CN104130948B - 一种牛樟芝菌丝体培养基的制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种牛樟芝菌丝体培养基的制备方法及应用，菌草灵芝菌糟提取物、葡萄糖、麦芽糖、酵母提取物、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O和VB₁按照一定比例混合而成的液体培养基。本发明具有使牛樟芝菌丝体具有萌发快、大量、快速生长的特点，且菌丝多糖含量可达0.43-0.97%、三萜含量为0.2%-0.41%，分别比传统培养基高2倍，可为实际生产中提供大量牛樟芝菌丝体的新方法，其制备方法简单，可重复性强，操作简便易行。

Description

一种牛樟芝菌丝体培养基的制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种牛樟芝菌丝体培养基的制备方法及应用，属于生物科技领域。

背景技术

牛樟芝（Antrodiacinnamomea）是我国台湾地区特有的一种药用菌，具有保肝、解毒、抗炎症、抗氧化等多种功效，研究到目前为止牛樟树（Cinnamomumkanehirai）是牛樟芝的唯一宿主，由于其宿主在自然界中极少量及牛樟芝的生长速度缓慢，牛樟芝被誉为“森林中的红宝石”。有研究表明，牛樟芝菌丝体具有与牛樟芝子实体极为相似的保健功能，为了解决人们对牛樟芝日益增长的需求，本发明筛选菌草灵芝菌糟提取物、葡萄糖、麦芽糖等作为培养基可以大量、快速刺激牛樟芝菌丝体生长，提高其有效成分含量的同时对樟芝市场发展也具有正确的引导作用，将为我国菌业产生重大的经济和社会效益。

发明内容

为了提高牛樟芝菌丝体生产能力，本发明提供了一种牛樟芝菌丝体培养基的制备方法及应用。本发明解决的技术问题所采用的技术方案是：

一种牛樟芝菌丝体培养基，、所述培养基配方按质量百分数为葡萄糖1.0-3.0%，蛋白胨0.5-1.0%，麦芽糖0.3-1.0%，酵母提取物0.3-1.0%，0.1-0.3%KH₂PO₄，0.1-0.3%MgSO₄·7H₂O，VB₁0.1%以及0.1%-0.5%的菌草灵芝菌糟提取物溶于1000mL水中，调节pH值为5-5.5，每100mL分装至250mL容量瓶中，在121℃灭菌20min。培养基冷却后接入牛樟芝菌种。

所述菌草灵芝菌糟提取物制备方法包括以下步骤：

（1）选择无杂菌、无虫害、灵芝菌丝体丰富、出芝一次的优质菌草灵芝菌糟；

（2）选取无病虫害、灵芝菌丝体丰富的菌草灵芝菌糟，经破袋、破碎、晒干后称取20g溶于1000mL水中，在80-90℃的条件下水浴加热真空回流3h后过滤，浸提液并浓缩至30mL，在-80℃条件下冷冻后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末状固体，即为菌草灵芝菌糟提取物。

一种牛樟芝菌丝体培养基在牛樟芝菌丝体生产中的应用

一、菌草灵芝菌糟提取物培养基组分及配比

该牛樟芝菌丝体培养基在传统培养基的条件下加入浓度为0.1-0.5%的菌草灵芝菌糟提取物。

所述的菌草灵芝菌糟提取物是由优质菌草灵芝菌糟，经破袋、破碎、干燥后用热水回流浸提装置，经过水浸提过滤后浓缩，进行冷冻干燥后得到的棕褐色粉末状固体。

所述的菌草灵芝菌糟是指挑选无杂菌、无虫害、灵芝菌丝体丰富、出芝一次的优质菌草灵芝菌糟，于60℃干燥后避光密封贮存。

添加量为0.1%-0.5%的菌草灵芝菌糟添加量是指固体干重占溶液体积的百分比。

二、牛樟芝培养基的制备方法及牛樟芝菌丝培养方法

菌草灵芝菌糟提取物制备工艺条件如下：以10-20g菌草灵芝菌糟加入1000mL水中，在80-90℃的条件下水浴加热回流3h后过滤并浓缩至20-50mL，在-80℃条件下冷冻后放入真空干燥箱，干燥成棕褐色粉末状固体。

本发明的菌草灵芝菌糟浸出液培养牛樟芝的方法：在28℃，120rpm，黑暗培养16天。

本发明的所培养的牛樟芝菌丝在第16天时生物量高达9g/L（DW），且接种培养2-3天后菌丝开始大量、萌发快速。灭菌冷却后的培养基在无菌条件下接入牛樟芝菌种，菌丝生物量可达8.57-9.2g/L（DW）菌丝中的多糖含量达0.43-0.97%、三萜含量可达0.2%-0.41%。

本发明所培养的牛樟芝菌丝利用葡聚糖为对照品以分光光度法测定多糖含量，利用香草醛-冰醋酸法测定三萜含量，菌草灵芝菌糟提取物培养牛樟芝菌丝多糖为0.43-0.97%和三萜为0.2%-0.41%。

本发明的效益是：

菌草灵芝菌糟是生产灵芝后的废菌料，在我国数量多且来源广，利用菌草灵芝菌糟提取物培养牛樟芝菌丝可使牛樟芝菌丝大量、迅速萌发；同时，菌草灵芝菌糟提取物作为添加剂培养牛樟芝菌丝体多糖含量0.49%-0.97%，是传统培养基的1-2倍，三萜含量0.2%-0.41%；其牛樟芝菌丝生物量是传统培养基的1-1.5倍。菌草灵芝菌糟是一种大量、快速制备牛樟芝菌丝体的材料，即可提高牛樟芝菌丝体的生物量，又可以提高其有效含量，可以作为培养基代替传统的培养基，大量快速生产牛樟芝菌丝体。

具体实施方式

实施例1

选取无病虫害、灵芝菌丝体丰富的菌草灵芝菌糟，经破袋、破碎、晒干后称取20g溶于1000mL水中，在90℃的条件下水浴加热真空回流3h后过滤，浸提液并浓缩至30mL，在-80℃条件下冷冻后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末状固体，即为菌草灵芝菌糟提取物。

本实施例的牛樟芝菌丝体培养基的制备：葡萄糖2.5%，蛋白胨0.5%，麦芽糖0.3%，酵母提取物0.3%，0.1%KH₂PO₄，0.1%MgSO₄·7H₂O，VB₁0.1%以及0.1%的菌草灵芝菌糟提取物溶于1000mL水中，调节pH值为5.5，每100mL分装至250mL容量瓶中，在121℃灭菌20min，冷却后备用。

培养方法：在28℃，120rpm，黑暗培养16天。

经测量，其菌丝生长量为8.67g/L（DW），多糖含量为0.97%，三萜含量为0.28%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

实施例2

选取无病虫害、灵芝菌丝体丰富的菌草灵芝菌糟，经破袋、破碎、晒干后称取20g溶于1000mL水中，在85℃的条件下水浴加热真空回流3h后过滤，浸提液并浓缩至40mL，在-80℃条件下冷冻后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末状固体，即为菌草灵芝菌糟提取物。

本实施例的牛樟芝菌丝体培养基的制备：葡萄糖3.0%，蛋白胨1.0%，麦芽糖1.0%，酵母提取物1.0%，0.3%KH₂PO₄，0.3%MgSO₄·7H₂O，VB₁0.1%以及0.5%的菌草灵芝菌糟提取物溶于1000mL水中，调节pH值为5，每100mL分装至250mL容量瓶中，在121℃灭菌20min。培养基冷却后接入牛樟芝菌种。

培养方法：在28℃，120rpm，黑暗培养16天。

经测量，其菌丝生长量为9.2g/L（DW），多糖含量为0.78%，三萜含量为0.41%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

实施例3

选取无病虫害、灵芝菌丝体丰富的菌草灵芝菌糟，经破袋、破碎、晒干后称取20g溶于1000mL水中，在90℃的条件下水浴加热真空回流3h后过滤，浸提液并浓缩至20mL，在-80℃条件下冷冻后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末状固体，即为菌草灵芝菌糟提取物。

本实施例的牛樟芝菌丝体培养基的制备：葡萄糖1.0%，蛋白胨0.5%，麦芽糖0.5%，酵母提取物0.5%，0.2%KH₂PO₄，0.2%MgSO₄·7H₂O，VB₁0.1%以及0.1%的菌草灵芝菌糟提取物溶于1000mL水中，调节pH值为5.5，每100mL分装至250mL容量瓶中，在121℃灭菌20min。培养基冷却后接入牛樟芝菌种。

培养方法：在28℃，120rpm，黑暗培养16天。

经测量，其菌丝生长量为9.0g/L（DW），多糖含量为0.85%，三萜含量为0.35%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (2)

1.一种牛樟芝菌丝体培养基，其特征在于：所述培养基配方按质量百分数为葡萄糖1.0-3.0%，蛋白胨0.5-1.0%，麦芽糖0.3-1.0%，酵母提取物0.3-1.0%，0.1-0.3%KH₂PO₄，0.1-0.3%MgSO₄·7H₂O，VB₁0.1%以及0.1%-0.5%的菌草灵芝菌糟提取物溶于1000mL水中，调节pH值为5-5.5，每100mL分装至250mL容量瓶中，在121℃灭菌20min；

所述菌草灵芝菌糟提取物制备方法包括以下步骤：

（1）选择无杂菌、无虫害、灵芝菌丝体丰富、出芝一次的优质菌草灵芝菌糟；

（2）选取无病虫害、灵芝菌丝体丰富的菌草灵芝菌糟，经破袋、破碎、晒干后称取20g溶于1000mL水中，在80-90℃的条件下水浴加热真空回流3h后过滤，浸提液并浓缩至30mL，在-80℃条件下冷冻后放入真空干燥箱中，得到棕褐色粉末状固体，即为菌草灵芝菌糟提取物。

2.一种如权利要求1所述的一种牛樟芝菌丝体培养基在牛樟芝菌丝体生产中的应用。