现代科学研究也证实，石榴果实在预防和治疗心脑血管疾病、癌症等方面有特效，而这些功效很可能来自于果实中的多酚类物质。石榴果实的各部位，包括果皮、果肉、种子内都含有一定量的多酚类物质，其中以果皮中含量最为丰富。石榴皮为石榴加工废料，目前除少数药用外，大多未加以利用，探寻石榴皮加工利用的途径和方法，具有重要的社会、经济价值。

报道的石榴皮的用途为：石榴皮是中药:(石榴皮、石榴根皮)石榴皮：(收涩药：止泻药)酸、涩，温。归大肠经。功效：止泻，杀虫。应用：1、用于久泻久痢及便血，脱肛。可炒炭研末服。久泻脱肛，脾胃虚弱，可与黄芪、白术、升麻等配伍。久痢而湿热未尽者，应与黄连、黄柏等配伍。2、用于蛔虫、绦虫、蛲虫等寄生虫病。可与槟榔配伍。

咪鲜胺锰盐：咪鲜胺锰盐具有内吸、传导、预防、保护、治疗等多重作用，属于咪唑类杀细菌剂，对子囊菌引起的多种作物病害有特效。通过抑制甾醇的生物合成而起作用的。主要用于番茄、西葫芦、梨树、苹果、火龙果、柑橘、水稻、小麦、大白菜、生菜、菠菜等防治腐烂病、晚疫病、黑星病等。

农业生产上，除了作物生长期的病虫害防治外，在果子、蔬菜等鲜活农产品采收后常常需要对库存产品做防腐保鲜处理，既利于长途运输也延长了农产品新鲜程度。

目前，农产品果子保鲜主要为北方的苹果、梨、猕猴桃、葡萄、冬枣，南方的柑橘、脐橙、香蕉等。果品类农产品保鲜主要解决的问题是产品贮藏期的病害，如苹果炭疽病、红黑点病，霉星病及各种生理性病害，葡萄炭疽病、褐斑病，冬枣的炭疽病、红斑病等，柑桔贮藏期的病害主要有青(绿)霉病、炭疽病、蒂腐病、黑腐病、褐腐病、酸腐病、干疤病等。据不完全统计如果果子采收入库前不进行正常的保鲜处理，由于以上病害常常会造成20-30％的烂果，严重地可达60％，损失很大。如我们在陕西最大的苹果经销商陕西华圣果业公司调研，库存苹果每年发生浸染性病害的损耗占55.8％；生理性病害的损耗占15.2％；病果损失率一般在4％左右，个别年份病果损失率高达8％左右。

在四川广安县柑橘产区，我们调研，在运输、贮藏过程中由于腐烂、霉变造成的柑橘损失一般在10％以上，温度高、湿度大时损失在30％以上。

蔬菜保鲜主要为南菜北运地区产品，如每年春节海南、广东等地的反季节蔬菜。由于新鲜蔬菜在采收后，水分含量很高，在加上库存和运输过程中温度变化，常常会发生腐烂病、炭疽病、黑斑病等。据不完全统计仅此问题如果处理不好，就会造成蔬菜产品20-40％以上的损失。

目前市场上用于果蔬防腐保鲜的产品主要为化学农药为主，如咪鲜胺系列，百可得、腐霉利、乙霉唑等等，总体效果还不错，但随着这些药剂的大量使用，效果越来越差。而生物药剂防腐保鲜的药剂目前还不多。

由于果蔬农产品直接用于人们生活，涉及食品安全。保鲜产品就必须严格要求高效、安全、低毒、无残留。

因此，开发合理、高效、低毒、环保的生物性或复配的防腐保鲜产品成为农业生产上的必须。

发明内容

本发明为解决上述技术背景中的不足，提供了一种用于柑橘、苹果、香蕉等保鲜的药剂及其制备方法，该药剂不但可以有效的用于水果保鲜，而且具有环境相容性好、不易产生抗性、物理化学稳定性好、药效时间长、低毒、低残留等优点，是一种新型的保鲜剂。该药剂相比单剂具有良好的增效作用，且能延缓单剂的抗药性，同时安全无毒、环境友好。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的。

本发明涉及一种杀细菌组合物，其特征在于，所述组合物含有活性成分石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐，其中二者的重量比为30:1-1:30。

优选地，该杀细菌组合物中石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐的重量比为10:1～1:10。

更优选地，该杀细菌组合物中石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐的重量比为5:1～1:5。

本发明涉及一种杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有1～90重量％的如上所述的杀细菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。

优选地，该杀细菌剂含有3～80重量％的如上所述的杀细菌组合物。

更优选地，该杀细菌剂含有15～70重量％的如上所述的杀细菌组合物。

所述石榴葡聚糖是采用如下方法制得的：

石榴皮原料来源于陕西临潼，提取工艺方法参考王岩--蚌埠学院毕业论文《正交法优化怀远石榴皮多糖提取工艺》及赵盈、张海生等人陕西师范大学食品工程与营养科学院、陕西教育学院生命科学院《石榴皮多糖的水浸提取工艺优化》论文中的方法。即本发明的石榴葡聚糖采用水浸提取工艺，即提取温度80℃，提取时间2h，料液比1:20，提取次数3次，合并提取液，最后提取液经真空浓缩，喷雾干燥，得到本发明的石榴葡聚糖。

石榴葡聚糖采用高效液相色谱法测定含量。具体测定方法是：试样用流动相溶解，以乙腈+0.1％磷酸水溶液(体积比为5:95)为流动相，使用以C₁₈为填料的不锈钢柱和紫外检测器，在波长258nm下，对试样中的石榴葡聚糖进行反相高效液相色谱分离和测定，外标法定量。石榴葡聚糖的保留时间为6.1min和7.8min)。实施工艺中提取物中的石榴葡聚糖含量≥6.0％即为合格品。

咪鲜胺锰盐从市场购买，生产厂家为南京红太阳化工股份有限公司。

二者复配用已知的方法可以制备成适合农业使用的任意一种剂型，比较好的剂型为可湿性粉剂和水分散粒剂。

进一步地，本申请涉及将上述杀细菌组合物或杀细菌剂用于防治细菌病害的用途。

本发明中使用的辅助成分包括：润湿剂、分散剂、粘结剂、稳定剂、助悬剂、崩解剂、吸附剂和填充料等及其它有益于有效成分在制剂中稳定和药效发挥的已知物质，都是农药制剂中常用或允许使用的各种成分，并无特别的限定，具体成分和用量根据配方要求通过简单试验确定。

具体实施方式

以下用具体实施例进行说明。所有配方中百分比均为重量百分比。本发明组合物各种制剂的加工工艺均为现有技术，根据不同情况可以有所变化。

本发明的石榴葡聚糖采用水浸提取工艺来进行提取，提取温度80℃，提取时间2h，料液比1:20(重量比)，提取次数3次，合并3次提取的提取液，提取液经真空浓缩，喷雾干燥，得到本发明的石榴葡聚糖。

石榴葡聚糖采用高效液相色谱法测定含量。具体测定方法是：试样用流动相溶解，以乙腈+0.1％磷酸水溶液(体积比为5:95)为流动相，使用以C₁₈为填料的不锈钢柱和紫外检测器，在波长258nm下，对试样中的石榴葡聚糖进行反相高效液相色谱分离和测定，外标法定量。石榴葡聚糖的保留时间为6.1min和7.8min)。实施工艺中提取物中的石榴葡聚糖含量≥6.0％即为合格品。

实施例1:35％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐可湿性粉剂(以1000公斤为例)

生产工艺：依次将400公斤填充料高岭土、100公斤防结块剂白炭黑、10公斤助悬剂硅酸镁铝、50公斤石榴葡聚糖母药、300公斤咪鲜胺锰盐、80公斤分散剂NNO和60公斤润湿剂拉开粉投入1000升的前混合罐中，搅拌30分钟，经气流粉碎到325目以上，粉碎后的物料在1000升的后混合罐搅拌1小时，取样分析，合格后包装入库。

实施例2：80％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐可湿性粉剂(以1000公斤为例)

生产工艺同实施例1

实施例3：10.1％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐水分散粒剂(以1000公斤为例)

生产工艺：依次将填充料319公斤玉米淀粉和200公斤滑石粉、10公斤粘结剂黄糊精、300公斤崩解剂氯化铵、1公斤石榴葡聚糖母药、100公斤咪鲜胺锰盐、40公斤分散剂2500和30公斤润湿剂LWET/F投入1000升的前混合罐中，搅拌30分钟，经气流粉碎到500目以上，粉碎后的物料在1000升的后混合罐搅拌1小时，取样分析，合格后将物料投入捏合机，加适量水捏合，经造粒机造粒后干燥，用筛分筛出需要颗粒大小，不合适的颗粒重新捏合造粒，合适的颗粒分析合格后包装入库。

实施例4：50％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐水分散粒剂(以1000公斤为例)

生产工艺同实施例3。

生测试验如下：

石榴葡聚糖与咪鲜胺锰盐组合对柑橘青霉菌、柑橘绿霉菌的毒力测定

1.试验条件

1.1供试病原菌：

柑橘青霉菌(Penicillium italicum Wehmer)柑橘绿霉菌(Penicilliumdigitatum Sacc)在西北农林科技大学植保学院植物病理研究室提纯、保存并提供。1.2培养条件：

供试菌种及试验后病菌的培养条件为温度为18～27℃，相对湿度90％以上。

2.试验设计

2.1供试药剂：

石榴葡聚糖(punica granatuml dextran)含量6％母粉，由陕西恒田化工有限公司研发室提供。

咪鲜胺锰盐(prochloraz-manganese chloride complex)98％原药，由江苏辉丰公司提供。

2.2药剂浓度和配比设计及溶液配制：

石榴葡聚糖溶液：称取0.01g石榴葡聚糖母粉，用0.2mL甲醇溶解，加入含0.1％Tween80乳化剂的无菌水98.3ml，搅拌均匀，配制成100mg/L母液，再用含0.1％Tween80乳化剂的无菌水稀释成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125mg/L浓度备用；

咪鲜胺锰盐溶液：称取0.01g98％咪鲜胺锰盐原药，用0.2ml甲醇溶解，加入含0.1％Tween80乳化剂的无菌水96.8ml配制成100mg/L母液，再用含0.1％Tween80乳化剂的无菌水稀释成10、5、1、0.5、0.1、0.05mg/L浓度备用；

各混配溶液：分别取5、5、5、50、150ml 10mg/L石榴葡聚糖溶液分别加入到5、50、150、5、5ml 10mg/L咪鲜胺锰盐溶液中制成10mg/L石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐1:1、1:10、1:30、10:1和30:1溶液，再用含0.1％Tween80乳化剂的无菌水稀释成各试验浓度。

对照溶液：0.2ml甲醇加95ml含0.1％Tween80乳化剂的无菌水。

3.测定方法：

参照生测标准方法NY/T1156.3-2006，采用平皿叶片法。

孢子囊悬浮液配制：选取培养好的柑橘青霉菌、柑橘绿霉菌孢子囊，用4℃蒸馏水稀释，浓度控制在每毫升1×10⁵个--1×10⁷个孢子囊，4℃下存放备用。

选取成熟较好无病害的柑橘果实300个，每10个一组，用消毒过的刀片在柑橘果实表皮轻轻划开少许伤口，将配制好的药液均匀喷施于果子上，待药液自然风干后，按处理标记后排放在保湿盒中。在药剂处理24小时后，将准备好的孢子囊悬浮液点滴10μL接种于果子表皮上。每果子接种4滴，每处理10个果子，试验设不含药剂处理的空白对照。接种后盖上皿盖，置于人工气候培养箱内，在没有光照，温度18～27℃，相对湿度控制在90％以上条件下培养。

4.数据调查与统计分析

4.1调查方法：

每天观察果子霉菌的发病情况，3天后待空白对照发病时调查防治效果，7天、15天后分别再调查果子发病情况，统计果子发病率和病情指数，计算防效。

4.2增效作用评价方法

参照生测标准方法NY/T1156.6-2006，根据Sun&Johnson(1960)的共毒系数法(CTC)来评价药剂混配的增效作用，即CTC≤80为拮抗作用，80＜CTC＜120为相加作用，CTC≥120为增效作用。

所有数据均采用SAS6.12系统软件进行分析，求出毒力回归方程式、相关系数(r)和EC50(95％置信度)。

5.结果与分析：

采取5点法取5个代表性的配比，并将这5个配比和标准药剂进行毒力测定。石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐复配对柑橘青、绿霉菌的毒力测定结果见表₁。由表₁可见，石榴葡聚糖与咪鲜胺锰盐以1:1、1:10、1:30、10:1和30:1的比例混配对柑橘青、绿霉菌均表现出增效作用，其EC₅₀值分别为2.67、3.17、3.07、3.29和3.43mg/L，共毒系数分别为137.80、143.82、159.40、145.54和138.00，其中以1:30的比例混配增效作用最好。

表1甲基营养型芽孢杆菌和叶枯唑复配对烟草青枯病的毒力测定结果

石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐复配大田药效试验

供试药剂

试验药剂：35％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐可湿性粉剂，恒田公司自制；

对照药剂：

6％石榴葡聚糖可湿性粉剂，恒田公司自制

50％咪鲜胺锰盐可湿性粉剂，江苏辉丰公司生产；

16％异菌脲·咪鲜胺悬浮剂  深圳诺普信公司生产；

20％抑霉唑可湿性粉剂  西安杨森制药公司生产。

供试作物：柑橘、苹果、香蕉采收前和采收后果实。

防治对象：柑橘贮藏期青、绿霉、酸腐病、炭疽病等病害害。苹果炭疽病、红黑点病及香蕉炭疽病、黑星病等。

处理及用药量：

处理：处理₁  35％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐可湿性粉剂2000倍液

      处理₂  35％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐可湿性粉剂1500倍液

      处理₃  35％石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐可湿性粉剂1000倍液

对照药剂：50％咪鲜胺锰盐可湿性粉剂1500倍液；以下简称对照药剂1

          6％石榴葡聚糖可湿性粉剂1000倍液；以下简称对照药剂2

          16％异菌脲·咪鲜胺悬浮剂1000倍液；以下简称对照药剂3

          20％抑霉唑可湿性粉剂1500倍液；以下简称对照药剂4

CK对照：     清水

施药方法：

果子采摘前树体叶面喷雾，药械选择工农-16型手动喷雾器，由果农自己喷药。

果子采摘后在当天内浸果进行防腐保鲜处理，浸果时间3-10秒。机械操作。

田间试验安排与调查统计方法：

柑橘防腐保鲜试验安排在江西南丰蜜桔果区陈德寿果园内，蜜桔采收前选择50棵树作为喷雾药剂试验样本。每药剂处理3重复，共21个处理。浸果保鲜试验选择在陈德寿收的蜜桔仓库里面，历年柑橘采收贮藏期不注意保险处理会发生腐烂病害，损失很大。近年来果农注重了库存果子保鲜处理。

苹果防腐保鲜试验安排在陕西礼泉苹果产区赵小龙家果园，苹果采收前选择50棵树作为喷雾药剂试验样本。每药剂处理3重复，共21个处理。浸果保鲜试验选择在当地张栋收购商的仓库里面。

香蕉防腐保鲜试验安排在海南省澄迈县白莲镇李德彬家香蕉果园，香蕉采收前选择50棵树作为喷雾药剂试验样本。每药剂处理3重复，共21个处理。浸果保鲜试验选择在李德彬家的香蕉仓库里面。

时间为2012年11月-2013年2月。

试验用药后，分别在果子入库1个月、2个月、3个月时间到后观察果子表面病害发生情况。按500个果子计数，只要贮藏期的果子表面感染病害就算发病，按果子发病与没发病个数百分比率情况统计发病率，依据对照计算各药剂处理的相对防治效果，进行评价。

7.试验结果：

7.1石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治柑橘、苹果、香蕉贮藏期病害药效试验结果分别见以下内容：

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治柑橘贮藏期病害药效试验结果见附表1

从表₁中看出石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合不同浓度处理浸果对柑橘贮藏期病害均有良好的防腐保鲜功效，其中处理₃药后1个月防效可达96％、处理₂1个月防效可达94％、处理₁1个月防效也达到了92％。处理3个月以后防腐保鲜效果均在90％以上。防腐保鲜效果非常显著，防效明显优于目前市场上所常采用的以上各对照药剂和单剂药剂。

表₁石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治柑橘贮藏期病害药效试验结果

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治苹果贮藏期病害药效试验见表₂，从表,₂中看出，石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合不同浓度处理对苹果贮藏期病害均有良好的防腐保鲜功效，其中处理₃药后1个月防效可达90％、处理₂1个月防效可达84％、处理₁1个月防效也达到了82％。3个月以后石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合防腐保鲜效果均在80％以上。防腐保鲜效果非常显著，防效明显优于目前市场上所常采用的以上各对照药剂和单剂药剂。

表₂石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治苹果贮藏期病害药效试验结果

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治香蕉贮藏期病害药效试验见表₃，从表₃中看出，石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合不同浓度处理对香蕉贮藏期病害均有良好的防腐保鲜功效，其中处理₃药后1个月防效可达94％、处理₂1个月防效可达88％、处理₁1个月防效也达到了86％。3个月以后石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜香蕉效果均在80％以上。防腐保鲜效果非常显著，防效明显优于目前市场上所常采用的以上各对照药剂和单剂药剂。

表₃石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜防治香蕉贮藏期病害药效试验结果

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合树上喷雾药剂再采收入库后防腐保鲜防治柑橘、苹果、香蕉贮藏期病害药效试验结果分别见以下内容：

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合树体喷雾防腐保鲜防治柑橘贮藏期病害药效试验结果见附表4

从表₄中看出石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合不同浓度处理对柑橘贮藏期病害均有良好的防腐保鲜功效，其中用处理₃药后喷雾采收的果子入库后1个月防效可达96％、处理₂1个月防效可达96％、处理₁1个月防效也达到了93.3％。各处理3个月以后防腐保鲜效果也均在90％以上。防腐保鲜效果非常显著，防效明显优于目前市场上所常采用的以上各对照药剂和单剂药剂。

表₄石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合果子采收前树体喷雾防腐保鲜防治柑橘贮藏期病害药效试验结果

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合树上喷雾防腐保鲜防治苹果贮藏期病害药效试验见表₅，从表,₅中看出，石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合不同浓度处理对苹果贮藏期病害均有良好的防腐保鲜功效，其中处理₃药后1个月防效可达90％、处理₂1个月防效可达85％、处理₁1个月防效也达到了85％。3个月以后石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合防腐保鲜效果也均在80％以上。防腐保鲜效果非常显著，防效明显优于目前市场上所常采用的以上各对照药剂和单剂药剂。

表₅石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合果子采收前树体喷雾防腐保鲜防治苹果贮藏期病害药效试验结果

石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合树体果子采收前喷雾防腐保鲜防治香蕉贮藏期病害药效试验见表₆，从表₆中看出，石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合不同浓度处理对香蕉贮藏期病害均有良好的防腐保鲜功效，其中处理₃药后1个月防效可达90％、处理₂1个月防效可达92.5％、处理₁1个月防效也达到了95％。3个月以后石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合浸果防腐保鲜香蕉效果均在85％以上。防腐保鲜效果非常显著，防效明显优于目前市场上所常采用的以上各对照药剂和单剂药剂。

表₆石榴葡聚糖·咪鲜胺锰盐组合树体喷雾防腐保鲜防治香蕉贮藏期病害药效试验结果

本发明的一种含有石榴葡聚糖与咪鲜胺锰盐的杀细菌组合物及其应用已经通过具体的实例进行了描述，本领域技术人员可借鉴本发明内容，适当改变原料、工艺条件等环节来实现相应的其它目的，其相关改变都没有脱离本发明的内容，所有类似的替换和改动对于本领域技术人员来说是显而易见的，都被视为包括在本发明的范围之内。

Claims (7)

1.一种杀细菌组合物，其特征在于，所述组合物含有活性成分石榴葡聚糖和咪鲜胺锰盐，其中二者的重量比为30:1-1:30。

2.根据权利要求1所述的杀细菌组合物，其特征在于，二者的重量比为10:1～1:10。

3.根据权利要求2所述的杀细菌组合物，其特征在于，二者的重量比为5:1～1:5。

4.一种杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有1～90重量％的权利要求1至3任一所述的杀细菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。

5.根据权利要求4所述的杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有3～80重量％的如上所述的杀细菌组合物。

6.根据权利要求5所述的杀细菌剂，其特征在于，该杀细菌剂含有15～70重量％的如上所述的杀细菌组合物。

7.将权利要求1至3任一所述的杀细菌组合物或权利要求4至6任一所述的杀细菌剂用于防治细菌病害的用途。