CN104288315A

CN104288315A - 一种抗超级细菌ndm-1耐药基因细菌的中药组合物

Info

Publication number: CN104288315A
Application number: CN201410570758.9A
Authority: CN
Inventors: 郭进军
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-02-08
Filing date: 2013-02-05
Publication date: 2015-01-21
Also published as: CN103239549B; CN103239549A; CN103239517A

Abstract

本发明提供一种以益气活血、清热解毒的药物配伍的药物组合，对细菌标准株及耐药菌株(如KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性)引起的各种炎症包括呼吸道感染、盆腔感染、泌尿感染及急性腹膜炎有确切治疗效果。这种药物组合物的组成包括临床上合理剂量的黄芪、人参、西洋参、党参、太子参、白术、甘草、山药其中的一种或几种；丹参、赤芍、水蛭、川芎、红花、桃仁、三七、降香、延胡索、土鳖虫、益母草、当归、虎杖其中一种或几种与金银花、连翘、板蓝根、大青叶、蒲公英、黄芩、鱼腥草、败酱草、穿心莲、紫花地丁、苦地丁、甜地丁、金莲花、野菊花其中一种或几种的组合制剂。

Description

一种抗超级细菌NDM-1耐药基因细菌的中药组合物

本发明专利申请为分案申请，原案申请号为201310046748.0，申请日为2013年2月5日，发明名称为：一种抗超级细菌NDM-1耐药基因细菌的中药组合物。

技术领域

本发明涉及含有一种抗标准菌株(抗生素敏感菌株)、KPC阳性及NDM-1耐药基因细菌(俗称超级细菌)的中药组合物及其制备方法。属于药物制剂领域。

背景技术

自从抗生素发明以来，它给人们的生活带来了转机，人类的感染性疾病得到了有效的控制。但是，由于人类对抗生素的滥用，出现了越来越多的耐药菌株。例如金黄色葡萄球菌原是一种常见病菌，可引起皮肤、肺部、血液、关节感染。最开始，青霉素对之有效。而变异后，它对青霉素、甲氧西林(半合成青霉素)，不再敏感。这种难以杀灭的耐药菌叫MRSA。2010年8月，在印度发现了一种比MRSA更厉害的超级细菌，学名叫“新德里金属－β－内酰胺酶1”(下称NDM-1)，该基因能在细菌中广泛复制和转染，并能生成出一种β－内酰胺酶。这种酶可以水解临床应用最广泛的抗菌药物。它几乎是“刀枪不入”，所以被称为超级细菌。而2010年10月26日，中国疾控中心称，在宁夏某县级医院出生的两名新生儿和福建一名老年患者身上，也发现三株携带NDM-1耐药基因的细菌。如何应对抗NDM-1耐药基因的细菌是现代人类面临的一个严重的挑战。

中医药在中华民族数千年的健康繁衍中做出了重要的贡献，但公认的是对于严重的细菌感染，中药是乏力的。所以现在医院的医生，无论中西医，遇到严重的细菌感染，都想到用抗生素，没有一个大夫在确诊病人严重感染时，会给病人单开几副汤药或吃点中成药来治病的，即使使用这些措施，也只是口服或注射抗生素的配合，作为辅助治疗。

国内研究状况以往抗菌中药的筛选方向集中于清热解毒、清热燥湿等药物中，如大黄、黄柏、穿心莲等。国家药监局已经批准的具有清热解毒的中药很多，如蒲公英颗粒、复方蒲公英颗粒、黄芩片、双黄连口服液、蒲地蓝口服液、蓝芩口服液、抗炎退热片、众生丸、痰热清等等都有一定抗菌消炎作用。但一经西药抗生素的体内抗菌实验黄金标准来检验，这些中成药都显示无效或疗效微弱，原因是由于动物对一般细菌感染抵抗力较强，实验模型均系注射大量细菌引起暴发型感染，作用不强的药物在这种模型上不易显示疗效。所以查阅文献没有找到上述已上市中成药和抗生素做对照的动物体内抗菌实验。

发明内容

本发明的技术方案是这样实现的：这种药物组合物的组成或原料药组成包括临床上合理剂量的黄芪、人参、西洋参、党参、太子参、白术、甘草、山药其中的一种或几种益气药；丹参、赤芍、水蛭、川芎、红花、桃仁、三七、降香、延胡索、土鳖虫、益母草、当归、虎杖其中一种或几种活血药与金银花、连翘、板蓝根、大青叶、蒲公英、黄芩、鱼腥草、败酱草、穿心莲、紫花地丁、苦地丁、甜地丁、金莲花、野菊花其中一种或几种清热解毒药的组合制剂。

所述的药物组合物的组成的比例或原料药组成包括：黄芪、人参、西洋参、党参、太子参、白术、甘草、山药其中的一种或几种3-30重量份或克；丹参、赤芍、水蛭、川芎、红花、桃仁、三七、降香、延胡索、土鳖虫、益母草、当归、虎杖其中一种或几种1-20重量份或克；金银花、连翘、板蓝根、大青叶、蒲公英、黄芩、鱼腥草、败酱草、穿心莲、紫花地丁、苦地丁、苦地丁、金莲花、野菊花其中一种或几种3-40重量份或克。

所述的药物组合物的最佳组合比例或原料药组成包括：黄芪3-15重量份或克、丹参1-10重量份或克或赤芍1-10重量份或克、连翘5-20重量份或克、金银花0-20重量份或克、蒲公英0-20重量份或克。

所述的药物组合物的最佳组合比例或原料药组成包括：黄芪3-15重量份或克、丹参1-10重量份或克或赤芍1-10重量份或克、连翘5-20重量份或克、金银花0-20重量份或克、蒲公英0-20重量份或克、鱼腥草0-40重量份或克。

其中所述的连翘可以用连翘提取物代替；黄芪可以用黄芪提取物代替；丹参可以用丹参提取物代替；其他类同。

所述中药原料按照常规方法，加入或不加入常规辅料制成药剂学上可接受的剂型，包括但不限于汤剂、口服液、胶囊、片剂、颗粒剂、滴丸或散剂制剂。

本发明的中药组合物的制备方法，是由所述原料用不同工艺、不同提取方法得到的各药物提取物的混合物，或药物分成几个不同组分经分别提取后的提取物的混合物，或总提取物，制成的制剂。

本发明的所述的中药组合物，它是由所述重量配比的原料制成的任何一种药剂学上所说的剂型，包含汤剂，口服液、散剂、片剂、胶囊、分散片、微丸、滴丸、注射剂、颗粒剂。

本发明的所述的中药组合物的制备方法，它包括将所述中药原料直接切成小块或粉碎成粗粉，再用水或乙醇提取得到的各药物提取物，或继续浓缩成干浸膏，或者再与药剂学上可接受的载体混合。

本发明的所述的中药组合物的制备方法可以是，将中药材原料用水煎煮1-3次，每次10-30分钟，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，即得汤剂；或经灭菌，灌瓶，即得口服液；或者浓缩、干燥至干膏，加入淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者常规方法加入硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得片剂；或者加入常规赋形剂，装入胶囊，即得胶囊剂。

或者：将中药原料用乙醇浸泡8-12小时后，用20～25重量倍75～85％乙醇分1-3次回流，每次微沸后回流1～1.5小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；按常规方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂、注射剂或胶囊剂。

本发明的中药组合物的制备方法优选为，将丹参、连翘、黄芪、蒲公英、金银花用水煎煮3次，每次20分钟，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1/2体积，减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，即得汤剂；或经灭菌，灌瓶，即得口服液；或者浓缩至稠膏，继续减压干燥至干膏，加入淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得片剂；或者加入赋形剂，装入胶囊，即得胶囊剂。

或者将连翘、丹参、黄芪、蒲公英用乙醇浸泡12小时后，用25倍量75～85％乙醇2次回流，每次微沸后回流1～1.5小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；按上述方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂。

或者按配方颗粒常规提取方法分别提取连翘、丹参、黄芪、金银花和蒲公英。取其提取物混合。按上述方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂。

本发明的中药组合物的制备方法优选为，将赤芍、连翘、黄芪、蒲公英、金银花用水煎煮3次，每次20分钟，滤过，合并滤液，滤液浓缩至1/2体积，减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，即得汤剂；或经灭菌，灌瓶，即得口服液；或者浓缩至稠膏，继续减压干燥至干膏，加入淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得片剂；或者加入赋形剂，装入胶囊，即得胶囊剂。

或者将连翘、赤芍、黄芪、蒲公英用乙醇浸泡12小时后，用25倍量75～85％乙醇2次回流，每次微沸后回流1～1.5小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；按上述方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂。

或者按配方颗粒常规提取方法分别提取连翘、赤芍、黄芪、金银花和蒲公英。取其提取物混合。按上述方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、胶囊剂。

本发明的中药组合物是由上述重量配比的原料药或者还有药学上可以接受的载体制成的任何一种药剂学上所说的剂型，包含汤剂、散剂、片剂、胶囊、分散片、微丸、注射剂、口服液、颗粒剂。

本发明的药剂学上可以接受的载体包括但不限于：赋形剂，如淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙、硬脂酸镁、微粉硅胶等；崩解剂，如羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等；润滑剂，如硬脂酸镁等；包糖衣材料，如蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等；薄膜包衣材料，如胃溶型水、醇包衣材料等。

本发明药物组合物的应用包括可以用于治疗细菌性标准菌株和耐药菌株(如KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性)感染的口服制剂形式。本发明药物组合物的应用包括药物组合物在制备抗细菌性感染的药物中的应用，特别是药物组合物在制备抗超级细菌KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性的感染药物中的应用。

所述的药物组合物的应用还包括可以作为临床上治疗细菌性标准菌株和耐药菌(如KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性)感染的口服液、胶囊、片剂、颗粒剂、滴丸、散剂制剂形式。

本发明人一直关注细菌感染，一直想在抗细菌感染方面有所贡献。在多年运用现代科技研究中医药的基础上，发明了以益气活血、清热解毒的药物配伍的药物组合，这种组合制剂对细菌标准菌株和耐药菌株(如KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性)引起的各种炎症包括呼吸道感染、盆腔感染、泌尿感染及急性腹膜炎有确切治疗效果。

下述实验例用于进一步说明本发明。

下述试验例和实施例进一步证明但不限于本发明。

实验例1临床上呼吸道和下呼吸道感染病例

本发明(实施例14)治疗细菌性呼吸道感染51例

由于抗生素的广泛使用，耐药菌株不断出现，甚至出现了对所有抗生素都耐药的超级细菌，一些患者在感染后寻求中医药治疗，发明者委托数位医生朋友在各自的医院、

门诊和诊所中观察了使用本发明治疗细菌感染51例取得的较好的效果。

1对象及方法

1.1病例选择

2010年9月～2011年2月，在河北唐山和山西晋城，根据病史、临床症状、体征、影像学、实验室检查和病原学鉴定确诊为细菌性上呼吸道感染和下呼吸道感染，包括细菌性喉炎5例、鼻窦炎15例，支气管感染23，社区获得性肺炎8例，所有患者试验前未用过抗菌药物或使用过抗菌药物而病情无好转者。

1.2药物及用药方法

每天口服本发明中药三次，每次一包，每包6克。疗程4～14天，祛痰、平喘等对症治疗视情况而定。

1.3疗效观察

用药期间每天观察患者症状、体征；治疗前和疗程结束后第一天各进行1次胸部X线片检查；治疗前和疗程结束后第一天分别检查血常规，医生认为有必要者治疗中可随时检查，有异常者随访至正常；治疗前和疗程结束后第一天留取痰液作细菌培养。

1.4临床疗效评价标准

根据我国抗菌药物研究指导原则按痊愈、有效、无效3级评定。痊愈：症状、体征完全恢复，病原菌转阴。有效：症状、体征、血象、胸部影像及痰菌检查等5项中有三项以上恢复正常或明显好转。无效：治疗72小时后症状无改善或反而加重，改用其他抗生素治疗者。按痊愈和有效计算总有效率。

1.5安全性评价

对治疗过程中出现的不良反应及实验室检查异常与所用新型复方中药的因果关系判断：按肯定有关、很可能有关、可能有关、可能无关、肯定无关5级进行评定，前3项为药物不良反应。

2结果

2.1临床疗效分析

其中除两名社区获得性肺炎患者为有效，其余所有患者在疗程结束后都达到临床治愈标准

2.2痰菌清除率

疗程结束后痰阳性者2例，细菌清除率为96.1％。

2.3不良反应

实验对象未发生不良反应。

3结论和讨论

新型复方中药是治疗呼吸系统感染的有效药物，可以单独使用或与抗生素合用。

实验例2临床泌尿系感染病例

本发明(实施例10)治疗泌尿系统细菌感染性疾病28例

由于抗生素的广泛使用，耐药菌株不断出现，甚至出现了对所有抗生素都耐药的超级细菌，一些患者在感染后寻求中医药治疗，发明者委托数位医生朋友在各自的医院、门诊和诊所中观察了使用新型复方中药治疗泌尿系统细菌感染28例取得的较好的效果。

1资料与方法

1.1病例选择

①经临床诊断，受试者患有泌尿系统轻、中度急性细菌性感染且需进行全身抗菌药物治疗；

②年龄18～65岁；

③性别不限，女性育龄期患者入组前需做尿妊娠试验，阴性者方可入组；

④本试验开始前48h未用过其它抗菌药物或使用过抗菌药物临床无效且细菌培养阳性者；

⑤依从性较好者。

1.2给药方法均在门诊进行治疗与复查，均不用抗生素和激素。每天口服新型复方中药三次，每次一包，每包6克。疗程3～10天。

1.3疗效评定标准

根据症状，体征，尿常规及病原学检查4项或3项判断疗效。将疗效分为4级。①治愈：尿细菌培养阳性者，治疗后4项指标均恢复正常；尿细菌培养阴性者，治疗后其他3项指标恢复正常；②显效：治疗前尿细菌培养阳性者，治疗后尿细菌培养阴性，其他3项指标中，有1项未恢复正常，但有好转趋向；治疗前尿细菌培养阴性者，治疗后其他3项指标中有1项未恢复正常，但有明显好转；③好转：治疗前尿细菌培养阳性者，治疗后尿细菌培养仍为阳性；无论尿细菌培养是否阳性，治疗后症状体征消失，而尿常规中尿蛋白、尿红细胞或白细胞按原计数下降1/2左右者，其他2项均恢复正常；④无效：治疗前尿细菌培养阳性者，治疗后仍为阳性；无论尿菌是否阳性，治疗后病情无改善，反而加重，尿常规无改变或加重者。治愈，显效，好转合并计数总有效率。

2结果

2.1治疗结果统计见表1

表1治疗结果统计表(例)

2.2不良反应

治疗阶段未发现不良反应

3讨论和结论

新型复方中药是治疗泌尿系感染的有效药物，可以单独使用或与抗生素合用。

实验例3

临床盆腔炎感染病例

发明者委托医生朋友及自己还观察到6例女性诊断为盆腔炎患者，服用本发明中药实施例1每日三到四次，疗程六天，结果全部痊愈。

实验例4标准菌小鼠染菌实验

为进一步验证本发明的效果，发明人在河北联合大学药学院进行了如下实验：

新型复方中药对肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠的保护作用实验

1材料

1.1新型复方中药配方组成见后。

1.2菌株：肺炎克雷伯菌(编号：46117)；

1.3动物昆明种小鼠，体重18—22g，雌雄各半，由河北联合大学实验动物中心提供。

2方法

2.1细菌引起小鼠100％死亡的最小致死量(MLD)测定：将上述试验菌株，分别转种在MH培养液中，增菌l8h后，经腹腔感染小鼠，0.5ml/只，每组l0只，观察5d，测定出试验菌株引起小鼠100％死亡的MLD。

为了验证本方的组方合理性，发明者将处方拆散，如单独由黄芪组成的黄芪颗粒(20克生药提取,组方1)，单独由连翘组成的连翘颗粒(20克生药提取，组方2)，单独由丹参组成的丹参颗粒(20克生药提取，组方3)，由黄芪和连翘组成的黄芪连翘颗粒(30克生药提取，连翘黄芪生药重量比为2：1，组方4)，由连翘和丹参组成的连翘丹参颗粒(30克生药提取，连翘丹参生药重量比为2：1，组方5)，由黄芪和丹参组成的黄芪丹参颗粒(30克生药提取，黄芪丹参生药重量比为1：1，组方6)，由黄芪连翘丹参三味药组成的黄芪连翘丹参颗粒(30克生药提取，连翘黄芪丹参生药重量比为2：1：1，组方7)，简称芪翘丹颗粒，制备方法按照实施例7单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。每组10只小鼠灌药五分钟到二十分钟内均腹腔感染试验菌液(MLD)，此后连续分别灌胃各中药治疗组，给药单日剂量为折合成生药为20g/kg，空白组每只小鼠灌胃蒸馏水，容量均为0.4ml/20g，灌胃3次/d，连续3d，观察记录感染后l一3d的小鼠存活数。

观察到72小时以后，存活的小鼠已从感染状态中恢复过来，开始喝水，进食，攀爬。5天以后，存活的小鼠一切正常，与从未给过菌的正常小鼠没有分别。

实验数据显示三味药组成(组方7)具有明显的协同作用，这也是与临床使用效果相符合的。

发明者觉得芪翘丹这个复方效果还不够好，就尽可能再添加现代药理已经证实具有抑菌作用而中医功效为清热解毒的中药，希望达到协同的效果，分别试着加用了金银花、蒲公英、鱼腥草、苦地丁、黄芩、败酱草、穿心莲组成复方(其中组方7三味药与新加入的中药重量比为5:1)，制成颗粒，分别为组方7，组方8，组方9，组方10，组方11.组方12，组方13，组方14，制备方法按照实施例8单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。还是应用同一菌株，同样的MLD浓度和剂量，每组10只小鼠灌药五分钟到二十分钟内均腹腔感染试验菌液(MLD)，此后连续分别灌胃各中药治疗组，给药单日剂量为折合成生药为20g/kg，容量均为0.4ml/20g，灌胃3次/d，连续3d，观察记录感染后l一3d的小鼠存活数

结果芪翘丹和清热解毒中药复方数据如下：

表3

4结论

组方7、组方8、组方9、组方10动物存活率高，可以认为在芪翘丹颗粒上加用金银花、蒲公英或鱼腥草有微弱的协同作用，而加用苦地丁、黄芩、败酱草和穿心莲反而使药效降低，分析可能是因为后几种原料的提取物的毒副作用大所致，如穿心莲其味甚苦，可致胃肠不适，食欲减退；败酱草具有镇静、催眠作用；黄芩提取物有一定肝毒性；苦地丁有一定的镇静作用和抑制免疫作用。总之，从动物实验可知，在治疗急性细菌感染上，苦地丁、黄芩、败酱草和穿心莲不宜和芪翘丹合用。

实验例5

KPC阳性菌小鼠染菌实验

本发明对KPC阳性肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠的保护作用实验

1材料

1.1自研复方中药颗粒：每袋30g原生药提纯，具体配比和制备方法见后；娃哈哈纯净水市售。

1.2菌株：肺炎克雷伯菌(临床分离的KPC阳性菌)；

2方法

2.1细菌引起小鼠100％死亡的最小致死量(MLD)测定：将上述试验菌株，分别转种在MH培养液中，增菌l8h后，经腹腔感染小鼠，0.5ml/只，每组8只，观察5d，测定出试验菌株引起小鼠100％死亡的MLD。

2.2中药颗粒体内抗菌实验：将实验鼠随机分为6组＜纯净水空白对照组，芪翘丹(组方7由黄芪连翘丹参三种原料制成，连翘黄芪丹参生药重量比为2：1：1制备方法按照实施例7单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。)颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，蒲银芪翘丹(组方15由黄芪连翘丹参蒲公英金银花五种原料制成，连翘黄芪丹参金银花蒲公英生药重量比为2：1：1：1:1，制备方法按照实施例7单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。)颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，连翘丹参党参(组方16由连翘丹参党参三种原料制成，连翘丹参党参生药重量比为2：1：1，制备方法按照实施例7单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。)颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，芪翘芍(组方17由连翘黄芪赤芍三种原料制成，按实施例8)颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)蓝银丹芪(组方18由板蓝根金银花丹参黄芪四种原料制成，板蓝根金银花黄芪丹参生药重量比为1：1：1:1，制备方法按照实施例7单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。)颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，每组8只，均为雄性，每组均先腹腔注射感染试验菌液(MLD)0.5ml/只，五分钟后分别灌胃治疗组和纯净水组，其中各中药颗粒组，4次/d，连续1d；纯净水空白对照组灌胃容量均为0.4ml/20g，灌胃4次/d，连续1d，观察记录感染后l一3d的小鼠存活数。

3结果

3.1临床分离菌株毒力很低，测不出MLD，然后用5％活性酵母增强细菌毒力后测得MLD为1×10⁸CFU/ml×0.5ml；即按此浓度和剂量注射增强毒力后72小时内4只小鼠全部死亡。

表4：各治疗组结果对照：

观察到72小时以后，各组存活的小鼠已完全从感染状态中恢复过来，开始喝水，进食，攀爬。5天以后，存活的小鼠一切正常，与从未给染过菌的正常小鼠没有分别。

4结论

在芪翘丹三种主要配伍中，有益气的黄芪，活血的丹参，清热解毒的连翘，从中医功效可代替成分来看，理论上丹参可以用赤芍代替，黄芪用党参代替，连翘用板蓝根、金银花等代替，而动物实验显示可以用赤芍代替丹参，而党参不宜代替黄芪，板蓝根和金银花不如连翘。加入金银花和蒲公英，未见增加芪翘丹的作用，但也没有降低其功效。

另在KPC阳性肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠的保护作用发明者比较了芪翘丹组方7高中低三种剂量的药效对比，芪翘丹(组方7由黄芪连翘丹参三种原料制成，连翘黄芪丹参生药重量比为2：1：1制备方法按照实施例7单味配方颗粒的常规提取方法，然后按比例混合制备成颗粒剂。)颗粒组高剂量组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，芪翘丹(由黄芪连翘丹参三种原料制成)颗粒组中剂量组(给药单日剂量为折合成生药20g/kg)，芪翘丹(由黄芪连翘丹参三种原料制成)颗粒组低剂量组(给药单日剂量为折合成生药10g/kg)结果如下：

各治疗组结果对照：

表5

结论：芪翘丹对小鼠腹腔感染KPC阳性肺炎克雷伯菌中高剂量组略优于低剂量组，没有明显的剂量相关性。

实验例6

超级细菌NDM-1阳性菌小鼠染菌实验

复方中药颗粒(实施例9)对超级细菌NDM-1阳性肺炎克雷伯菌腹腔感染小鼠的保护作用实验

1材料

1.1自研复方中药颗粒：每袋30g原生药提纯；双黄连颗粒市售(哈药集团中药二厂，生产批号110821)：每袋15g原生药提纯；头孢克洛干混悬剂市售(石家庄四药有限公司，批号110998)：每袋含头孢克洛有效成分125mg；娃哈哈纯净水市售。

1.2菌株：肺炎克雷伯菌(ATCC号：BAA-2146)；

2方法

2.2中药颗粒体内抗菌实验：将实验鼠随机分为5组＜纯净水空白对照组，双黄连颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，头孢克洛组(给药单日剂量为100mg/kg)，自研复方中药颗粒组(给药单日剂量为折合成生药40g/kg)，自研复方中药颗粒+头孢组(给药单日剂量中药为折合成生药40g/kg，头孢克洛50mg/kg)＞，每组8只，均为雄性，每组均先腹腔注射感染试验菌液(MLD)0.5ml/只，五分钟后分别灌胃各治疗组和纯净水组，其中自研复方中药颗粒+头孢组，头孢在中药灌服半小时后灌服；其中自研复方中药颗粒+头孢组，中药4次/d，头孢1次/d，连续1d；头孢克洛组，2次/d，连续1d；自研复方中药颗粒组，双黄连颗粒组和纯净水空白对照组灌胃容量均为0.4ml/20g，灌胃4次/d，连续1d，观察记录感染后l一3d的小鼠存活数。

3结果

3.1冻干菌株复活后培养到最高浓度，测不出MLD，然后用易感动物大鼠腹腔注射菌液，两小时后抽血再次进行血培养，增强细菌毒力后测得为MLD，为两个麦氏单位即6×10⁸CFU/ml×0.5ml；即按此浓度和剂量注射增强毒力后24小时内8只小鼠全部死亡。观察发现小鼠在感染毒力增强后菌液1小时后趋于安静，拥挤抱团，发热、呼吸急促，有的6个小时后眼睛出现分泌物或流泪，在8到24小时内死亡，有的死亡前有剧烈惊厥抽搐现象，有的死亡后尿道口还发现有脓随尿液流出。

表6：各治疗组结果对照：

观察到48小时以后，各组存活的小鼠已完全从感染状态中恢复过来，开始喝水，进食，攀爬。5天以后，存活的小鼠一切正常，与从未给染过菌的正常小鼠没有分别。

这里特别提出的是发明者本人在观察记录这些实验现象时，连续数天一直每天10多小时与实验小鼠同处一室，由于防护不周，上呼吸道感染了肺炎克雷伯菌，表现为嗓子不适，咳浓痰、低热，眼睛分泌物增多，于是发明者本人连续三天服用上述自研的复方中药颗粒(实施例9)，每日四次，痊愈。

实验例7：新中药复方治疗上呼吸道感染60例临床观察

1资料与方法

1.1一般资料100例上呼吸道感染病人随机分为治疗组60例，其中男33例，女27例；年龄18～65岁，平均35±5岁，急性支气管炎15例，急性扁桃体炎10例，急性咽喉炎20例，普通感冒15例；对照组40例，男21例，女19例，年龄18～65岁，平均36±4岁，急性支气管炎8例，急性扁桃体炎6例，急性咽喉炎13例，普通感冒13例。试验组和对照组在性别、年龄、病情及病程方面差异无显著性

1.2治疗方法治疗组:新中药复方颗粒(实施例3)口服每次1袋(相当于原生药20克)，每日4次，3天为1个疗程。对照组:双黄连颗粒(市售哈药集团制药二厂，批号:110821)口服每次2袋，每日3次，3天为1个疗程。在观察期间，一律不得使用抗生素和激素。

1.3诊断标准参照2004年人民卫生出版社全国高等医药院校教材《内科学》和1998年人民军医出版社《临床疾病诊断依据和好转标准》有关规定制定

1.4疗效判定标准分4级:(1)痊愈:治疗3天以内体温恢复正常，症状基本或全部消失，异常理化指标恢复正常。(2)显效:治疗3天以内体温恢复正常，自觉症状和临床体征大部分消失，异常理化指标恢复正常。(3)有效:治疗3天体温有所下降，但有反复，自我症状部分消失，异常理化指标有所改善。(4)无效:治疗3天体温未降或升高，自我症状无改善。异常理化指标无好转，或治疗不足三天因故改用其他药物治疗者。

1.5安全性评价(1)安全性观察:①一般体检；②血常规；③肝功能(ALT)、肾功能(BUN、Cr)；④不良反应(2)安全性评比标准:①一级:安全、无任何不良反应；②二级:比较安全、如有不良反应，不需做任何处理可继续给药观察；③三级:有中等不良反应，做处理后可继续给药观察；④四级:有严重不良反应，因此而中止试验。

2结果

表7两种治疗后疗效比较(例)

组别	例数	治愈	显效	有效	无效	显效率(％)	总有效率(％)
								治疗组	60	25	32	3	0	95	100
对照组	40	10	3	8	19	32.5	52.5

从统计情况来看，治疗组明显优于对照组。

3讨论

从实验结果来看，新中药复方的显效率与总有效率均明确高于双黄连颗粒，有统计学意义。可能是因为新中药复方与双黄连对于风热感冒有相似的疗效，而本实验的病例，有绝大部分不仅仅是感冒，已经是感冒以后伴发的细菌感染，明确诊断为急性支气管炎、急性扁桃体炎与急性咽喉炎。而双黄连对于急性支气管炎、急性扁桃体炎与急性咽喉炎几乎无作用，而新中药复方对于急性支气管炎、急性扁桃体炎与急性咽喉炎有确切的作用。所以两种药物在治疗上呼吸道感染方面差距明显，显示了新中药复方的确有开发的价值。

本发明中药复方在治疗上呼吸道感染方面疗效确切，发明者为验证其药效，采用肺炎克雷伯菌标准菌株、KPC阳性的肺炎克雷伯菌株及NDM-1阳性的肺炎克雷伯菌株分别进行了小白鼠的急性细菌性致死腹膜炎与双黄连颗粒、头孢克洛颗粒作为对照，揭示肺炎克雷伯菌标准菌株中头孢克洛保护作用最好，几乎可以使实验动物100％存活，新中药复方颗粒可以使实验动物40％存活，双黄连颗粒不能使实验动物存活；采用KPC阳性的肺炎克雷伯菌株时，头孢克洛可以使10％实验动物存活，新中药复方颗粒可以使实验动物40％存活，双黄连颗粒不能使实验动物存活；采用NDM-1阳性的肺炎克雷伯菌株时，头孢克洛可以使10％实验动物存活，新中药复方颗粒可以使实验动物40％存活，双黄连颗粒不能使实验动物存活。

具体实施方式

下述实施例均能实现上述试验例的效果，特别说明的除外。

实施例1

取连翘30克、、丹参30克、黄芪30克、蒲公英30克用水煎煮3次，每次20分钟，过滤，合并滤液。减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，即得汤剂，或者钴60辐照灭菌后，灌瓶，即得口服液。

或者，所得到的提取浓缩物继续减压干燥至干膏，加入适量淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者加入适量的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣即得片剂。

或者，所得到的提取浓缩物，继续减压干燥至干膏，加入适量淀粉，粉碎，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得胶囊剂。

实施例2：

取连翘40克、丹参20克、黄芪30克用水煎煮3次，每次20分钟，过滤，合并滤液，滤液浓缩至1/5体积备用；减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，将15克木糖醇加入，搅匀，即得汤剂，或者钴60辐照灭菌后，灌瓶，即得口服液。

或者按实施例1所述的方法制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例3：

取连翘50克、蒲公英30克、丹参20克、黄芪25克用水煎煮2次，每次60分钟，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(75～80℃测)的清膏，冷至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75％乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，将15克木糖醇加入，再加入纯净水，每1毫升相当于生药材量1克，搅匀，即得汤剂，或者钴60辐照灭菌后，灌瓶，即得口服液。

或者减压浓缩成稠膏，低温干燥，粉碎，加淀粉适量，混匀，(或用乙醇制粒，干燥。)制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例4：

取连翘30克、蒲公英30克、丹参20克、黄芪30克用20～25倍量75％乙醇分两次浸泡超声，每次浸泡24小时，然后超声1小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；将15克木糖醇和提取物混合，加适量蒸馏水；减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，，搅匀，即得汤剂，或者钴60辐照灭菌后，灌瓶，即得口服液。

或者按实施例1所述的方法制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例5：

取连翘35克、丹参20克、黄芪30克用20～25倍量75％乙醇分两次浸泡超声，每次浸泡24小时，然后超声1小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；将15克木糖醇和提取物混合，加适量蒸馏水；减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，，搅匀，即得汤剂，或者钴60辐照灭菌后，灌瓶，即得口服液。

或者按实施例1所述的方法制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例6：

取连翘40克、蒲公英40克、丹参20克、黄芪30克用乙醇浸泡12小时后，用20～25倍量75～85％乙醇分两次回流，每次微沸后回流1小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；将15克木糖醇和提取物混合，加适量蒸馏水；减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，，搅匀，即得汤剂，或者钴60辐照灭菌后，灌瓶，即得口服液。

或者按实施例1所述的方法制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例7：

按配方颗粒常规提取方法分别提取连翘、丹参、黄芪、金银花和蒲公英。取其提取物分别相当于连翘原料40克、丹参20克、黄芪20克、金银花40克、蒲公英40克混合。加入适量淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者加入适量的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣即得片剂。

或者将各自提取物混合后，加入适量淀粉，粉碎，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得胶囊剂。

实施例8

按配方颗粒常规提取方法分别提取连翘、赤芍、黄芪。取其提取物分别相当于连翘原料40克、赤芍20克、黄芪20克混合。加入适量淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者加入适量的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣即得片剂。

实施例9

按配方颗粒常规提取方法分别提取连翘、赤芍、黄芪、金银花。取其提取物分别相当于连翘原料40克、赤芍20克、黄芪20克、金银花40克混合。加入适量淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者加入适量的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣即得片剂。

实施例10

按配方颗粒常规提取方法分别提取连翘、赤芍、黄芪、金银花、蒲公英。取其提取物分别相当于连翘原料40克、赤芍20克、黄芪20克、金银花40克、蒲公英40克混合。加入适量淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者加入适量的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣即得片剂。

实施例11

取连翘15克、、丹参8克、黄芪10克、蒲公英30克用水煎煮3次，每次20分钟，过滤，合并滤液。减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，所得到的提取浓缩物继续减压干燥至干膏，加入适量淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者加入适量的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣即得片剂。

实施例12

取连翘30克、、丹参30克、黄芪30克、蒲公英20克用水煎煮3次，每次20分钟，过滤，合并滤液。减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，所得到的提取浓缩物，继续减压干燥至干膏，加入适量淀粉，粉碎，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得胶囊剂。

实施例13

取连翘18克、蒲公英15克、丹参10克、黄芪13克用水煎煮2次，每次60分钟，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(75～80℃测)的清膏，冷至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75％乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩成稠膏，低温干燥，粉碎，加淀粉适量，混匀，或用乙醇制粒，干燥。制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例14

取原料药黄芪10克、或赤芍6克、连翘13克、金银花12克、蒲公英18克，用水煎煮2次，每次60分钟，分次滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(75～80℃测)的清膏，冷至40℃时，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达75％，充分搅拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75％乙醇适量，搅匀，静置12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩成稠膏，低温干燥，粉碎，加淀粉适量，混匀，或用乙醇制粒，干燥。制成颗粒剂、片剂或胶囊剂。

实施例15

取原料药黄芪15克、赤芍1克、连翘18克、金银花3克、蒲公英5克，用水煎煮3次，每次20分钟，过滤，合并滤液。减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，所得到的提取浓缩物，继续减压干燥至干膏，加入适量淀粉，粉碎，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得胶囊剂。

实施例16

取连翘30克、、丹参15克、黄芪30克、鱼腥草20克用水煎煮3次，每次20分钟，过滤，合并滤液。减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1克，所得到的提取浓缩物，继续减压干燥至干膏，加入适量淀粉，粉碎，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得胶囊剂。

本发明的几种主要原料黄芪、连翘、丹参、赤芍、金银花、蒲公英，制备配方颗粒的方法选择依据是：

1、丹参目前从丹参中分离得到的脂溶性成分和水溶性成分。其中脂溶性成分主要为丹参酮型的二萜类化合物,主要有丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、异丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、异隐丹参酮、异丹参酮Ⅱ、羟基丹参酮Ⅰ、左旋二氢丹参酮Ⅰ、丹参新酮、丹参醇I、丹参醇Ⅱ等。水溶性成分主要有丹参素(丹参酸甲)、丹参酸乙、丹参酸丙、原二茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B,丹酚酸C,丹酚酸D,丹酚酸E和迷迭香酸，咖啡酸等。易采用乙醇回流-水煎煮提取法,具体是将粉碎的丹参药材加6倍量90％乙醇,回流提取2次,每次1h。再将此醇提后的药渣加7倍量水煎煮两次，,每次1h。

2、黄芪主要含黄芪多糖、黄芪甲苷均具有很好的水溶性，易于用水提取。

3、连翘主要含连翘苷、连翘酯、齐墩果酸以及挥发油。连翘苷在水醇中溶解性较好，但是连翘酯、齐墩果酸以及挥发油不溶于水，为了尽量多的提取有效成分，采用乙醇提取。

4、金银花主要含有绿原酸、异绿原酸以及少量挥发油，可以用水提取。

5、赤芍主要含芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药花苷等单萜类化合物，可以用水或乙醇提取。

6、蒲公英主要含绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸和槲皮素等可以用水或乙醇提取。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims

1.一种治疗细菌性感染的药物组合物，其特征在于制备其有效成分的原料为：

黄芪3-15重量份、赤芍1-10重量份、连翘5-20重量份、金银花0-20重量份、蒲公英0-20重量份；

或黄芪3-30重量份、赤芍1-10重量份、连翘5-20重量份、金银花0-20重量份、蒲公英0-20重量份、鱼腥草0-40重量份。

2.根据权利要求1所述的治疗细菌性感染的药物组合物，其中制备其有效成分的原料为：

黄芪5重量份、赤芍5重量份、连翘10重量份；

黄芪4重量份、赤芍6重量份、连翘8重量份、金银花10重量份；

黄芪5重量份、赤芍3重量份、连翘10重量份、金银花10重量份、蒲公英10重量份；或黄芪6重量份、赤芍6重量份、连翘10重量份、蒲公英15重量份；

或黄芪8重量份、赤芍6重量份、连翘10重量份、鱼腥草10重量份。

3.根据权利要求1-2任一所述的治疗细菌性感染的药物组合物，其特征在于所述细菌性感染是抗生素敏感菌株及耐药菌株KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性感染。

4.根据权利要求1-2任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：将所述中药原料按照常规方法，加入或不加入常规辅料制成药剂学上可接受的剂型，包括但不限于汤剂、口服液、胶囊、片剂、颗粒剂、滴丸或散剂制剂。

5.根据权利要求1-2任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：将中药材原料用水煎煮1-3次，每次10-30分钟，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1重量份，即得汤剂；或经灭菌，灌瓶，即得口服液；或者浓缩、干燥至干膏，加入淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者常规方法加入硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得片剂；或者加入常规赋形剂，装入胶囊，即得胶囊剂。

6.根据权利要求1-2任一所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：将中药原料用乙醇浸泡8-12小时后，用20～25重量倍75～85％乙醇1-3次回流，每次微沸后回流1～1.5小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；按常规方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂、注射剂或胶囊剂。

7.根据权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：将中药材原料用水煎煮1-3次，每次10-30分钟，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至每1毫升相当于生药材量1重量份，即得汤剂；或经灭菌，灌瓶，即得口服液；或者浓缩、干燥至干膏，加入淀粉，粉碎，混匀，过80目筛，用95％乙醇湿法制粒，80℃以下干燥，整粒，制成颗粒剂；或者常规方法加入硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得片剂；或者加入常规赋形剂，装入胶囊，即得胶囊剂。

8.根据权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：将中药原料用乙醇浸泡8-12小时后，用20～25重量倍75～85％乙醇分两次回流，每次微沸后回流1～1.5小时，滤过，回收乙醇至无醇味，得提取物；按常规方法制成汤剂、口服液、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂、注射剂或胶囊剂。

9.根据权利要求1-2任一所述的药物组合物在制备抗细菌性感染的药物中的应用。

10.根据权利要求1-2任一所述的药物组合物在制备抗超级细菌KPC阳性或超级细菌NDM-1阳性的感染药物中的应用；或者在制备治疗上呼吸道感染药物中的应用；或者在制备治疗普通感冒、急性扁桃体炎、急性咽喉炎或急性支气管炎的药物中的应用。