CN104237506A - 一种检测抗原或抗体的方法 - Google Patents

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朱绍辉
周洪海
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Abstract

本发明首先提供一种检测抗原或抗体的方法，包括有如下的步骤：包被并封闭待检抗原或血清对应的特异性抗体或抗原；用待检抗原或血清特异性结合的抗体或抗原致敏染色的SPA；取待检抗原或血清与包被在载体上的抗体或抗原进行结合反应，之后冲洗；再加入上述致敏了SPA的特异性抗体或抗原，再冲洗；最后进行结果的判定，根据是否出现显色条带表明待检测样品中存在待检测的抗原或抗体。本发明可以一次检测一种或多种抗原或抗体，减少了操作次数，节约了成本；特异性强，降低了假阳性出现的几率；成本低廉，操作极为简便，缩短了工时；易于推广，适于普查；速度快，灵敏度高。

Description

一种检测抗原或抗体的方法
技术领域
本发明分子检测技术领域，具体涉及一种抗原、抗体的快速检测方法。
背景技术
抗原和相应抗体之间可以发生特异性的结合反应，这种结合取决于抗原表位与抗体超变区的结构具有互补性和亲和性。抗原或抗体的检测原理便是基于抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。其中对抗原的定性和定位检测即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。
抗体检测的意义在于协助临床诊断，在某些疾病中亦是观察疗效及预后的一个指标，预防接种效果的观察，以及传染病流行病学调查中，特异性抗体的检测也具有特殊的、重要的意义。抗体检测用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。
抗原检测的意义根据可做为抗原进行检测的物质可分为以下四类：
1)各种微生物及其大分子产物：用于传染病诊断、微生物的分类及鉴定以及对菌苗、疫苗的研究。
2)生物体内各种大分子物质：包括各种血清蛋白(如各类免疫球蛋白、
补体的各种成分)、可溶性血型物质、多肽类激素、细胞因子及癌胚抗原等均可做为抗原进行检测。在对这些成分的生物学作用的研究以及各种疾病的诊断有重要意义。
3)人和动物细胞的表面分子：包括细胞表面各种分化抗原同种异型抗原、病毒相关抗原和肿瘤相关性抗原等。检测这些抗原对各种细胞的分类、分化过程及功能研究、对各种与免疫有关的疾病的诊断及发病机制的研究，均有重要意义。
4)各种半抗原物质：某些药物、激素和炎症介质等属于小分子的半抗原，可以分别将它们偶联到大分子的载体上，组成人工结合的完全抗原。用其免疫动物，制备出各种半抗原的抗体，应用于各种半抗原物质的检测，例如对某些病人在服用药物后进行血中药物浓度的监测。
目前用于抗原抗体检测的方法主要有：
(1)沉淀反应包括环状沉淀试验、单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫比浊法、对流免疫电泳、免疫电泳、免疫印记法。
(2)凝集反应包括直接凝集反应、间接凝集反应(包括应用SPA的协同凝集反应)、抗球蛋白试验。
(3)补体参与抗原抗体反应包括溶血反应、补体介导的细胞毒试验、补体结合试验。
(4)中和反应包括病毒中和试验和毒素中和试验。
(5)标记免疫反应包括荧光免疫技术、放射免疫技术、酶联免疫分析法、发光免疫技术和胶体金免疫技术
综上这些方法要么要求有复杂的仪器设备和繁琐的操作过程，不适合现场监控和大量样本的筛查，要么就是检测时间较长、对操作人员专业要求高，或是检测成本高、假阳性现象比较多。更重要的是，目前的检测方法还存在灵敏度不是很高的问题。所以，目前急需一种操作简便、经济、准确、适合临床推广的检测方法来检测抗原和抗体。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测抗原抗体的方法，从而克服现有技术存在的不足。
本发明首先提供一种检测抗原的方法，包括如下的步骤：
将与待检测的抗原特异性结合的抗体包埋在检测用的载体上；
将包被在载体上的抗体用BSA封闭；
将SPA进行染色，染色结束后，将染色的SPA与待检测的抗原特异性结合的抗体进行结合，即用与待检测的抗原特异性结合的抗体致敏SPA；
取待检测的样品与包被在载体上的抗体进行结合反应，反应结束后用清洗液清洗；
然后再加入上述致敏了SPA的特异性抗体进行结合反应，反应结束后用洗液进行清洗；
最后进行结果的判定，如出现显色条带表明样品中存在待检测的抗原。
作为优选，在检测用的载体上还包埋有作为阳性对照的阳性血清、作为阴性对照的阴性血清及空白对照。
其中阳性血清是用一种或多种特异性抗原免疫易感动物，免疫后静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800或以上时，收集血清，制得抗以上多种抗原的阳性血清。
所述阴性血清，是采集健康动物血清测定抗多种抗原的抗体的效价，效价低于1:1时，收集血清制得阴性血清。
SPA的染色的方法如下：在金黄色葡萄球菌菌液中滴加染液，混匀后收集菌体，再用缓冲液清洗直至菌体无颜色脱落为止，再加入缓冲液悬浮得到染色的SPA菌液。
染色的SPA与待检测的抗原特异性结合的抗体进行结合，其具体方法如下：将染色后SPA菌液内加入与待检测的抗原特异性结合的抗体，混匀，37℃温箱放置30分钟后，收集菌体，菌体用缓冲液冲洗，制成悬液。
所述的检测载体，优选为NC膜或ELISA板；
所述的清洗液或缓冲液优选为PBS缓冲液。
上述的方法，还可以用于检测抗体，操作步骤如下；
将与待检测的抗体特异性结合的抗原包埋在检测用的载体上；
将包被在载体上的抗原用BSA封闭，备用；
将SPA进行染色，染色结束后，进行SPA致敏和检测步骤：
采用待检测的血清进行SPA致敏；
取致敏了SPA的待检测样品与包被在载体上的抗原进行结合反应，反应结束后用清洗液清洗；
冲洗结束后，如出现显色条带表明待检测样品中存在待检测的抗体。
上述的SPA致敏和检测步骤，还可以采用如下的方法：
采用特异性的抗体致敏SPA；
取待检测的样品与包被在载体上的特异性抗原进行结合反应，反应结束后用清洗液冲洗；
然后再加入上述致敏了SPA的特异性抗体进行结合反应，反应结束后用洗液进行冲洗；
最后进行结果的判定，如不出现显色条带表明待检测样品中存在待检测的抗原。
进一步的，上述的SPA致敏和检测步骤，还可以采用如下的方法：
采用抗特异性抗体的二抗致敏SPA；
取待检测的样品与包被在载体上的特异性抗原进行结合反应，反应结束后用清洗液冲洗；
然后再加入上述致敏了SPA的二抗进行结合反应，反应结束后用洗液进行冲洗；
最后进行结果的判定，如出现显色条带表明样品中存在待检测的抗原；
所述的二抗是用一种或多种抗原免疫易感动物，免疫后静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800或以上时，收集血清，制得抗以上多种抗原的阳性血清，再将此抗体免疫易感动物，免疫后静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800或以上时，收集血清，即制得抗以上一种或多种抗原的阳性血清的二抗。
作为优选，在检测用的载体上还包埋有作为阳性对照的标准抗原、作为阴性对照的PBS(pH值7.4，0.01M)缓冲液及空白对照。
本发明可以一次检测多种抗原(或抗体)，减少了操作次数，节约了成本；特异性强，降低了假阳性出现的几率；所应用的检测试剂成本低廉，操作极为简便，缩短了工时；易于推广，适于普查；速度快，灵敏度高，可以检测到0.1ppb的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺；其结果易于观察，且可以长期保存，这对于快速判断被检样本中是否含有特异性抗原或抗体具有重要诊断价值。
附图说明
图1：本发明检测抗原原理图；
图2：本发明检测抗体原理图a；
图3：本发明检测抗体原理图b；
图4：本发明检测抗体原理图c；
图5：本发明线性包被示意图，其中T1、T2及“……”表示包被的特异性抗体(或抗原)PC表示阳性对照，NC表示阴性对照。图中特异性抗体(或抗原)的包被是线性包被。
图6：本发明点状包被示意图，其中T1、T2及“……”表示包被的特异性抗体(或抗原)PC表示阳性对照，NC表示阴性对照。图中特异性抗体(或抗原)的包被是点状包被。
具体实施方式
金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)是存在于细菌细胞壁的一种表面蛋白。SPA是一种单链多肽，与胞壁肽聚糖呈共价结合；SPA可与人类IgG1、IgG2和IgG4的Fc段非特异性结合，亦能同豚鼠、小鼠等多种哺乳动物的IgG的Fc段结合；而IgG分子的Fab段仍能同相应抗原分子发生特异性结合。
申请人在长期的研究中发现，用SPA结合抗原或抗体，能显著的提高检测时的灵敏性，从而促成了本发明。
本发明的方法，其步骤总体如下：
1)制备特异性的抗体、阳性血清和阴性血清，备用；
2)将特异性抗体(或抗原)、阳性血清(或抗原)、阴性血清(检测抗体时为PBS缓冲液)包被在NC膜(或ELISA板)上，进行封闭备用，其中阳性血清(或抗原)即为阳性对照，阴性血清(检测抗体时为PBS缓冲液)即为阴性对照；
3)然后将SPA进行染色，并用特异性的抗体或是待检血清致敏，备用；
4)取待检样品(或致敏了染色的SPA的待检样品)于包被了特异性抗体(或抗原)且已封闭好的NC膜(或ELISA板)上，作用一段时间后用PBS缓冲液冲洗3次；
5)再滴加致敏的SPA混合液，作用一段时间后再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次。(应用直接检测抗体时该步骤省略)
检测抗原时的结果判断标准：阳性对照有显色反应，同时阴性对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。在实验结果成立的条件下，包被抗体的位置上有显色反应的判为阳性，即被检样品中有针对该特异性抗体的抗原；包被抗体的位置上无显色反应的判为阴性，即被检样品中无针对该特异性抗体的抗原。
采用待检血清或抗特异性抗体的二抗致敏SPA检测抗体时的结果判断标准：阳性对照有显色反应，同时阴性对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。在实验结果成立的条件下，包被抗原的位置上有显色反应的判为阳性，即被检样品中有针对该特异性抗原的抗体；包被抗体的位置上无显色反应的判为阴性，即被检样品中无针对该特异性抗原的抗体。
应用特异性抗体致敏SPA检测抗体时的结果判断标准：阳性对照无显色反应，同时阴性对照有显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。在实验结果成立的条件下，包被抗原的位置上无显色反应的判为阳性，即被检样品中有针对该特异性抗原的抗体；包被抗体的位置上有显色反应的判为阴性，即被检样品中无针对该特异性抗原的抗体。
所述特异性抗体的制备步骤如下：
将抗原稀释后(半抗原时需加入佐剂)以皮下注射和静脉注射的方式免疫易感动物，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗以上多种抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得特异性抗体。
所述阳性血清的制备步骤如下：
将多种抗原稀释后(半抗原时需加入佐剂)以皮下注射和静脉注射的方式免疫易感动物，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗以上多种抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗以上多种抗原的阳性血清。
所述二抗的制备步骤如下：
将一种或多种抗原稀释后以皮下注射和静脉注射的方式免疫易感动物，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗以上多种抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗以上一种或多种抗原的阳性血清，再将此阳性血清稀释后以皮下注射和静脉注射的方式免疫易感动物，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗以上多种抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗以上一种或多种抗原的特异性抗体的二抗。
所述阴性血清的制备步骤如下：
采集健康动物血清测定抗以上多种抗原的抗体的效价，效价低于1:1时，收集血清即为抗该多种抗原的阴性血清。
所述制备特异性抗体、阳性血清和二抗过程中对免疫动物进行的静脉注射和皮下注射，其注射步骤是：第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为特异性抗体(或阳性血清或二抗)。
对于本发明所使用的阳性对照的阳性血清和作为阴性对照的阴性血清，也可选用本领域通过的作为阳性对照清和作为阴性对照的血清。
所述制备特异性抗体和阳性血清过程中对半抗原进行的预处理方法是：将半抗原与佐剂按10:1～15:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，之后放室温或4℃静止1天，即可用于免疫动物。
所述致敏SPA混合液的制备步骤如下：
1、SPA的染色:于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加石碳酸复红染液，摇晃混匀，放置15分钟～20分钟，2000rpm离心10分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
2、SPA的致敏:将染色后SPA菌液内加入同等体积的特异性抗体，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
所述特异性抗体(或抗原)的包被与封闭步骤如下：
将特异性抗体(或抗原)按照1mg/L的浓度包被于NC膜或ELISA板上，然后用3％BSA封闭，4℃过夜，备用。
所述0.01M的PBS缓冲液的制备步骤如下：
称取Na2HPO42.2g，NaH2PO40.3g，NaCl 8.5g，调节溶液的pH值至7.4，最后加水定容1000ml，121.3℃灭菌30分钟，保存于4℃冰箱中备用。
下面结合附图并通过具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
检测对象为动物尿液中的瘦肉精，属于抗原检测，具体操作步骤如下：
将盐酸克伦特罗(一种瘦肉精)标准品(100μg/ml)做1:2、1:20、1:200、1:2000、1:10000、1:20000倍稀释，分别用胶体金法和本发明的SPA法同时对稀释好的盐酸克伦特罗标准品的稀释液进行检测。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗盐酸克罗抗体：将盐酸克伦特罗标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗盐酸克罗抗体(阳性血清)。
制备盐酸克伦特罗阴性血清：采集健康动物血清测定效价，效价低于1:1时，收集血清即为抗盐酸克伦特罗的阴性血清。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内加入同等体积的抗盐酸克罗抗体，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需致敏SPA混合液。
应用SPA法快速检测盐酸克伦特罗抗原的具体步骤如下：
1)将抗盐酸克伦特罗抗体(效价为1:10000)、阴性对照血清分别按照1ug/ml的浓度包被于NC膜上，37℃温箱放置30min。
2)然后加入3％BSA，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)取1:2、1:20、1:200、1:2000、1:10000、1:20000稀释的盐酸克伦特罗标准品5μl滴在包被了抗盐酸克伦特罗抗体和阴性对照且已经封闭好的NC膜上，37℃30min；
4)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
5)再于NC膜上滴加5μl致敏的SPA混合液，37℃30min；
6)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照有显色反应，同时阴性对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的条件下，包被的抗盐酸克伦特罗抗体位置上有显色反应的判为阳性，即被检样品中含有盐酸克伦特罗；反之，无显色反应的判为阴性，即被检样品中不含有盐酸克伦特罗。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对盐酸克伦特罗标准品进行检测时能够检测到1:2000倍稀释时的标准品，即能够检测到0.1ppb的盐酸克伦特罗标准品。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对盐酸克伦特罗标准品进行检测时能够检测到1:200倍稀释时的标准品，即能够检测到1ppb的盐酸克伦特罗标准品。结果如表1所示。
表1：胶体金法和SPA法检测盐酸克伦特罗标准品的对比结果
上述结果表明，SPA法检测盐酸克罗标准品要比胶体金法敏感，就精确度而言，前者为后者的高10倍，即应用SPA法检测抗原要比胶体金法效果稍好。
实施例2
检测对象为动物尿液中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种瘦肉精时，仍属于抗原检测，具体操作步骤如下：
采集100份已确定结果的病例猪的尿液作为待检样品，其中阳性标本40份，阴性标本60份，用胶体金法和本发明的SPA法对其进行检测。其中胶体金试剂盒和本发明SPA法所用试剂均在25℃湿度70％的条件下存放了18个月的产品。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗盐酸克罗抗体：将盐酸克伦特罗标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗盐酸克罗抗体。
制备抗莱克多巴胺抗体：将莱克多巴胺标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗莱克多巴胺抗体。
制备抗沙丁胺醇抗体：将沙丁胺醇标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗沙丁胺醇抗体。
制备抗瘦肉精阳性血清：将盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种瘦肉精标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三种瘦肉精的阳性血清。
制备瘦肉精阴性血清：采集健康动物血清测定效价，效价低于1:1时，收集血清即为抗瘦肉精的阴性血清。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内加入同等体积的抗盐酸克伦特罗抗体、抗莱克多巴胺抗体和抗沙丁胺醇抗体三种瘦肉精标准品，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
应用SPA法快速检测盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺抗原的具体步骤如下：
1)分别将抗盐酸克伦特罗抗体(效价为1:10000)、抗莱克多巴胺抗体(效价为1:10000)、抗沙丁胺醇抗体(效价为1:10000)、抗瘦肉精阳性血清、阴性对照血清分别按照1ug/ml的浓度包被于NC膜上，37℃温箱放置30min。
2)然后分别加入3％BSA，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)取待检样品5μl滴在NC膜上包被且封闭好了的抗体上，置37℃温箱放置30min；
4)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
5)再于NC膜上滴加5μl致敏的SPA混合液，37℃30min；
6)用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照有显色反应，同时阴性对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的前提下，包被瘦肉精抗体的位置出现显色反应，就判为阳性，说明被检样品中含有瘦肉精，反之，未发生显色反应，判为阴性，说明被检样品中不含有瘦肉精。即包被盐酸克伦特罗抗体的位置出现显色反应，说明被检样品中含有盐酸克伦特罗，不出现显色反应，就说明被检样品中不含有盐酸克伦特罗；包被沙丁胺醇抗体的位置出现显色反应，说明被检样品中含有沙丁胺醇，不出现显色反应，就说明被检样品中不含有沙丁胺醇；包被莱克多巴胺抗体的位置出现显色反应，说明被检样品中含有莱克多巴胺，不出现显色反应，就说明被检样品中不含有莱克多巴胺。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对已知阳性、阴性结果的100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出40份阳性样品，60份阴性样品。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对上述100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出44份阳性样品，56份阴性样品。
结果如表2所示。
表2 胶体金法和SPA法检测猪尿液中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的结果
阳性样品份数 阴性样品份数 阳性对照 阴性对照
胶体金法 44 56 阳性 阴性
SPA法(本发明) 40 60 阳性 阴性
上述结果可以看出本发明的SPA法检测瘦肉精的阳性检出率和阴性检出率符合已知结果，而胶体金法的检出结果则出现了假阳性，所以，本发明的SPA法检测效果要优于胶体金法。
实施例3
检测对象为动物尿液中的抗三聚氰胺抗体，属于抗体检测，具体操作步骤如下：
采集100份已确定结果的病例猪的尿液作为待检样品，其中阳性标本30份，阴性标本70份，用胶体金法和本发明的SPA法对其进行检测。其中胶体金试剂盒和本发明SPA法所用试剂均在20℃湿度20％的条件下存放了4个月的产品。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗三聚氰胺阳性血清：将三聚氰胺标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗三聚氰胺抗体(阳性血清)。
制备三聚氰胺阴性血清：采集健康动物血清测定效价，效价低于1:1时，收集血清即为抗三聚氰胺的阴性血清。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内分别加入同等体积的待检测的抗体，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
应用SPA法快速检测三聚氰胺抗体的具体步骤如下：
1)分别包被三聚氰胺标准品(1：:4000)和阴性对照各5ul于NC膜上，37℃温箱放置30min。其中阴性对照为PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)；
2)然后加入3％BSA，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)分别取用待测样品致敏的SPA5ul分别滴在包被了三聚氰胺标准品和阴性对照且已经封闭好的NC膜上，置37℃温箱放置30min；
4)用PBS缓冲液冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照有显色反应，同时阴性对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的条件下，包被三聚氰胺的孔有显色反应的判为阳性，即被检样品中含有抗三聚氰胺的抗体；反之，无显色反应的判为阴性，即被检样品中不含有抗三聚氰胺的抗体。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对已知阴性阳性结果的100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出30份阳性样品，70份阴性样品，与已知结果相符合。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对上述100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出30份阳性样品，70份阴性样品，也与已知结果相符合。
表3 胶体金法和SPA法检测猪尿液中三聚氰胺抗体的结果
阳性样品份数 阴性样品份数 阳性对照 阴性对照
胶体金法 30 70 阳性 阴性
SPA法(本发明) 30 70 阳性 阴性
上述结果可以看出本发明的SPA法和胶体金法检测三聚氰胺抗体的总符合率为100％。
实施例4
检测对象为动物尿液中的抗三聚氰胺抗体，属于抗体检测，具体操作步骤如下：
采集100份已确定结果的病例猪的尿液作为待检样品，其中阳性标本30份，阴性标本70份，用胶体金法和本发明的SPA法对其进行检测。其中胶体金试剂盒和本发明SPA法所用试剂均在16℃湿度20％的条件下存放了6个月的产品。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗三聚氰胺阳性血清：将三聚氰胺标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗三聚氰胺抗体(阳性血清)。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内分别加入同等体积的抗三聚氰胺阳性血清，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
应用SPA法快速检测三聚氰胺抗体的具体步骤如下：
1)分别包被三聚氰胺标准品(1：:4000)和阴性对照各5ul于NC膜上，37℃温箱放置30min。其中阴性对照为PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)；
2)然后加入3％BSA，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)取用抗三聚氰胺阳性血清致敏的SPA5ul分别滴在包被了三聚氰胺标准品和阴性对照且已经封闭好的NC膜上，置37℃温箱放置30min；
4)用PBS缓冲液冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照无显色反应，同时阴性对照有显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的条件下，包被三聚氰胺的孔无显色反应的判为阳性，即被检样品中含有抗三聚氰胺的抗体；反之，有显色反应的判为阴性，即被检样品中不含有抗三聚氰胺的抗体。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对已知阴性阳性结果的100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出30份阳性样品，70份阴性样品，与已知结果相符合。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对上述100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出30份阳性样品，70份阴性样品，也与已知结果相符合。
表3 胶体金法和SPA法检测猪尿液中三聚氰胺抗体的结果
阳性样品份数 阴性样品份数 阳性对照 阴性对照
胶体金法 30 70 阳性 阴性
SPA法(本发明) 30 70 阳性 阴性
上述结果可以看出本发明的SPA法和胶体金法检测三聚氰胺抗体的总符合率为100％。
实施例5
检测对象为动物尿液中的抗三聚氰胺抗体，属于抗体检测，具体操作步骤如下：
采集100份已确定结果的病例猪的尿液作为待检样品，其中阳性标本30份，阴性标本70份，用胶体金法和本发明的SPA法对其进行检测。其中胶体金试剂盒和本发明SPA法所用试剂均在25℃湿度20％的条件下存放了8个月的产品。
(一)本发明的SPA法检测方法如下：
制备抗三聚氰胺阳性血清：将三聚氰胺标准品与弗氏完全佐剂按10:1的比例进行混合，置37℃摇床振摇3天，放室温静止1天，之后，以皮下注射和静脉注射的方式免疫健康家兔，共免疫4次，第一次静脉注射0.1ml，皮下注射0.1ml；10天后进行第二次免疫，静脉注射0.2ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第三次免疫，静脉注射0.5ml，皮下注射0.1ml；7天后进行第四次免疫，静脉注射1.0ml，皮下注射0.3ml；5天后耳静脉采血，收集血清，测定效价，当抗体效价达到1：800以上时，即可心脏放血，收集血清，作为抗三聚氰胺抗体(阳性血清)。
将抗三聚氰胺抗体稀释后以皮下注射和静脉注射的方式免疫易感动物，共免疫4次，每次间隔7～10天，第4次免疫5天后耳静脉采血测定抗以上多种抗体效价，效价达到1:800以上时，即可自心脏放血，收集血清，即制得抗抗三聚氰胺抗体的二抗。
SPA的染色：于金黄色葡萄球菌Cowan 1株菌液中滴加1％染液，摇晃混匀，室温放置20分钟，2000rpm离心15分钟后加入PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗(此步骤重复，直至无颜色脱落为止)，加PBS缓冲液恢复至原体积，即可得到染色的SPA菌液。
SPA的致敏:将染色后SPA菌液内分别加入同等体积的抗三聚氰胺抗体的二抗，混匀，37℃温箱放置30分钟，3000rpm离心15分钟，弃上清，沉淀物再用PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)冲洗两次，制成5％的悬液，即为所需的致敏SPA混合液。
应用SPA法快速检测三聚氰胺抗体的具体步骤如下：
1)分别包被三聚氰胺标准品(1：:4000)和阴性对照各5ul于NC膜上，37℃温箱放置30min。其中阴性对照为PBS缓冲液(0.01M，pH值7.4)；
2)然后加入3％BSA，进行封闭，4℃过夜，备用。
3)取用抗三聚氰胺抗体的二抗致敏的SPA5ul分别滴在包被了三聚氰胺标准品和阴性对照且已经封闭好的NC膜上，置37℃温箱放置30min；
4)用PBS缓冲液冲洗3次；
结果判断标准：
a)如果阳性对照有显色反应，同时阴性对照无显色反应时，实验结果成立，否则，实验结果不成立。
b)在实验结果成立的条件下，包被三聚氰胺的孔有显色反应的判为阳性，即被检样品中含有抗三聚氰胺的抗体；反之，无显色反应的判为阴性，即被检样品中不含有抗三聚氰胺的抗体。
最终本发明的检测结果显示，应用本发明的SPA法对已知阴性阳性结果的100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出30份阳性样品，70份阴性样品，与已知结果相符合。
(二)胶体金法检测步骤为常规的方法
胶体金法检测结果显示，应用胶体金法对上述100份病例猪的尿液进行检测时阳性对照和阴性对照均成立，并检测出30份阳性样品，70份阴性样品，也与已知结果相符合。
表3 胶体金法和SPA法检测猪尿液中三聚氰胺抗体的结果
阳性样品份数 阴性样品份数 阳性对照 阴性对照
胶体金法 30 70 阳性 阴性
SPA法(本发明) 30 70 阳性 阴性
上述结果可以看出本发明的SPA法和胶体金法检测三聚氰胺抗体的总符合率为100％。

Claims (11)

1.一种检测抗原的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：
将与待检测的抗原特异性结合的抗体包埋在检测用的载体上；
将包被在载体上的抗体用BSA封闭；
将SPA进行染色，染色结束后，将染色的SPA与待检测的抗原特异性结合的抗体进行结合，即用与待检测的抗原特异性结合的抗体致敏SPA；
取待检测的样品与包被在载体上的抗体进行结合反应，反应结束后用清洗液冲洗；
然后再加入上述致敏了SPA的特异性抗体进行结合反应，反应结束后用洗液进行冲洗；
最后进行结果的判定，如出现显色条带表明待检测样品中存在待检测的抗原。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的载体上还包埋有作为阳性对照的阳性血清、作为阴性对照的阴性血清和空白对照。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的阳性血清是用多种抗原免疫易感动物，免疫后静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800或以上时，收集血清制得的。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的阴性血清，是采集动物血清测定抗多种抗原的抗体的效价，效价低于1:1时，收集血清制得的阴性血清。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的将SPA进行染色，是在金黄色葡萄球菌菌液中滴加染液，混匀后收集菌体，再用缓冲液清洗直至菌体无颜色脱落为止，再加入缓冲液悬浮得到染色的SPA菌液。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的染色的SPA与待检测的抗原特异性结合的抗体进行结合，是将染色后SPA菌液内加入与待检测的抗原特异性结合的抗体，混匀温育后，收集菌体，菌体用缓冲液冲洗制成的。
7.如权利要求1所述方法，其特征在于所述检测载体为NC膜或ELISA板。
8.如权利要求1所述方法，其特征在于所述清洗液或缓冲液为PBS缓冲液。
9.一种检测抗体的方法，其特征在于，所述的方法包括有如下的步骤：
将与待检测的抗体特异性结合的抗原包埋在检测用的载体上；
将包被在载体上的抗原用BSA封闭，备用；
将SPA进行染色，染色结束后，进行SPA致敏和检测步骤：
首先采用待检测的血清进行SPA致敏；
然后取致敏了SPA的待检测样品与包被在载体上的抗原进行结合反应，反应结束后用清洗液清洗；
冲洗结束后，如出现显色条带表明待检测样品中存在待检测的抗体。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的SPA致敏和检测步骤如下：
采用特异性的抗体致敏SPA；
取待检测的样品与包被在载体上的特异性抗原进行结合反应，反应结束后用清洗液冲洗；
然后再加入上述致敏了SPA的特异性抗体进行结合反应，反应结束后用洗液进行冲洗；
最后进行结果的判定，如不出现显色条带表明待检测样品中存在待检测的抗原。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的SPA致敏和检测步骤如下：
采用抗特异性抗体的二抗致敏SPA；
取待检测的样品与包被在载体上的特异性抗原进行结合反应，反应结束后用清洗液冲洗；
然后再加入上述致敏了SPA的二抗进行结合反应，反应结束后用洗液进行冲洗；
最后进行结果的判定，如出现显色条带表明样品中存在待检测的抗原；
所述的二抗是用一种或多种抗原免疫易感动物，免疫后静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800或以上时，收集血清，制得抗以上多种抗原的阳性血清，再将此抗体免疫易感动物，免疫后静脉采血测定抗体效价，效价达到1:800或以上时，收集血清，即制得抗以上一种或多种抗原的阳性血清的二抗。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5292874A (en) * 1991-09-04 1994-03-08 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes to Staphylococcus aureus
EP0613005A2 (en) * 1993-02-25 1994-08-31 Quidel Corporation Assays employing dyed microorganism labels
WO2003106697A2 (en) * 2002-03-21 2003-12-24 Gonet, Michael, J. Method and kit for identifying pseudomonas aeruginosa
CN102818891A (zh) * 2012-08-27 2012-12-12 重庆市畜牧科学院 兔肺炎克雷伯氏菌凝集原及其应用
CN103361313A (zh) * 2010-01-13 2013-10-23 王信 Spa-抗体三聚体的试剂盒及其用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5292874A (en) * 1991-09-04 1994-03-08 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes to Staphylococcus aureus
EP0613005A2 (en) * 1993-02-25 1994-08-31 Quidel Corporation Assays employing dyed microorganism labels
WO2003106697A2 (en) * 2002-03-21 2003-12-24 Gonet, Michael, J. Method and kit for identifying pseudomonas aeruginosa
CN103361313A (zh) * 2010-01-13 2013-10-23 王信 Spa-抗体三聚体的试剂盒及其用途
CN102818891A (zh) * 2012-08-27 2012-12-12 重庆市畜牧科学院 兔肺炎克雷伯氏菌凝集原及其应用

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