CN104272113A

CN104272113A - 表征浆细胞相关疾病的方法

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Publication number: CN104272113A
Application number: CN201380023667.7A
Authority: CN
Inventors: S·哈丁; R·休斯; H·卡尔-史密斯
Original assignee: Binding Site Group Ltd
Current assignee: Binding Site Group Ltd
Priority date: 2012-03-06
Filing date: 2013-03-06
Publication date: 2015-01-07
Also published as: EP2823317A1; WO2013132245A1; JP2015511008A; GB201203938D0; US20150051839A1; JP6240099B2; EP2823317B1

Abstract

本发明提供一种表征患者的浆细胞相关疾病的方法，所述方法包括：(i)提供来自所述患者的至少一个样品；(ii)在所述样品中确定以下参数的两个或更多个：(a)κ:λ游离轻链(FLC)比例，(b)结合至一类重链的κ轻链:结合至相同类别的重链的λ轻链的比例(HLCκ:HLCλ比例)，(c)所述样品中FLC的总量，和(d)结合至所述重链类别的κ轻链加上结合至相同重链类别的λ轻链的总量(总HLC)；(iii)将来自(a)、(b)、(c)和/或(d)的每个比例或量与预定值进行比较，并且对每个量或比例指定评分；以及(iv)利用所述评分表征所述浆细胞相关疾病。本发明还提供配置为进行本发明的方法的装置。本发明还提供一种试剂盒，其包含以下的组合：(i)抗κFLC特异性抗体或其片段和抗λFLC特异性抗体或其片段，以及(ii)抗κ重链类别特异性抗体或其片段和抗λ重链类别特异性抗体或其片段，任选地混合在一起。

Description

表征浆细胞相关疾病的方法

技术领域

本发明涉及一种改良的表征患者的浆细胞疾病的方法以及进行所述方法的装置和试剂盒。

背景技术

申请人已研究游离轻链作为测定患者广泛的单克隆丙种球蛋白病的一种方式许多年。这类游离轻链在诊断中的用途在书“Serum Free Light ChainAnalysis,Sixth Edition(2008)A.R.Bradwell,ISBN 9780704427969”中详细综述。多克隆异常也是已知的，其中患者有减少或增加的多克隆抗体生成。

抗体包含重链和轻链。它们通常具有双重对称性，并且由两条相同的重链和两条相同的轻链组成，每条包含可变区和恒定区结构域。每个轻链/重链对的可变结构域组合形成抗原结合位点，从而两条链均促成抗体分子的抗原结合特异性。轻链有两种类型，κ和λ，并且任何给定抗体分子均具有任一种轻链，但不会具有两种。在人中产生的κ分子是λ分子的大约两倍，但是这在一些哺乳动物中不同。通常轻链附着至重链。但是，在个体的血清或尿中可检测到一些未附着的“游离轻链”(FLC)。游离轻链可以通过产生针对游离轻链表面的抗体来特异性地鉴定，游离轻链表面通常通过轻链与重链的结合而隐藏。在游离轻链中，这种表面被暴露，从而允许其免疫检测。可商购的用于检测κ或λ游离轻链的试剂盒包括例如The BindingSite Limited,Birmingham,United Kingdom制造的“Freelite^TM”。申请人以前已鉴定测量游离κ、游离λ和/或游离κ/游离λ比例，允许检测患者的单克隆丙种球蛋白病。例如，其已在完整免疫球蛋白多发性骨髓瘤(MM)、轻链MM、非分泌型MM、AL淀粉样变、轻链沉积病、郁结性MM、浆细胞瘤和MGUS(意义未明的单克隆丙种球蛋白病)的诊断中用作辅助。例如，FLC的检测还已用作其他B-细胞体液不调诊断的辅助，并且实际上一般用作单克隆丙种球蛋白病诊断的尿本周蛋白分析的替代。

通常，寻找λ或κ轻链之一的增加。例如，多发性骨髓瘤(MM)由恶性浆细胞的单克隆增殖所致，导致产生单一类型免疫球蛋白的单一类型细胞增加。这导致在个体内观察到游离轻链λ或κ的量增加。可以确定这种浓度增加，并且通常确定游离κ比游离λ的比例并与正常范围进行比较。这有助于单克隆疾病的诊断。此外，游离轻链测定还可以用于跟踪患者疾病的治疗。例如，可以进行AL淀粉样变治疗后患者的预后。

Katzmann et al(Clin.Chem.(2002)；48(9):1437-1944)讨论了单克隆丙种球蛋白病的诊断中游离κ和游离λ免疫球蛋白的血清参考间隔和诊断范围。通过免疫测定研究了21-90岁的个体，并且与通过免疫固定获得的结果进行比较以优化检测患有B-细胞体液不调的个体中单克隆游离轻链的免疫测定。

记录κ和λFLC量以及κ/λ比例，允许确定参考间隔用于检测B-细胞体液不调。

申请人以前还已鉴定FLC的测定可以用来预测个体的长期存活，甚至当个体是表面上健康的对象时也是如此(WO 2011/021041)。他们发现总FLC浓度与长期存活统计上显著相关。此外，这种关联看来与现有的长期存活预后标记如胆固醇、肌酸酐、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和C-反应蛋白的关联相似或更好。总FLC测量的测定在文件中公开。测量总FLC的测定可获得自The Binding Site,Birmingham,United Kingdom，商标为“Combylite”。

还已发现测量重链类别至轻链类型结合特异性(HLC)免疫球蛋白如IgAλ、IgAκ、IgGκ、IgGλ、IgMκ或IgMλ有助于表征单克隆丙种球蛋白病。重链类别-轻链类型特异性抗体以及它们的用途在WO 2006/079816中公开。这类抗体可商购自The Binding Site,Birmingham,United Kingdom，商标为“Hevylite”。

与多克隆异常相关的疾病一般是已知的，其中一种以上特异性抗体的生成增加或减少。例如，这可以通过抗体生成的普遍增加或者通过存在来自两种不同肿瘤来源的两种或更多种单克隆抗体来表征。慢性感染、自身免疫性疾病和许多肿瘤引起多克隆免疫球蛋白的增加。皮肤、肺和肠疾病更可能引起IgA浓度的增加，而全身性感染会增加所有免疫球蛋白，但特别是IgG。

血清蛋白电泳(SPE)包括在已将血清蛋白分离且已将凝胶染色之后扫描琼脂糖电泳凝胶。免疫固定电泳(IFE)检测血清蛋白的存在，利用抗体结合至电泳凝胶内的蛋白以产生可见的沉淀条带。这类方法有许多限制。从2001年开始，血清FLC测定已可用于鉴定血清中的游离λ或游离κ轻链(FLC)。在国际指导方针中推荐FLC、SPE和/或IFE测定的联合使用。每个测试的不同结果分开解释，虽然组合的结果一起可能或可能不互相支持，参见例如Dispenzieri A.et.al,Leukaemia 23-2(2009),215-24。

发明内容

最近申请人已开发使用Hevylite^TM抗体的HLC测定。这类HLC测定允许测量来自肿瘤的累及的单克隆蛋白(此外其可以通过SPE测量)与相同重链类别(但是结合至相反轻链)的未累及的多克隆水平之间的可定量比例。这个比例可以用于代替SPE和IFE来确定血清中单克隆蛋白的类型和浓度。

来自可获得的各种测定的结果的解释可能非常困难并需要一些技巧和专业人员。申请人已鉴定FLC和HLC结果，任选地连同总FLC和/或总HLC可以加权已产生单克隆丙种球蛋白病的指征的评分。这可以用来不仅显示异常的指征，而且还显示这种指征的置信度(degree of confidence)。还可以更容易地鉴定一个或多个结果中的分析错误。预期这允许获得单克隆丙种球蛋白病的区别和置信度以及以下之间的区别：

a)单克隆蛋白生成(为这种完整免疫球蛋白、游离轻链或两者的确实生成)。有或无相关的未累及的免疫球蛋白的多克隆抑制。

b)没有单克隆生成的多克隆生成的升高-高丙种球蛋白血症。

c)没有单克隆生成的多克隆生成的抑制-低丙种球蛋白血症。

d)没有单克隆生成的正常多克隆生成。

e)结合至一类重链的κ轻链或λ轻链的生成和/或没有单克隆蛋白生成的κ轻链或λ轻链的生成。

本发明提供一种表征患者的浆细胞相关疾病的方法，所述方法包括：

(i)提供来自所述患者的至少一个样品；

(ii)在所述样品中确定以下参数的两个或更多个：

(a)κ:λ游离轻链(FLC)比例，

(b)结合至一类重链的κ轻链:结合至相同类别的重链的λ轻链的比例(HLCκ:HLCλ比例)，

(c)所述样品中FLC的总量，和

(d)结合至所述重链类别的κ轻链加上结合至相同重链类别的λ轻链的总量(总HLC)；

(iii)将来自(a)、(b)、(c)和/或(d)的每个比例或量与预定值进行比较，并且对每个量或比例指定评分；以及

(iv)利用所述评分来表征所述浆细胞相关疾病。

例如，异常FLCκ:λ比例或HLCκ:HLCλ比例的指征、升高的克隆浓度以及未累及的免疫球蛋白的抑制给出高水平的存在单克隆浆细胞相关疾病的确定性。

通常，确定κ:λFLC比例和HLCκ:HLCλ比例。

确定样品中的总FLC和总HLC还可以用于提供评分。

具有正常范围内的FLCκ:λ比例的升高的κFLC或λFLC水平强调潜在的异常并有必要进一步研究。相似地，具有正常范围内的HLCκ:HLCλ的升高的HLCκ或HLCλ也强调潜在的异常并有必要进一步研究。

样品可以是尿样品，但优选血清、血液或血浆。

评分系统允许表征浆细胞相关疾病并有助于简化表征，允许较不熟练的从业人员进行测定并允许确定结果的置信度。

浆细胞相关疾病可以为单克隆丙种球蛋白病。其可以为B-细胞相关疾病如骨髓瘤、(如完整免疫球蛋白骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤)、MGUS、AL淀粉样变、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、霍奇金淋巴瘤、滤泡中心细胞性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、前B细胞白血病或急性淋巴细胞白血病。

浆细胞相关疾病还可以为多克隆相关疾病如高丙种球蛋白血症或低丙种球蛋白血症。

所述方法可以通过计算机实施，例如可以实施步骤(iii)。评分可以在输出如计算机显示器上显示。可选地，评分可以用来产生疾病类型的可能诊断的输出。

一个或多个样品可以基本上同时采自患者。可以在单个样品或不同样品上测定量。

评分可以用来指示浆细胞疾病的类型和/或包括表征浆细胞疾病的置信度(confidence level)。

例如，高或中FLCκ:λ比例会指示κ单克隆丙种球蛋白病。但是，当其本身鉴定较低的异常κ:λFLC比例时，指示单克隆生成的较低置信度(confidence)。如果重链类别之一的HLC比例(如IgAκ:IgAλ)也显示异常比例，对于比例和轻链类型，这证实发现单克隆生成。

特定类别的总FLC和/或总HLC的总和可以用来显示异常水平的免疫球蛋白生成或者例如一种或多种类别免疫球蛋白如IgM或IgA的抑制。

通常，确定FLCκ:λ比例并与FLCκ:λ比例的正常范围进行比较。正常范围可以是表面上健康的个体的κ:λ的典型范围，根据评价的群体，其通常为0.26-1.65。

如果FLCκ:λ比例高于或低于该普通范围，其可以给出评分。例如，评分可以为高、中或低；1、2、3或4；或者+、++、+++或++++用于克隆形成能力的指征。例如，“正常比例”还可以评分为零。预定范围以上如1.65以上的比例指示κ单克隆形成能力，所以κ值会给出评分，例如高、中或低；或者4为非常高、3为较高、2为较低、1为刚好在正常范围以上。当比例低于正常范围(例如低于0.26)时，指示λ单克隆形成能力并也可以以相似的方式评分。

例如，以下比例可以用来评分结果。

表1

还可以使用可选评分系统如1-4或者+至++++。

如果FLCκ:λ比例是正常的，则可以确定并评分FLC(κ+λ)总量以显示增加或减少的多克隆FLC生成。在血清中正常的总FLC通常为27mg/ml。同样可以使用以下评分：高、中、低；-4至+4(其中+4表示非常高的总FLC，而-4非常低生成)或者----、---、--、-、0(正常)、+、++、+++、++++。例如：

可以将样品中λFLC的量与样品中κFLC的量进行比较(或者HLCκ的量与HLCλ进行比较)以产生克隆形成能力评分或者生成或抑制FLC或HLC的指征。通常对于正常FLC或HLC比例指示生成或抑制水平。

表2对于异常FLC比例

正常比例(例如0.26-1.65之间)还可以细分。

例如FLCκ+FLCλ>45.7mg/L–FLC生成

FLCκ+FLCλ<9.01mg/L–FLC抑制

表3

可选地，总FLC生成可以分为3段：高生成、正常或抑制生成。

还可以将结合至特定重链类别的κ轻链类型:结合至相同重链类别的λ轻链的比例(HLCκ:λ)与该重链类别的正常范围进行比较。重链类别可以为IgA、IgM、IgD或IgE。更典型地，IgG、IgA或IgM这些更可能与这类疾病相关。可以测定一种或多种类别。因此比例可以为IgA:IgAλ、IgGκ:IgGλ、IgMκ:IgMλ、IgDκ:IgDλ和/或IgEκ:IgEλ。

典型的正常比例为：

IgGκ:IgGλ 0.98-2.75

IgAκ:IgAλ 0.80-2.04

IgMκ:IgMλ 0.96-2.30

可以以与FLC相似的方式评分这些HLC比例。

当HLCκ:HLCλ比例在正常范围内时，可以确定并评分该类别的总HLC(HLCκ+HLCλ)以给出重链类别生成升高或抑制的指征。即，例如，然后确定IgGκ:IgGλ(相同类别)。

当FLCκ:FLCλ和HLCκ:HLCλ在正常范围内时，升高的FLCκ或FLCλ和/或HLCκ或HLCλ水平可以指示疾病并强调需要进一步的研究。正常范围之上的水平可以定义为升高。

典型的正常范围为：

FLCκ3.3-19.4

FLCλ5.71-26.3

IgGκ4.03-9.78

IgGλ1.97-5.71

IgAκ0.48-2.82

IgAλ0.36-1.98

IgMκ0.29-1.82

IgMλ0.17-0.94

代替地或另外地，HLCκ:HLCλ比例可以是亚类特异性的。这给出更特异性的数据。例如，IgG具有4个亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。IgA具有2个亚类(IgA1和IgA2)。因此HLC比例可以是例如IgG2κ:IgG2λ比例。

典型的评分系统的实例为：

表4

可以相似地评分多克隆形成能力。

表5

同样地，对于正常比例可以给出评分“0”。抑制和生成也可以表示为3段：高生成、正常和抑制。

对于IgG，还可以以与FLC比例相似的方式评分克隆形成能力，并且对于其他重链确实是相似的。

表6

例如，具有一些多克隆M抑制的中等IgAλ以及对IgGκ的分析误差(低权重和分歧)可以表示为IgGκ低、IgAλ中、IgM总中等抑制。

可以将FLC结果(κ:λFLC和/或总FLC)与HLC结果(HLCκ:HLCλ和/或总HLC)进行比较以鉴定误差或一致的地方。

具有高λFLC的IgAλ、多克隆抑制的IgM和对IgG的分析误差表示为：

κ:λFLCλ高、IgAλ高、IgGλ低、IgM总低抑制。

上述评分的可选方式可以使用如下：

例如，FLC(β)结果显示克隆形成能力κ[A]或λ[B]或多克隆异常[C]。[A]或[B]可以在1至4(+、++、+++或++++)的水平上评分。[C]可以为抑制或升高，因此可以在-4至+4(---、--、-、0、+、++、+++或++++)的度量上评分。这表示FLC结果是下列之一：

例如强FLCλ结果FLC度量(β)为：

G(γ)、A(α)或M(μ)的HLC结果可以以相同方式示出，即它们显示克隆形成能力(κ[A]或λ[B]或多克隆异常[C])。克隆形成能力[A]或[B]再次可以在1至4(+、++、+++或++++)的水平上评分，并且对于[C]，抑制或升高可以出现，因此在-4至+4(----,---,--,-,0,+,++,+++,++++)的度量上评分。

例如，具有一些多克隆M抑制的中等IgAλ和对IgGκ的分析误差(低权重和分歧)可以表示如下：

然后可以将FLC结果(β)与HLC G(γ)、A(α)和M(μ)结果组合。具有高λFLC水平的IgAλ、多克隆抑制的IgM结果和对IgG的分析误差的实例表示如下：

克隆相同性通过FLC(β)结果与HLC(γ、α或μ)结果之间的一致来显示，在这种情况下β&α。Β和α显示这是λ样品，γ的分歧显示γ结果为误差，并且μ结果提供额外的信息，有多克隆抑制。

来自算法的第二成果是结果的置信度，这可以计算自一致的项：

样品中FLC和HLC的测量可以利用本领域公知的方法来确定。

Κ或λFLC特异性的抗体或抗体片段是公知的，并且可以商品名Freelite^TM商购。

重链类别-轻链类型-特异性抗体(例如抗IgAκ抗体)也是本领域公知的(参见WO 2006/079816)，并且可以商品名Hevylite^TM商购自The Binding Site,Birmingham,UK。或者，可以例如通过夹心测定，如WO 2006/079816所述利用抗轻链类型抗体和抗重链类别抗体确定结合至重链的轻链。

通常，通过免疫测定如ELISA测定或利用荧光标记的珠如Luminix^TM珠确定FLC或HLC如κ:λFLC比例、总FLC、HLCκ:HLCλ和/或总HLC。

例如，ELISA使用抗体检测特异性抗原。可以将用于测定的一种或多种抗体用能够将底物转化为可检测的分析物的酶标记。这类酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和本领域已知的其他酶。或者，可以使用其他可检测的标签或标记代替酶，或者与酶一起使用。这些包括放射性同位素，本领域已知的广泛的有色和荧光标记，包括荧光素、Alexa fluor、OregonGreen、BODIPY、罗丹明红、Cascade Blue、Marina Blue、Pacific Blue、CascadeYellow、金；以及缀合物如生物素(例如，可获得自Invitrogen Ltd,UnitedKingdom)。还可以使用染料溶胶、金属溶胶、化学发光标记或彩色乳胶。这些标记中的一种或多种可以用于本文所述的各种发明的ELISA测定，或者可选地用于本文所述的其他测定、标记抗体或试剂盒。

ELISA类型测定的构建本身是本领域公知的。例如，将FLC特异性的“结合抗体”固定在基质上。可以通过本领域公知的方法将“结合抗体”固定在基质上。样品中的FLC通过结合FLC或HLC的“结合抗体”结合至基质。

可以将未结合的免疫球蛋白洗掉。

在ELISA测定中，可以利用标记的“检测抗体”确定结合的免疫球蛋白的存在，所述标记的“检测抗体”对所关注的FLC的与结合抗体不同的部分特异性的。

流式细胞术可以用来检测所关注的FLC或HLC的结合。这个技术是诸如细胞分选的领域公知的。但是，其还可以用来检测标记的颗粒如珠以及测量它们的大小。许多教科书描述了流式细胞术，例如Practical FlowCytometry,3^rd Ed.(1994),H.Shapiro,Alan R.Liss,New York和FlowCytometry,First Principles(2^nd Ed.)2001,A.L.Given,Wiley Liss。

将结合抗体之一如FLC特异性的抗体结合至珠，如聚苯乙烯或乳胶珠。将珠与样品和第二检测抗体混合。检测抗体优选用可检测的标记来标记，其结合样品中待检测的FLC。当待测定的FLC存在时，这导致标记的珠。

本文所述的其他分析物特异性的其他抗体也可以用来允许检测那些分析物。

然后通过流式细胞术检测标记的珠。不同的标记如不同的荧光标记可以用于例如抗游离λ和抗游离κ抗体。本文所述的其他分析物特异性的其他抗体也可以用于本文所述的这个或其他测定以允许检测那些分析物。这允许同时确定结合的每种类型FLC的量，或者确定其他分析物的存在。

可选地或额外地，不同大小的珠可以用于不同抗体，例如不同标记特异性抗体。流式细胞术可以区分不同大小的珠，因此可以迅速确定样品中每种FLC或其他分析物的量。

例如，可选方法使用结合至荧光标记的珠如可商购的Luminex^TM珠的抗体。不同珠与不同抗体使用。将不同的珠用不同的荧光团混合物标记，因此允许通过荧光波长确定不同的分析物。Luminex珠可获得自LuminexCorporation,Austin,Texas,United States of America。

优选地，所用的测定为散射浊度(nephelometric)法或浊度法。

还提供配置为进行本发明的方法的装置。它们可以包含配置为进行所述方法的计算机处理器和内存。它们可以包含输出如显示屏以显示评分和/或结果。

所述装置可以包含用于测量κ:λFLC比例、HLCκ:HLCλ比例以及任选地测量总FLC和/或总HLC的检测器。

所述装置可以为流式细胞仪、散射浊度计或浊度计。

试剂盒，其包含

(i)抗κFLC特异性抗体和抗λFLC特异性抗体，以及

(ii)抗κ重链类别特异性抗体或其片段和抗λ重链类别特异性抗体或其片段。

所述试剂盒可以额外地包含抗体或片段以测量样品中的总FLC和/或HLC。

例如，可以将这类检测抗体或片段在多重试剂盒中混合在一起，对于每种不同的检测抗体使用不同的染料或其他标记。例如，标记可以是不同的Luminex^TM珠。

应用可以仅通过实例来描述。

可以利用本领域公知的技术进行κ:λFLC比例、总FLC、HLCκ:HLCλ比例和/或总HLC。

通常，根据制造商的说明书使用Freelite^TM试剂盒、Hevylite^TM试剂盒和Combylite^TM试剂盒(可获得自The Binding Site Ltd,Birmingham,UK)以测量来自患者的血清样品。

例如，结果如上文表1-6所示并如上文所述进行评分。

下文表7示出基于申请人以前发现的患者类型，可以预期的一些结果的解释。

表7

非克隆表明进一步的研究可能是需要的。

本发明的算法的用途的证实

方法：分析Royal Wolverhampton医院的1515名患者。利用SEBIAHydrasys 2进行SPE和IFE，通过散射浊度法进行FLC和HLC测定，并且利用如本文所述的算法分析结果，所述算法包括：

(1)FLC和HLC比例；

(2)同种型匹配抑制的水平；

(3)全身免疫球蛋白抑制的水平；以及

(4)FLC和HLC生成。

将来自所述算法以及历史SPE和IFE凝胶的结果与患者的临床诊断进行比较。

结果：在检查中，156/1515(10％)样品具有异常的SPE；101/156为IFE阳性。IFE阳性患者中的52/101患有证实的血液病症，包括：

14个多发性骨髓瘤(MM)，

3个瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)，

1个IgM冷球蛋白血症，

3个慢性淋巴细胞白血病(CLL)，

3个淋巴瘤，

1个浆细胞瘤，

1个干燥综合征，以及

26个意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)。

在检查中，通过FLC/HLC算法将175/1515(11％)个样品鉴定为具有FLC和/或HLC异常。FLC/HLC算法鉴定78名患者患有血液病症，包括通过SPE/IFE鉴定的全部52名患者，以及SPE/IFE未检测到的另外26名患者，包括：

1个淀粉样变，

1个无症状MM，

6个CLL，

1个小淋巴细胞白血病，

2个淋巴瘤，以及

15个轻链MGUS患者。

结论：基于FLC和HLC测定的算法提供一种更灵敏的检测血液病症的方法，并且鉴定了SPE和sIFE的筛查组漏掉的26名患者。

Claims

1.一种表征患者的浆细胞相关疾病的方法，所述方法包括：

(i)提供来自所述患者的至少一个样品；

(ii)在所述样品中确定以下参数的两个或更多个：

(a)κ:λ游离轻链(FLC)比例，

(c)所述样品中FLC的总量，和

(iv)利用所述评分来表征所述浆细胞相关疾病。

2.权利要求1的方法，其中确定FLCκ:λ比例和HLCκ:λ比例。

3.一种计算机实施的方法，其包括权利要求1或2的方法。

4.权利要求1或2的方法，其中步骤(iii)通过计算机来实施。

5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述评分指示浆细胞疾病的类型和/或指示表征浆细胞疾病的置信度。

6.前述权利要求中任一项的方法，其中确定κ:λ游离轻链比例并与FLCκ:λ的正常范围进行比较。

7.权利要求6的方法，其中如果所述FLCκ:λ比例在正常范围之上或之下，则对所述FLCκ:λ给出评分。

8.权利要求6或7的方法，其中如果所述FLCκ:λ在正常范围内，则确定所述样品中FLC的总量并对所述量给出评分。

9.权利要求6-8的方法，其中如果所述FLCκ:λ比例在正常范围内，则正常范围之上的FLCκ或FLCλ水平表明需要进一步的研究。

10.前述权利要求中任一项的方法，其中确定HLCκ:HLCλ比例并与正常范围该重链类别的HLCκ:HLCλ进行比较。

11.权利要求10的方法，其中如果所述HLCκ:HLCλ比例在正常范围之上或之下，则对所述HLCκ:HLCλ比例给出评分。

12.权利要求10或11的方法，其中如果所述HLCκ:HLCλ比例在正常范围内，则确定总HLCκ+HLCλ量并给出评分。

13.权利要求10-12的方法，其中如果所述HLCκ:HLCλ比例在正常范围内，则正常范围之上的HLCκ或HLCλ水平表明需要进一步的研究。

14.前述权利要求中任一项的方法，其中所述HLCκ:HLCλ比例和/或总HLC是亚类特异性的。

15.前述权利要求中任一项的方法，其中将所述样品中λFLC的量与κFLC的量进行比较以产生克隆形成能力评分或者FLC生成或抑制的指征。

16.前述权利要求中任一项的方法，其中将所述样品中HLCλ的量与HLCκ的量进行比较以产生克隆形成能力评分或者FLC生成或抑制的指征。

17.前述权利要求中任一项的方法，其中通过免疫吸附测定确定κ:λFLC比例、HLCκ:HLCλ比例、总FLC和/或总HLC。

18.权利要求17的方法，其包括使用抗κFLC特异性抗体或其特异性片段、抗λFLC特异性抗体或其特异性片段、抗κ重链类别特异性抗体或其特异性片段和/或抗λ重链类别特异性抗体或其特异性片段。

19.权利要求17或18的方法，其中所述测定为夹心测定如ELISA测定，或者利用散射浊度计、浊度计、流式细胞仪和/或Luminex^TM珠来确定抗体对FLC或HLC的结合。

20.装置，其包含配置为进行前述权利要求中任一项的方法的计算机处理器和内存。

21.权利要求20的装置，其包含用于测量κ:λFLC比例、HLCκ:HLCλ比例以及任选地测量总FLC和/或总HLC的检测器。

22.一种试剂盒，其包含以下的组合：(i)抗κFLC特异性抗体或其片段和抗λFLC特异性抗体或其片段，以及(ii)抗κ重链类别特异性抗体或其片段和抗λ重链类别特异性抗体或其片段，任选地混合在一起。

23.权利要求22的试剂盒，其额外地包含用于确定样品中的总FLC的其他抗体或其片段。