CN104146972A - 罗哌卡因纳米粒及其制备方法以及其效果的优化实验方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物制备领域，具体而言，涉及罗哌卡因纳米粒及其制备方法以及其效果优化实验方法。该罗哌卡因纳米粒的制备方法，包括如下步骤：(A)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，聚乙烯醇溶液作为水相；(B)将白色乳液在30-40℃条件下蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液；(C)将淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将沉淀洗涤、超声分散、真空冷冻干燥后即得罗哌卡因纳米粒。本发明提供的该罗哌卡因纳米粒的制备方法，体外释放研究发现通过这种方法制得的罗哌卡因纳米粒96h内的释放率为73％左右，缓释效果非常好，一次给药就能满足术后疼痛等急性疼痛的镇痛要求。
Description
技术领域
本发明涉及药物制备领域，具体而言，涉及罗哌卡因纳米粒及其制备方法以及其效果优化实验方法。
背景技术
术后疼痛是围手术期治疗过程中的一个重要问题。由于局部麻醉药能可逆性地阻滞注射部位的神经传导，使机体某个特定区域产生暂时性的感觉丧失，因而注射局部麻醉药是治疗术后疼痛最直接、有效的镇痛方法。罗哌卡因属于临床上常用的局麻药，与其他局麻药相比具有高度的感觉-运动神经分离阻滞特性，非常适合术后镇痛治疗。
但目前临床上所用的罗哌卡因原药注射剂型半衰期短，一般一次给药后仅能维持4-6h疗效，难以满足长期镇痛需要。如采用多次给药或体内导管植入持续给药的方式以满足长时间的镇痛要求，由于给药次数过多又会引起药物蓄积和呼吸、循环的抑制，引起局麻药中毒；长时间留置导管容易引起感染或导管移位、打折，因此这些方法也并不是解决长时间镇痛的最好途径。最终如何能研制出一种缓释效果好、镇痛时间长的新型局麻药剂型才是当前临床亟待解决的难题。
发明内容
本发明的目的在于提供罗哌卡因纳米粒及其制备方法以及其效果的优化实验方法，以解决上述的问题。
本发明实施例提供了罗哌卡因纳米粒的制备方法，包括如下步骤：
(A)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，质量百分比浓度为1-1.5％的聚乙烯醇溶液作为水相，并将所述有机相缓慢滴加入所述水相之中在0-5℃条件下超声处理得到白色乳液，其中所述有机相中的聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物(PLGA)的质量浓度为35-75mg/ml，罗哌卡因(RVC)的质量浓度为5-17mg/ml，所述有机相与所述水相的油水体积比为0.05-0.1；
(B)将所述白色乳液在30-40℃条件下蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液；
(C)将所述淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将所述沉淀洗涤、超声分散、真空冷冻干燥后即得罗哌卡因纳米粒。
本发明实施例提供的罗哌卡因纳米粒的制备方法，其采用O/W乳化-溶剂挥发法制备罗哌卡因纳米粒，由于这种方法比较适合于亲脂性药物，那么罗哌卡因盐酸盐原料药为水溶性药,为提高包封率及载药量，在纳米粒制备中将其还原为罗哌卡因游离碱以后再进行制备，而且油水混合时需要控制在0-5℃以防止超声设备运转放热损坏纳米粒，体外释放研究发现通过这种方法制得的罗哌卡因纳米粒96h内的释放率为73％左右，缓释效果非常好，一次给药就能满足术后疼痛等急性疼痛的镇痛要求。
优选地，所述步骤(A)中的罗哌卡因游离碱的具体制备方法为：将罗哌卡因盐酸盐溶于水制成饱和水溶液，加入氨水得到沉淀物，将所述沉淀物洗涤后干燥即得罗哌卡因游离碱，为提高包封率及载药量使得RVC制备纳米粒时更易被包裹，在纳米粒制备中将其还原为亲脂性的罗哌卡因游离碱。
优选地，所述步骤(A)中，其中所述有机相中的聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度为35-65mg/ml，罗哌卡因的质量浓度为5-15mg/ml，所述有机相与所述水相的油水体积比为0.08-0.1，这三个因素通过考察发现为对RVC-PLGA-NPS的性质影响较为显著的3个因素，因此其具体控制上述的范围内能使得制备出的纳米粒具有非常高的包封率和载药量，以及纳米粒的形态较好。
优选地，所述步骤(B)中，白色乳液进行蒸发操作时采用旋转蒸发仪，操作时间为1-1.5h，为了使有机相充分蒸发操作时间为一个小时左右。
优选地，所述步骤(C)中，超声分散时加质量百分比浓度为15-17％的甘露醇溶液，甘露醇溶液不仅能在超声分散时提供良好的分散性能，并且是非常适合于RVC-PLGA-NPS纳米粒的冻干支撑剂，冻干后的纳米粒外观疏松、饱满。
优选地，所述步骤(C)中，真空冷冻干燥的时间为10-15h，为了便于保存将溶液进行冷冻干燥成粉末。
本发明实施例提供的罗哌卡因纳米粒的制备方法制备出的罗哌卡因纳米粒，其粒径在300nm左右已经达到纳米颗粒级别，纳米粒外观光滑平整、表面很多呈蜂窝状的圆孔，相比于现在一些只能达到微球药物颗粒的产品，其缓释时间更长，释放更稳定，临床使用时即使用药总量达到正常的2-3倍，也不会引起毒性反应，危及到病人的生命，而且其包封率在60-80％、载药量在8-15％之间，性能比较好。
本发明实施例还提供了一种罗哌卡因纳米粒的效果优化实验方法，包括如下步骤：
(A)采用Design Expert8.05软件进行星点-效应面优化设计，将聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度(X1)、罗哌卡因的质量浓度(X2)与油水体积比(X3)经过单因素实验后的最优值填入星点设计因素水平表的相应处；
(B)然后由上述软件自动安排出实验次数以及每次罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的数值，完成上述实验并计算出每次实验的载药量、包封率以及罗哌卡因纳米粒的粒径；
(C)根据以下公式对上述每次实验数据进行非线性拟合，计算考察指标OD的数值，OD＝b0+b1X1+b2X2+b3X3+b12X1X2+b23X2X3+b13X1X3+b11X1 2+b22X2 2+b33X3 2，其中X1-X3代表影响因子，b0代表截距，b代表各影响因子的系数；
(D)将每次实验计算得出的载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及考察指标这四个数值填入软件中的实验结果表格中，所述软件根据效应面优化设计自动分析结果得出载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及OD值这四个指标最优条件下的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的具体数值；
(E)将用优化后的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的具体数值制备出的罗哌卡因纳米粒进行形态学研究以及体外释放分析实验。
本发明实施例提供的罗哌卡因纳米粒效果的优化实验方法，采用Design Expert8.05软件进行星点-效应面优化设计实验，通过优化得出最佳包封率、载药量、纳米粒的粒径条件下的实验条件，以及通过验证这种优化实验方法准确度高、误差小，这种优化后的实验条件下做出的罗哌卡因纳米粒具有很好的形态特征以及体外释放效果，为罗哌卡因纳米粒的优化实验方法提供了可靠、科学与有效的方法。
优选地，在所述步骤(E)之后还包括如下步骤：将用优化后的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的数值实验做出的罗哌卡因纳米粒的载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及OD值与所述软件模拟出的结果进行对比以验证软件模拟的准确性。
优选地，用优化后的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的数值实验做出罗哌卡因纳米粒的平行实验次数为3-4次，单次实验验证并不能说明其普遍性，因此多做几次平行实验以更好的说明软件模拟的准确程度。
附图说明
图1示出了本发明实施例罗哌卡因纳米粒的扫描电镜图；
图2示出了本发明实施例罗哌卡因纳米粒的体外药物释放曲线图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例子并结合附图对本发明做进一步的详细描述。
实施例1
罗哌卡因纳米粒的制备方法如下：
(A)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，聚乙烯醇溶液作为水相，并将有机相缓慢滴加入水相之中在0℃条件下超声处理得到白色乳液，其中有机相中的PLGA的质量浓度为35mg/ml，RVC的质量浓度为5mg/ml，有机相与水相的油水体积比为0.05。
(B)将所述白色乳液在30℃条件下蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液；
(C)将淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将沉淀洗涤、超声分散、真空冷冻干燥后即得罗哌卡因纳米粒RVC-PLGA-NPS。
实施例2
罗哌卡因纳米粒的制备方法如下：
(A)将罗哌卡因盐酸盐溶于水制成饱和水溶液，加入氨水得到沉淀物，将所述沉淀物洗涤后干燥即得罗哌卡因游离碱；
(B)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，质量百分比浓度为1％的聚乙烯醇溶液作为水相，并将有机相缓慢滴加入水相之中在5℃条件下超声处理得到白色乳液，其中有机相中的PLGA的质量浓度为75mg/ml，RVC的质量浓度为17mg/ml，有机相与水相的油水体积比为0.1。
(C)将所述白色乳液在40℃条件下采用旋转蒸发仪蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液，旋转蒸发时间为1.5h；
(D)将淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将沉淀洗涤、质量百分比浓度为15％的甘露醇溶液超声分散、真空冷冻干燥15h后即得罗哌卡因纳米粒RVC-PLGA-NPS。
实施例3
罗哌卡因纳米粒的制备方法如下：
(A)将罗哌卡因盐酸盐溶于水制成饱和水溶液，加入质量浓度为0.9g/ml的氨水使其完全沉淀得到沉淀物，将沉淀物洗涤至中性后在42℃条件下干燥至恒重即得罗哌卡因游离碱；
(B)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，质量百分比浓度为1.5％的聚乙烯醇溶液作为水相，并将有机相缓慢滴加入水相之中在2℃条件下超声处理得到白色乳液，其中有机相中的PLGA的质量浓度为65mg/ml，RVC的质量浓度为15mg/ml，有机相与水相的油水体积比为0.08。
(C)将所述白色乳液在37℃条件下采用旋转蒸发仪蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液，旋转蒸发时间为1.5h；
(D)将淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将沉淀洗涤、质量百分比浓度为17％的甘露醇溶液超声分散、真空冷冻干燥10h后即得罗哌卡因纳米粒RVC-PLGA-NPS。
实施例4
罗哌卡因纳米粒的制备方法如下：
(A)将罗哌卡因盐酸盐溶于水制成饱和水溶液，加入质量浓度为0.9g/ml的氨水使其完全沉淀得到沉淀物，将沉淀物洗涤至中性后在42℃条件下干燥至恒重即得罗哌卡因游离碱；
(B)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，质量百分比浓度为1％的聚乙烯醇溶液作为水相，并将有机相缓慢滴加入水相之中在2℃条件下超声处理得到白色乳液，其中有机相中的PLGA的质量浓度为50mg/ml，RVC的质量浓度为12.5mg/ml，有机相与水相的油水体积比为0.08。
(C)将所述白色乳液在37℃条件下采用旋转蒸发仪蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液，旋转蒸发时间为1h；
(D)将淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将沉淀洗涤、质量百分比浓度为15％的甘露醇溶液超声分散、真空冷冻干燥10h后即得罗哌卡因纳米粒RVC-PLGA-NPS。
实施例5
罗哌卡因纳米粒的制备方法如下：
(A)将罗哌卡因盐酸盐溶于水制成饱和水溶液，加入质量浓度为0.9g/ml的氨水使其完全沉淀得到沉淀物，将沉淀物洗涤至中性后在42℃条件下干燥至恒重即得罗哌卡因游离碱；
(B)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，质量百分比浓度为1％的聚乙烯醇溶液作为水相，并将有机相缓慢滴加入水相之中在2℃条件下超声处理得到白色乳液，其中有机相中的PLGA的质量浓度为52.82mg/ml，RVC的质量浓度为8.04mg/ml，有机相与水相的油水体积比为0.1。
(C)将所述白色乳液在37℃条件下采用旋转蒸发仪蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液，旋转蒸发时间为1h；
(D)将淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将沉淀洗涤、质量百分比浓度为15％的甘露醇溶液超声分散、真空冷冻干燥10h后即得罗哌卡因纳米粒RVC-PLGA-NPS。
实施例6
罗哌卡因纳米粒的效果优化实验方法如下：
(A)将实施例4的PLGA的质量浓度(X1)、RVC的质量浓度(X2)与油水体积比(X3)的具体数值填于星点设计因素水平表中的0水平的对应行，然后Design Expert8.05软件设计出实验次数，以及每次实验的具体实验条件参数，具体数值见下表1前三列，软件一共设计出了20次实验，而且每次实验的X1-X3值也显示在表中，只需要对照数据做实验得到相应的罗哌卡因纳米粒，并进行计算载药量、包封率以及罗哌卡因纳米粒的粒径，也填入相应的表1中的对应列，为了考察X1-X3值的相关性以及准确性，因此软件还会根据OD＝b0+b1X1+b2X2+b3X3+b12X1X2+b23X2X3+b13X1X3+b11X1 2+b22X2 2+b33X3 2进行非线性拟合，(其中X1-X3代表影响因子，b0代表截距，b代表各影响因子的系数)，所以计算出来的OD值也要作为优化实验的一个优化标准填入表1的相应列中，具体见下表1：
表1 星点设计的实验安排和结果
表2 模型拟合的结果
从表1-2中可以看出，随着RVC和PLGA浓度的增加，纳米粒的包封率和载药量逐渐增加，到一定数值时反而随着浓度的增加而下降；而粒径则呈现相反的情况，即随着浓度的增加先下降后升高，主要原因可能是，随着有机相PLGA浓度的增加，产生了黏滞度大和内部结构更紧密的有机相，均质时剪切力相对减小，同时外水相对其乳化作用相对减弱，从而形成较大乳滴，最终产生粒径较大纳米粒。
其中，包封率与载药量的计算方法如下：
(1)检测波长的确定
精密称取25mg RVC游离碱，置50ml容量瓶中，以二氯甲烷(CH2Cl2)定容，得500ug·ml-1贮备液，用移液枪精密量取1.0ml贮备液，置50ml容量瓶中，定容为10ug·ml-1RVC的CH2Cl2溶液，作为对照品溶液。分别精密称取10mg RVC-PLGA-NPS和空白纳米粒，分别置于100ml容量瓶，并以CH2Cl2定容，作为样品溶液和辅料溶液。于200-400nm波长内进行扫描，发现RVC最大吸收波长为232nm，且所有辅料在该波长处的紫外吸收对测定结果无干扰，故选232nm为检测波长；
(2)标准曲线的绘制
用移液枪分别精密取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml步骤(1)中制备的RVC游离碱贮备液，加至50ml容量瓶中，定容，配成浓度为10、15、20、25、30ug·ml-1的CH2Cl2溶液。于232nm处测定其吸收度A，以A对质量浓度C进行线性回归，得回归方程C＝46.087A+0.745(R2＝0.9992)，RVC检测浓度的线性范围为10-30ug·ml-1；
(3)罗哌卡因纳米粒包封率和载药量的测定
精密称取适量RVC-PLGA-NPS，溶于适量蒸馏水中，再把该溶液加入五倍CH2Cl2中，振荡、涡旋10min，静置后用分液漏斗取下层液，在232nm波长处扫描测得A，代入(2)中的标准方程得到纳米粒中RVC的含量，根据测得的一定质量纳米粒中的药物量按照下式计算载药量和包封率：
载药量＝纳米粒中所含药物量/纳米粒的总重量×100％。
包封率＝系统中包封的药量/系统中包封与未包封的总药量×100％；
(4)包封率和载药量的测定方法的验证性实验
分别精密称取4、5、6mg的RVC游离碱于三个10ml的EP管中，均加入1ml空白纳米粒再分散液和5ml的CH2Cl2，振荡、涡旋10min，静置后用分液漏斗取1ml下层液于50ml容量瓶，用CH2Cl2定容，得浓度为15、20、25ug·ml-1的样品溶液，在232nm波长处扫描测得吸光度，3种溶液分别测定3次，代入标准方程,计算回收率，分别为98.44％，99.35％，94.71％。
将上述配制的高、中、低质量浓度的样品溶液，用紫外分光光度法于波长232nm处测定吸收度，分别于1天内测定5次及每天测定1次，共测定5天，其高、中、低质量浓度溶液的日内精密度分别为0.1％、0.2％、0.14％，日间精密度分别为0.2％、0.3％、0.13％。
从回收率与精密度的具体数据可以看出，本发明所用的如何测定包封率与载药量的方法是精确度很高的。
(B)软件会自动模拟出将这20次实验的载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及OD值这四个指标最优条件下的RVC的质量浓度、PLGA的质量浓度与油水体积比的具体数值，一般软件都会给出10个左右最优的对应数值，其中第一个为最佳值，具体如下：PLGA的质量浓度为52.82mg/ml，RVC为8.04mg/ml，油水体积比为1:10；
(C)用优化后的RVC的质量浓度、PLGA的质量浓度与油水体积比的具体数值制备出的罗哌卡因纳米粒进行形态学研究以及体外释放分析实验:
纳米粒进行形态学研究结果：取实施例5制备的RVC-PLGA-NPS适量，以双蒸水稀释后，用Malvem Zetasizernano_Zs90纳米粒度测定仪测定纳米粒的平均粒径及粒径分布，纳米粒平均粒径为(331.2±2.1)nm，粒径分布较窄，多分散系数(PI)为0.045，Zeta电位为8.34±1.32，扫面电镜下观察结果如图1所示。
本发明中，对实施例1-4制备的RVC-PLGA-NPS纳米粒参照上面的方法也进行了形态学研究，扫描电镜观察结果和实施例5的扫描电镜观察结果很像。
体外释放分析实验过程及结果：
实验过程：精密称取实施例5制备的RVC-PLGA-NPS25mg，装入预先处理好的透析袋中，加入4ml pH7.4磷酸盐缓冲溶液，两端扎紧，放入装有适量体积pH7.4磷酸盐缓冲溶液的具塞玻璃瓶中，于37℃，气浴恒温振荡80rpm，定时取样，同时补加等温、同体积的释药介质；样品溶液以紫外分光光度法测定光密度，每个样品重复测定3次，并绘制纳米粒的体外释放曲线，同样的实验方法绘制出罗哌卡因盐酸盐的释放曲线。
实验结果：如图2所示，横坐标代表释放时间，纵坐标代表释放率，从图中可以看出，纳米粒体外释药曲线分为突释、缓释两个阶段。在突释阶段，RVC释放几乎呈线性，8h累积释放量达31.21％。这部分RVC释放较快，可能是因为药物吸附在纳米粒表面，或者以较弱的作用力结合在纳米粒表层，从而较易脱落。另外，溶液内外的浓度差起始较大，也可能促使RVC的加快释放。随后96h内，RVC体外释药进入缓释阶段，累积释放量为73.4％，这可能是随着时间的延长，PLGA出现了生物降解，而在降解过程中纳米粒表面也不断形成孔隙，从而使包裹内部的RVC以扩散方式逐渐释放，从而起到了缓释的效果。
比较两个曲线发现，96h内纳米粒的累积释放率达到73％，而盐酸罗哌卡因在8h内的释放率为82.5％，进一步说明RVC-PLGA-NPS具有明显的缓释作用，同时体外释放曲线拟合结果为Higuchi释放模型，Higuchi方程为Q＝23.86+5.05t1/2(R2＝0.9756,t1/2＝26.22h)。
本发明中，对实施例1-4制备的RVC-PLGA-NPS纳米粒参照上面的方法也测定了其体外释放曲线，所绘制的体外释放曲线和实施例5的产品的的体外释放曲线基本一致。
(D)将实验条件为：PLGA的质量浓度为52.82mg/ml，RVC为8.04mg/ml，油水体积比为1:10时做出罗哌卡因纳米粒，平行实验做3次后，测定其载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径与软件模拟出的预测值进行对比，以验证其选出的最优条件的准确度，具体结果见下表3：
表3 模型准确度验证
| 指标 | 预测值 | 实测值 | 偏差(％) |
| 包封率 | 79.28 | 74.82±2.53 | 5.06 |
| 载药量 | 14.84 | 13.81±1.35 | 6.73 |
| 粒径 | 332.1 | 331.21±2.11 | 0.31 |
| OD | 1.02 | 0.98±0.21 | 3.9 |
注：偏差＝(预测值-测定值)/预测值×100％
从上表3中可以看出，优化工艺制备的纳米粒包封率、载药量和粒径的预测值和实测值吻合良好且符合设计要求，说明该方法运用星点设计，对非线性模式进行设计和研究，充分考虑到各影响因素间的交互作用，同时在中心点进行重复实验，提高了实验准确性，可信度较好，值得应用和推广。
本发明实施例通过还原罗哌卡因游离碱，经过星点设计-效应面优化法优化纳米粒的具体性能参数，制得纳米粒外观光滑圆整，表面多孔，呈蜂窝状，平均粒径为(331.21±2.11)nm，粒径在300-350nm之间的纳米粒占80％，载药量(13.81±1.35)％，包封率(74.82±2.53)％。同时体外释放研究发现制得的纳米粒在96h内的释放率为73％，有明显的缓释效果，为RVC-PLGA-NPS的注射缓释剂型等研究奠定基础。
本发明实施例中所用到的药品与设备来源如下：
TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)，超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Nicomp380纳米激光粒度及电位仪(美国库尔特电子仪器公司)。
盐酸罗哌卡因(批号110502，纯度99.6％)，PLGA(50/50，深圳绿宝生物有限公司，MW：600000，批号：20130411)，聚乙烯醇(PVA，广州医药化学试剂公司分装，批号：870827，MW：22000，纯度：88％)；二氯甲烷、氢氧化钠、磷酸二氢钾等均为分析纯。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种罗哌卡因纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(A)将罗哌卡因游离碱与聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物溶解于二氯甲烷中作为有机相，质量百分比浓度为1-1.5％的聚乙烯醇溶液作为水相，并将所述有机相缓慢滴加入所述水相之中在0-5℃条件下超声处理得到白色乳液，其中所述有机相中的聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度为35-75mg/ml，罗哌卡因的质量浓度为5-17mg/ml，所述有机相与所述水相的油水体积比为0.05-0.1；
(B)将所述白色乳液在30-40℃条件下蒸发除去有机相后得到淡蓝色乳光悬浮液；
(C)将所述淡蓝色乳光悬浮液离心分离得到沉淀，并将所述沉淀洗涤、超声分散、真空冷冻干燥后即得罗哌卡因纳米粒。
2.根据权利要求1所述的一种罗哌卡因纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中的罗哌卡因游离碱的具体制备方法为：将罗哌卡因盐酸盐溶于水制成饱和水溶液，加入氨水得到沉淀物，将所述沉淀物洗涤后干燥即得罗哌卡因游离碱。
3.根据权利要求1所述的一种罗哌卡因纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中，其中所述有机相中的聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度为35-65mg/ml，罗哌卡因的质量浓度为5-15mg/ml，所述有机相与所述水相的油水体积比为0.08-0.1。
4.根据权利要求1所述的一种罗哌卡因纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(B)中，白色乳液进行蒸发操作时采用旋转蒸发仪，操作时间为1-1.5h。
5.根据权利要求1所述的一种罗哌卡因纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(C)中，超声分散时加质量百分比浓度为15-17％的甘露醇溶液。
6.根据权利要求1所述的一种罗哌卡因纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤(C)中，真空冷冻干燥的时间为10-15h。
7.权利要求1-4任一项罗哌卡因纳米粒的制备方法制备出的罗哌卡因纳米粒。
8.一种罗哌卡因纳米粒的效果优化实验方法，其特征在于，包括如下步骤：
(A)采用Design Expert8.05软件进行星点-效应面优化设计，将聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度(X1)、罗哌卡因的质量浓度(X2)与油水体积比(X3)经过单因素实验后的最优值填入星点设计因素水平表的相应处；
(B)然后由上述软件自动安排出实验次数以及每次罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的数值，完成上述实验并计算出每次实验的载药量、包封率以及罗哌卡因纳米粒的粒径；
(C)根据以下公式对上述每次实验数据进行非线性拟合，计算考察指标OD的数值，OD＝b0+b1X1+b2X2+b3X3+b12X1X2+b23X2X3+b13X1X3+b11X1 2+b22X2 2+b33X3 2，其中X1-X3代表影响因子，b0代表截距，b代表各影响因子的系数；
(D)将每次实验计算得出的载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及考察指标这四个数值填入软件中的实验结果表格中，所述软件根据效应面优化设计自动分析结果得出载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及OD值这四个指标最优条件下的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的具体数值；
(E)将用优化后的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的具体数值制备出的罗哌卡因纳米粒进行形态学研究以及体外释放分析实验。
9.根据权利要求8所述的一种罗哌卡因纳米粒的效果优化实验方法，其特征在于，在所述步骤(E)之后还包括如下步骤：将用优化后的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的数值实验做出的罗哌卡因纳米粒的载药量、包封率、罗哌卡因纳米粒的粒径以及OD值与所述软件模拟出的结果进行对比以验证软件模拟的准确性。
10.根据权利要求9所述的一种罗哌卡因纳米粒的效果优化实验方法，其特征在于，用优化后的罗哌卡因的质量浓度、聚乳酸聚羟乙酸嵌段共聚物的质量浓度与油水体积比的数值实验做出罗哌卡因纳米粒的平行实验次数为3-4次。
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