CN104043131A - 含聚l-氨基酸及淀粉的活性蛋白药物口服微球制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及含有聚L-氨基酸和淀粉的活性蛋白药物口服微球，以聚L-氨基酸和淀粉作为骨架基质，所述骨架基质至少含有9.0％-95.0％重量的聚L-氨基酸和8.0％-80.0％重量的淀粉。本发明将聚L-氨基酸和淀粉本身具有的特性和微球本身具有的给药途径优势相结合，掩盖药物的不良气味及口味，提高药物的稳定性，减少配伍禁忌，降低毒副作用，缓释或控制释放药物，靶向给药，避免药物在口服过程中被消化道水解酶以及胃酸环境的破坏，增加口服时的生物活性药物利用度。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域，具体涉及一种以聚L-氨基酸和淀粉为主要材料制备口服微球固体制剂；
本发明还涉及所述微球固体制剂的制备方法。
背景技术
用作药物缓释控释材料的物质要有良好的生物相容性，无毒，能在体液中被酶、微生物等降解，聚合物的主链断裂，分子量逐渐减小，最终代谢成水和CO2或亲水性较大的单体排出体外。用作药物缓释控释的材料一般可分为两类，天然药用高分子和合成高分子。天然药用高分子材料按照化学组成和结构单元可以分为多糖类、蛋白质类和其他类。多糖类是糖基间通过苷键连接而成的一类高分子聚合体，用作微球载体材料的有壳聚糖、阿拉伯胶、海藻酸钠、果胶、淀粉等。蛋白质类主要是用动物原料制取的一类聚L-氨基酸，用作微球载体材料的蛋白质主要有明胶、清蛋白、酪蛋白。
微球是指利用高分子材料作为基质，将药物包裹形成骨架型的微小球状实体，可以掩盖药物的不良气味及口味，提高药物的稳定性，减少配伍禁忌，降低毒副作用，缓释或控制释放药物，靶向给药，避免药物在口服过程中被消化道水解酶以及胃酸环境的破坏，增加口服时的生物活性药物利用度。微球是蛋白类药物的一类重要给药途径。
蛋白微球制备方法主要分为三类，乳化-液中干燥法、喷雾干燥法、相分离法。乳化-液中干燥法、相分离法制备过程通常需要二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、甲醛等溶剂，存在残留问题，易引起蛋白类药物变性失活和毒副作用；喷雾干燥法制备微球的工艺条件之一就是高温干燥，温度一般要求105℃，高温易使蛋白类药物变性失活。评价药物微球化工艺优劣的参数主要有七点，载药量、药物包封率、产品收率、批间重现性、微球的形态特点、释药速率、终产品的有机溶媒残余量。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种聚L-氨基酸和淀粉作为骨架基质制备的活性蛋白药物的口服微球。
本发明的又一目的在于提供一种聚L-氨基酸和淀粉作为骨架基质制备活性蛋白药物口服微球的方法。
本发明还要解决的问题是避免在微球制备过程中使用有毒有机溶剂。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球，是将聚L-氨基酸和淀粉本身具有的特性和微球本身具有的给药途径优势相结合，掩盖药物的不良气味及口味，提高药物的稳定性，减少配伍禁忌，降低毒副作用，缓释或控制释放药物，靶向给药，避免药物在口服过程中被消化道水解酶以及胃酸环境的破坏，增加口服时的生物活性药物利用度。本发明的口服微球在人工模拟胃液和肠液中的溶解性能实验也表明此肠溶微球在肠液中可溶解，而在人工模拟胃液中微溶，达到了预期的缓释控释效果，提高了微球包被生物活性蛋白药物的利用度。
本发明制备微球条件温和，设备简单，易于扩大生产，成本低廉，制备工艺优良。相比已有微球制备方法，本发明专利制备的微球载药量、药物包封率、产品收率都较高；批间重复性较好；微球形态稳定；缓释控释符合药物特性；可以控制终产品的有机溶媒残余量符合相关标准。
根据本发明的一方面，一种活性蛋白药物口服微球，其特征在于以聚L-氨基酸和淀粉作为骨架基质，所述骨架基质至少含有9.0％-95.0％重量的聚L-氨基酸和8.0％-80.0％重量的淀粉。优选含有9％-20％重量的聚L-氨基酸和10-20％重量的淀粉。
一种聚L-氨基酸和淀粉作为骨架基质制备活性蛋白药物的口服微球，其粒径分布比较均匀，粒径尺寸控制在10-50μm。
本发明所述的聚L-氨基酸是明胶、清蛋白(人血清白蛋白、牛血清白蛋白、乳清蛋白)、酪蛋白等动物源性蛋白。
本发明所述的淀粉是变性淀粉(辛烯基琥珀酸淀粉酯、羧甲基淀粉、羟丙基淀粉、微孔淀粉)、抗性淀粉(凝沉淀粉)、β-环糊精、淀粉水解物麦芽糊精与淀粉糖浆(玉米糖浆)等。
本发明所用的溶剂是无毒的植物油(豆油、菜籽油)、乙醇和水。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，是由所述的聚L-氨基 酸、淀粉、蛋白药物和水充分混合均匀作为内水相，外油相采用所述植物油，内加乳化剂(Span80、Span60、PGPR、ES-95、Solfa-G950)，内水相加入到外油相中乳化均质形成油包水乳剂，加热该乳剂形成微球，过滤微球，乙醇清洗残留植物油，然后干燥。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，内水相中聚L-氨基酸占比5.0％-55.0％(w/w)。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，内水相中淀粉占比5.0％-20.0％(w/w),预糊化温度70℃-90℃，预糊化时间1h-2h，冷却至40℃。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，内水相与外油相以1：2-1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，外油相添加1.0％-5.0％(v/v)乳化剂。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，加热温度范围57℃-80℃，加热时间10-30min。
本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法，乳化机均质转子乳化均质转速2000-3500rpm/min，搅拌桨搅拌转速10-80rpm/min。
本发明所述的微球包封率和载药量的测定，取一定质量的终产品微球，置于PBST缓冲液中，室温震荡至微球完全溶解，离心取上清液，Elisa酶联免疫法检测包被的活性蛋白药物效价，根据以下公式计算微球的包封率和载药量。理论载药量的计算公式基于配料固形物全部形成微球结构，微球制备过程中无任何损失。
附图说明
图1为实施例1制备的空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态 (放大200倍)。
图2为实施例1制备的空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大400倍)。
图3为实施例2制备的空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图4为实施例4制备的含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图5为实施例5制备的含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图6为实施例6制备的含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图7为实施例8制备的口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图8为实施例9制备的空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图9为实施例10制备的空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图10为实施例11制备的空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大200倍)。
图11为实施例12制备的含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大400倍)。
图12为实施例13制备的含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大400倍)。
图13实施例14制备的含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球光学显微镜下形态(放大400倍)。
图14聚L-氨基酸和淀粉口服微球粒径分布图。
图15模拟肠胃液释放实验。
具体实施方式
材料来源：
羟丙基淀粉，批号20131011，购自珠海展洋化工有限公司。
酪蛋白，批号20131106，购自上海普洛钦国际贸易有限公司。
豆油，批号20140113，购自丰益贸易(中国)私人有限公司。
乳化剂Span80，批号20130925，购自天津市永大化学试剂有限公司。
无水乙醇，批号20131201，购自国药集团化学试剂有限公司。
活性蛋白药物IGY(卵黄免疫球蛋白)，批号20131010，购自深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司。
PBST(磷酸盐吐温缓冲液)，批号20140218，购自深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司。
ELISA酶联免疫法检测试剂盒，批号20140201，购自深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司。
β-环糊精，批号20131112，购自珠海展洋化工有限公司。
微孔淀粉，批号20131005，购自珠海展洋化工有限公司。
明胶，批号20130815，购自上海普洛钦国际贸易有限公司。
牛血清白蛋白，批号20131208，购自深圳市青腾源科技有限公司。
【实施例1】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合100g水与50g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，70℃预糊化1h，冷却至40℃。根据实验发现，预糊化温度低于70℃，淀粉溶液不能完全糊化，预糊化温度高于90℃，淀粉溶液易粘稠结块。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与550g酪蛋白1h。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入酪蛋白溶液，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比5.0％，内水相中酪蛋白占比55.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉与酪蛋白混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。根据实验发现，内水相与外油相比值大于1：2时，油水相无法乳化均质形成油包水稳定乳剂。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，形成微球。根据实验发现，加热油包水乳剂温度低于57℃，油包水乳剂无法固化形成微球，温度过高，易使活性 蛋白药物部分或全部失去活性。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为95.0％。制备的微球骨架基质含有91.7％重量的酪蛋白和8.3％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图1(光学显微镜放大200倍)、图2(光学显微镜放大400倍)。如图所示，微球形态圆整，粒径均一，分散性良好。
将微球置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡30min，光学显微镜观测，微球破损较少。
【实施例2】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与200g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，90℃预糊化2h，冷却至40℃。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入50g酪蛋白，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比20.0％，内水相中酪蛋白占比5.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，50ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为1.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉与酪蛋白混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为70.0％。制备的微球骨架基质含有20.0％重量的酪蛋白和80.0％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图3(光学显微镜放大200倍)。
将微球置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡30min，光学显微镜观测，微球部分破损。
【实施例3】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与200g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，90℃预糊化2h，冷却至40℃。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入40g酪蛋白，充分搅拌，加水定溶至 1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比20.0％，内水相中酪蛋白占比4.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，50ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为1.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉与酪蛋白混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，无法形成微球，结块粘连。微球基质中含有16.7％的酪蛋白和83.3％的羟丙基淀粉，羟丙基淀粉超量导致无法形成微球。
【实施例4】含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与50g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，70℃预糊化1h，冷却至40℃。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入560g酪蛋白和190g IGY(卵黄免疫球蛋白)，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比5.0％，内水相中酪蛋白占比56.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉、酪蛋白和IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至60℃，保温10min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为93.2％。制备的微球骨架基质含有70.0％重量的酪蛋白和6.3％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图4(光学显微镜放大200倍)。
将微球置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡90min，光学显微镜观测，微球无破损。8000rpm/min离心，ELISA检测上清液，效价检测值为阴性。用研钵研磨微球，然后置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡30min， 光学显微镜观测，微球部分破损。8000rpm/min离心，ELISA检测上清液，效价检测值为阳性，由此推测，微球结实度较高，不易崩解释放药物。
【实施例5】含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与40g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，70℃预糊化1h，冷却至40℃。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入550g酪蛋白和190g IGY(卵黄免疫球蛋白)，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比4.0％，内水相中酪蛋白占比55.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉、酪蛋白和IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至60℃，保温10min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为94.0％。制备的微球骨架基质含有70.5％重量的酪蛋白和5.1％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图5(光学显微镜放大200倍)。
将微球置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡90min，光学显微镜观测，微球无破损。8000rpm/min离心，ELISA检测上清液，效价检测值为阴性。用研钵研磨微球，然后置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡30min，光学显微镜观测，微球部分破损。8000rpm/min离心，ELISA检测上清液，效价检测值为阳性，由此推测，微球结实度较高，不易崩解释放药物。
【实施例6】不含淀粉的聚L-氨基酸对照微球制备方法
使用磁力搅拌器充分搅拌混合250g水与550g酪蛋白1h。
向酪蛋白溶液加入190g IGY，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比0.0％，内水相中酪蛋白占比55.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml酪蛋白和IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至60℃，保温10min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为93.5％。制备的微球骨架基质含有74.3％重量的酪蛋白和0.0％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图6(光学显微镜放大200倍)。
将微球置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡90min，光学显微镜观测，微球无破损。8000rpm/min离心，ELISA检测上清液，效价检测值为阴性。用研钵研磨微球，然后置于PBST(磷酸盐吐温缓冲液)中，37℃震荡30min，光学显微镜观测，微球部分破损。8000rpm/min离心，ELISA检测上清液，效价检测值为阳性，由此推测，微球结实度较高，不易崩解释放药物。
【实施例7】不含聚L-氨基酸的对照微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合260g水与50g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，70℃预糊化1h，冷却至40℃。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入190g IGY，充分搅拌，加水定溶至500ml。内水相中羟丙基淀粉占比5.0％，内水相中酪蛋白占比0.0％(w/w)。
向乳化机中加入2500ml豆油，125ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入500ml羟丙基淀粉与IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，无法固化形成微球。
【实施例8】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合100g水与50gβ-环糊精，边加热边搅拌，90℃预糊化1h，冷却至40℃。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与550g酪蛋白1h。
向预糊化的β-环糊精溶液中加入酪蛋白溶液，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中β-环糊精占比5.0％，内水相中酪蛋白占比55.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000mlβ-环糊精与酪蛋白混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为84.0％。制备的微球骨架基质含有91.7％重量的酪蛋白和8.3％重量的β-环糊精。
微球图片见图7(光学显微镜放大200倍)。
【实施例9】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合100g水与50g微孔淀粉，边加热边搅拌，90℃预糊化1h，冷却至40℃。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与550g酪蛋白1h。
向预糊化的微孔淀粉溶液中加入酪蛋白溶液，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中微孔淀粉占比5.0％，内水相中酪蛋白占比55.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml微孔淀粉与酪蛋白混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为82.0％。制备的微球骨架基质含有91.7％重量的酪蛋白和8.3％重量的微孔淀粉。
微球图片见图8(光学显微镜放大200倍)。
【实施例10】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合100g水与50g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，70℃预糊化1h，冷却至40℃。
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合750g水与50g明胶2h。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入明胶溶液，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比5.0％，内水相中明胶占比5.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，250ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉与明胶混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至80℃，保温30min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为81.3％。制备的微球骨架基质含有50.0％重量的明胶和50.0％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图9(光学显微镜放大200倍)
【实施例11】空白聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合100g水与50g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，70℃预糊化1h，冷却至40℃。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合200g水与100g牛血清白蛋白1h。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入牛血清白蛋白溶液，充分搅拌，加水定溶至500ml。内水相中羟丙基淀粉占比5.0％，内水相中牛血清白蛋白占比10.0％(w/w)。
向乳化机中加入2500ml豆油，125ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为5.0％(v/v)。
向乳化机中加入500ml羟丙基淀粉与牛血清白蛋白混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速80rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3500rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至70℃，保温15min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为84.0％。制备的微球骨架基质含有66.7％重量的牛血清白蛋白和33.3％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图10(光学显微镜放大200倍)
【实施例12】优化的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合70g水与80g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，80℃预糊化1h，冷却至40℃。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合70g水与80g酪蛋白1h。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合100g水与600g IGY0.5h。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入酪蛋白和IGY溶液，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比8.0％，内水相中酪蛋白占比8.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，150ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为3.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉、酪蛋白和IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速50rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3000rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至70℃，保温20min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为92.0％，包封率为89.6％，载药量为76.9％。制备的微球骨架基质含有10.5％重量的酪蛋白和10.5％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图11(光学显微镜放大400倍)。
【实施例13】含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合60g水与100g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，80℃预糊化1h，冷却至40℃。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合70g水与80g酪蛋白1h。
使用磁力搅拌器充分搅拌混合90g水与600g IGY0.5h。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入酪蛋白和IGY溶液，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比10.0％，内水相中酪蛋白占比8.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，150ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为3.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉、酪蛋白和IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速50rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3000rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至70℃，保温20min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为89.0％，包封率为96.4％，载药量为83.3％。制备的微球骨架基质含有10.3％重量的酪蛋白和12.8％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图12(光学显微镜放大400倍)。
【实施例14】含活性蛋白药物的聚L-氨基酸和淀粉口服微球制备方法
使用加热式磁力搅拌器充分搅拌混合170g水与150g羟丙基淀粉，边加热边搅拌，80℃预糊化2h，冷却至40℃。
向预糊化的羟丙基淀粉溶液中加入80g酪蛋白和600g IGY，充分搅拌，加水定溶至1000ml。内水相中羟丙基淀粉占比15.0％，内水相中酪蛋白占比8.0％(w/w)。
向乳化机中加入5000ml豆油，150ml乳化剂Span80，充分搅拌溶解。外油相添加乳化剂比例为3.0％(v/v)。
向乳化机中加入1000ml羟丙基淀粉、酪蛋白和IGY混合溶液。内水相与外油相以1：5(v/v)比例混合后乳化均质。
乳化机搅拌桨搅拌转速50rpm/min，乳化机均质转子乳化均质转速3000rpm/min，充分乳化均质形成均一的油包水乳剂。
加热油包水乳剂至70℃，保温20min，形成微球。
过滤微球，乙醇清洗残留豆油，干燥得微球成品。
所得微球的收率为86.0％，包封率为99.1％，载药量为83.3％。制备的微球骨架基质含有9.6％重量的酪蛋白和18.1％重量的羟丙基淀粉。
微球图片见图13(光学显微镜放大400倍)
【实施例15】微球粒径检测
各实施例制备的微球利用激光粒径分析仪进行测定，微球粒径均一，结果见图14(以实施例14制备微球为例)，其中纵坐标为微球的粒径分布，横坐标为微球的粒径(μm)，结果表明所制备的微球粒径分布在10-50μm。
【实施例16】体外模拟胃液、肠液环境下微球释放实验
参照美国药典(2004年版)配制模拟肠胃液。
定量取优化条件制备的活性蛋白药物IGY微球0.5g，置于5ml模拟胃液，37℃恒温摇床(80rpm/min)振荡0-2h，期间0.5h、1h、1.5h、2h分别12000rpm/min离心取上清液进行Elisa酶联免疫法检测IGY效价。2h后将沉淀置于5ml模拟肠液，37℃恒温摇床(80rpm/min)振荡0-4h，期间1h、2h、3h、4h分别12000rpm/min离心取上清液进行Elisa酶联免疫法检测IGY效价。根据图15分析，IGY微球在模拟胃液中几乎不释放。进入模拟肠液环境中，IGY微球释放速度快速增加，3h微球累计释放率达到100％。由此可得，本发明所述的聚L-氨基酸和淀粉口服微球可以避免药物在口服过程中被消化道水解酶以及胃酸环境的破坏，增加口服时的生物活性药物利用度，起到肠溶控释的靶向给药作用。
Claims (10)
1.一种活性蛋白药物口服微球，其特征在于以聚L-氨基酸和淀粉作为骨架基质，所述骨架基质至少含有9.0-95.0％重量的聚L-氨基酸和8.0％-80.0％重量的淀粉。
2.权利要求1所述的活性蛋白药物口服微球，其特征在于所述聚L-氨基酸为选自明胶、清蛋白和酪蛋白的动物源性蛋白，在所述骨架基质中的含量为9％-20％重量。
3.权利要求1所述的活性蛋白药物口服微球，其特征在于所述淀粉选自变性淀粉、抗性淀粉、β-环糊精、淀粉水解物麦芽糊精和淀粉糖浆，在所述骨架基质中的含量为10％-20％重量。
4.权利要求1-3任一项所述的活性蛋白药物口服微球，其特征在于，所述口服微球通过下述方法制备：
将聚L-氨基酸、淀粉、蛋白药物和水充分混合均匀作为内水相，以植物油作为外油相，加入乳化剂，将所述内水相加入到外油相中乳化均质形成油包水乳剂，加热该乳剂形成微球，过滤微球，乙醇清洗残留植物油，干燥获得所述活性蛋白药物口服微球。
5.权利要求4所述的活性蛋白药物口服微球，其特征在于所述口服微球粒径为10-50μm。
6.制备权利要求1所述的活性蛋白药物口服微球的方法，包括将聚L-氨基酸、淀粉、蛋白药物和水充分混合均匀作为内水相，以植物油作为外油相，加入乳化剂，将所述内水相加入到外油相中乳化均质形成油包水乳剂，加热该乳剂形成微球，过滤微球，乙醇清洗残留植物油，干燥获得所述活性蛋白药物口服微球。
7.权利要求6所述的方法，其中内水相中聚L-氨基酸占比5.0％-55.0％重量。
8.权利要求6所述的方法，其中内水相中淀粉占比5.0％-20.0％重量，淀粉的预糊化温度为70℃-90℃，预糊化时间为1h-2h，预糊化后冷却至40℃。
9.权利要求6所述的方法，其中内水相与外油相以1：2-1：5(v/v)比例混合后乳化均质，在所述外油相中添加1.0％-5.0％(v/v)乳化剂。
10.权利要求6所述的方法，其中加热温度为57℃-80℃，加热时间为10-30min，乳化机均质转子乳化均质转速2000-3500rpm/min，搅拌桨搅拌转速10-80rpm/min。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101455645A (zh) * | 2008-12-30 | 2009-06-17 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法 |
| CN101850133A (zh) * | 2010-06-01 | 2010-10-06 | 华南理工大学 | 一种自固化磷酸钙微球及其制备方法与应用 |
| CN103289083A (zh) * | 2013-05-17 | 2013-09-11 | 中山大学 | 一种快速降解高分子量聚氨基酸的方法及其应用 |
-
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101455645A (zh) * | 2008-12-30 | 2009-06-17 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 植物性大豆蛋白载体的药物微球的制备方法 |
| CN101850133A (zh) * | 2010-06-01 | 2010-10-06 | 华南理工大学 | 一种自固化磷酸钙微球及其制备方法与应用 |
| CN103289083A (zh) * | 2013-05-17 | 2013-09-11 | 中山大学 | 一种快速降解高分子量聚氨基酸的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 汤继辉等: "聚氨基酸作为药物载体的研究进展", 《中国药科大学学报》, vol. 42, no. 3, 31 December 2011 (2011-12-31), pages 284 - 288 * |
| 汤谷平等: "聚氨基酸材料在药物控释系统中的应用", 《生物医学工程学杂志》, vol. 18, no. 2, 31 December 2001 (2001-12-31), pages 169 - 172 * |
| 高芸芳等: "酪蛋白结构及其酶解特性研究进展", 《农产品加工（学刊）》, no. 3, 31 March 2013 (2013-03-31), pages 1 - 4 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114403343A (zh) * | 2022-01-26 | 2022-04-29 | 广元市帆舟食品有限责任公司 | 一种制浆工艺及其应用 |
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