CN104237511A - 一种检测瘦肉精的检测试剂 - Google Patents

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苏冬梅
张述智
李春雨
朱绍辉
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Abstract

本发明的目的在于提供一种检测瘦肉精的检测试剂，能够单独或同时检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺。本发明的检测试剂包含有包被在载体上的，用于检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺中的任一种或几种的特异性抗体和抗原；用于显色反应的试剂，所述的显色反应的试剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。本发明所制备的试剂特异性强，降低了假阳性出现的几率；制备成本低廉，操作极为简便，缩短了工时；易于推广，适于普查；与协同凝集试验所用试剂相比，更适于抗原或抗体的检测，速度快，灵敏度高，可以检测到0.1ppb的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺，其结果易于观察，且可以长期保存。

Description

一种检测瘦肉精的检测试剂
技术领域
本发明属于β-受体激动剂检测领域，具体涉及一种检测瘦肉精的检测试剂。
背景技术
瘦肉精是一类动物用药的统称，有数种药物被称为瘦肉精，例如盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺，上述三种药物是一类选择性β2-肾上腺素受体激动剂，具有调节动物神经兴奋及其体内营养素重分配的功能，可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长。瘦肉精化学性质稳定，加热至172℃时才分解，一般方法不能将其破坏，肠道吸收快，作用时间持久，药理作用强。动物食用了瘦肉精后，初期会采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤、呼吸加剧、体温上升，长期食用直接损伤肉畜的机体。人食用了饲喂含β-受体激动剂作为饲料添加剂的产品后，就会出现中毒症状，通常会出现肌肉震颤、心悸、精神紧张、头疼、肌肉疼痛、眩晕、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，甚至死亡，给患者的精神、健康及正常生活造成了严重危害。因此，世界上许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精来提高动物的瘦肉率，我国也于1997年发文禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用，商务部自2009年12月9日起，禁止进出口莱克多巴胺和盐酸莱克多巴胺。2001年12月27日、2002年2月9日、4月9日，农业部分别下发文件禁止食品动物禁止使用β激动剂类药物作为饲料添加剂(农业部176号、193号公告、1519号条例)，并且通过相关政策手段对相关领域进行监督管理，而且，对于畜禽产品要进行瘦肉精含量的检测。
目前对盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺等瘦肉精的检测方法主要有沉淀反应、凝集反应、补体参与抗原抗体反应、中和反应、标记免疫反应等，与之相对应有酶免疫检测试剂盒，也有单独检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺的检测试纸条和同时检测以上三种瘦肉精的胶体金法，但这些检测方法主要依懒化学仪器分析，要么要求有复杂的仪器设备和繁琐的操作过程，不适合现场监控和大量样本的筛查，要么就是检测时间较长、对操作人员专业要求高，或是检测成本高、假阳性现象比较多，或是灵敏度不够高。由此衍生的检测试剂也同样存在制备成本高、不适于推广应用、结果判断不直观等特点，所以，目前急需一种操作简便、经济、准确、灵敏、适合临床推广的检测方法和试剂来检测抗原和抗体。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测瘦肉精的检测试剂，能够单独或同时检测抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克巴多胺抗体。本发明制备的试剂具有特异性强、敏感性高、操作简便的优点，从而弥补现有技术的不足。
本发明的检测试剂包含有包被在载体上的，用于检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺中的任一种或几种的特异性抗体；用于显色反应的试剂，所述的显色反应的试剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。
作为实施例的优选，所述的特异性抗体为盐酸克伦特罗、沙丁胺醇或莱克多巴胺免疫家兔后制备的效价达到1:800或以上的兔子血清；
作为实施例的优选，上述的载体为NC膜或ELISA板。
作为实施例的一种优选，所述的金黄色葡萄球菌用石碳酸复红染料进行了染色；
所述金黄色葡萄球菌的致敏是将染色后的金黄色葡萄球菌用抗盐酸克伦特罗、沙丁胺醇或莱克多巴胺抗体中的任一种或几种致敏的。
上述的试剂，还包含有用作阳性对照的阳性血清和/或作为阴性对照的阴性血清；
作为实施例的优选，所述的阳性血清，是将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺免疫家兔后制备的效价达到1:800或以上的兔子血清；
所述的瘦肉精阴性血清，是抗盐酸克伦特罗、抗沙丁胺醇和抗莱克多巴胺抗体的效价低于1:1的动物血清。
上述的测试剂还包含有包被在载体上的、用于检测抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克巴多胺抗体中的任一种或几种的瘦肉精抗原；
本发明所制备的试剂特异性强，降低了假阳性出现的几率；制备成本低廉，操作极为简便，缩短了工时；易于推广，适于普查；与协同凝集试验所用试剂相比，更适于抗原或抗体的检测，速度快，灵敏度高，可以检测到0.1ppb的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺，其结果易于观察，且可以长期保存，这对于快速判断被检样本中是否含有特异性抗原或抗体具有重要诊断价值。
附图说明
图1：本发明检测抗原原理图
图2：本发明检测抗体原理图
图3：本发明线性包被示意图，其中T1、T2及“……”表示包被的特异性抗体(或抗原)PC表示阳性对照，NC表示阴性对照。图中特异性抗体(或抗原)的包被是线性包被。
图4：本发明点状包被示意图，其中T1、T2及“……”表示包被的特异性抗体(或抗原)PC表示阳性对照，NC表示阴性对照。图中特异性抗体(或抗原)的包被是点状包被。
具体实施方式
金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)是存在于细菌细胞壁的一种表面蛋白。SPA是一种单链多肽，与胞壁肽聚糖呈共价结合。目前，SPA应用最多的是用于协同凝集试验，但协同凝集试验在检测抗原或抗体存在诸多的不足，如没有固定的结合点，结果不易于观察且不能长期保存，适于检测的抗原大多为颗粒性抗原，检测可溶性抗原时易产生假阳性，所以，也不能作为抗原或抗体检测的最为理想的方法，因此，该方法所用试剂也不是最理想的试剂。但申请人发现将SPA与抗体结合作为显色试剂，能够明显提高检测灵敏度，从而促成了本发明。
本发明分别用盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺单独或同时免疫健康家兔，从而获得抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体、抗莱克多巴胺抗体、抗瘦肉精阳性血清；采集健康家兔血清测定效价制备阴性血清；用染料对SPA菌液进行染色获得染色的SPA菌液，由抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克多巴胺抗体致敏的染色的SPA菌液。
本发明中所用的组分的制备方法如下：
1)制备抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克多巴胺抗体、抗瘦肉精阳性血清和阴性血清，备用；
所述抗盐酸克伦特罗抗体的制备步骤为：将盐酸克伦特罗与弗氏完全佐剂按照10:1～15:1的比例混合，置37℃摇床振摇3天，之后放室温或4℃静止1天后以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗盐酸克伦特罗抗体。
所述抗沙丁胺醇抗体的制备步骤为：将沙丁胺醇与佐剂按照10:1～15:1的比例混合，置37℃摇床振摇3天，之后放室温或4℃静止1天后以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗沙丁胺醇抗体。
所述抗莱克多巴胺抗体的制备步骤为：将莱克多巴胺与佐剂按照10:1～15:1的比例混合，置37℃摇床振摇3天，之后放室温或4℃静止1天后以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗莱克多巴胺抗体。
2)将抗盐酸克伦特罗抗体(或抗原)、抗沙丁胺醇抗体(或抗原)和抗莱克多巴胺抗体(或抗原)、阳性血清(或抗原)、阴性血清(检测抗体时为PBS缓冲液)和空白对照包被在NC膜(或ELISA板)上，进行封闭备用，其中阳性血清(或抗原)即为阳性对照，阴性血清(检测抗体时为PBS缓冲液)即为阴性对照；
所述抗瘦肉精阳性血清的制备步骤为：将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺分别与佐剂按照10:1～15:1的比例混合，置37℃摇床振摇3天，之后放室温或4℃静止1天后同时以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗盐酸克伦特罗、抗沙丁胺醇和抗莱克多巴胺抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗瘦肉精阳性血清。
所述抗瘦肉精阴性血清的制备步骤为：采集健康动物血清测定抗盐酸克伦特罗、抗沙丁胺醇和抗莱克多巴胺抗体的效价，效价低于1:1时，收集血清即为抗瘦肉精阴性血清。
所述制备抗体和阳性血清过程中对免疫动物进行的静脉注射和皮下注射，其注射步骤是：第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为特异性抗体(或阳性血清)。
3)将SPA进行染色，并用抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克多巴胺抗体致敏，即得致敏的SPA混合液；
所述致敏SPA混合液的制备步骤如下：
1、SPA的染色:于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加染液，摇晃混匀，放置15分钟～20分钟，2000rpm离心10分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
2、SPA的致敏:将染色后SPA菌液内加入同等体积的特异性抗体，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
所述盐酸克伦特罗抗体(或抗原)、沙丁胺醇抗体(或抗原)、莱克多巴胺抗体(或抗原)及抗瘦肉精阳性血清和阴性血清的包被与封闭步骤如下：
将上述抗体(或抗原)按照1mg/L的浓度包被在NC膜(或ELISA板)上，然后3％BAS封闭，4℃过夜，备用。
所述0.01M的PBS缓冲液的制备步骤如下：
称取Na2HPO42.2g，NaH2PO40.3g，NaCl 8.5g，调节溶液的pH值至7.4，最后加水定容1000ml，121.3℃灭菌30分钟，保存于4℃冰箱中备用。
如果所述包被的载体为NC膜，则其反应体系的组装与切割步骤如下(包被载体为ELISA板时省略该步骤)：
a)将带有盐酸克伦特罗抗体(或抗原)、沙丁胺醇抗体(或抗原)、莱克多巴胺抗体(或抗原)及抗瘦肉精阳性血清和阴性血清的硝酸纤维素膜黏贴到用于支撑整个反应体系的PVC板中部。
b)将吸水纸黏贴在PVC板两端。
c)用切纸刀将PVC板按照要求切割成检测板。
本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下：
实施例1
检测对象为动物尿液中的瘦肉精，属于抗原检测，具体操作步骤如下：
将盐酸克伦特罗(一种瘦肉精)标准品(100ug/ml)做1:2、1:20、1:200、1:2000、1:10000、1:20000倍稀释，分别用胶体金法和本发明的SPA法同时对稀释好的盐酸克伦特罗标准品的稀释液进行检测。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗盐酸克罗抗体：将盐酸克伦特罗标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗盐酸克罗抗体(阳性血清)。
制备盐酸克伦特罗阴性血清：采集健康动物血清测定效价，效价低于1:1时，收集血清即为抗盐酸克伦特罗的阴性血清。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内加入同等体积的抗盐酸克罗抗体，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
应用SPA法快速检测盐酸克伦特罗抗原的具体步骤如下：
1)将抗盐酸克伦特罗抗体(效价为1:10000)、阴性对照血清及空白对照分别按照1ug/ml的浓度包被于NC膜上，37℃温箱放置30min。
2)然后加入3％BAS，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)取1:2、1:20、1:200、1:2000、1:10000、1:20000稀释的盐酸克伦特罗标准品5μl滴在包被了抗盐酸克伦特罗抗体、阴性对照和空白对照且已经封闭好的NC膜上，37℃30min；
4)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
5)再于NC膜上滴加5μl致敏的SPA混合液，37℃30min；
6)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照有显色反应，同时阴性对照和空白对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的条件下，包被的抗盐酸克伦特罗抗体位置上有显色反应的判为阳性，即被检样品中含有盐酸克伦特罗；反之，无显色反应的判为阴性，即被检样品中不含有盐酸克伦特罗。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对盐酸克伦特罗标准品进行检测时能够检测到1:2000倍稀释时的标准品，即能够检测到0.1ppb的盐酸克伦特罗标准品。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对盐酸克伦特罗标准品进行检测时能够检测到1:200倍稀释时的标准品，即能够检测到1ppb的盐酸克伦特罗标准品。结果如表1所示。
表1：胶体金法和SPA法检测盐酸克伦特罗标准品的对比结果
上述结果表明，本发明检测盐酸克罗标准品要比胶体金法敏感，就精确度而言，前者为后者的10倍或以上。表明本发明的试剂检测抗原比胶体金法具有更好的效果。
实施例2
检测对象为动物尿液中的抗盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种瘦肉精抗体时，属于抗体检测，具体操作步骤如下：
采集100份已确定结果的病例猪的尿液作为待检样品，其中阳性标本40份，阴性标本60份，用胶体金法和本发明的SPA法对其进行检测。其中胶体金试剂盒和本发明SPA法所用试剂均在25℃湿度70％的条件下存放了18个月的产品。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗盐酸克罗抗体：将盐酸克伦特罗标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗盐酸克罗抗体。
制备抗莱克多巴胺抗体：将莱克多巴胺标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗莱克多巴胺抗体。
制备抗沙丁胺醇抗体：将沙丁胺醇标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗沙丁胺醇抗体。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内加入同等体积的抗盐酸克伦特罗抗体、抗莱克多巴胺抗体和抗沙丁胺醇抗体三种瘦肉精标准品，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇阳性抗原制备：将盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇标准品分别做1：200倍稀释，即为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇阳性抗原。
应用SPA法快速检测抗盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇抗体的具体步骤如下：
1)分别将盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和PBS阴性对照分别按照1ug/ml的浓度包被于NC膜上，并设空白对照，37℃温箱放置30min。
2)然后分别加入3％BAS，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)取待检测的样品5μl滴在包被了盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和PBS阴性对照和空白对照且已经封闭好的NC膜上，37℃30min；
4)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
4)再于NC膜上滴加5μl致敏的SPA混合液，37℃温箱放置30min；
5)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照无显色反应，同时阴性对照和空白对照有显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的前提下，包被瘦肉精抗原的位置无显色反应，就判为阳性，说明被检样品中含有瘦肉精抗体，反之，出现显色反应，判为阴性，说明被检样品中不含有瘦肉精抗体。即包被盐酸克伦特罗的位置无显色反应，说明被检样品中含有盐酸克伦特罗抗体，出现显色反应，就说明被检样品中不含有盐酸克伦特罗抗体；包被沙丁胺醇的位置无显色反应，说明被检样品中含有沙丁胺醇抗体，出现显色反应，就说明被检样品中不含有沙丁胺醇抗体；包被莱克多巴胺的位置无显色反应，说明被检样品中含有莱克多巴胺抗体，出现显色反应，就说明被检样品中不含有莱克多巴胺抗体。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对已知结果的100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照、阴性对照和空白对照均成立，并检测出40份阳性样品，60份阴性样品。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对上述100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照、阴性对照和空白对照均成立，并检测出42份阳性样品，58份阴性样品。
结果如表2所示。
表2：胶体金法和SPA法检测100份样本的瘦肉精抗体的结果
阳性样品份数 阴性样品份数 阳性对照 阴性对照
胶体金法 42 58 阳性 阴性
SPA法(本发明) 40 60 阳性 阴性
上述结果可以看出本发明检测瘦肉精的阳性检出率和阴性检出率符合已知结果，而胶体金法的检出结果则出现了假阳性。

Claims (9)

1.一种检测瘦肉精的试剂，其特征在于，所述的试剂包含有包被在载体上的、用于检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克巴多胺中的任一种或几种的特异性抗体；用于显色反应的试剂，所述的显色反应的试剂为染色的且用上述的特异性抗体致敏的金黄色葡萄球菌。
2.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的特异性抗体的效价为1:800或以上。
3.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述载体为NC膜或ELISA板。
4.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的金黄色葡萄球菌用石碳酸复红染料进行的染色。
5.如权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的金黄色葡萄球菌的致敏是将染色后的金黄色葡萄球菌用抗盐酸克伦特罗、沙丁胺醇或莱克多巴胺抗体中的任一种或几种致敏的。
6.权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述的试剂包含有用作阳性对照的阳性血清和/或作为阴性对照的阴性血清。
7.如权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述的阳性血清，是将盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺免疫家兔后制备的效价达到1:800或以上的兔子血清。
8.如权利要求6所述的试剂，其特征在于，所述的瘦肉精阴性血清，是抗盐酸克伦特罗、抗沙丁胺醇和抗莱克多巴胺抗体的效价低于1:1的动物血清。
9.权利要求1所述的试剂，其特征在于还包含有包被在载体上的、用于检测抗盐酸克伦特罗抗体、抗沙丁胺醇抗体和抗莱克巴多胺抗体中的任一种或几种的瘦肉精抗原。
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