CN104161750A - 一种stat3抑制剂及其在制药业中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种倍半萜类化合物6-OAP在制备STAT3的抑制剂中的应用，和其在治疗STAT3异常相关的疾病中的应用以及一种治疗与STAT3异常相关疾病的药物组合物，该药物组合物中包含6-OAP。6-OAP能快速结合STAT3，在细胞和动物荷瘤模型中显著抑制STAT3的磷酸化，并显著抑制由炎症因子诱导的STAT3的活性，对其它正常组织无明显毒副作用。具有剂量适中，疗效显著，作用靶点明确，毒副作用小等优点，在临床上具有广泛抗癌与抗炎应用前景。

Description

一种STAT3抑制剂及其在制药业中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种STAT3（信号转导与转录激活因子3）抑制剂及其在治疗与STAT3异常相关的疾病中的应用，更具体涉及能抑制STAT3转录活性的化合物6-O-angeloylplenolin（6-OAP，即以下所述式I化合物）在治疗与STAT3异常相关的疾病，包括但不限于炎症性、自身免疫性及肿瘤性疾病中的应用。

背景技术

炎症是机体对外来刺激的一种病理反应过程，是十分常见而又重要的基本病理过程。许多常见病如肺炎、肠炎、肾炎、外伤感染及各种传染病等都是炎症性疾病，主要由感染、过敏、空气污染、吸烟等不同的病因引起。当人体的免疫系统检测病原体或细胞损伤时，激活的巨噬细胞和中性粒细胞会大量涌入感染组织，这些细胞在吞噬细菌、死细胞和碎片的同时释放各种细胞因子和生长因子等炎症因子，这些炎症因子不仅直接损伤组织，造成局部组织变质，而且与癌症的发生关系密切，研究表明仅高水平的白细胞介素15（IL-15）一项就可在动物模型中导致大颗粒淋巴细胞白血病的发生。

正常情况下，细胞因子的表达和分泌受机体严格调控，在病理状态下，病理检查可发现有大量炎症细胞如粒细胞、巨噬细胞的局部浸润，导致细胞因子如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等表达过高，进一步促进炎症细胞的聚集、活化和炎症介质的释放，加重炎症症状，诱导组织坏死。在许多炎症性疾病中都可检测到上述细胞因子的水平升高。实验证明用某些细胞因子给动物注射，可直接诱导某些炎症现象，充分证明了细胞因子在炎症过程中的重要作用。

目前研究发现慢性炎症在癌症发生发展中起着重要的作用。炎症发生后，炎性细胞在侵润炎症部位的过程中产生大量活性氧和活性氮等物质，这些活性物质诱导DNA损伤，增加细胞癌变的几率。胃癌、肺癌、皮肤癌及肉瘤等很多恶性肿瘤的发生都发现与炎症相关，持续的感染和慢性炎症发生都可以增加细胞突变的几率，加快突变细胞的增殖，促进癌症的发生。例如幽门螺旋杆菌持续感染可以导致慢性萎缩性胃炎的发生，进而发展成胃癌。烟草烟雾中微粒和其他的刺激因子可以促进肺慢性梗阻性疾病，革兰氏阴性细菌同样可以激活巨噬细胞和中性粒细胞产生氧化应激，引起炎症性肺病，由感染、中毒、免疫等各种肺内外因素引起的肺部炎症反应（慢性阻塞性疾病、肺纤维化、急性肺损伤）都可以增加肺癌的发生率。在炎症性肠病（包括溃疡性结肠炎和克罗恩病）中，肠粘膜破坏导致溃疡肉芽增生，统计显示炎症性肠病患者的癌变率明显高于正常人。炎症不仅会促发肿瘤疾病，还可能与肿瘤发展的多个环节相关，包括肿瘤细胞增生、逃逸、浸润、血管生成、转移等。目前，炎症引起恶性肿瘤的分子和细胞机制尚未完全明确。

目前对于炎症与癌症发生的分子基础以及药物开发方面已取得很多突破性进展。研究发现免疫和炎症系统被多种细胞因子调控，这些细胞因子（如IL-1、TNF-α、IL-6、IL-23）通过和受体结合后激活细胞内的转录因子（如AP-1、NF-κB、STAT3）。目前已开始利用细胞因子抑制剂治疗炎症性疾病，例如利用IL-1的受体拮抗剂（IL-lra）和抗TNFα抗体治疗败血性休克、类风湿关节炎等。另外许多细胞因子参与炎症与癌症等疾病的发生，例如，细胞因子（如IL-6、TNF-α、IFN等）可以活化Janus激酶（JAK）/信号转导与转录激活因子（STAT）通路，JAK/STAT的持续活化对炎症与肿瘤的发生具有显著促进作用。在炎症性肠病患者以及小鼠结肠炎模型中均发现STAT家族中的STAT3高度磷酸化，而且STAT3的磷酸化程度与炎症的组织学严重程度呈正相关性，提示STAT3的活化在肠炎和结直肠癌的发病中起着重要作用。STAT家族同样参与肺部的炎症与肿瘤的发生，在其中STAT3能够被更多种细胞因子激活，与炎症性肺病与肺癌的关系最为密切，因为炎症细胞产生一些肿瘤促进因子，诱导细胞增殖和基因突变，促进肿瘤的发生发展。目前发现许多抗炎药同样可以减慢肿瘤发展进度，降低死亡率。抗炎药物不仅可以减少促肿瘤炎症细胞的数量，抑制肿瘤微环境中的细胞因子，还可以抑制肿瘤细胞赖以存活和生长的信号转导蛋白活性，对于肿瘤中血管生成与肿瘤细胞转移同样具有一定的抑制作用。另外STAT3还参与炎症相关的其他许多疾病的发生，细胞因子IL-6与糖尿病肾病的发生相关，而且最近一项研究显示体内敲除STAT3可以阻止糖尿病肾小球病发生，说明IL-6活化STAT3在糖尿病肾病中扮演重要的角色。另外根据《自然医学》杂志上的研究，在银屑病炎性病变区内存在激活的转录因子STAT3，局部以STAT3特异性的寡核苷酸治疗抑制了病变形成，说明STAT3可能是治疗银屑病的一个靶标。

针对炎症与肿瘤发生发展中起关键作用的因子寻找特异结合并抑制其活性的化合物，对炎症与癌症的机理研究以及治疗都具有积极意义。STAT3作为炎症与细胞转化的桥梁，是一类由细胞因子、生长因子等多肽类配体激活的转录因子。STAT3蛋白结构可分为6个功能区：N端的氨基酸保守序列、螺旋区、DNA结合域、连接区、SH2结构域和C端的转录活化区。STAT3是EGFR、JAK、Src等多个致癌性酪氨酸激酶信号通路的汇聚的焦点，当细胞因子或生长因子与酪氨酸激酶受体结合后，STAT3保守SH2结构域中的一个酪氨酸位点（Tyr705）会被磷酸化，两个磷酸化的STAT单体通过SH2结构域形成二聚体，进入核内启动基因的转录，STAT3在许多炎症性疾病和癌症中中均发现较高程度的磷酸化。目前通过计算机虚拟模拟与分子对接筛选出一些针对STAT3的抑制剂，例如STA-21、S3I-201。因为STAT3参与炎症因子诱导的信号通路，STAT3抑制剂在慢性炎症与癌症的治疗中具有十分重要的价值。据报道S3I-201通过抑制STAT3的磷酸化还可以抑制受损肾脏内炎性细胞的侵润，延缓梗阻性肾病的间质纤维化。STAT3抑制剂还可以减弱星形胶质细胞产生炎症因子的功能以及IFN-γ诱导的神经毒性。另外小分子化合物通过抑制STAT3转录活性在乳腺癌、肺癌等多种癌症中可以显著抑制癌细胞的侵袭迁移和增殖能力，在细胞和动物模型中表现出很好的肿瘤杀伤效果。

6-OAP是一种从鹅不食草中分离提取的倍半萜类化合物，分子式为C₂₀H₂₆O₅。6-OAP对STAT3的作用、对与STAT3异常相关的疾病有没有治疗效果，目前均没有报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供如结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物6-OAP在制备STAT3抑制剂中的应用：

本发明的另一个目的是提供如结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物6-OAP在制备预防、治疗和/或预后与STAT3异常相关的疾病，包括但不限于炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤的药物中的应用。

本发明的再一个目的是提供一种预防、治疗和/或预后与STAT3异常相关的疾病，包括但不限于炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤的药物组合物。

一方面，本发明提供如结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物6-OAP在制备STAT3抑制剂中的应用和在降低STAT3的磷酸化水平中的应用。本发明的如结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物6-OAP能作为STAT3的抑制剂的应用，本发明的发明人发现，在分子水平上，天然化合物6-OAP能特异性结合STAT3的SH2结构域，从而抑制STAT3第705位酪氨酸处的磷酸化，降低了STAT3的DNA结合能力与转录活性，进而抑制由IL-6等细胞因子诱导的STAT3的活化、磷酸化与二聚体的形成，降低了STAT3与DNA的结合能力以及转录功能。

另一方面，本发明提供的如结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物6-OAP在制备预防、治疗和/或预后与STAT3异常相关的疾病的药物中的应用，优选地，所述与STAT3异常相关的疾病为与STAT3活化相关的疾病，更优选地，所述疾病为炎症性疾病、自身免疫性疾病或肿瘤。

本发明证明了6-OAP可以特异性的抑制组成型活化和白细胞介素6（IL-6）激活的STAT3蛋白的转录活性，在细胞和动物模型上表现出良好的治疗效果，并且通过抑制STAT3通路具有治疗与STAT3活化相关的疾病的功能。

其中，所述炎症性疾病包括但不限于炎症性肺病、支气管哮喘、慢性肾炎、胃炎、胰腺炎、梗阻性肾病、糖尿病肾小球病、视网膜炎。

所述自身免疫性疾病包括但不限于系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、甲状腺机能元进、青少年糖尿病、银屑病、多发性硬化症、自发性血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化。

所述肿瘤为包括但不限于肺癌、多发性骨髓瘤、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、直肠癌、脑瘤、皮肤癌。

再一方面，本发明提供一种预防、治疗和/或预后与STAT3异常相关的疾病的药物组合物，优选地，所述与STAT3异常相关的疾病为与STAT3活化相关的疾病，更优选地，所述疾病为炎症性疾病、自身免疫性疾病或肿瘤。

其中，所述炎症性疾病包括但不限于炎症性肺病、支气管哮喘、慢性肾炎、胃炎、胰腺炎、梗阻性肾病、糖尿病肾小球病、视网膜炎。

所述自身免疫性疾病包括但不限于系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、甲状腺机能元进、青少年糖尿病、银屑病、多发性硬化症、自发性血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化。

所述肿瘤包括但不限于肺癌、多发性骨髓瘤、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、直肠癌、脑瘤、皮肤癌。

该药物组合物中包含如结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物6-OAP。还可以包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。所述载体或赋形剂可以包括甘油、乙醇、缓冲盐水、生理盐水及其组合。所述药物组合物还可以进一步包含渗透促进剂、抗氧化剂等。

在所述药物组合物中，6-OAP通过抑制炎症细胞侵润，减弱炎症微环境中细胞和生长因子的作用达到抗炎效果，通过抑制肿瘤细胞增殖和降低肿瘤细胞的迁移转化功能达到抗肿瘤效果。

为治疗目的，所述药物组合物可以采用适当的制剂形式并通过适当的给药途径来施用。对于制剂形式，可以将所述药物组合物制成各种剂型，例如溶液剂、脂质体制剂、聚合物制剂、微胶囊剂及其它缓释制剂。对于给药途径，例如对肺癌的给药，可以采用雾化形式的药物组合物；对于皮肤癌，可以采用乳剂或凝胶剂等形式通过局部给药（例如作为液体、乳剂或凝胶剂）来实现。本发明的药物组合物可以全身给药，例如通过静脉注射；或者局部给药等。

其中，所述药物组合物中6-OAP的含量为1.1～2.2mg/kg；优选地，为1.6～2.2mg/kg；更优选地，为1.6mg/kg。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

1、STAT3蛋白在绝大多数正常组织中磷酸化程度很低，在许多炎症部位与癌组织细胞中组成型磷酸化，因此，6-OAP可以特异的作用于自身或细胞因子诱导的具有STAT3活性的炎症细胞与癌细胞，对正常组织的损害较小。

2、目前治疗肺癌等癌症的药物包括顺铂，紫杉醇，吉西他滨、长春瑞滨等，毒副作用较大且复发率高，6-OAP在动物模型中没有明显的毒副作用且显著抑制体内肿瘤生长。

3、STAT3不具备酪氨酸激酶活性，合成直接结合STAT3的小分子化合物比较困难。天然药物中含有丰富的小分子化合物，提供了可供筛选的化合物库。通过结构模拟和分子对接技术发现天然小分子化合物6-OAP可以结合到STAT3蛋白的SH2结构域，在短时间内抑制STAT3的磷酸化和转录活性。

总之，6-OAP快速结合STAT3，在细胞和动物荷瘤模型中显著抑制STAT3的磷酸化，并显著抑制由炎症因子诱导的STAT3的活性，对其它正常组织无明显毒副作用。具有剂量适中，疗效显著，作用靶点明确，毒副作用小等优点，在临床上具有广泛抗炎与抗癌应用前景。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1是软件模拟6-OAP与STAT3蛋白SH2结构域相互作用结合示意图；其中，图1A、1B、1D为6-OAP与STAT3蛋白SH2结构域结合的的静电表面图，图1C为6-OAP与STAT3蛋白SH2结构域结合的的拓扑卡通图，图1A为6-OAP与STAT3蛋白SH2结构域结合的蛋白晶体结构示意图，图1B、1C、1D还显示STAT3蛋白SH2结构域中具有结合药物潜能的活性氨基酸位点。

图2是利用生物素标记化合物6-OAP（Bio-6-OAP）在细胞水平验证其与STAT3相互作用；其中，图2A为STAT3与Bio-6-OAP结合的免疫印迹图，图2B为6-OAP与Bio-6-OAP竞争性结合STAT3的免疫印迹图。

图3是6-OAP对炎症因子白介素6（IL-6）诱导的以及本底STAT3磷酸化水平的抑制效果；其中，图3A为6-OAP抑制IL-6诱导的STAT3的磷酸化的免疫印迹图，图3B为6-OAP抑制本底STAT3的磷酸化的免疫印迹图。

图4是6-OAP对炎症因子IL-6诱导的以及本底STAT3转录活性的抑制效果；其中，图4A为6-OAP抑制A549细胞本底STAT3的转录活性柱状图，图4B为6-OAP抑制IL-6诱导的STAT3的转录活性柱状图。

图5是6-OAP对肺癌细胞活性和增殖作用效果；其中，图5A为6-OAP对5种肺癌细胞系活性抑制效果柱状图，图5B为6-OAP抑制肺癌细胞增殖的生长曲线图。

图6是6-OAP对肺癌细胞转化迁移功能抑制效果示意图；其中，图6A、6B为6-OAP对肺癌细胞迁移功能抑制效果图，图6C为6-OAP对肺癌细胞转化功能抑制效果图。

图7是6-OAP在动物荷瘤模型上对肺癌的治疗效果；图7A、7B为6-OAP对裸鼠体内肺癌细胞H1975生长抑制效果图，图7C为6-OAP处理后裸鼠体重变化图。

图8是6-OAP在昆明鼠体内的急性毒性检测；图8A为6-OAP在高剂量给药后昆明鼠体重变化图,图8B为检测6-OAP对昆明鼠肝功能影响图，图8C为检测6-OAP对昆明鼠肾功能影响图。

具体实施方式

除非特别指明，以下实施例中所用昆明鼠与裸鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均为分析纯级试剂，且可从正规渠道商购获得。

实施例1

利用Autodock Vina软件对6-OAP与STAT3三维结构（参考蛋白质数据库http://www.rcsb.org/pdb/）进行分子对接，STAT3蛋白的SH2结构域作为受体，6-OAP与SH2结构域中Arg609，ser611与Ser613氨基酸残基均能形成氢键（见图1B、C、D），STAT3与SH2结构域分别以拓扑卡通图（见图1C）和静电表面图呈现（见图1A、B、D）。

实施例2

用50μM的生物素（Bio）以及生物素标记的6-OAP（Bio-6-OAP）处理H1975细胞，6h后裂解细胞，利用亲和素与生物素特异结合的原理，链霉亲和素偶联的琼脂糖珠子可以沉淀与Bio-6-OAP相结合的蛋白质（Input为细胞内STAT3总蛋白量内参对照，IP为沉淀后所得STAT3蛋白），发现Bio-6-OAP可以结合STAT3（见图2A）。为了进一步验证6-OAP与STAT3之间结合的特异性，用100μM的6-OAP与50μM Bio-6-OAP同时处理H1975细胞（“+”为加入相应药物处理，“-”为加入溶剂对照），发现6-OAP可以与Bio-6-OAP竞争性的结合STAT3，Bio-6-OAP结合STAT3量明显降低（见图2B），说明小分子化合物6-OAP与可以特异性的稳定结合STAT3。

实施例3

为进一步检测6-OAP是否抑制炎症因子IL-6诱导的Jak2/STAT3通路的活化，先用无血清培养基饥饿处理A549细胞，再用IL-6（10ng/ml）孵育细胞1h，然后用不同浓度的6-OAP（5-10μM）处理3h，或者将饥饿处理的A549细胞用7.5μM的6-OAP预处理3h，再用IL-6（10ng/ml）孵育细胞0-30分钟后收细胞。实验检测STAT3蛋白的磷酸化情况发现，IL-6显著促进STAT3的磷酸化，而用6-OAP处理以后，这种促进作用则被抑制（见图3A,“+”为加入相应药物处理，“-”为加入溶剂对照,Actin为总蛋白内参）。同样用不同浓度的6-OAP（5-10μM）处理H1975与A549细胞12小时(h)，或者用7.5μM的6-OAP在不同时间点（3-24h）处理H1975与A549细胞，发现6-OAP可以短时间内下调肺癌细胞内STAT3（Tyr705）的磷酸化（pSTAT3,见图3B）。以上结果推断，6-OAP在炎症或免疫性疾病中能够抑制炎症因子IL-6诱导的STAT3的磷酸化，并可以显著抑制细胞内本底的STAT3磷酸化水平。

实施例4

为了检验天然化合物6-OAP对炎症因子IL-6的诱导以及对本底STAT3的转录活性的影响，用A549细胞瞬时转染双荧光素酶报告系统来验证6-OAP是否能抑制STAT3依赖的报告基因的表达。萤火虫荧光素酶（Luci）的表达受STAT3结合序列调控，当活化的STAT3结合到该序列时，细胞会启动萤火虫荧光素酶的表达，而海肾荧光素酶的表达不受STAT3的调控，可作为内参用。用不同浓度的6-OAP（5-10μM）处理瞬转双荧光素酶报告系统的A549细胞24h（见图4A），或者无血清提前饥饿已瞬转双荧光素酶报告系统的A549细胞，再用IL-6（30ng/ml）和6-OAP（7.5μM）共同处理细胞24h（见图4B，“+”为加入相应药物处理，“-”为加入溶剂对照）。然后用Promega公司的双荧光素酶报告系统检测试剂盒检测细胞内荧光素酶的相对活性，发现6-OAP可以显著的抑制细胞内本底和IL-6诱导的萤火虫荧光素酶活性，说明6-OAP可以抑制STAT3与目的DNA的结合能力，因而6-OAP在炎症或免疫性疾病中能够抑制炎症因子IL-6诱导的STAT3的转录活性。

实施例5

取对数生长期的肺癌细胞系接种96孔板，24h以后，用不同浓度的6-OAP（2.5-15μM）处理细胞，44h后加入MTT检测试剂再孵育4h，吸去培养基，每孔加入150μl DMSO，震荡10分钟使颜色产物充分溶解，然后用酶标仪测定其在570nm的吸光值（OD570）。抑制率按以下公式计算：抑制率=（加药-对照）/（对照-空白）。结果发现，6-OAP剂量依赖性的显著抑制肺癌细胞活性（见图5A）。用不同浓度的6-OAP（1×10^-6～5×10^-6M）处理肺癌细胞A549与H1975细胞，在0-48h各个时间点收取细胞，用台盼蓝染色后对活细胞计数，发现6-OAP可明显抑制肺癌细胞的增殖，这种作用呈剂量依赖性（见图5B）。

在分子水平上，6-OAP通过抑制本底以及炎症因子IL-6诱导的STAT3活性，显著抑制肺癌细胞的增殖与转化迁移能力。采用浓度为1×10^-6～1×10^-5M的6-OAP处理肺癌细胞系A549和H1975细胞，6-OAP能快速引起肺癌细胞中STAT3的磷酸化水平下调，从而抑制肺癌细胞的活性和迁移功能，并且能显著抑制肺癌细胞系H1975肿瘤裸鼠移植模型中肿瘤细胞的生长。

实施例6

取对数生长期的肺癌细胞A549和H1975接种6孔板，待细胞融合后用小枪头在每孔垂直划几条线，用PBS洗去线中间的细胞。然后用6-OAP（7.5μM）处理并在无血清培养基中继续培养48h，观察细胞向无细胞的划痕区域迁移的情况，并取固定的点在显微镜下用10倍镜头拍照，结果发现6-OAP可以显著的抑制细胞向划线中间的迁移能力（见图6A）。用跨膜小室进一步验证6-OAP对肺癌细胞的迁移能力影响。所用跨膜小室被中间的微孔滤膜（24孔板小室直径6.5mm，膜孔径8μm）分隔成上下两个腔。用6-OAP（7.5μM）预处理A549和H197512h，取1×10⁴细胞接种在跨膜小室的上方，用无血清培养基培养，在小室的下方加入含10%胎牛血清的培养基，胎牛血清作为趋化剂吸引细胞跨膜迁移。24h后将滤膜上方未迁移的细胞擦去，下面迁移的细胞染色后在10倍镜头下随即取五个视野计数统计。结果发现6-OAP显著的抑制肺癌细胞迁移到跨膜小室滤膜的下面（见图6B）。进一步用软琼脂克隆形成实验观察6-OAP对肺癌细胞转化能力的影响。将1.2％低熔点琼脂糖与2×细胞培养基（含有不同浓度的6-OAP）以1:1的体积比混合制备1ml0.6％的底层琼脂，取对数期细胞，胰酶消化后吹散成单个细胞悬液，计数，并调细胞浓度，将0.6％低熔点琼脂糖与2×细胞培养基（含1×10³个细胞）以1:1的体积比混合，制备0.3％的上层琼脂，室温凝固。置于37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养2周，计数含50个细胞以上的克隆，计算细胞集落形成率（见图6C）。以上结果说明6-OAP可以明显降低肺癌细胞的迁移和转化功能。

实施例7

构建裸鼠的H1975肺癌细胞移植模型，将6-OAP溶于载体溶液中，用不同剂量的6-OAP（10mg/kg，15mg/kg和20mg/kg）及溶剂对照组通过尾静脉给药的方式对肺癌裸鼠模型进行治疗，期间对肿瘤体积及体重测量，24天后将裸鼠处死，统计数据发现6-OAP可以显著抑制肿瘤生长（见图7A、7B），但没有明显影响裸鼠体重（见图7C）。说明6-OAP在没有明显毒性前提下对肺癌细胞在体内水平具有显著的疗效。

实施例8

选用昆明鼠用尾静脉注射6-OAP后观察小鼠的急性毒性反应。将6-OAP溶于载体溶液中，用不同剂量的6-OAP（225mg/kg，375mg/kg和600mg/kg）及溶剂对照组在第一天通过尾静脉注射给药。每天称量小鼠体重，连续观察7天未见小鼠死亡以及异常反应。7天后取小鼠血清，检测血清中谷草转氨酶和肌酐含量，结果表明6-OAP没有显著改变血清中的谷草转氨酶和肌酐水平（见图8B、8C），说明6-OAP没有对小鼠的肝脏和肾脏造成损伤，而且与对照组相比，6-OAP没有明显影响小鼠体重（见图8A），说明6-OAP高剂量注射下在体内不具有明显毒性。

尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (9)

1.一种如以下结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物在制备STAT3的抑制剂中的应用和降低STAT3的磷酸化水平中的应用：

2.一种如以下结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物在制备治疗与STAT3异常相关的疾病的药物中的应用：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述式I化合物和其他抗炎药物、抗癌药物联合应用。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述与STAT3异常相关的疾病为与STAT3活化相关的疾病，优选地，所述疾病为炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述炎症性疾病为炎症性肺病、支气管哮喘、慢性肾炎、胃炎、胰腺炎、梗阻性肾病、糖尿病肾小球病、视网膜炎；所述自身免疫性疾病为系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、硬皮病、甲状腺机能元进、青少年糖尿病、银屑病、多发性硬化症、自发性血小板减少性紫癜、溃疡性结肠炎、自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化；所述肿瘤为肺癌、多发性骨髓瘤、头颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、直肠癌、脑瘤、皮肤癌。

6.一种用于治疗与STAT3异常相关的疾病的药物组合物，该药物组合物中包含如以下结构式Ⅰ所示的倍半萜类化合物：

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述载体或赋形剂包括甘油、乙醇、缓冲盐水、生理盐水及其组合。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含渗透促进剂、抗氧化剂。