CN104230523A - 防治柑橘黄龙病的微生物菌剂及制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明属生物领域，提供一种防治柑橘黄龙病的复合微生物菌剂。所述菌剂由二株或二株以上公知的原始菌种和含多种微量元素的基质组成。作为复合菌群中主体菌类的放线菌占60～90%，作为辅助菌类的植物杆菌等占10～40%，各菌类成分配比根据土壤环境条件及施肥条件的不同而改变。选用的菌类在复杂多变的生态环境下增殖、优选、强化，培养成的多功能菌群。该菌群能在柑橘类植物根际土壤中繁殖并侵染柑橘类作物，发挥“以菌治菌”生物防治柑橘黄龙病的功效，还能为柑橘提供氮磷钾营养元素发挥生物肥料的功效。

Description

防治柑橘黄龙病的微生物菌剂及制造方法

技术领域

本发明属于生物领域，尤其涉及一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂及制造方法。

背景技术

柑橘作为世界第一大水果，全世界年产量1亿吨，种植面积1亿亩。有140个国家和地区栽培柑橘，主要集中在巴西、美国、中国及地中海沿海国家；2002年世界柑橘贸易额达82多亿美元，是仅次于小麦、玉米的第三大贸易农产品

黄龙病（英文：Huanglongbing，英文简称：HLB）是威胁柑橘产业生存发展的毁灭性病害，目前，我国种植柑橘橙的19个省区已有11个遭受黄龙病危害，受害面积占栽培面积的80%以上，产量占85%左右，据《华盛顿邮报》网站报道，美国佛罗里达州的橙树50%患黄龙病，而且不断蔓延，预计再过十年该州价值90亿美元的柑橘业将被彻底毁掉。

黄龙病被发现已近100年，对其危害的研究日渐深入，普遍认为黄龙病的病原是一种类菌体，由一种飞木虱传播，其对人体是无害的。但直至今日，全世界都认为黄龙病“可防可控不可治”，因为没有找到一种治理黄龙病的有效药物，中国官方鼓励的防控办法是从培育无菌苗开始，把病树砍伐挖根烧毁以清理果园，控制其蔓延。参考消息网1月15日报道：“去年2月，来自20多个国家的500位科学家聚集在奥兰多开会讨论如何应对黄龙病，尽管人们为研究这种病害已投入8000万美元，但科学家仍然不知道如何消灭病菌或把它从树木上消除”。

所以现在急需一种能够有效治疗黄龙病的制剂。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂，其解决现有技术无法有效治疗黄龙病的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂，所述微生物菌剂包括：二株或二株以上的菌进行复合得到的复合菌种以及基质；其中，所述复合菌种包括：主体菌类和辅助菌类，所述主体菌类的数量占比为60~90%，所述辅助菌类的数量占比为10~40%；所述主体菌类为：放线菌；所述辅助菌类为：植物杆菌或根瘤菌；

所述基质为：包含多种微量元素的泥土，其中，所述多种微量元素含量以ppm计如下：：

锂0.05~5、硼0.1~15 、镁5~15 、硅5~15 、硫10~30 、钙50~100 、钛0.1~3 、铁50 ~100 、铜5~15 、硒0.1~3 、鉬0.5~5 、钍0.05~5 、钠5~30 、铝0.5~5 、磷0.5~5 、钾5~30 、钒0.1~3 、锰0.5~5 、鈷0.1~3 、锌10~30 、锆0.1~3 和铈0.01~2。

可选的，所述泥土具体为：泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合。

可选的，所述放线菌具体为：美国的密西里游动放线菌、抗生链霉菌、金霉素链霉菌、链霉菌或委内瑞拉链霉菌中的一种或多种。

可选的，所述植物杆菌具体为：枯草芽孢杆菌、玉米枯萎病杆菌、稻黄杆菌或甘兰黑腐病杆菌的一种或多种；所述根瘤菌具体为：豇豆根瘤菌或苜宿根瘤菌。

可选的，所述复合菌种还包括：化学诱变剂，化学诱变剂含量为：0.5~10ppb ；所述化学诱变剂具体为：烷化剂、碱性类似物或Y啶化合物的一种或多种。

第二方面，提供一种上述的微生物菌剂的制造方法，所述方法包括：

将所述主体菌类和所述辅助菌类的菌株分别放入实验室培养基培养扩大，其中，所述培养基为无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值变化在4~10之间，对所述培养基进行震荡操作和增氧操作得到主体菌类的菌液和辅助菌类的菌液；所述震荡操作具体为：连续振荡3天、间断振荡1天和停止振荡3天；

将所述主体菌类的菌液和所述辅助菌类的菌液分别放入灭菌的培养基的种子罐，所述种子罐为无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值变化在4~10之间，对所述种子罐进行增氧操作得到主体菌类的增殖菌液和辅助菌类的增殖菌液；、

将所述主体菌类的增殖菌液和所述辅助菌类的增殖菌液分别放入装有经过灭菌的培养基的发酵罐中发酵再次增殖，所述发酵罐为无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值变化在4~10之间，对发酵罐连续曝气5天得到浓度达标的主体菌液和辅助菌液，其中，所述曝气的气液比为：100：1； 

对所述基质进行高温灭菌后，将所述浓度达标的主体菌液和辅助菌液放入高温灭菌后的基质搅拌均匀得到初始微生物菌剂；

将所述初始微生物菌剂放入密闭无菌、调温调湿、通风、翻动的转动床上固体发酵三天得到成品微生物菌剂。

可选的，所述方法在得到成品微生物菌剂之后，所述方法还包括：将成品微生物菌剂定量称量装袋，然后真空封口包装后低于15℃保存。

可选的，所述基质的制造方法具体为：将在泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合中加入矿物质成分，所述矿物质成分具体为：浮石粉、蛭石粉、粉煤灰粉、矿渣粉、冶炼渣粉等矿物质成分的一种或多种的组合。

可选的，所述基质的制造方法具体为：

将在泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合中加入如权利要求1所述的微量元素成分的人造固体化合物或水溶液来获得基质。

第三方面，提供一种采用上述微生物菌剂进行黄龙病的防治方法，所述方法包括：

在植株周围土壤挖3~4个能见到须根的土坑或环沟，往坑里或环沟按每棵施100~500克的量施入上述微生物菌剂；

往坑里或环沟在加入有机肥后，浇水盖土，保持土壤润湿

在本发明实施例中，本发明提供的技术方案提供一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂，通过实验证明，可以非常有效的治疗黄龙病，所以其具有有效治疗黄龙病的优点。

附图说明

图1是本发明提供的一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂的制造方法的流程图；

图2是本发明提供的微生物菌剂进行黄龙病的防治方法的流程图。

 

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明具体实施方式提供一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂，该微生物菌剂包括：二株或二株以上的菌进行复合得到的复合菌种以及基质；其中，该复合菌种包括：主体菌类和辅助菌类，该主体菌类的数量占比为60~90%，该辅助菌类的数量占比为10~40%；该主体菌类可以为：放线菌；该辅助菌类可以为：植物杆菌或根瘤菌；上述数量占比具体可以为，该菌类个数与复合菌种总个数的比例。

该基质可以为：包含多种微量元素的泥土，其中，所述多种微量元素含量以ppm计如下：

锂0.05~5、硼0.1~15 、镁5~15 、硅5~15 、硫10~30 、钙50~100 、钛0.1~3 、铁50 ~100 、铜5~15 、硒0.1~3 、鉬0.5~5 、钍0.05~5 、钠5~30 、铝0.5~5 、磷0.5~5 、钾5 ~30 、钒0.1~3 、锰0.5~5 、鈷0.1~3 、锌10~30 、锆0.1~3 、铈0.01~2。

本发明提供的微生物菌剂对防治柑、橘、橙、柠檬及柚的黄龙病非常有效。

可选的，上述泥土具体可以为：泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合。其中，泥碳土俗称：褐煤、草炭、风化煤或泥煤等。

可选的，上述放线菌具体可以为：美国的密西里游动放线菌、抗生链霉菌、金霉素链霉菌、链霉菌或委内瑞拉链霉菌中的一种或多种。

可选的，上述植物杆菌具体可以为：枯草芽孢杆菌、玉米枯萎病杆菌、稻黄杆菌或甘兰黑腐病杆菌的一种或多种，上述根瘤菌具体可以为：豇豆根瘤菌或苜宿根瘤菌。

可选的，复合菌种还包括：化学诱变剂，其含量为：0.5~10ppb ；该化学诱变剂具体可以为：烷化剂、碱性类似物或Y啶化合物的一种或多种。

本发明具体实施方式还提供一种上述防治柑橘黄龙病的微生物菌剂的制造方法，该方法如图1所示，包括如下步骤：

101、将上述主体菌类和辅助菌类的菌株分别放入实验室培养基培养扩大，其中，该培养基可以放在无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值在4~10之间，对培养基进行震荡操作和增氧操作得到主体菌类的菌液和辅助菌类的菌液；上述震荡操作具体可以为：连续振荡3天、间断振荡1天和停止振荡3天；

102、将主体菌类的菌液和辅助菌类的菌液分别放入灭菌的培养基的种子罐增殖，该种子罐可以为无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值在4~10之间，对种子罐进行增氧操作得到主体菌类的增殖菌液和辅助菌类的增殖菌液；

103、将主体菌类的增殖菌液和辅助菌类的增殖菌液分别放入装有经过灭菌的培养基的发酵罐中发酵再次增殖，该发酵罐可以无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值在4~10之间，对发酵罐连续曝气5天得到浓度达标的主体菌液和辅助菌液，其中，上述曝气的气液比可以为：100：1；该浓度达标的条件具体可以为：浓度达到30~50亿个活菌/ml；

104、对基质进行高温灭菌后，将上述浓度达标的主体菌液和辅助菌液分别放入高温灭菌后的基质搅拌均匀得到初始微生物菌剂；

105、将初始微生物菌剂放入密闭无菌、调温调湿、通风、翻动的转动床上固体发酵三天得到成品微生物菌剂。

上述成品微生物菌剂需要达到菌体个数：2~3亿个/克，水份：20~35%，PH6.5~7.2。

可选的，上述方法还可以包括：将成品微生物菌剂定量称量装袋真空封口包装低于15℃保存。

可选的，上述基质的制造方法具体可以为：将在泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合中加入矿物质成分，该矿物质成分具体可以为：浮石粉、蛭石粉、粉煤灰粉、矿渣粉、冶炼渣粉等矿物质成分的一种或多种的组合。

可选的，上述基质的制造方法还可以为：

将在泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合中加入上述微量元素成分的人造固体化合物或水溶液来获得基质。

本发明的优点在于把放线菌为主的优势菌株配合其它菌类，通过优化组合、合理配比，并把这些菌株在复杂多变甚至“严酷”的生态环境条件下进行增殖、优选、强化，从而培养出有更强的生命力的微生物菌群。当该微生物菌群被吸收在基质上制成菌剂进入土壤环境中，就能各显其能，发挥菌与菌之间、菌与作物之间以及菌与土壤环境之间的“优胜劣汰效应”、“菌类共荣及营养调控效应”、“固氮与解磷解钾效应”。本发明微生物菌剂改土、肥地、防病治病的综合功效是有益菌群群体功能的发挥，是有益微生物群体调节植株与根际环境生态平衡的体现。

本发明菌剂对防治柑、橘、橙、柠檬及柚的黄龙病有效。

本发明具体实施方式还提供一种采用上述微生物菌剂进行黄龙病的防治方法，该方法如图2所示，包括：

201、在植株周围土壤挖3~4个能见到须根的土坑或环沟，往坑里或环沟按每棵施100~500克的量施入上述微生物菌剂；

202、往坑里或环沟在加入有机肥后，浇水盖土，保持土壤润湿。

可选的，上述方法在202之后还可以包括：向果树上喷1~3%浓度的氨基酸水溶液。

采用如图2所示的方法处理后，过1到3个月，就能见到黄龙病的疗效：黄叶转绿、萌发新芽、开花结果（见效快慢与温度、湿度、土壤肥料条件、施肥习惯有关）。春秋两季是施用本微生物菌剂最佳时间，与果树施肥时间一致，还可少施1/3常规肥，每年施1—2次，同时往树上喷1~3%的氨基酸水溶液效果更佳。有病能治，无病可防。

本发明的实验室采用的原始菌株的形态和性能都是国内外文献或教科书可查到的公知菌类，这些菌株可以从自然界中提取选育自用，也可以与国内外有关单位或专家交流交换而获得，本发明采用的细菌培养基都可以从国内外文献记载中随意选用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种防治柑橘黄龙病的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂包括：二株或二株以上的菌进行复合得到的复合菌种以及基质；其中，所述复合菌种包括：主体菌类和辅助菌类，所述主体菌类的数量占比为60~90%，所述辅助菌类的数量占比为10~40%；所述主体菌类为：放线菌；所述辅助菌类为：植物杆菌或根瘤菌；

所述基质为：包含多种微量元素的泥土，其中，所述多种微量元素的含量范围以ppm计如下：

锂0.05~5、硼0.1~15 、镁5~15 、硅5~15 、硫10~30 、钙50~100 、钛0.1~3 、铁50 ~100 、铜5~15 、硒0.1~3 、鉬0.5~5 、钍0.05~5 、钠5~30 、铝0.5~5 、磷0.5~5 、钾5 ~30 、钒0.1~3 、锰0.5~5 、鈷0.1~3 、锌10~30 、锆0.1~3 和铈0.01~2。

2.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述泥土具体为：泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合。

3.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述放线菌具体为：美国的密西里游动放线菌、抗生链霉菌、金霉素链霉菌、链霉菌或委内瑞拉链霉菌中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述植物杆菌具体为：枯草芽孢杆菌、玉米枯萎病杆菌、稻黄杆菌或甘兰黑腐病杆菌的一种或多种；所述根瘤菌具体为：豇豆根瘤菌或苜宿根瘤菌。

5.根据权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于，所述复合菌种还包括：化学诱变剂，化学诱变剂含量为：0.5~10ppb ；所述化学诱变剂具体为：烷化剂、碱性类似物或Y啶化合物的一种或多种。

6.一种如权利要求1—5任一所述的微生物菌剂的制造方法，其特征在于，所述方法包括：

将所述主体菌类和所述辅助菌类的菌株分别放入实验室培养基培养扩大，其中，所述培养基放在无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值变化在4~10之间，对所述培养基进行震荡操作和增氧操作得到主体菌类的菌液和辅助菌类的菌液；所述震荡操作具体为：连续振荡3天、间断振荡1天和停止振荡3天；

将所述主体菌类的菌液和所述辅助菌类的菌液分别放入灭菌的培养基的种子罐，所述种子罐为无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值变化在4~10之间，对所述种子罐进行增氧操作得到主体菌类的增殖菌液和辅助菌类的增殖菌液；、

将所述主体菌类的增殖菌液和所述辅助菌类的增殖菌液分别放入装有经过灭菌的培养基的发酵罐中发酵再次增殖，所述发酵罐为无菌密闭变温环境，温度变化在1℃~40℃之间，PH值变化在4~10之间，对发酵罐连续曝气5天得到浓度达标的主体菌液和辅助菌液，其中，所述曝气的气液比为：100：1； 

对所述基质进行高温灭菌后，将所述浓度达标的主体菌液和辅助菌液分别放入高温灭菌后的基质搅拌均匀得到初始微生物菌剂；

将所述初始微生物菌剂放入密闭无菌、调温调湿、通风、翻动的转动床上固体发酵三天得到成品微生物菌剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法在得到成品微生物菌剂之后，所述方法还包括：将成品微生物菌剂定量称量装袋，然后真空封口包装后低于15℃保存。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述基质的制造方法具体为：将在泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合中加入矿物质成分，所述矿物质成分具体为：浮石粉、蛭石粉、粉煤灰粉、矿渣粉、冶炼渣粉等矿物质成分的一种或多种的组合。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述基质的制造方法具体为：

将在泥碳土、糖泥、污泥或淤泥中的任意二种或二种以上的组合中加入如权利要求1所述的微量元素成分的人造固体化合物或水溶液来获得基质。

10.一种采用上述微生物菌剂进行黄龙病的防治方法，其特征在于，所述方法包括：

在植株周围土壤挖3~4个能见到须根的土坑或环沟，往坑里或环沟按每棵施100~500克的量施入上述微生物菌剂；

往坑里或环沟在加入有机肥后，浇水盖土，保持土壤润湿。