CN104366188A - 含有蛋白酶抑制剂的婴儿营养品 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种包含至少一种蛋白酶抑制剂的婴儿营养品、制备所述婴儿营养品的方法和所述婴儿营养品用于治疗和/或预防儿童肥胖症和由儿童肥胖症引起的继发病症的用途。

Description

含有蛋白酶抑制剂的婴儿营养品

技术领域

本发明涉及营养品、特别是营养完全的婴儿营养品，和所述营养品用于预防和/或治疗儿童肥胖症的用途。 

背景技术

儿童肥胖症是发达国家中日益增加的问题。举例来说，在美国，2000年认为有约15％的不超过11岁的儿童达到肥胖，而在1980年只有7％。在欧洲同样观察到儿童肥胖症的增加。 

肥胖儿童极有可能患有持续到成年期的肥胖症。儿童肥胖症与高血压和高血脂以及长大后患有诸如哮喘、2型糖尿病、关节炎和心血管疾病等疾病的风险增加相关。此外，儿童肥胖症可具有负面的社会心理作用。儿童肥胖症的起因包括缺乏定期的体育锻炼、久坐、饮食习惯、社会经济因素和遗传因素。早期营养品在儿童肥胖症的预防中也起到重要作用。Armstrong&Reilly(2002，Lancet 359:2003-4)观察到喂养人乳可降低儿童肥胖症的风险。 

母乳喂养是喂养婴儿的优选方法。然而，存在导致母乳喂养不可能或不太合乎需要的情况。在这些情况下，婴儿配方奶粉和较大婴儿配方奶粉是不错的替代品。现代婴儿配方奶粉和较大婴儿配方奶粉的组成是经调节使得其满足生长中和发育中婴儿的特殊营养需求。以配方奶粉喂养的婴儿(几乎)完全依赖于配方奶粉中的营养物和水。因此，用于肥胖症的常用医治方法(例如增加饱腹感或降低食欲，或增加生热)并不可行，这是因为婴儿的 

严格营养需求会受到危害。 

WO 0022937描述使用消化速度有所降低的蛋白质材料来制备用于肠内投药的组合物，使得能够调节餐后血浆氨基酸含量。所述文献也描述含有消化速度有所降低的蛋白质材料的用于肠内投与哺乳动物的组合 物。 

需要既能满足支持最佳生长和发育的所有营养需求并且能够防止长大后发生儿童肥胖症的婴儿营养品。 

发明概述 

用婴儿配方奶粉喂食婴儿可导致比婴儿接受人乳时更高的餐后胰岛素反应，而血糖含量在投与婴儿配方奶粉时也并未降低。因此，与喂食人乳相比，喂食婴儿配方奶粉而引起的餐后胰岛素含量增加是不合需要的，这是因为其在以配方奶粉喂食的婴儿体内诱发一种形式的胰岛素抗性，其有助于发展儿童肥胖症。 

本发明者意外地发现，投予包含蛋白酶抑制剂的婴儿营养品与投予不包含蛋白酶抑制剂的相同婴儿营养品相比，会导致更低水平的餐后胰岛素含量和餐后葡萄糖含量，同时获得足够含量的血浆氨基酸、尤其是必需氨基酸。在投与含有蛋白酶抑制剂的婴儿营养品之后所观察到的餐后胰岛素反应、餐后血糖含量和餐后血浆氨基酸含量与喂食人乳时所观察到的情况相当。 

因此，本发明的含有蛋白酶抑制剂的婴儿营养品可有利地用于治疗和/或预防儿童肥胖症的方法中。本发明也可适当地用于治疗和/或预防患有儿童肥胖症的儿童的继发病症的方法中，特别是选自由以下各病组成的群组的一种或一种以上的继发病症：糖尿病、心血管疾病、高血压、哮喘、睡眠呼吸暂停、矫形术并发症(特别是腿骨和髋骨的矫形术并发症)和关节炎。 

发明详述 

本发明一方面涉及一种组合物，其包含蛋白质、碳水化合物和至少一种选自由植物油脂、海洋生物油脂和微生物油脂组成的群组的油脂源，所述组合物包含一种或一种以上选自由胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂和弹性蛋白酶抑制剂组成的群组的蛋白酶抑制剂。蛋白酶抑制剂优选地选自由胰蛋白酶抑制剂和胰凝乳蛋白酶抑制剂组成的群组。在一个实施例中，组合物至少包含植物油脂。 

本发明的第二方面是本发明的组合物用于制造对婴儿提供营养的营养组合物的用途。 

本发明的第三方面是本发明的组合物用于制造用于预防和/或治疗儿童肥胖症的方法的制剂的用途，所述方法包含向婴儿经口投予所述制剂。 

本发明另一方面是本发明的组合物用于制造营养组合物的用途，所述营养组合物用于在患有儿童肥胖症的受试者中治疗和/或预防糖尿病、心血管疾病、高血压、哮喘、睡眠呼吸暂停、矫形术病症和/或关节炎的方法中，所述方法包含向婴儿经口投予所述营养组合物。 

本发明另一方面是用于制备婴儿营养品的方法，其包含混合以下来源： 

a.包含至少一种选自由胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂和弹性蛋白酶抑制剂组成的群组的蛋白酶抑制剂的来源； 

b.油脂源； 

c.蛋白质源；和 

d.碳水化合物源。 

本发明另一方面是至少一种选自由胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂和弹性蛋白酶抑制剂组成的群组的蛋白酶抑制剂用于制造用于预防和/或治疗儿童肥胖症的营养组合物的用途。 

本文所用的术语婴儿是指年龄在0到24个月之间的人类。儿童是年龄在0到12岁之间的人类。在优选实施例中，本发明涉及在具有发展儿童肥胖症的高风险的婴儿中预防儿童肥胖症。 

本发明所用的术语“儿童肥胖症”是指儿童肥胖或超重。婴儿和儿童都可患有儿童肥胖症。具体来说，性别特异性的以年龄为准的BMI指数(BMI-for age)大于85个百分点或甚至大于95个百分点的儿童患有儿童肥胖症BMI(体质指数)是人体测量的度量标准，其被定义为体重(千克)除以身高(米)的平方。举例来说，可在美国国家卫生数据中心(US National Center for Health Statistics)公开获得具有性别特异性的以年龄为准的BMI指数的表格。如果一个儿童的性别特异性以年龄为准的BMI指数大于85个百分点或甚至95个百分点，那么这意味着在相同年龄和性别的儿童组成的群体中有85％或甚至95％的儿童具有更低的BMI指 数。 

在本说明书中的任何地方在体积方面描述组合物时，这意味着是指无需进一步稀释以使其适于投予儿童、尤其是婴儿的即饮液体组合物。 

蛋白酶抑制剂

本文所用的术语“蛋白酶”是指能够通过裂解肽键来水解蛋白质和/或肽的酶。本发明尤其涉及对人类肠蛋白酶胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或弹性蛋白酶的抑制。 

结合本发明使用的术语“蛋白酶抑制剂”是指能够抑制蛋白酶作用的化合物、物质和/或组合物。本发明的蛋白酶抑制剂优选为食品级且无毒。本发明尤其涉及能够抑制人类肠胰蛋白酶、人类肠胰凝乳蛋白酶和/或人类肠弹性蛋白酶的活性的蛋白酶抑制剂。能够抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或弹性蛋白酶的作用的化合物、物质和/或组合物可由所属领域的技术人员使用此项技术中已知的方法(例如使用下文所述的方法)容易地确定。 

本发明优选包含以下至少一种成份作为蛋白酶抑制剂： 

·卵类粘蛋白(来源于禽蛋)； 

·在哺乳动物血液、血浆、乳汁和/或初乳以及在非人类哺乳动物的器官中所发现的抗胰蛋白酶和/或抗胰凝乳蛋白酶； 

·重组人类α₁-抗胰蛋白酶、重组人类间-α-胰蛋白酶抑制剂和/或重组人类α₁-抗胰凝乳蛋白酶； 

·来自真菌和/或细菌、优选为放线菌属(actinomyces)、链霉菌属(streptomyces)、双歧杆菌(Bifidobacteria)或乳酸菌的蛋白酶抑制剂； 

·在玉米仁、马铃薯和/或豆科种子(诸如利马豆、鹰嘴豆、青刀豆、赤小豆和/或大豆)中所发现的蛋白酶抑制剂； 

·葡糖酸锌； 

·或任何一种上述制剂的混合物。 

蛋白酶抑制剂优选是从选自由马铃薯、豆科种子、非人乳、禽蛋白和微生物培养物组成的群组的来源获得。蛋白酶抑制剂优选为肽。蛋白酶抑制剂可从(例如)Sigma-Aldrich购得，或者可如下列文献中所述分离得到：例如，Seidl&Liener,(1972)J.Biol.Chem.247:3533-3538；和 Michael等人，1976，Proc.Natl.Acad Sci,73:1941-1944；和WO02060932。在特定实施例中，蛋白酶抑制剂为葡糖酸锌。 

所述组合物优选包含至少一种选自由以下各物组成的群组的蛋白酶抑制剂：在人类血浆中所发现的α₁抗胰蛋白酶；在人类血浆中所发现的α₁抗胰凝乳蛋白酶；在牛肺中所发现的抑肽酶(aprotinin)；在牛胰腺或午初乳中所发现的Kunitz抑制剂；在牛胰腺中所发现的Kazal抑制剂；在大豆中所发现的Bowman-Birk胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制剂；在大豆中所发现的I-S型胰蛋白酶抑制剂；在大豆中所发现的II-S型胰蛋白酶抑制剂；在大豆中所发现的Kunitz抑制剂；在利马豆中所发现的胰蛋白酶抑制剂；在利马豆中所发现的II-L型胰蛋白酶抑制剂；在玉米仁中所发现的哈格曼因子(Hageman factor)；在鸡蛋白中所发现的卵抑制剂；在鸡蛋白中所发现的III-O型胰蛋白酶抑制剂；在鸡蛋白中所发现的IV-O型胰蛋白酶抑制剂；在火鸡蛋白中所发现的II-T型胰蛋白酶抑制剂；链霉菌属枯草杆菌蛋白酶抑制剂；由双歧杆菌产生的丝氨酸蛋白酶抑制剂；马铃薯抑制剂I；马铃薯抑制剂II；和葡糖酸锌。特别优选组合物包含至少一种选自由以下各物组成的群组的蛋白酶抑制剂：在人类血浆中所发现的α₁抗胰蛋白酶；在人类血浆中所发现的α₁抗胰凝乳蛋白酶；在牛初乳中所发现的Kunitz胰蛋白酶抑制剂；在大豆中所发现的Bowman-Birk胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制剂；在鸡蛋白中所发现的卵抑制剂；由双歧杆菌产生的丝氨酸蛋白酶抑制剂；马铃薯抑制剂I；和马铃薯抑制剂II。 

蛋白酶抑制剂的浓度和活性

根据Schwert G.W.和Takenaka Y.(Biochim.Biophys.Acta(1955)16,570)所述的方法测量胰蛋白酶活性和胰凝乳蛋白酶活性。在测定胰蛋白酶活性的方法中，使N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯[BAEE]在酯键处水解，引起在253nm和25℃下所测量的吸光度增加。在测定胰凝乳蛋白酶活性的方法中，使N-乙酰基-L-酪氨酸乙酯[ATEE]在酯键处水解，引起在237nm和25℃下所测量的吸光度降低。可如Gertler,A.和Hofmann,T.(1970).Can.J.Biochem.48，384-6所述通过水解N-乙酰基-(L-丙氨酸)₃-甲酯(AAAAME)来测量弹性蛋白酶活性。 

一个单位的胰蛋白酶活性是定义为在如Schwert(上文)所述的反应 条件下每分钟水解1μmol BAEE。一个单位的胰凝乳蛋白酶活性是定义为在如Schwert(上文)所述的反应条件下每分钟水解1μmol ATEE。本文所用的一个单位的弹性蛋白酶活性是定义为在如Gertler(上文)所述的反应条件下每分钟水解1μmol AAAAME。 

一个单位的胰蛋白酶抑制剂活性(TIU)是定义为抑制一个单位的胰蛋白酶活性的活性水平。一个TIU抑制具有2个单位活性的胰蛋白酶制剂活性的50％。类似地，一个单位的胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶抑制剂分别为抑制一个单位胰凝乳蛋白酶活性和一个单位弹性蛋白酶活性的抑制剂活性。一个单位的蛋白酶抑制剂(PIU)是定义为抑制一个单位的胰蛋白酶加胰凝乳蛋白酶加弹性蛋白酶的活性总和的抑制剂的量。 

一种或一种以上所述蛋白酶制剂优选为每克组合物干重中以抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶总和的蛋白酶抑制剂单位(PIU)的至少0.75、更优选为至少3.0、最优选为至少9.0的活性存在。所述蛋白酶抑制剂优选为每克组合物干重中以低于300、更优选低于75PIU的浓度存在。当组合物为即饮液体的形式时，每100毫升组合物优选包含至少10PIU、更优选为至少40PIU、最优选为至少120PIU。 

本发明的蛋白质抑制剂优选地每一抑制剂重量不具有尤其高的抑制活性，意即比抑制活性，这是因为这会导致不合需要的高局部抑制活性。获得与食物基质的适当混合也需要一定体积和重量的蛋白酶抑制剂。因此，本发明的组合物优选地每克组合物干重包含至少35μg蛋白酶抑制剂、更优选为至少140μg蛋白酶抑制剂、最优选为至少560μg蛋白酶抑制剂。每100毫升的即饮液体形式的组合物优选包含至少0.5mg、更优选为至少2.0mg、最优选为至少8.0mg蛋白酶抑制剂。所用蛋白酶抑制剂优选地每毫克蛋白酶抑制剂具有小于2000PIU、更优选小于400PIU,最优选小于100PIU的比抑制剂活性。 

然而，比蛋白酶抑制活性也不应太低，以避免对有利地包括在组合物中用于提供营养的营养物构成限制。因此，本发明的组合物优选地每100毫升包含少于0.2克的蛋白酶抑制剂，更优选地每100毫升包含少于0.050克的蛋白酶抑制剂。或者，本发明的组合物优选地每克组合物干重包含少于14mg的蛋白酶抑制剂，更优选地每克组合物干重包含少于3.5 mg的蛋白酶抑制剂。比蛋白酶抑制剂活性优选大于0.2PIU/mg蛋白酶抑制剂，或更优选大于1.0PIU/mg蛋白酶抑制剂，最优选大于4.0PIU/mg蛋白酶抑制剂。 

为尽可能地接近人乳，本发明的组合物优选含有与人乳相同的蛋白酶抑制活性。所述蛋白酶抑制活性优选是在人乳中所发现的蛋白酶抑制活性的20％到5000％范围内、更优选在40％与1000％之间。为确定组合物中应存在的蛋白酶抑制剂活性，优选使用以下方法： 

-在如上文所描述的用于测定胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或弹性蛋白酶抑制活性的合适检定中，测定每100毫升中15mg人类血清α₁抗胰蛋白酶(Athena Biochemicals,Athens,GA)与2.5mg人类血清α₁抗胰凝乳蛋白酶(ICN Biochemicals,Costa Mesa,CA)的溶液的蛋白酶抑制活性。 

-每100毫升本发明的组合物(当为即饮液体形式时)中所加入的蛋白酶抑制剂活性是在以上所得的活性的20％与5000％之间，优选在该活性的40％与1000％之间。 

为确定组合物中应存在的蛋白酶抑制剂重量，优选使用以下方法： 

-使用与用于测定加入本发明组合物中的蛋白酶抑制活性的检定相同的检定，测试含17.5mg本发明的蛋白酶抑制剂的溶液在100ml时的抑制活性。在计算每重量的蛋白酶抑制活性之后，每100ml本发明的组合物(即用型液体配方)中需加入的蛋白酶抑制剂重量是提供从15mg人类血清α₁抗胰蛋白酶和2.5mg人类血清α₁抗胰凝乳蛋白酶抑制剂获得的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或弹性蛋白酶抑制活性的20％与5000％之间活性的重量。 

相当地，可描述每克组合物干重的抑制剂活性。在优选实施例中，每克组合物干重的蛋白酶抑制剂活性为1.1mg人类血清α₁抗胰蛋白酶和0.18mg人类血清α₁抗胰凝乳蛋白酶的活性的20％到5000％、更优选为40％到1000％。 

在优选实施例中，组合物的蛋白酶抑制剂活性为每克蛋白质6到2500PIU、更优选为每克蛋白质25到600PIU。蛋白酶抑制剂优选以每克蛋白质0.03mg到120mg存在，更优选以每克蛋白质0.12mg到30mg存在。或者，每克蛋白质中所存在的蛋白酶抑制剂活性优选为8.8mg人类血清 α₁-抗胰蛋白酶和1.5mg人类血清α₁-抗胰凝乳蛋白酶的活性的20％到5000％、更优选为40％到1000％。 

营养物

为了对婴儿提供满足支持生长和发育的营养需求的营养品，蛋白质、碳水化合物和油脂是必需的。营养品最好进一少包含(必需)维生素、矿物质和微量元素。合适的维生素、矿物质和微量元素众所周知，且所属领域的技术人员通常了解用于婴儿的营养产品中可包括何种上述物质和何种量。举例来说，诸如1和2的市售婴儿营养品中所存在的那些维生素、矿物质和微量元素包括在本发明的组合物中同样合适。 

蛋白质

本发明的组合物包含蛋白质。最好本发明组合物中的蛋白质的至少50重量％、更优选为至少90重量％是来源于非人类哺乳动物乳汁、优选为牛奶。酪蛋白和乳清优选以20/80到80/20范围内的重量比存在。这是最佳范围，因为一方面牛酪蛋白的氨基酸组成更类似于人乳蛋白，且另一方面乳清蛋白更易于消化且发现其在人乳中的量更多。优选地，本发明组合物中的至少80重量％、优选为至少95重量％的蛋白质未被蛋白酶水解成较小的肽或游离氨基酸。当组合物为液体形式时，优选每100ml包含1.0g到6.0g蛋白质，更优选每100ml包含1.0g到2.5g蛋白质。相当地，组合物包含以干重计7重量％到40重量％、优选为8重量％到20重量％的蛋白质。使用N*6.38，根据Kjeldahl计算蛋白质含量，其中N为所测量的氮的量。本发明组合物中蛋白质的量优选为5能量％到16能量％、最优选为8.0能量％到12.0能量％。能量％为能量百分比的缩写且表示构成制剂的总热量值的各组份的相对量。 

可消化碳水化合物

本发明的组合物优选包含选自由乳糖、麦芽糊精、淀粉、果糖、蔗糖、葡萄糖和麦芽糖组成的群组的可消化碳水化合物源。因为低胰岛素反应和低升糖指数很重要，所以最好至少35重量％、优选至少50重量％、更优选至少75重量％的本发明组合物的可消化碳水化合物为乳糖。蔗糖加葡萄糖的量优选低于可消化碳水化合物的6重量％、更优选低于2重量％。本发明的组合物优选包含25到75能量％、优选为40到55能量％ 的可消化碳水化合物。当为液体形式时，本发明的组合物优选每100ml包含6到19g可消化碳水化合物、更优选每100ml包含6到10g可消化碳水化合物。以干重计，组合物优选包含40到75重量％的可消化碳水化合物。本文所用的术语“可消化碳水化合物”是指能够转化为可在人类消化道的口、食道、胃和/或小肠中吸收的单元的碳水化合物。 

不可消化的可发酵碳水化合物 

不可消化的碳水化合物为在经口摄入后完整地进入人类结肠的碳水化合物。 

本文所用的术语“可发酵”是指经受(厌氧)分解并在胃肠道下半部(例如结肠)由微生物转化为较小分子、尤其是短链脂肪酸和乳酸盐的能力。可以Am.J.Clin.Nutr.53，1418-1424(1991)中所述的方法测定可发酵性。 

不可消化的可发酵碳水化合物(NDFC)具有血糖调和作用，这是因为其延迟胃排空并缩短小肠通过时间。这种作用可经由从结肠中的低聚糖通过所谓的回肠结肠闸(ileocolonic brake)产生的短链脂肪酸引起，回肠结肠闸是指通过到达回肠-结肠接合处的营养物对胃排空的抑制。短链脂肪酸也可缩短回肠排空。因此，认为不可消化的可发酵碳水化合物和蛋白酶抑制剂协同预防和/或治疗儿童肥胖症。 

根据一优选实施例，组合物包含一种或一种以上不可消化的可发酵碳水化合物。组合物优选每100ml液体包含0.2-1.5g、优选为0.3到1.0g NDFC。以干重计，组合物优选包含1到10重量％、优选为2到6重量％。组合物优选包含至少一种选自由多聚果糖、低聚果糖、低聚半乳糖、部分水解的半乳甘露聚糖、酸性低聚糖和稳定的或不可消化的聚糊精组成的群组的不可消化的可发酵碳水化合物。在一特别优选的实施例中，组合物包含a)反式低聚半乳糖与多聚果糖的混合物；或b)部分水解的瓜尔胶与一种选自由多聚果糖和稳定的或不可消化的聚糊精组成的群组的碳水化合物的混合物，这是因为这些混合物协同产生最高量的短链脂肪酸。 

多聚果糖为包含聚合度为10或10以上的β连接果糖单元链的多糖碳水化合物。多聚果糖包括菊糖、果聚糖和/或混合类型的多聚果糖。适 用于组合物的菊糖也可容易地购得，例如HP(Orafti)。 

低聚果糖(FOS)是指以葡萄糖和/或果糖终止的果糖链，其聚合度(DP)低于10。因此，可将FOS描述为GF_n-1链和/或F_n链，其中G为葡糖基单元，F为果糖基单元且n＝1-9。大部分(至少90％、优选为至少95％)果糖单元是通过β(2,1)果糖基-果糖键连接。合适的FOS源为 (Orafti)或Actilight(Beghin-Meiji)。 

低聚半乳糖(GOS)是指包含半乳糖单元的低聚糖，其DP低于10。葡萄糖单元可存在于链的还原端。GOS包含α-和β-低聚半乳糖。优选地，至少66％的GOS的糖化物单元为半乳糖单元。反式低聚半乳糖(TOS)为大部分半乳糖单元(至少90％、优选为至少95％)通过β键(例如β-(1,4)键)连接的低聚半乳糖。优选地，本发明所用的GOS的键中至少50％为β键。例如，所述TOS为在GOS(Borculo Domo Ingredients,Zwolle,Netherlands)中所发现的TOS。 

术语酸性低聚糖是指包含至少一个选自由N-乙酰神经氨酸、N-乙醇酰神经氨酸、游离或酯化竣酸、硫酸基和磷酸基组成的群组的酸性基团的低聚糖。酸性低聚糖优选包含糖醛酸单元(意即糖醛酸聚合物)、更优选为半乳糖醛酸单元。酸性低聚糖可为同源或异源的碳水化合物。优选使用果胶和/或海藻酸盐的水解产物。DP优选低于10。 

部分水解的半乳甘露聚糖是指其中半乳甘露聚糖已经受水解但尚未水解为其单体单元的组合物。半乳甘露聚糖为在直链中包含至少90％、优选为至少95％的β-(l,4)-D-甘露吡喃糖基单元和经由α-(l,4)-D键与其结合的半乳糖支链的多糖。根据一尤其优选的实施例，使用瓜尔胶。制备部分水解的瓜尔胶(PHGG)的方法描述于EP0557627和EP1252195中。PHGG可以商品名从Novartis Nutrition Corporation购得或以商品名“Sunfiber”从Taiyo Kagaku,Japan购得。水解的瓜尔胶优选为具有较佳的溶解性的聚结形式。 

稳定的或不可消化的聚糊精是指DP为3到50、优选为4到20且单体单元的至少80％、优选至少85％是来源于葡萄糖(以所存在的全部单体单元计)的不可消化的碳水化合物。平均聚合度是在每分子10个与16个单糖单元之间。在一优选实施例中，不可消化的聚糊精为无规分枝聚 糊精且包含α-(l,4)、α-(l,6)葡糖苷键和α/β-(1,2)、α/β-(1,3)和β-(1,6)键。例如，不可消化的聚糊精可以商品名“”从Matsutami Inductries购得或以商品名从Danisco购得。 

油脂

组合物包含至少一种选自由植物油脂、海洋生物油脂和微生物油脂组成的群组的油脂源。 

饱和脂肪酸易于氧化且其摄取会导致儿童肥胖症。因此，饱和脂肪酸的量优选低于总脂肪酸的58重量％、最优选低于45重量％。单不饱和脂肪酸的浓度优选在以总脂肪酸重量计17到60重量％的范围内。本发明的组合物中多不饱和脂肪酸的浓度优选在以总脂肪酸重量计11与36重量％之间。 

必需脂肪酸亚麻酸(LA；一种ω6脂肪酸)和α-亚麻酸(ALA；一种ω3脂肪酸)应以足量和均衡比存在，这是因为LA和ALA缺乏和失衡与诸如胰岛素抗性和肥胖症的病症相关。因此，组合物优选每100ml包含0.3到1.5g LA且每100ml包含至少50mg ALA。以干重计，本发明的组合物优选包含1.8到12.0重量％的LA和至少0.30重量％的ALA。重量比LA/ALA优选是在5与15之间。本发明的组合物优选包含长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)、更优选为二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)。DHA和EPA都改善胰岛素敏感性且因此有利地包括在本发明的组合物中。具有如上所述的特性的油脂组合物被认为与蛋白酶抑制剂一起对儿童肥胖症的预防和/或治疗起协同作用。 

微生物油脂包括来源于海藻和真菌的油脂。 

当组合物为液体形式时，优选每100ml包含2.1到6.5g油脂。以千重计，组合物优选包含12.5到30重量％的油脂。本发明的组合物优选包含35到60能量％油脂、更优选为39到50能量％油脂。 

调渗物(Osmolyte)

调渗物使诸如胰蛋白酶抑制剂的蛋白酶抑制剂稳定。因此，本发明组合物中的调渗物和蛋白酶抑制剂对儿童肥胖症的预防和/或治疗具有协同作用。本发明的组合物优选包含一种或一种以上选自由甜菜碱、肌氨酸、肌醇、牛磺酸、胆碱和肌酸组成的群组的调渗物。 

当本发明的组合物为液体形式时，组合物优选每100ml包含至少8mg调渗物。当本发明的组合物为液体形式时，组合物优选每100ml包含不超过90mg调渗物。组合物优选每克本发明组合物的干重包含至少0.5mg调渗物。组合物优选每克本发明组合物的干重包含不超过6mg调渗物。 

液体组合物

本发明的组合物优选以液体形式投药。为了满足热量需要，组合物优选包含50到200kcal/100ml、更优选为60到90kcal/100mL。本发明组合物的摩尔渗透压浓度(osmolarity)通常介于150与420mOsmol/l之间、优选为260到320mOsmol/l。低摩尔渗透压浓度旨在减轻胃肠压力，例如，尤其降低婴儿中腹泻的发生率。 

组合物优选为粘度低于35cps的液体即饮形式。合适地，组合物为可以重溶于水以形成液体的粉末形式或应以水稀释的液体浓缩物形式。 

每日剂量

当组合物为液体形式时，在每日基础上所投予的优选体积在每日约80到2500ml、更优选为约450到1000ml的范围内，这是适用于婴儿的量。 

治疗

本发明的组合物可有利地用于治疗和/或预防儿童肥胖症的方法中。本发明的组合物也可有利地用于在患有儿童肥胖症的婴儿和/或儿童中治疗和/或预防2型糖尿病、高血压、心血管疾病、关节炎、睡眠呼吸暂停、哮喘和/或矫形术并发症(特别是腿骨和髋骨的矫形术并发症)。 

本发明的组合物优选经口投药。组合物尤其可用于对婴儿提供营养物和/或刺激婴儿生长的方法中。因为组合物尤其可用于预防长大后的儿童肥胖症，所以组合物应有利地投予0-24个月大的婴儿或儿童、优选投与0-18个月大的婴儿或儿童。 

本发明涵盖经包装的营养组合物，其具有明确地或含蓄地指导消费者根据一种或一种以上上述或下述目的使用所述补充物或产品的标签。例如，所述标签可通过结合例如“瘦”、“预防超重”、“发展健康身体质量”和类似术语的术语而涉及用于治疗儿童肥胖症的方法。产品的儿童肥胖 症预防特性可经由诸如图像、图式和其它指示的标记来表明，消费者可由所述标记推断产品旨在治疗或预防儿童肥胖症。 

附图说明

图1：在喂食2ml人乳的大鼠(●)中、喂食2ml标准婴儿配方奶粉的大鼠(□)中和喂食2ml含有1mg大豆胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶抑制剂(Sigma T9777)的标准婴儿配方奶粉的大鼠(■)中的餐后血糖含量。 

图2：在喂食2ml人乳(●)、2ml标准婴儿配方奶粉(□)和2ml补充有1mg大豆胰蛋白酶/胰凝乳蛋白酶抑制剂(Sigma T9777)的标准婴儿配方奶粉(■)的大鼠中的餐后胰岛素含量。 

具体实施方式

实例1 

动物：

个别圈养20只成年雄性Wistar大鼠(在实验开始时为10周龄)。动物可随意进食水和食物(Standard Rat Chow,Harlan)。动物在异氟烷/N₂O/O₂麻醉下的外科手术期间于颈静脉中接收永久插管以使得能够轻松地反复采血。 

治疗：

在4h禁食期后，对10只动物喂食2ml奶粉组合物。在交叉设计(间隔一周的实验)中测试三种不同的组合物。 

1.人类乳汁 

2.1 

3.含有1mg蛋白酶抑制剂(大豆胰凝乳蛋白酶和膜蛋白酶抑制剂抑制剂，Sigma T9777)的1。 

1的组成提供于表I中。随后，在喂食后t＝0、5、10、15、30、60、90和120分钟时，在经肝素化冷却的管中收集血样(200μl)。随后，在离心(10min，5000rpm)后分离血浆并存储在-20℃下直到分析。 

测量胰岛素：

通过放射免疫检定(RIA，Linco)，根据试剂盒实验方案测量血浆胰 岛素，并进行以下调整：所有的检定体积都减少4倍。 

测量葡萄糖：

以96孔格式(Roche Diagnostics,#1448668)用氧化酶-过氧化物酶方法测量血浆葡萄糖。 

测量氨基酸：

根据Fekkes D,van Dalen A,Edelman M,Voskuilen A的“Validation of the determination of amino acids in plasma by high performance liquid chromatography using automated pre-column derivatization with o-phtaldialdehyde”Journal of Chrom.B.(1995)177-186测定氨基酸。不能用这一方法测量半胱氨酸。 

曲线下面积、峰倌时间、最大峰高

在早期峰(t＝0-30min)期间，在所测量的整个曲线下(t＝0-120min)，计算每只动物的葡萄糖和胰岛素的曲线下面积。扣除负值(当反应到达基线下水平时)。测定每只动物的葡萄糖和胰岛素峰值的时间和水平(所有测量时间点的最大血浆浓度)。 

统计：

使用GraphPad InStat软件进行统计。因为数据不是正常分布，所以使用任意分布Kruskal-Wallis检验(成对样品，反复测量)以post-hoc检验测试差异。P值<0.05在统计学上被认为具有显著性。 

表1：每100ml膳食的组成 

结果：

在图1和2中可以看到，在喂食人乳的大鼠中的葡萄糖和胰岛素的餐后峰值低于喂食标准婴儿配方奶粉的大鼠中的餐后峰值。在表2中可以看到，喂食人乳的大鼠的胰岛素和葡萄糖的曲线下面积 (AUC)低于喂食标准婴儿配方奶粉的大鼠的曲线下面积。令人吃惊的是，当喂食补充有蛋白酶抑制剂的标准婴儿配方奶粉时，观察到更低的葡萄糖和胰岛素的餐后峰值(图1和2)。峰值时间、最大峰高和AUC也降低(表2)。 

表2：标准婴儿配方奶粉()、含有蛋白酶抑制剂的标准婴儿配方奶粉和人乳对葡萄糖和胰岛素的餐后峰值时间、最大峰高和曲线下面积的作用。IMF＝婴儿配方奶粉，PI＝蛋白酶抑制剂，HM＝人乳。 

测定血液中必需氨基酸和总氨基酸的量。当喂食IMF时，氨基酸的峰值(t＝5时)最高。当喂食人乳时，峰值最低。含有蛋白酶抑制剂的IMF通常展示中间作用，参看表3。t＝120min时，喂食IMF和人乳的大鼠的血液氨基酸含量类似。当喂食IMF加蛋白酶抑制剂时，含量稍微降低(但在统计学上并不显著)。三组之间所测试的所有氨基酸的AUC值在统计学上也不具有显著差异。 

表3:标准婴儿配方奶粉(1)、含有蛋白酶抑制剂的标准婴 儿配方奶粉和人乳对除半胱氨酸外的必需氨基酸和总氨基酸的相对餐后峰值含量(t＝5)的作用。将t＝0时的值设定为100％。IMF＝婴儿配方奶粉，PI＝蛋白酶抑制剂，HM＝人乳。 

可推断婴儿配方奶粉中存在蛋白酶抑制剂可导致葡萄糖和胰岛素含量和动力学更类似于用人乳所观察到的含量和动力学，而所测试的所有氨基酸对生物利用率的作用并不显著。这些结果表明蛋白酶抑制剂可用于治疗和/或预防儿童肥胖症和由儿童肥胖症引起的继发病症的用途。 

实例2： 

每100ml包含以下成份的组合物(Nutricia，Zoetermeer,The Netherlands)： 

实例3: 

每100ml包含以下成份的组合物(Nutricia Zoetermeer,The Netherlands): 

Claims (12)

1.用于0至24月龄婴儿的组合物，其包含5到16能量％的蛋白质；35到60能量％的油脂，其中至少一种油脂源选自植物油脂、海洋生物油脂和微生物油脂；和25到75能量％的碳水化合物，其特征在于：所述组合物包含一种或多种蛋白酶抑制剂，其选自胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂和弹性蛋白酶抑制剂，并且其中每克组合物干重的所述蛋白酶抑制剂活性为1.1mg人类血清α₁抗胰蛋白酶和0.18mg人类血清α₁抗胰凝乳蛋白酶的活性的40％到1000％。

2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物至少包含植物油脂。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白酶抑制剂是从选自马铃薯、豆科种子、非人乳、禽蛋白和微生物培养物的来源获得。

4.根据前述权利要求中任意一项所述的组合物，其中所述蛋白酶抑制剂是选自：来自人类血浆的α₁-抗胰蛋白酶或α₁蛋白酶抑制剂、来自人类血浆的α₁-抗胰凝乳蛋白酶、来自初乳胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制剂的牛Kunitz胰蛋白酶抑制剂、来自大豆的Bowman-Birk抑制剂、来自鸡蛋白的II-O型胰蛋白酶抑制剂或卵抑制剂、来自双歧杆菌(Bifidobacteria)的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)、马铃薯抑制剂I、马铃薯抑制剂II和葡糖酸锌。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白酶抑制剂是每克所述组合物的干重中存在35μg到14mg。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述蛋白酶抑制剂是每克所述组合物的干重中存在0.75到300个蛋白酶抑制剂单位，其中一个蛋白酶抑制剂单位是抑制一个单位的总活性的活性，所述总活性是胰蛋白酶活性、胰凝乳蛋白酶活性和弹性蛋白酶活性的总活性。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中至少50重量％的可消化碳水化合物为乳糖。

8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物还包含以所述组合物的干重计1-10重量％的选自以下的不可消化的可发酵碳水化合物：反式低聚半乳糖、菊糖、低聚果糖、低聚半乳糖醛酸、部分水解的瓜尔胶和不可消化的葡聚糖。

9.制备用于权利要求1-8中任一项所述的0至24月龄婴儿的婴儿营养品的方法，包括将一种或多种选自胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白酶抑制剂和弹性蛋白酶抑制剂的蛋白酶抑制剂与蛋白质、碳水化合物和植物油脂混合，其量使得所述婴儿营养品包含5到16能量％的蛋白质、35到60能量％的油脂和25到75能量％的碳水化合物。

10.权利要求1-8中任一项所述的组合物在制备用于治疗和/或预防儿童肥胖症的方法的制剂中的用途，所述用途包括对婴儿经口给予所述制剂。

11.权利要求1-8中任一项所述的组合物在制备用于对婴儿提供营养的组合物中的用途。

12.权利要求1-8中任一项所述的组合物的用途，其用于制备用于在患有儿童肥胖症的个体中治疗和/或预防糖尿病、心血管疾病、高血压、哮喘、睡眠呼吸暂停、矫形术病症和/或关节炎的方法中的营养组合物，所述用途包含向婴儿经口给予所述营养组合物。