CN104024253B

CN104024253B - 作为pi3k抑制剂的杂环基胺

Info

Publication number: CN104024253B
Application number: CN201280052912.2A
Authority: CN
Inventors: Y·李; W·姚; A·P·坎布斯; E·W·岳; S·梅; 朱文育; J·格伦; T·P·马杜斯亏二世; R·B·斯帕克斯; B·道替; C·何
Original assignee: Because Of C1-Esteraseremmer-N Parent Corp
Current assignee: Because Of C1-Esteraseremmer-N Parent Corp
Priority date: 2011-09-02
Filing date: 2012-08-31
Publication date: 2016-11-30
Anticipated expiration: 2032-08-31

Abstract

本发明提供式I的杂环基胺衍生物：其中变量是在本文中定义，所述衍生物调节磷酸肌醇3‑激酶(PI3K)的活性并且适用于治疗与PI3K的活性相关的疾病，包括(例如)炎性病症、免疫基病症、癌症以及其它疾病。

Description

作为PI3K抑制剂的杂环基胺

本申请要求2011年9月2日提交的美国临时申请第61/530,866号、2012年2月3日提交的美国临时申请第61/594,882号以及2012年7月30日提交的美国临时申请第61/677,445号的权益，所述临时申请各自以引用的方式整体并入本文。

发明领域

本发明提供调节磷酸肌醇3-激酶(PI3K)的活性并且适用于治疗与PI3K的活性相关的疾病，例如炎性病症、免疫基病症、癌症以及其它疾病的杂环基胺衍生物，例如吡唑并嘧啶。

发明背景

磷酸肌醇3-激酶(PI3K)属于在肌醇环的D3位置上使磷酸肌醇磷酸化的脂质信号传导激酶大家族(Cantley,Science,2002,296(5573):1655-7)。PI3K根据其结构、调控以及基质特异性分成三个类别(类别I、II以及III)。包括PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ以及PI3Kδ在内的类别I PI3K为催化磷脂酰肌醇-4,5-双磷酸(PIP₂)磷酸化，从而产生磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP₃)的双重特异性脂质以及蛋白质激酶家族。PIP₃充当控制许多细胞过程，包括生长、存活、粘附以及迁移的第二信使。所有四个类别I PI3K同种型皆以由催化亚基(p110)以及控制其表达、活化以及亚细胞定位的紧密缔合的调控亚基构成的杂二聚体形式存在。PI3Kα、PI3Kβ以及PI3Kδ与称为p85的调控亚基缔合并且由生长因子和细胞激素经由酪氨酸激酶依赖性机制活化(Jimenez等,J Biol Chem.,2002,277(44):41556-62)，而PI3Kγ与两个调控亚基(p101和p84)缔合且其活化由G蛋白偶联受体的活化驱动(Brock等,J CellBiol.,2003,160(1):89-99)。PI3Kα和PI3Kβ普遍表达。相反，PI3Kγ以及PI3Kδ主要在白细胞中表达(Vanhaesebroeck等,Trends Biochem Sci.,2005,30(4):194-204)。

PI3K同种型的差异性组织分布有其不同生物功能的原因。遗传去除PI3Kα或PI3Kβ会导致胚胎致死，表明PI3Kα和PI3Kβ至少在发育期间具有必要且非冗余的功能(Vanhaesebroeck等,2005)。相反，尽管缺乏PI3Kγ和PI3Kδ的小鼠显示免疫系统改变，但其可存活、可繁殖且具有正常寿命。PI3Kγ缺乏会导致巨噬细胞和嗜中性白细胞朝向发炎位点的募集障碍以及T细胞活化障碍(Sasaki等,Science,2000,287(5455):1040-6)。PI3Kδ突变型小鼠的B细胞信号传导具有特定缺陷，其导致B细胞发育障碍以及抗原刺激后的抗体反应降低(Clayton等,J Exp Med.2002,196(6):753-63；Jou等,Mol Cell Biol.2002,22(24):8580-91；Okkenhaug等,Science,2002,297(5583):1031-4)。

PI3Kγ和PI3Kδ突变型小鼠的表型表明这些酶可能在发炎以及其它免疫基疾病中起作用并且这在临床前模型中得到证实。在小鼠类风湿性关节炎(RA)和哮喘模型中，PI3Kγ突变型小鼠大部分免遭疾病影响(Camps等,Nat Med.2005,11(9):936-43；Thomas等,EurJ Immunol.2005,35(4):1283-91)。此外，显示用PI3Kγ的选择性抑制剂治疗野生型小鼠在MRL-lpr全身性狼疮肾炎(SLE)模型中减轻肾小球性肾炎并延长存活并且且在RA模型中抑制关节发炎和损伤(Barber等,NatMed.2005,11(9):933-5；Camps等,2005)。类似地，用PI3Kδ的选择性抑制剂治疗的PI3Kδ突变型小鼠与野生型小鼠两者均显示在小鼠哮喘模型中具有减弱的过敏性气道发炎以及高反应性(Ali等,Nature.2004,431(7011):1007-11；Lee等,FASEB J.2006,20(3):455-65)且在RA模型中疾病减弱(Randis等,Eur.J.Immunol.,2008,38(5):1215-24)。

所有四个类别I PI3K同种型除在炎性疾病中的潜在作用的外，它们还可在癌症中起作用。在包括乳癌、前列腺癌、结肠癌以及子宫内膜癌的常见癌症中，编码p110α的基因常常突变(Samuels等,Science,2004,304(5670):554；Samuels等,Curr Opin Oncol.2006,18(1):77-82)。这些突变中的80％由酶的螺旋域或激酶域中的三个氨基酸取代中的一者表示并且导致激酶活性显著上调，从而在细胞培养物和动物模型中导致致癌性转化(Kang等,Proc Natl Acad Sci U S A.2005,102(3):802-7；Bader等,Proc Natl Acad Sci U SA.2006,103(5):1475-9)。在其它PI3K同种型中尚未鉴别出这类突变，但有证据表明其可有助于恶性疾病的产生和发展。观测到PI3Kδ在急性髓母细胞性白血病中一贯过度表达(Sujobert等,Blood,2005,106(3):1063-6)并且PI3Kδ的抑制剂可阻止白血病细胞生长(Billottet等,Oncogene.2006,25(50):6648-59)。观察到PI3Kγ在慢性骨髓性白血病中表达升高(Hickey等,J Biol Chem.2006,281(5):2441-50)。也已在脑癌、结肠癌以及膀胱癌中观测到PI3Kβ、PI3Kγ以及PI3Kδ的表达改变(Benistant等,Oncogene,2000,19(44):5083-90；Mizoguchi等,Brain Pathol.2004,14(4):372-7；Knobbe等,Neuropathol ApplNeurobiol.2005,31(5):486-90)。此外，这些同种型已全部显示在细胞培养物中具有致癌性(Kang等,2006)。

因此，抑制如PI3K的激酶的新颖或改进药剂持续为开发旨在加强或抑制免疫以及发炎路径的更有效新颖的药品(如用于器官移植物的免疫抑制剂)所需，亦需要用于预防以及治疗自体免疫性疾病(例如多发性硬化症、类风湿性关节炎、哮喘、第I型糖尿病、炎性肠病、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、自体免疫性甲状腺病症、阿兹海默氏病(Alzheimer’sdisease)、肾炎)、涉以及活性过度炎性反应的疾病(例如湿疹)、过敏、肺病、癌症(例如前列腺癌、乳癌、白血病、多发性骨髓瘤)以及由其它治疗剂引起的一些免疫反应(例如皮疹或接触性皮炎或腹泻)的药剂。本文所述的化合物、组合物以及方法是针对这些需要以及其它需要。

概述

本发明尤其提供式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中变量在下文中定义。

本发明进一步提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体的组合物。

本发明还提供调节PI3K激酶的活性的方法，所述方法包括使所述激酶与本发明的化合物或其药学上可接受的盐接触。

本发明进一步提供治疗患者的疾病的方法，其中所述疾病与PI3K激酶的异常表达或活性相关，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明进一步提供治疗患者的免疫基疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还提供治疗患者的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明进一步提供治疗患者的肺病的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐，以用于在本文所述的任何方法中使用。

本发明进一步提供化合物或其药学上可接受的盐用于制造用于本文所述的任何方法中的药剂的用途。

附图简述

图1描绘实施方案269的化合物的晶体结构。

详述

本发明尤其提供式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

X为CR⁹或N；

W为CR⁷或N；

Y为CR⁸、CR^8a或N；

Z为单键或C(＝O)；

条件是-W＝Y-Z-为-CR⁷＝CR⁸、-N＝CR⁸-、-CR⁷＝CR^8a-C(＝O)-、-N＝CR^8a-C(＝O)-或CR⁷＝N-C(＝O)-；

R¹为C_1-3烷基；

R²为卤代、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤烷基、C_1-6卤烷氧基、苯基或5-6元杂芳基；其中所述苯基和5-6元杂芳基各自任选被1、2、3或4个独立地选自卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基以及C_1-4卤烷氧基的取代基取代；

R³为Cy、-(C_1-3亚烷基)-Cy、卤代、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、OR^a、SR^a、C(＝O)R^b、C(＝O)NR^cR^d、C(＝O)OR^a、OC(＝O)R^b、OC(＝O)NR^cR^d、NR^cR^d、NR^cC(＝O)R^b、NR^cC(＝O)OR^b、NR^cC(＝O)NR^cR^d、C(＝NR^e)R^b、C(＝NR^e)NR^cR^d、NR^cC(＝NR^e)NR^cR^d、NR^cS(＝O)₂R^b、NR^cS(＝O)₂NR^cR^d、S(＝O)₂R^b或S(＝O)₂NR^cR^d；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基以及C_2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R^3a基团取代；

R⁴为H、卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4卤烷氧基；

R⁵为卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4卤烷氧基或环丙基；

R⁶为H、卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4卤烷氧基；

R⁷为H或C_1-4烷基；

R⁸为H、卤代、-OH、-CN、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、Cy²、-(C_1-3亚烷基)-Cy²、OR^a2、SR^a2、C(＝O)R^b2、C(＝O)NR^c2R^d2、C(＝O)OR^a2、OC(＝O)R^b2、OC(＝O)NR^c2R^d2、NR^c2R^d2、NR^c2C(＝O)R^b2、NR^c2C(＝O)OR^b2、NR^c2C(＝O)NR^c2R^d2、C(＝NR^e)R^b2、C(＝NR^e)NR^c2R^d2、NR^c2C(＝NR^e)NR^c2R^d2、NR^c2S(＝O)R^b2、NR^c2S(＝O)₂NR^c2R^d2、S(＝O)R^b2或S(＝O)₂NR^c2R^d2；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

R^8a为H、卤代、-CN、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、Cy²、-(C_1-3亚烷基)-Cy²、C(＝O)R^b2、C(＝O)NR^c2R^d2、C(＝O)OR^a2、NR^c2R^d2、NR^c2C(＝O)R^b2、NR^c2C(＝O)OR^b2、NR^c2C(＝O)NR^c2R^d2、NR^c2S(＝O)R^b2、NR^c2S(＝O)₂NR^c2R^d2、S(＝O)R^b2或S(＝O)₂NR^c2R^d2；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

R⁹为H、卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4卤烷氧基；

R¹⁰为H或C_1-4烷基；

各R^a、R^b、R^c以及R^d独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基以及Cy；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基以及C_2-6炔基各自任选被1、2或3个独立选择的R^3b基团取代；

或R^c和R^d连同其所连接的N原子一起形成4、5、6或7元杂环烷基，其任选被-OH或C_1-3烷基取代；

各R^e独立地选自H、CN、OH、C_1-4烷基以及C_1-4烷氧基；

各Cy独立地选自C_3-7环烷基、4-10元杂环烷基、苯基、萘基以及5-10元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R^3b基团取代；

各R^3a独立地选自卤代、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、OR^a1、SR^a1、C(＝O)R^b1、C(＝O)NR^c1R^d1、C(＝O)OR^a1、OC(＝O)R^b1、OC(＝O)NR^c1R^d1、NR^c1R^d1、NR^c1C(＝O)R^b1、NR^c1C(＝O)OR^b1、NR^c1C(＝O)NR^c1R^d1、C(＝NR^e)R^b1、C(＝NR^e)NR^c1R^d1、NR^c1C(＝NR^e)NR^c1R^d1、NR^c1S(＝O)R^b1、NR^c1S(＝O)₂NR^c1R^d1、S(＝O)₂R^b1以及S(＝O)₂NR^c1R^d1；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

各R^3b独立地选自Cy¹、-(C_1-3亚烷基)-Cy¹、卤代、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、OR^a1、SR^a1、C(＝O)R^b1、C(＝O)NR^c1R^d1、C(＝O)OR^a1、OC(＝O)R^b1、OC(＝O)NR^c1R^d1、NR^c1R^d1、NR^c1C(＝O)R^b1、NR^c1C(＝O)OR^b1、NR^c1C(＝O)NR^c1R^d1、C(＝NR^e)R^b1、C(＝NR^e)NR^c1R^d1、NR^c1C(＝NR^e)NR^c1R^d1、NR^c1S(＝O)R^b1、NR^c1S(＝O)₂NR^c1R^d1、S(＝O)R^b1以及S(＝O)₂NR^c1R^d1；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

各Cy¹独立地选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

各R^a1、R^b1、R^c1以及R^d1独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基各自任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

或R^c1和R^d1连同其所连接的N原子一起形成4、5、6或7元杂环烷基，其任选被-OH或C_1-3烷基取代；

各Cy²独立地选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

各R^a2、R^b2、R^c2以及R^d2独立地选自H、C_1-6烷基、C_1-6卤烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基各自任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

或R^c2和R^d2连同其所连接的N原子一起形成4、5、6或7元杂环烷基，其任选被-OH或C_1-3烷基取代；并且

各R¹¹独立地选自OH、NO₂、CN、卤代、C_1-3烷基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、C_1-3卤烷基、氰基-C_1-3烷基、HO-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基-C_1-3烷基、C_3-7环烷基、C_1-3烷氧基、C_1-3卤烷氧基、氨基、C_1-3烷基氨基、二(C_1-3烷基)氨基、硫基、C_1-3烷基硫基、C_1-3烷基亚磺酰基、C_1-3烷基磺酰基、氨甲酰基、C_1-3烷基氨甲酰基、二(C_1-3烷基)氨甲酰基、羧基、C_1-3烷基羰基、C_1-3烷氧基羰基、C_1-3烷基羰基氨基、C_1-3烷基磺酰基氨基、氨基磺酰基、C_1-3烷基氨基磺酰基、二(C_1-3烷基)氨基磺酰基、氨基磺酰基氨基、C_1-3烷基氨基磺酰基氨基、二(C_1-3烷基)氨基磺酰基氨基、氨基羰基氨基、C_1-3烷基氨基羰基氨基以及二(C_1-3烷基)氨基羰基氨基。

本发明还提供式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

X为CR⁹或N；

W为CR⁷或N；

Y为CR⁸、CR^8a或N；

Z为单键或C(＝O)；

条件是-W＝Y-Z-为-CR⁷＝CR⁸、-N＝CR⁸-、-CR⁷＝CR^8a-C(＝O)-、-N＝CR^8a-C(＝O)-或-CR⁷＝N-C(＝O)-；

R¹为C_1-3烷基；

R²为卤代、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤烷基、C_1-6卤烷氧基、苯基或5-6元杂芳基；其中所述苯基以及5-6元杂芳基各自任选被1、2、3或4个独立地选自卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基以及C_1-4卤烷氧基的取代基取代；

R⁷为H或C_1-4烷基；

R⁸为H、卤代、-OH、-CN、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、Cy²、-(C_1-3亚烷基)-Cy²、OR^a2、SR^a2、C(＝O)R^b2、C(＝O)NR^c2R^d2、C(＝O)OR^a2、OC(＝O)R^b2、OC(＝O)NR^c2R^d2、NR^c2R^d2、NR^c2C(＝O)R^b2、NR^c2C(＝O)OR^b2、NR^c2C(＝O)NR^c2R^d2、C(＝NR^e)R^b2、C(＝NR^e)NR^c2R^d2、NR^c2C(＝NR^e)NR^c2R^d2、NR^c2S(＝O)R^b2、NR^c2S(＝O)₂NR^c2R^d2、S(＝O)R^b2、S(＝O)₂R^b2或S(＝O)₂NR^c2R^d2；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

R^8a为H、卤代、-CN、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、Cy²、-(C_1-3亚烷基)-Cy²、C(＝O)R^b2、C(＝O)NR^c2R^d2、C(＝O)OR^a2、NR^c2R^d2、NR^c2C(＝O)R^b2、NR^c2C(＝O)OR^b2、NR^c2C(＝O)NR^c2R^d2、NR^c2S(＝O)R^b2、NR^c2S(＝O)₂NR^c2R^d2、S(＝O)R^b2、S(＝O)₂R^b2或S(＝O)₂NR^c2R^d2；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

R¹⁰为H或C_1-4烷基；

各R^e独立地选自H、CN、OH、C_1-4烷基以及C_1-4烷氧基；

各R^3b独立地选自Cy¹、-(C_1-3亚烷基)-Cy¹、卤代、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基、OR^a1、SR^a1、C(＝O)R^b1、C(＝O)NR^c1R^d1、C(＝O)OR^a1、OC(＝O)R^b1、OC(＝O)NR^c1R^d1、NR^c1R^d1、NR^c1C(＝O)R^b1、NR^c1C(＝O)OR^b1、NR^c1C(＝O)NR^c1R^d1、C(＝NR^e)R^b1、C(＝NR^e)NR^c1R^d1、NR^c1C(＝NR^e)NR^c1R^d1、NR^c1S(＝O)R^b1、NR^c1S(＝O)₂NR^c1R^d1、S(＝O)R^b1、S(＝O)₂R^b1以及S(＝O)₂NR^c1R^d1；其中所述C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基各自任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

各Cy²独立地选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基或9-10元双环杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R¹¹基团取代；

各R¹¹独立地选自OH、NO₂、CN、卤代、C_1-3烷基、C_2-3烯基、C_2-3炔基、C_1-3卤烷基、氰基-C_1-3烷基、HO-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基-C_1-3烷基、C_3-7环烷基、C_1-3烷氧基、C_1-3卤烷氧基、氨基、C_1-3烷基氨基、二(C_1-3烷基)氨基、硫基、C_1-3烷基硫基、C_1-3烷基亚磺酰基、C_1-3烷基磺酰基、氨甲酰基、C_1-3烷基氨甲酰基、二(C_1-3烷基)氨甲酰基、羧基、C_1-3烷基羰基、C_1-4烷氧基羰基、C_1-3烷基羰基氨基、C_1-3烷基磺酰基氨基、氨基磺酰基、C_1-3烷基氨基磺酰基、二(C_1-3烷基)氨基磺酰基、氨基磺酰基氨基、C_1-3烷基氨基磺酰基氨基、二(C_1-3烷基)氨基磺酰基氨基、氨基羰基氨基、C_1-3烷基氨基羰基氨基以及二(C_1-3烷基)氨基羰基氨基。

在任一前述实施方案的一个实施方案中，Cy不为其中：

G为NH，n为1，并且V为O；或

G为NH，n为0，并且V为O或CH₂；或

G为O，n为0并且V为NH。

在前述实施方案的一个实施方案中，R³为

在前述实施方案的一个实施方案中，R³为Cy，其中各Cy独立地选自氮杂环丁烷环、吡唑环、吡啶环、嘧啶环以及苯基环，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R3b基团取代。

在一些实施方案中：

部分为：

在一些实施方案中：

部分为

在一些实施方案中：

部分为

在一些实施方案中：

部分为

在一些实施方案中：

部分为

在一些实施方案中，R¹为甲基。

在一些实施方案中，R²为C_1-6烷基、C_1-3烷氧基或苯基；其中所述苯基任选被1、2、3或4个独立地选自卤代的取代基取代。

在一些实施方案中，各R^a、R^b、R^c以及R^d独立地选自H、C_1-6烷基以及C_1-6卤烷基。

在一些实施方案中，R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R³为Cy。

在一些实施方案中，R³为C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基。

在一些实施方案中，各Cy独立地选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R^3b基团取代。

在一些实施方案中，各Cy独立地选自氮杂环丁烷环、吡唑环、吡啶环、嘧啶环以及苯基环，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R^3b基团取代。

在一些实施方案中：

各Cy独立地选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基，其各自任选被1或2个独立地选自以下的R^3b取代：Cy¹、-(C_1-3亚烷基)-Cy¹、卤代、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤烷基、C(＝O)R^b1、C(＝O)NR^c1R^d1、S(＝O)R^b1以及S(＝O)₂NR^c1R^d1；其中所述C_1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

各R^a1、R^b1、R^c1以及R^d1独立地选自H、C_1-6烷基以及C_1-6卤烷基；其中所述C_1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；并且

各R¹¹独立地为OH或C_1-3烷氧基。

在一些实施方案中：

各Cy独立地选自氮杂环丁烷环、吡唑环、吡啶环、嘧啶环、苯基环，其各自任选被一个选自以下的R^3b取代：Cy¹、-(C_1-3亚烷基)-Cy¹、卤代、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤烷基、C(＝O)R^b1、C(＝O)NR^c1R^d1、S(＝O)R^b1以及S(＝O)₂NR^c1R^d1；其中所述C_1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

各R¹¹独立地为OH或C_1-3烷氧基。

在一些实施方案中：

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

各R¹¹独立地为OH、CN、卤代、C_1-3烷基、C_1-3卤烷基、HO-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_1-3卤烷氧基、氨基、C_1-3烷基氨基、二(C_1-3烷基)氨基、氨甲酰基、C_1-3烷基氨甲酰基或二(C_1-3烷基)氨甲酰基。

在一些实施方案中：

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

在一些实施方案中，R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基。

在一些实施方案中，R⁴为F、Cl、CN或甲基。

在一些实施方案中，R⁴为F。

在一些实施方案中，R⁴为Cl。

在一些实施方案中，R⁴为CN。

在一些实施方案中，R⁴为甲基。

在一些实施方案中，R⁵为卤代或CN。

在一些实施方案中，R⁵为Cl。

在一些实施方案中，R⁶为H。

在一些实施方案中，R⁷为H。

在一些实施方案中，R⁸为H、卤代、CN、C_1-6烷基或Cy²；其中Cy²选自C_3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基以及4-7元杂环烷基，其各自任选被1或2个独立选择的R¹¹基团取代。

在一些实施方案中，R⁸为H、卤代、CN、C_1-6烷基或Cy²；其中Cy²选自C_3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基或4-7元杂环烷基，其各自任选被1个选自以下的R¹¹取代：OH、CN、卤代、C_1-3烷基、C_1-3卤烷基、HO-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_1-3卤烷氧基、氨基、C_1-3烷基氨基、二(C_1-3烷基)氨基、氨甲酰基、C_1-3烷基氨甲酰基以及二(C_1-3烷基)氨甲酰基。

在一些实施方案中，R⁸为H、卤代、CN、甲基或Cy²；其中Cy²选自环丙基、苯基、吡唑环、吡啶环或嘧啶环，其各自任选被1个选自以下的R¹¹取代：OH、CN、氟基、甲基、2-羟乙基、二甲基氨甲酰基、氨基、甲基氨甲酰基以及二甲基氨甲酰基。

在一些实施方案中，R⁸为H、甲基、F、Cl或I。

在一些实施方案中，R⁸为甲基。

在一些实施方案中，R⁸为H。

在一些实施方案中，R⁸为F。

在一些实施方案中，R⁸为Cl。

在一些实施方案中，R⁸为I。

在一些实施方案中，各R¹¹独立地为OH、CN、卤代、C_1-3烷基、C_1-3卤烷基、HO-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基-C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_1-3卤烷氧基、氨基、C_1-3烷基氨基、二(C_1-3烷基)氨基、氨甲酰基、C_1-3烷基氨甲酰基或二(C_1-3烷基)氨甲酰基。

在一些实施方案中，R^8a为H、卤代、-CN、C_1-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、C_1-6卤烷基或Cy²。

在一些实施方案中，R^8a为H或卤代。

在一些实施方案中，R^8a为H。

在一些实施方案中，R⁹为H。

在一些实施方案中，R¹⁰为H。

在一些实施方案中：

部分为：

R¹为甲基；

R²为C_1-6烷基、C_1-3烷氧基或苯基；其中所述苯基任选被1、2、3或4个独立地选自卤代的取代基取代；

R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c以及R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基，其各自任选被1、2、3或4个独立选择的R^3b基团取代；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁶、R⁷、R⁹以及R¹⁰各自为H；

R⁸为H、卤代、CN、C_1-6烷基或Cy²；其中Cy²选自C_3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基以及4-7元杂环烷基，其各自任选被1或2个独立选择的R¹¹基团取代；

R^8a为H或卤代；并且

在一些实施方案中：

部分为：

R¹为甲基；

R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy选自C_3-7环烷基、4-7元杂环烷基、苯基以及5-6元杂芳基，其各自任选被1或2个独立地选自以下的R^3b取代：Cy¹、-(C_1-3亚烷基)-Cy¹、卤代、CN、OH、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤烷基、C(＝O)R^b1、C(＝O)NR^c1R^d1、S(＝O)R^b1以及S(＝O)₂NR^c1R^d1；其中所述C_1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

各R^a1、R^b1、R^c1以及R^d1独立地选自H、C_1-6烷基以及C_1-6卤烷基；其中所述C_1-6烷基任选被1、2或3个独立选择的R¹¹基团取代；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁶、R⁷、R⁹以及R¹⁰各自为H；

R⁸为H、卤代、CN、C_1-6烷基或Cy²；其中Cy²选自C_3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基以及4-7元杂环烷基，其各自任选被1个R¹¹基团取代；

R^8a为H或卤代；并且

在一些实施方案中：

部分为：

R¹为甲基；

R²为C_1-3烷氧基；

R³为Cy；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁶、R⁷、R⁹以及R¹⁰各自为H；

R^8a为H或卤代；并且

在一些实施方案中：

部分为：

R¹为甲基；

R²为苯基；其中所述苯基任选被1、2、3或4个独立地选自卤代的取代基取代；

R³为C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁶、R⁷、R⁹以及R¹⁰各自为H；

R^8a为H或卤代；并且

在一些实施方案中：

部分为：

R¹为甲基；

R²为C_1-3烷氧基；

R³为Cy；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁶、R⁷、R⁹以及R¹⁰各自为H；

R^8a为H或卤代；并且

在一些实施方案中：

部分为：

R¹为甲基；

R³为C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c以及R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁶、R⁷、R⁹以及R¹⁰各自为H；

R^8a为H或卤代；并且

在一些实施方案中，化合物为式II的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式III的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式IV的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式V的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式VIa的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式VIb的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式VIa的化合物：

或其药学上可接受的盐；其中：

R²为甲氧基或乙氧基；

R^3b为C_1-6烷基，任选被1或2个独立地选自F、OH以及C_1-3烷氧基的基团取代；

R⁴为F、CN、甲基或乙基；并且

R⁵为F、Cl、甲基或乙基。

在一些实施方案中，化合物为式VIb的化合物：

或其药学上可接受的盐；其中：

R²为甲氧基或乙氧基；

R^3b为C(＝O)NR^c1R^d1；

R⁴为F、CN、甲基或乙基；并且

R⁵为F、Cl、甲基或乙基。

在一些实施方案中，化合物为式IIa的化合物：

IIa

或其药学上可接受的盐；其中：

R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

R⁸为H、卤代、CN、C_1-6烷基或Cy²；其中Cy²选自C_3-6环烷基、苯基、5-6元杂芳基以及4-7元杂环烷基，其各自任选被1个R¹¹基团取代；并且

在一些实施方案中，化合物为IIIa的化合物：

或其药学上可接受的盐；其中：

R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；并且

在一些实施方案中，化合物为式IVa的化合物：

或其药学上可接受的盐；其中：

R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；并且

在一些实施方案中，化合物为式Va的化合物：

或其药学上可接受的盐；其中：

R³为Cy或C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c和R^d独立地选自C_1-6烷基；

Cy¹为C_3-6环烷基或4-7元杂环烷基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代或CN；

在式IIa、IIIa、Iva或Va的以上实施方案中，R²为C_1-3烷氧基；并且R³为Cy。

在式IIa、IIIa、Iva或Va的以上实施方案中，R²为苯基；其中所述苯基任选被1、2、3或4个独立地选自卤代的取代基取代；并且R³为C(＝O)NR^cR^d；其中各R^c以及R^d独立地选自C_1-6烷基。

在任何以上提及的实施方案中，R²或R³包含至少一个环状部分。

在一些实施方案中，化合物选自：

1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{1-[3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-丙酰基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-(1-{5-氯-3-[1-(环丙基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-2-甲氧基-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{1-[5-氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{1-[5-氯-3-(1-异丁基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-{1-[3-(1-仲丁基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-(1-{5-氯-2-甲氧基-3-[1-(2-甲氧基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-甲基吡啶甲酰胺；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)吡啶-2-甲酰胺；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；

2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇；

3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-4-甲酰胺；

3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,6'-二甲基联苯-4-甲酰胺；

5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-(2-羟乙基)吡啶甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-氨基-8-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯基}乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮；

5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}烟碱甲腈；

4-氨基-8-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶-3-基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮；

4-氨基-8-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-嘧啶-5-基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮；

3'-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5'-氯-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-3-甲酰胺；

4-氨基-8-{1-[5-氯-3-(5-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮；

3'-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5'-氯-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-3-磺酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-氨基-8-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮；

4-氨基-8-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮；

5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

6-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-4-氯-N-乙基-3',5'-二氟-3-甲基联苯-2-甲酰胺；

4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)吡啶-2-甲酰胺；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈；

5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

4-(1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基)-6-氯-3-乙氧基-2-(5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)苯甲腈；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-[3-(1-{4-氨基-3-[1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-环丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{4-氨基-1-[1-(5-氯-3-{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(5-氰基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-(3-{1-[4-氨基-3-(2-氨基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-{6-[(甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-吡啶-4-基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-吡啶-3-基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-{5-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；

1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-氧杂环丁烷-3-基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

1-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[1-(四氢-2H-吡喃-4-基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺；

5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺；以及

或任何上述化合物的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物选自：

4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

4-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

4-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

4-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((R)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

4-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((R)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

(S)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；以及

(R)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈；

或任何上述化合物的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式I：

中的星号碳为手性碳并且所述化合物或所述盐为(S)-对映异构体。

在一些实施方案中，化合物为式IIa的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²为甲氧基、乙氧基、-OCHF₂、甲基、-F或-CHF₂；

R⁴为甲基、Cl、F或CN；并且

R⁵为甲基、Cl、F或CN。

在一些实施方案中，化合物为式IIa的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²为甲氧基、乙氧基、-OCHF₂、甲基、-F或-CHF₂；

R⁴为甲基、Cl、F或CN；

R⁵为甲基、Cl、F或CN；并且

R⁸为H、卤代、CN、甲基或Cy²；其中所述Cy²选自环丙基、苯基、吡唑环、吡啶环或嘧啶环，其各自任选被1个选自以下的R¹¹取代：OH、CN、氟基、甲基、2-羟乙基、二甲基氨甲酰基、氨基、甲基氨甲酰基以及二甲基氨甲酰基。

在一些实施方案中，化合物为式IIb的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²为甲氧基、乙氧基、-OCHF₂、甲基、-F或-CHF₂；

R⁴为甲基、Cl、F或CN；并且

R⁵为甲基、Cl、F或CN。

在一些实施方案中，化合物为式IIIa的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²为甲氧基、乙氧基、-OCHF₂、甲基、-F或-CHF₂；

R⁴为甲基、Cl、F或CN；并且

R⁵为甲基、Cl、F或CN。

在一些实施方案中，化合物为式IVa的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²为甲氧基、乙氧基、-OCHF₂、甲基、-F或-CHF₂；

R⁴为甲基、Cl、F或CN；并且

R⁵为甲基、Cl、F或CN。

在一些实施方案中，化合物为式Va的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R²为甲氧基、乙氧基、-OCHF₂、甲基、-F或-CHF₂；R⁴为甲基、Cl、F或CN；并且

R⁵为甲基、Cl、F或CN。

在一些实施方案中，化合物为式VIII的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为式IX的化合物：

或其药学上可接受的盐。

应进一步了解，为清楚起见在单独实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可在单一实施方案中组合提供。

本申请进一步提供一种式VII的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

G为NH，n为1，并且V为O；或

G为NH，n为0，并且V为O或CH₂；或

G为O，n为0并且V为NH；

X为CR⁹或N；

W为CR⁷或N；

Y为CR⁸、CR^8a或N；

Z为单键或C(＝O)；

R¹为C_1-3烷基；

R⁷为H或C_1-4烷基；

R¹⁰为H或C_1-4烷基；

各R^e独立地选自H、CN、OH、C_1-4烷基以及C_1-4烷氧基；

或R^c2以及R^d2连同其所连接的N原子一起形成4、5、6或7元杂环烷基，其任选被-OH或C_1-3烷基取代；并且

在一个实施方案中，式VII的化合物不是实例310-311以及323-325的化合物。在另一个实施方案中，式VII的化合物选自实例310-311以及323-325的化合物。

在一些实施方案中，R¹为甲基。

在一些实施方案中，R²为C_1-3烷氧基。

在一些实施方案中，R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基。

在一些实施方案中，R⁴为甲基。

在一些实施方案中，R⁵为卤代。

在一些实施方案中，R⁵为氯基或氟基。

在一些实施方案中，R⁶为H。

在一些实施方案中，R⁸为C_1-6烷基。

在一些实施方案中，R⁸为甲基。

在一些实施方案中，R¹⁰为H。

在一些实施方案中，G为NH，n为0并且V为O。

在一些实施方案中，G为NH，n为0并且V为CH₂。在一些实施方案中，G为NH，n为1并且V为O。

在一些实施方案中，G为O，n为0并且V为NH。

在一些实施方案中，化合物为具有式VIIa的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物为具有式VIIb的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中：

G为NH；

n为0；

V为O；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

在一些实施方案中：

G为NH；

n为0；

V为CH₂；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

在一些实施方案中：

G为NH；

n为1；

V为O；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

在一些实施方案中：

G为O；

n为0；

V为NH；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代；

R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

在一些实施方案中，化合物选自：

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮；

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈；

6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮；

5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮；

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮；以及

5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮，

或任何上述化合物的其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，化合物选自：

(S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；

(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；

(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；以及

(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；

或任何上述化合物的其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，式VII：

中的星号碳为手性碳并且所述化合物或盐为(S)-对映异构体。

相反，为简洁起见在单一实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可单独或以任何适合的子组合提供。

在本说明书中各处，描述了二价连接取代基。明确意图的是各二价连接取代基包括连接取代基的正向与反向形式两者。例如，-NR(CR’R”)_n-包括-NR(CR’R”)_n-与-(CR’R”)_nNR-两者。当结构明确需要连接基团时，针对所述基团列出的马库西(Markush)变数应理解为连接基团。

术语“n元”(其中n为整数)通常描述某一部分中的成环原子数，其中成环原子数为n。例如，哌啶基为6元杂环烷基环的实例，吡唑基为5元杂芳基环的实例，吡啶基为6元杂芳基环的实例，并且1,2,3,4-四氢-萘为10元环烷基的实例。

如本文所用，词组“任选被取代”意指未取代或取代。如本文所用，术语“取代的”意指氢原子被移除并且置换为取代基。应了解给定原子处的取代受化合价限制。

在整篇定义中，术语“C_n-m”指示包括端点的范围，其中n和m为整数并且指示碳数目。实例包括C_1-4、C_1-6等。

如本文所用，单独或与其它术语组合使用的术语“C_n-m烷基”是指可为直链或支链的具有n至m个碳原子的饱和烃基团。在一些实施方案中，烷基含有1至6个碳原子、1至4个碳原子、1至3个碳原子、或1至2个碳原子。烷基部分的实例包括(但不限于)化学基团，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基；高碳数同系物，如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丙基等。

如本文所用，“C_n-m烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键并且具有n至m个碳的烷基。在一些实施方案中，烯基部分含有2至6、2至4、或2至3个碳原子。示例性烯基包括(但不限于)乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁烯基、仲丁烯基等。

如本文所用，“C_n-m炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键并且具有n至m个碳的烷基。示例性炔基包括(但不限于)乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基等。在一些实施方案中，炔基部分含有2至6、2至4、或2至3个碳原子。

如本文所用，单独或与其它术语组合使用的术语“亚烷基”是指二价烷基连接基团。亚烷基的实例包括(但不限于)乙-1,2-二基、丙-1,3-二基、丙-1,2-二基、丁-1,4-二基、丁-1,3-二基、丁-1,2-二基、2-甲基-丙-1,3-二基等。

如本文所用，单独或与其它术语组合使用的术语“C_n-m烷氧基”是指式-O-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳。示例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基氨基”是指式-NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷氧基羰基”是指式-C(O)O-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基羰基”是指式-C(O)-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基羰基氨基”是指式-NHC(O)-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)₂-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“氨基磺酰基”是指式-S(O)₂NH₂的基团。

如本文所用，术语“C_n-m烷基氨基磺酰基”是指式-S(O)₂NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“二(C_n-m烷基)氨基磺酰基”是指式-S(O)₂N(烷基)₂的基团，其中各烷基独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“氨基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)₂NH₂的基团。

如本文所用，术语“C_n-m烷基氨基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)₂NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“二(C_n-m烷基)氨基磺酰基氨基”是指式-NHS(O)₂N(烷基)₂的基团，其中各烷基独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，单独或与其它术语组合使用的术语“氨基羰基氨基”是指式-NHC(O)NH₂的基团。

如本文所用，术语“C_n-m烷基氨基羰基氨基”是指式-NHC(O)NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“二(C_n-m烷基)氨基羰基氨基”是指式-NHC(O)N(烷基)₂的基团，其中各烷基独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基氨甲酰基”是指式-C(O)-NH(烷基)的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“硫基”是指式-SH的基团。

如本文所用，术语“C_n-m烷基硫基”是指式-S-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基亚磺酰基”是指式-S(O)-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“C_n-m烷基磺酰基”是指式-S(O)₂-烷基的基团，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“氨基”是指式-NH₂的基团。

如本文所用，术语“氨甲酰基”是指式-C(O)NH₂的基团。

如本文所用，单独或与其它术语组合使用的术语“羰基”是指-C(O)-基团。

如本文所用，术语“氰基-C_1-3烷基”是指式-(C_1-3亚烷基)-CN的基团。

如本文所用，术语“HO-C_1-3烷基”是指式-(C_1-3亚烷基)-OH的基团。

如本文所用，术语“C_1-3烷氧基-C_1-3烷基”是指式-(C_1-3亚烷基)-O(C_1-3烷基)的基团。

如本文所用，术语“羧基”是指式-C(O)OH的基团。

如本文所用，术语“二(C_n-m烷基)氨基”是指式-N(烷基)₂的基团，其中两个烷基各自独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，术语“二(C_n-m烷基)氨甲酰基”是指式-C(O)N(烷基)₂的基团，其中两个烷基各自独立地具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，各烷基独立地具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，“卤代”是指F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，卤代为F或Cl。

如本文所用，“C_n-m卤烷氧基”是指具有n至m个碳原子的式-O-卤烷基的基团。示例性卤烷氧基为OCF₃。在一些实施方案中，卤烷氧基仅被氟化。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，单独或与其它术语组合使用的术语“C_n-m卤烷基”是指具有一个卤素原子至2s+1个可相同或不同的卤素原子的烷基，其中“s”为烷基中的碳原子数，其中烷基具有n至m个碳原子。在一些实施方案中，卤烷基仅被氟化。在一些实施方案中，烷基具有1至6、1至4、或1至3个碳原子。

如本文所用，“环烷基”是指包括环化烷基和/或烯基的非芳族环烃。环烷基可包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠合环)基团和螺环。环烷基可具有3、4、5、6或7个成环碳(C_3-7)。环烷基的成环碳原子可任选被氧基或硫基取代。环烷基还包括亚环烷基。示例性环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环已二烯基、环庚三烯基、降冰片基(norbornyl)、降蒎烷基(norpinyl)、降蒈烷基(norcarnyl)等。在一些实施方案中，环烷基为环丙基、环丁基、环戊基或环己基。环烷基的定义中还包括一个或多个芳族环稠合于环烷基环(即具有与环烷基环共享的键)的部分，例如环戊烷、环己烷等的苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族环的环烷基可经由任何成环原子(包括稠合芳族环的成环原子)连接。

如本文所用，“杂芳基”是指具有至少一个选自硫、氧以及氮的杂原子环成员的单环或多环芳族杂环。在一些实施方案中，杂芳基环具有1、2、3或4个独立地选自氮、硫以及氧的杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基部分中的任何成环N都可为N-氧化物。在一些实施方案中，杂芳基具有5-10个环原子以及1、2、3或4个独立地选自氮、硫以及氧的杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基具有5-6个环原子以及1或2个独立地选自氮、硫以及氧的杂原子环成员。在一些实施方案中，杂芳基为5元或6元杂芳基环。

5元杂芳基环为具有含5个环原子的环的杂芳基，其中一个或多个(例如1、2或3个)环原子独立地选自N、O以及S。示例性5元环杂芳基为噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、吡唑基、异噻唑基、异噁唑基、1,2,3-三唑基、四唑基、1,2,3-噻二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-三唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-三唑基、1,3,4-噻二唑基以及1,3,4-噁二唑基。

6元杂芳基环为具有含6个环原子的环的杂芳基，其中一个或多个(例如1、2或3个)环原子独立地选自N、O以及S。示例性6元环杂芳基为吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基以及哒嗪基。

“双环C_9-10杂芳基”为具有9至10个环成员的双环稠合杂芳基。

如本文所用，“杂环烷基”是指具有一个或多个选自O、N或S的成环杂原子的非芳族单环或多环杂环。杂环烷基中包括单环4、5、6以及7元杂环烷基。杂环烷基也可包括螺环。示例性杂环烷基包括吡咯烷-2-酮、1,3-异噁唑烷-2-酮、吡喃基、四氢吡喃、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、吡咯烷基、异噁唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、氮杂环庚烷基、苯并氮呯等。杂环烷基的成环碳原子和杂原子可任选被氧基或硫基(例如C(O)、S(O)、C(S)或S(O)₂等)取代。杂环烷基可通过成环碳原子或成环杂原子连接。在一些实施方案中，杂环烷基含有0至3个双键。在一些实施方案中，杂环烷基含有0至2个双键。杂环烷基的定义中还包括一个或多个芳族环稠合于杂环烷基环(即具有与杂环烷基环共享的键)的部分，例如哌啶、吗啉、氮呯等的苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族环的杂环烷基可经由任何成环原子(包括稠合芳族环的成环原子)连接。在一些实施方案中，杂环烷基具有4-10、4-7或4-6个环原子以及1或2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子并且具有一个或多个氧化环成员。

在某些场合，定义或实施方案是指特定环(例如氮杂环丁烷环、吡啶环等)。除非另外指示，否则这些环可经由任何环成员连接，条件是不超过原子的化合价。例如，氮杂环丁烷环可在任何环位置处连接，而氮杂环丁烷-3-基环在3-位置处连接。

本文所述的化合物可为不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则意指所有立体异构体，如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代的碳原子的本发明的化合物可以光学活性或外消旋形式分离。如何由非光学活性起始物质制备光学活性形式的方法在本领域内为已知的，如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体也可存在于本文所述的化合物中，并且所有这些稳定异构体皆涵盖在本发明中。本发明的化合物的顺式和反式几何异构体得以描述并且其可以异构体的混合物形式或以分离异构形式分离。在一些实施方案中，化合物具有(R)-构型。在一些实施方案中，化合物具有(S)-构型。

可通过本领域内已知的众多方法中的任一种对化合物的外消旋混合物进行拆分。示例性方法包括使用为光学活性的成盐有机酸的手性拆分酸进行分段再结晶。适用于分段再结晶方法的拆分剂为例如光学活性酸，如D型和L型酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、杏仁酸(mandelic acid)、苹果酸、乳酸或各种光学活性樟脑磺酸，如β-樟脑磺酸。适于分段结晶方法的其它拆分剂包括α-甲基苯甲基胺的立体异构纯形式(例如S以及R形式或非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇、去甲麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙胺、1,2-二氨基环己烷等。

还可通过在装填有光学活性拆分剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱上洗脱来对外消旋混合物进行拆分。适合的洗脱溶剂组成可由本领域技术人员确定。

本发明的化合物还包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键交换并伴随质子迁移而产生。互变异构形式包括质子转移互变异构体，其为具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。示例性质子转移互变异构体包括酮-烯醇对、酰胺-亚胺酸对、内酰胺-内酰亚胺对、烯胺-亚胺对、以及质子可占据杂环系统的两个或更多个位置的环形式，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚、以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡状态或通过适当取代而在空间上锁定为一种形式。

本发明的化合物还可包括中间体或最终化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。

如本文所用的术语“化合物”意图包括所描绘结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体以及同位素。除非另外规定，否则由名称或结构鉴别为一种特定互变异构形式的本文化合物意图包括其它互变异构形式。

所有化合物和其药学上可接受的盐可连同如水和溶剂的其它物质一起存在(例如水合物和溶剂合物)或可分离。

在一些实施方案中，本发明的化合物或其盐实质上被分离。“实质上被分离”意指化合物从其形成或检测时所处的环境至少部分或实质上分离。部分分离可包括例如富含本发明的化合物的组合物。实质上分离可包括含有至少约50重量％、至少约60重量％、至少约70重量％、至少约80重量％、至少约90重量％、至少约95重量％、至少约97重量％或至少约99重量％的本发明的化合物或其盐的组合物。分离化合物和其盐的方法在本领域内为常规的。

词组“药学上可接受的”在本文中用来指在合理医学判断范围内适用于与人和动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

如本文所用的表述“环境温度”和“室温”或“rt”为本领域所了解，并且通常指大致为进行反应所处的空间的温度的温度(例如反应温度)，例如约20℃至约30℃的温度。

本发明还包括本文所述的化合物的药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过使现有酸或碱部分转化成其盐形式而被改性。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基(如胺)的无机酸或有机酸盐；酸性残基(如羧酸)的碱盐或有机盐；及类似物。本发明的药学上可接受的盐包括母体化合物的例如由无毒无机酸或有机酸形成的常规无毒盐。本发明的药学上可接受的盐可通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。一般而言，这些盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适当碱或酸在水或有机溶剂或两者的混合物中反应来制备；一般而言，如醚、乙酸乙酯、醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇)或乙腈(ACN)的非水性介质是优选的。适合盐的清单见于Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal ofPharmaceutical Science,66,2(1977)中，其各自以引用的方式整体并入本文。

合成

本发明的化合物(包括其盐)可使用已知有机合成技术来制备并且可根据众多可能的合成途径中的任一种来合成。

制备本发明的化合物的反应可在可由有机合成领域技术人员容易选择的适合溶剂中进行。适合溶剂可实质上不与起始物质(反应物)、中间体或产物在进行反应所处的温度(例如可在溶剂的冷冻温度至溶剂的沸腾温度的范围内的温度)下反应。给定反应可在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。视特定反应步骤而定，适于特定反应步骤的溶剂可由熟练技术人员选择。

本发明的化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱除保护。保护和脱除保护的需要和适当保护基的选择可易于由本领域技术人员确定。保护基的化学可见于例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,Wiley&Sons,Inc.,New York(1999)中，其以引用的方式整体并入本文。

可根据本领域内已知的任何适合方法来监测反应。例如，产物形成可通过分光手段，如核磁共振光谱法(例如¹H或¹³C)、红外光谱法、分光亮度测定法(例如紫外-可见)、质谱；或通过色谱方法，如高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱(LCMS)或薄层色谱法(TLC)进行监测。化合物可由本领域技术人员利用多种方法，包括高效液相色谱法(HPLC)(“Preparative LC-MS Purification:Improved Compound Specific MethodOptimization”Karl F.Blom,Brian Glass,Richard Sparks,Andrew P.CombsJ.Combi.Chem.2004,6(6),874-883，其以引用的方式整体并入本文)和正相硅石色谱法进行纯化。

例如，式I的化合物可如方案I中所示来形成。化合物(i)可用N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺进行卤化以得到化合物(ii)，其中X¹＝Cl、Br或I。(ii)的卤代可在标准铃木(Suzuki)条件或标准斯蒂尔(Stille)条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸(Negishi)条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式(iii)衍生物。或者，R³-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(ii)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德(Buchwald)条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到酮(iii)。用如四氢硼酸钠的适合试剂还原酮(iii)可提供醇(iv)，其可转化成携带离去基团的衍生物(v)(例如Lg为经由与氰脲酰氯反应所得的氯基或经由与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)。最终，可使化合物(v)与适当杂环(vi)(例如3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮)在碱性条件(例如NaH或CsCO₃或K₂CO₃)下反应以得到式I的化合物(vii)。

方案I

或者，式I的化合物还可如方案II中所示来形成。酮化合物(i)可用N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺卤化以得到化合物(ii)，其中X¹＝Cl、Br或I。酮(ii)可用如四氢硼酸钠的适合试剂还原以得到醇(iii)，其可转化成携带离去基团的衍生物(例如Lg为经由与氰脲酰氯反应所得的氯基或经由与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)并且接着与杂环反应以得到杂环衍生物(iv)。化合物(iv)的对映异构体可通过手性色谱法分离以得到杂环化合物(v)的单一对映异构体。最终，(v)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式I的衍生物(vi)。

方案II

可如方案III中所示形成式I的化合物，其中L为O、N或S。硫醇、酚或胺(i)可使用光延(Mitsunobu)条件(例如R’OH、DEAD、Ph₃P)或标准烷基化条件(R’-Lg，Lg＝离去基团)进行烷基化以分别得到硫醚、醚或烷基胺衍生物(ii)。(ii)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式(iii)的衍生物。或者，R³-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(ii)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)-钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到式(iii)的化合物。可使用如方案I和II中所示的类似方法转化酮(iii)以得到式I的化合物(iv)。或者，可使用如方案I和II中所示的类似方法转化卤代-酮(ii)以得到卤代中间体(v)。通过方案I和II中所述的类似方法进行R³-M与卤代中间体(v)的铃木、斯蒂尔、根岸或布赫瓦尔德偶联也可得到式I的化合物(vi)。

方案III

式I的化合物可如方案IV中所示来形成。化合物(i)可用适合酰化试剂(例如R¹-COCl)酰化以形成酯，其可在路易斯(Lewis)酸条件(例如BF₃/HOAc络合物)下重排以得到酮(ii)。使用NX¹S(例如NX¹S＝N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺)使酮(ii)卤化可得到化合物(iii)，其中X¹＝Cl、Br或I。酚可使用标准条件(例如Tf₂O)转化成三氟甲磺酸酯(iv)。(iv)的三氟甲磺酸酯基团可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式(v)的衍生物。或者，R²-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(iv)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到酮(v)。(v)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式(vi)的衍生物。或者，R³-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(iv)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到酮(vi)。可使用如方案I和II中所示的类似方法转化酮(vi)以得到式I的化合物(viii)。

或者，可使用如方案I和II中所示的类似方法转化卤代-酮(v)以得到卤代中间体(vii)。通过方案I和II中所述的类似方法进行M-R³与化合物(vii)的铃木、斯蒂尔、根岸或布赫瓦尔德偶联还可得到式I的化合物(viii)。

方案IV

可用于方案I、II和III的过程中的酮可如以下方案V中所示来形成。羧酸(i)可用偶联剂(例如HBTU、HATU或EDC)活化并且接着与N,O-二甲基羟胺反应以得到N-甲氧基-N-甲基甲酰胺衍生物(ii)。可接着使酰胺(ii)与式R¹-MgX¹(X¹＝卤代)的格里纳德(Grignard)试剂反应以得到酮(iii)。可使用如方案I、II和III中所示的类似方法转化酮(iii)以得到式I的化合物。

方案V

可用于方案I、II和III的过程中的酮还可如以下方案VI中所示来形成。羧酸(i)可用偶联剂(例如HBTU或HATU)活化并且接着与N,O-二甲基羟胺反应以得到N-甲氧基-N-甲基甲酰胺。硫醇、酚或胺可使用光延条件(例如R’OH、DEAD、Ph₃P)或标准烷基化条件(R’-Lg，Lg＝离去基团)进行烷基化以分别得到硫醚、醚或烷基胺衍生物(ii)。(ii)(X¹为卤代)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式(iii)的衍生物。或者，R³-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(ii)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到酰胺(iii)。化合物(iii)与式R¹-MgX²(X²＝卤代)的格里纳德试剂的反应可得到酮(iv)。可使用如方案I、II和III中所示的类似方法转化酮(iv)以得到式I的化合物。

方案VI

可用于方案I-III的过程中的化合物还可如方案VII中所示来形成。可使用标准氰化条件(例如Pd(0)和Zn(CN)₂)将卤代-酮(i)(X¹为卤代)转化成氰基-酮(ii)。在酸或碱条件下水解(ii)的氰基可得到羧酸，其可使用偶联剂(例如HATU、HBTU、EDC)和适当胺(HNR^cR^d)偶联至胺以得到酰胺(iii)。在一些实施方案中，R^c和R^d连同其所连接的氮原子一起可任选环化以形成4-7元杂环烷基(借此提供其中R³为C(O)R^b的化合物，其中R^b为4-7元杂环烷基)。可使用如方案I、II和III中所示的类似方法转化酰胺(iii)的酮以得到式I的化合物。

方案VII

可用于方案I-III的过程中的其它化合物可如方案VIII中所示来形成。可使用标准硝化条件(例如HNO₃)将酮(i)转化成硝基-酮(ii)。在标准条件(例如Fe、Zn、Pd/C上的H₂)下还原(ii)的硝基可得到氨基化合物，其可用适当酰化剂(例如RC＝OCl、ROC＝OCl、SO₂Cl、RRNC＝O)酰化以得到酮(iii)。可使用如方案I、II和III中所示的类似方法转化酮(iii)以得到式I的化合物。在一些实施方案中，R^c和R^d连同其所连接的氮原子一起可任选环化以形成4-7元杂环烷基(借此提供其中R³为C(O)R^b的化合物，其中R^b为4-7元杂环烷基)。

方案VIII

可用于方案I、II和III的过程中的酮还可如以下方案IX中所示来形成。(i)的卤代(例如X¹＝I)可在标准克内歇尔(Knochel)/根岸条件(例如在如三-(2-呋喃基)膦和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)的钯(0)催化剂和1,2-二溴乙烷和氯三甲基硅烷存在下)下偶联至锌试剂R³-Zn(例如3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和Zn粉)以得到式(ii)的衍生物。氮杂环丁烷(ii)可脱除保护(例如Pg＝Boc，使用TFA)并且接着在烷基化、酰化或还原性胺化(例如RX(如R-Br、RCOCl、R-SO₂Cl、RN＝C＝O或RCHO)和还原剂)条件下反应以得到酮衍生物(iii)，其可通过方案I、II和III中所示的类似方法转化成式I的化合物(v)。或者，酮(ii)可用适合试剂(NaBH₄或科里氏(Corey’s)手性CBS催化剂以主要得到醇的一种异构体)还原，所得醇可转化成离去基团(例如Lg为经由与氰脲酰氯反应所得的氯基或经由与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)并且接着使氯基或甲磺酸酯基与适当杂环(例如类似于方案I、II和III中所示的方法)反应以得到式(iv)的衍生物。胺上的保护基可在标准条件下移除并且接着在烷基化、酰化或还原性胺化条件(例如RX(如R-Br、RCOCl、R-SO₂Cl、RN＝C＝O或RCHO)和还原剂)下反应以得到式I的化合物(v)。

方案IX

式I的化合物还可如方案X中所示来形成。可使化合物(i)与卤代取代的杂环(ii)(例如3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或4-氨基-6-碘吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮)在碱性条件(例如NaH或CsCO₃或K₂CO₃)下反应以得到化合物(iii)，其中V＝Cl、Br或I。(iii)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R⁸-M为R⁸-B(OH)₂、R⁸-Sn(Bu)₄或Zn-R⁸)，以得到式(iii)的衍生物。或者，R⁸-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(iii)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到式I的化合物(iv)。

方案X

式I的化合物还可如方案XI中所示来形成。氰基衍生物(i)可水解成酸(例如在酸或碱存在下)以得到相应酸(ii)。可在如TEA或DIEA的碱存在下使用适当偶联剂(例如HATU、HBTU、EDC)使羧酸(ii)偶联至胺(例如HNR^c2R^d2为二甲胺)(iii)以得到酰胺(iii)。羧酸(ii)还可用适当还原剂(例如LAH或NaBH₄)还原成醇(iv)，其中R^t＝H，或转化成酯并且与格里纳德试剂(例如R^tMgBr)或烷基锂(例如R^tLi)反应以得到二级或三级醇(iv)。醇(iv)可通过与适合试剂(如氰脲酰氯)反应而转化成离去基团(如卤代)来活化，并且接着与适当胺(例如HNR^c2R^d2)反应以得到式I的化合物(v)。或者，可使醇(iv)在光延条件下(例如在DEAD、三苯膦和化合物A(例如携带NH的酚或杂芳基，例如咪唑)存在下)反应以得到式I的化合物(vi)。自方案XI中描绘的化合物起始，其它修改对于本领域技术人员而言将显而易知(例如醇的酯化等)。

方案XI

式I的化合物可如方案XII中所说明从酸氯化物化合物(i)合成。酸氯化物(i)与丙二腈在如氢化钠的碱存在下缩合可得到二氰基烯醇中间体，其可用如硫酸二甲酯的适当试剂在如碳酸氢钠的适当碱存在下进行O-甲基化以产生烯醇醚(ii)。烯醇醚(ii)与二盐酸肼在如三乙胺的适合碱存在下反应可得到吡唑化合物(iii)。可接着使吡唑化合物(iii)与甲酰胺反应以得到吡唑并嘧啶(iv)。最终，可使化合物(iv)与携带离去基团的适当化合物(v)在碱性条件下反应以得到式I的化合物(vi)。

方案XII

式I的化合物可自市售4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(i)合成。用如N-卤代丁二酰胺(NX¹S，其中X¹＝Cl、Br或I)的适合试剂对化合物(i)进行卤化可得到相应卤代化合物(ii)。卤代衍生物(ii)与携带离去基团的化合物(iii)在适合碱(例如二异丙基乙胺)存在下反应可得到化合物(iv)。卤代化合物(iv)可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R^8a-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R^8a-M为R^8a-B(OH)₂、R^8a-Sn(Bu)₄或Zn-R^8a)，以得到式(iii)的衍生物。或者，R^8a-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，其与化合物(iii)的偶联是通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热来进行以得到式I的化合物(v)。

方案XIII

式I的化合物还可如方案XIV中所示来形成。(i)的卤代X¹可在标准赫克(Heck)条件(例如在如乙酸钯的钯(II)催化剂存在下)下偶联至烯(例如丙烯酸酯或丙烯酰胺)以得到式(ii)的烯。烯(ii)与硝基甲烷在DBU存在下反应可得到硝基衍生物(iii)，其可在标准条件(例如NiCl₂/NaBH₄)下还原以得到游离胺，其环化以形成内酰胺(iv)。内酰胺可在标准条件(例如R^3a-X²，其中X²＝卤代，在如TEA或NaH的碱存在下)下进行烷基化以得到N-烷基-内酰胺(v)。式(v)的化合物和由用如LiAlH₄的适合还原剂还原内酰胺(v)获得的吡咯烷可使用方案I、II和III中所述的条件转化成式I的化合物。

方案XIV

式I的化合物还可如方案XV中所示来形成。(i)的卤代X¹可在标准铃木条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为适当取代的金属(例如R³-M为R³B(OH)₂；用于产生R³-M的适当非限制性起始物质示于方案XII中)，以得到式(ii)烯。用mCPBA使烯(ii)环氧化可得到环氧化物(iii)，其可与二级胺或一级胺(胺＝NHR^cR^d；对于一级胺而言，R^c＝H)反应以得到式(iv)的氨基化合物。二级胺或三级胺衍生物(iv)可进一步与羰基二咪唑或光气反应以形成噁唑烷酮(v)或与乙酰基-卤化物(例如在如TEA的碱存在下氯-乙酰氯)反应以得到N-酰基衍生物，其可在用碱(例如NaH)处理后转化成吗啉酮衍生物(vi)。可使用标准条件(例如用THP基团保护的化合物可用如TFA或HCl的酸处理)脱除式(iv、v和vi)化合物的保护基以得到式I的化合物。

方案XV

式I的化合物还可如方案XVI中所示来形成。式(i)的烯在适合条件(A或B，如JACS,2001,123(9),1862-1871和J.Org.Chem,2011,76,358-372中所述)下的夏普莱斯(Sharpless)氨基-羟基化可得到氨基-羟基异构体(ii)或(iii)。可使化合物(ii)和(iii)与羰基二咪唑或光气反应以形成噁唑烷酮(iv)或与乙酰基-卤化物(例如在如TEA的碱存在下氯-乙酰氯)反应以得到N-酰基衍生物，其可在用碱(例如NaH)处理后转化成吗啉酮衍生物(v)。替代性氨基-羟基异构体(iii)可如方案XV中所示转化成噁唑烷酮和吗啉酮衍生物。

方案XVI

式I的化合物可如方案XVII中所示来合成。(i)的卤代(例如X¹＝Cl、Br、I)可在标准条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下频哪醇硼酸酯)下转化成硼酸酯(ii)。可使硼酸酯(ii)与芳基卤化物或杂芳基卤化物(例如R³-X²)在铃木条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和如Na₂CO₃的碱存在下)下反应以得到式(iii)。可使用方案I、II或III中所述的反应条件使式(iii)转化成式I。

方案XVII

可如方案XVIII中所示形成式I的化合物，其中R⁴＝F或CN。化合物(i)可用适合酰化试剂(例如R¹-COCl)酰化以形成酯，其可在路易斯酸条件(例如BF₃/HOAc络合物)下重排以得到酮(ii)。酮(ii)可用N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺卤化以得到酚(iii)，其中X¹＝Cl、Br或I。化合物(iii)可进行烷基化(例如R²-X和碱，如NaH或Na₂CO₃；或在光延条件下)以得到醚(iv)。可置换(例如用NaCN或KCN置换)(iv)的氟基以得到氰基衍生物(v)。(v)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)或标准根岸条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³)，以得到式(vi)的衍生物。或者，R³-M可为环胺(其中M为H并且连接至胺氮)，并且通过在碱中或在布赫瓦尔德条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如烷氧化物碱)存在下)下加热偶联至化合物(v)以得到酮(vi)。用如四氢硼酸钠或科里CBS试剂的适合试剂还原酮(vi)可提供醇，其可转化成携带离去基团的衍生物(例如Lg为经由与氰脲酰氯反应所得的氯基或经由与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)并且接着与适当杂环(例如3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮)在碱性条件(例如NaH或CsCO₃或K₂CO₃)下反应以得到式I的化合物(viii)。或者，可颠倒最后两个步骤以使得酮(v)可还原以得到醇，其转化成离去基团并且首先用杂环置换并接着进行铃木、斯蒂尔、根岸或布赫瓦尔德偶联以得到式I的化合物(viii)。还可通过去除方案XVIII中的氰化步骤来使氟基衍生物(iv)转化成式I的化合物。

方案XVIII

式I的化合物还可如方案XIX中所示来形成。化合物(i)可用适合酰化试剂(例如R¹-COCl)酰化以形成酯，其可在路易斯酸条件(例如AlCl₃或BF₃/HOAc络合物)下重排以得到酮(ii)。使用NX¹S(例如NX¹S＝N-氯丁二酰胺、N-溴丁二酰胺或N-碘丁二酰胺)使酮(ii)卤化可得到化合物(iii)，其中X¹＝Cl、Br或I。可使用标准条件(例如无机碱(如K₂CO₃)和烷基卤化物(如Et-I))使酚转化成醚(iv)。(iv)的卤代可在标准铃木条件或标准斯蒂尔条件(例如在如四(三苯膦)钯(0)的钯(0)催化剂和碱(例如碳酸氢盐或碳酸盐碱)存在下)下偶联至R³-M，其中M为硼酸、硼酸酯或适当取代的金属(例如R³-M为R³-B(OH)₂、R³-Sn(Bu)₄或Zn-R³并且R³为取代或未取代的烯烃，如乙烯基)，以得到式(v)的衍生物。可接着使用夏普莱斯条件使烯二羟基化以得到二醇(vi)。可使用标准夏普莱斯不对称二羟基化方法实现二级醇的一种对映异构体的增强。二级醇可经由6步过程(例如一级醇的硅烷基保护(例如TBS-Cl和DIEA)、二级醇的甲磺酸化、用NaN₃置换甲磺酸酯、用Ph₃P还原迭氮化物、所得一级胺的Boc保护和接着用TBAF脱除一级醇上的硅烷基保护基)转化成经N-Boc保护的胺以得到氨基-醇(vii)。可通过用光气处理使氨基-醇(vii)转化成噁唑烷酮并且随后用如四氢硼酸钠或硼氢化钠的适合试剂还原酮可提供醇(viii)，其可转化成携带离去基团的衍生物(ix)(例如Lg为经由与氰脲酰氯反应所得的氯基或经由与甲烷磺酸酐反应所得的甲磺酸酯基)。最终，可使化合物(ix)与适当杂环(x)(例如3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺或4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮)在碱性条件(例如NaH或Cs₂CO₃或K₂CO₃)下反应以得到式I的化合物(xi)。

方案XIX

方法

本发明的化合物可调节包括例如磷酸肌醇3-激酶(PI3K)在内的各种激酶中的一种或多种的活性。术语“调节”欲指能够增加或降低PI3K家族的一个或多个成员的活性的能力。因此，本发明的化合物可用于通过使PI3K与任何一种或多种本文所述的化合物或组合物接触来调节所述PI3K的方法中。在一些实施方案中，本发明的化合物可充当一种或多种PI3K的抑制剂。在其它实施方案中，本发明的化合物可用于通过施用调节量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐来调节需要调节受体的个体的PI3K活性。在一些实施方案中，调节为抑制。

鉴于癌细胞生长和存活受多个信号传导路径影响，所以本发明适用于治疗特征在于药物抗性激酶突变体的疾病病况。此外，对活性受其调节的激酶展现不同偏好性的不同激酶抑制剂可组合使用。此方法可证明通过靶向多个信号传导路径来高效治疗疾病病况、降低细胞中出现药物抗性的可能性、并且降低疾病治疗剂的毒性。

本发明的化合物结合和/或调节(例如抑制)的激酶包括PI3K家族的任何成员。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ或PI3Kδ。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kγ或PI3Kδ。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kγ。在一些实施方案中，PI3K为PI3Kδ。在一些实施方案中，PI3K包括突变。突变可为一个氨基酸被置换成另一氨基酸，或缺失一个或多个氨基酸。在这类实施方案中，突变可存在于PI3K的激酶域中。

在一些实施方案中，使用多于一种本发明的化合物来抑制一种激酶(例如PI3Kγ或PI3Kδ)的活性。

在一些实施方案中，使用多于一种本发明的化合物来抑制多于一种激酶，如至少两种激酶(例如PI3Kγ和PI3Kδ)。

在一些实施方案中，一种或多种化合物与另一种激酶抑制剂组合用于抑制一种激酶(例如PI3Kγ或PI3Kδ)的活性。

在一些实施方案中，一种或多种化合物与另一种激酶抑制剂组合用于抑制多于一种激酶(例如PI3Kγ或PI3Kδ)，如至少两种激酶的活性。

本发明的化合物可具有选择性。“选择性”意指化合物结合或抑制激酶的亲和力或效能相较于至少一种其它激酶分别较大。在一些实施方案中，本发明的化合物为对PI3Kγ或PI3Kδ的选择性超过对PI3Kα和/或PI3Kβ的选择性的选择性抑制剂。在一些实施方案中，本发明的化合物为PI3Kδ的选择性抑制剂(例如超过PI3Kα、PI3Kβ以及PI3Kγ)。在一些实施方案中，本发明的化合物为PI3Kγ的选择性抑制剂(例如超过PI3Kα、PI3Kβ以及PI3Kδ)。在一些实施方案中，选择性可为至少约2倍、5倍、10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约200倍、至少约500倍或至少约1000倍。选择性可通过本领域内的常规方法进行测量。在一些实施方案中，选择性可在各酶的K_m ATP浓度下测试。在一些实施方案中，本发明的化合物的选择性可通过与特定PI3K激酶活性相关的细胞分析测定。

本发明的另一方面是关于治疗个体(例如患者)的激酶(如PI3K)相关性疾病或病症的方法，其是通过向需要此治疗的所述个体施用治疗有效量或剂量的一种或多种本发明的化合物或其药物组合物来实现。PI3K相关性疾病可包括直接或间接与PI3K的表达或活性相关的任何疾病、病症或病状，包括过度表达和/或活性水平异常。在一些实施方案中，疾病可与Akt(蛋白质激酶B)、雷帕霉素(rapamycin)的哺乳动物目标(mTOR)、或磷酸肌醇依赖性激酶1(PDK1)相关。在一些实施方案中，mTOR相关性疾病可为发炎、动脉粥样硬化、牛皮癣、再狭窄、良性前列腺肥大、骨病症、胰腺炎、血管生成、糖尿病性视网膜病变、动脉粥样硬化、关节炎、免疫病症、肾病或癌症。PI3K相关性疾病还可包括可通过调节PI3K活性进行预防、改善或治愈的任何疾病、病症或病状。在一些实施方案中，疾病的特征在于PI3K活性异常。在一些实施方案中，疾病的特征在于PI3K突变。在这些实施方案中，突变可存在于PI3K的激酶域中。

PI3K相关性疾病的实例包括涉及全身的免疫基疾病，包括例如类风湿性关节炎、过敏、哮喘、肾小球性肾炎、狼疮或与以上任一者相关的发炎。

PI3K相关性疾病的其它实例包括癌症，如乳癌、前列腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液科癌症。

在一些实施方案中，血液科癌症为急性髓母细胞性白血病(AML)或慢性骨髓性白血病(CML)或B细胞淋巴瘤。

PI3K相关性疾病的其它实例包括肺病，如急性肺损伤(ALI)和成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。

PI3K相关性疾病的其它实例包括骨关节炎、再狭窄、动脉粥样硬化、骨病症、关节炎、糖尿病性视网膜病变、牛皮癣、良性前列腺肥大、发炎、血管生成、胰腺炎、肾病、炎性肠病、重症肌无力、多发性硬化症或干燥综合征以及类似疾病。

如本文所用，术语“接触”是指使指定部分在体外系统或体内系统中集合在一起。例如，使PI3K与本发明的化合物“接触”包括向具有PI3K的个体或患者(如人)施用本发明的化合物和例如将本发明的化合物引入含有包含PI3K的细胞或经纯化制剂的样品中。

如本文所用，可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选为小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最优选为人。

如本文所用，词组“治疗有效量”是指活性化合物或药学药剂的引发由研究人员、兽医、医生或其它临床医师在组织、系统、动物、个体或人中所寻求的生物或医学反应的量。在一些实施方案中，向患者或个体施用的化合物或其药学上可接受的盐的剂量为约1mg至约2g、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约1mg至约100mg、约1mg至50mg、或约50mg至约500mg。

如本文所用，术语“治疗”是指以下各项的一项或多项：(1)预防疾病；例如预防可能易患疾病、病状或病症但尚未经历或显示疾病的病理学或症状的个体的疾病、病状或病症；(2)抑制疾病；例如抑制正经历或显示疾病、病状或病症的病理学或症状的个体的疾病、病状或病症(即遏制病理学和/或症状的进一步发展)；以及(3)改善疾病；例如改善正经历或显示疾病、病状或病症的病理学或症状的个体的疾病、病状或病症(即逆转病理学和/或症状)，如降低疾病的严重性。

组合疗法

一种或多种其它药学药剂，例如像化学治疗剂、消炎剂、类固醇、免疫抑制剂以及Bcr-Abl、Flt-3、EGFR、HER2、JAK(例如JAK1或JAK2)、c-MET、VEGFR、PDGFR、cKit、IGF-1R、RAF、FAK、Akt、mTOR、PIM以及AKT(例如AKT1、AKT2或AKT3)激酶抑制剂(例如像WO2006/056399中所述的那些)或其它药剂(如治疗性抗体)可与本发明的化合物组合用于治疗PI3K相关性疾病、病症或病状。一种或多种其它药学药剂可同时或依序向患者施用。

用于组合疗法中的示例性抗体包括(但不限于)曲妥珠单抗(Trastuzumab)(例如抗HER2)、雷珠单抗(Ranibizumab)(例如抗VEGF-A)、贝伐单抗(Bevacizumab)(商品名阿伐斯汀(Avastin)，例如抗VEGF)、帕尼单抗(Panitumumab)(例如抗EGFR)、西妥昔单抗(Cetuximab)(例如抗EGFR)、利妥昔(Rituxan)(抗CD20)和针对c-MET的抗体。

一种或多种下列药剂可与本发明的化合物组合使用并且呈现为非限制性清单：细胞生长抑制剂、顺铂(cisplatin)、多柔比星(doxorub icin)、泰索帝(taxotere)、泰素(taxol)、依托泊苷(etoposide)、伊立替康(irinotecan)、开普拓(camptostar)、拓扑替康(topotecan)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、埃博霉素(epothilones)、他莫昔芬(tamoxifen)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲氨蝶呤(methoxtrexate)、替莫唑胺(temozolomide)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、SCH66336、R115777、L778,123、BMS214662、易瑞沙(Iressa)、塔西瓦(Tarceva)、针对EGFR的抗体、Gleevec^TM、甘乐能(intron)、阿糖胞苷(ara-C)、阿霉素(adriamycin)、癌得星(cytoxan)、吉西他滨(gemcitabine)、尿嘧啶氮芥(Uracil mustard)、氮芥(Chlormethine)、异环磷酰胺(Ifosfamide)、美法仑(Melphalan)、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、哌泊溴烷(Pipobroman)、三伸乙基蜜胺(Triethylenemelamine)、三伸乙基硫磷酰胺(Triethylenethiophosphoramine)、白消安(Busulfan)、亚硝脲氮芥(Carmustine)、环己亚硝脲(Lomustine)、链脲霉素(Streptozocin)、达卡巴嗪(Dacarbaz ine)、氟尿苷(Floxuridine)、阿糖胞苷(Cytarabine)、6-巯基嘌呤(6-Mercaptopurine)、6-硫鸟嘌呤(6-Thioguanine)、磷酸氟达拉滨(Fludarabine phosphate)、奥沙利铂(oxaliplatin)、亚叶酸(leucovirin)、ELOXATIN^TM、喷司他丁(Pentostatine)、长春花碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春地辛(Vindesine)、博莱霉素(Bleomycin)、放线菌素(Dactinomycin)、道诺霉素(Daunorubicin)、多柔比星(Doxorubicin)、表柔比星(Epirubicin)、伊达比星(Idarubicin)、光神霉素(Mithramycin)、脱氧柯福霉素(Deoxycoformycin)、丝裂霉素-C(Mitomycin-C)、L-天冬酰胺酶(L-Asparaginase)、替尼泊苷(Teniposide)、17α-乙炔雌二醇(17.alpha.-Ethinylest radiol)、己烯雌酚(Diethylstilbestrol)、睾酮(Testosterone)、泼尼松(Pre dnisone)、氟羟甲基睪酮(Fluoxymesterone)、丙酸屈他雄酮(Dromostan olone propionate)、睾内酯(Testolactone)、乙酸甲地孕酮(Megestrolacetate)、甲泼尼龙(Methylprednisolone)、甲基睾酮(Methyltestosterone)、泼尼松龙(Prednisolone)、曲安奈德(Triamcinolone)、氯烯雌酚(Chlorot rianisene)、羟孕酮(Hydroxyprogesterone)、氨鲁米特(Aminoglutethimi de)、雌氮芥(Estramustine)、乙酸甲羟孕酮(Medroxyprogesteroneacetat e)、亮丙瑞林(Leuprolide)、氟他胺(Flutamide)、托瑞米芬(Toremifene)、戈舍瑞林(goserelin)、顺铂(Cisplatin)、卡铂(Carboplatin)、羟基脲(Hy droxyurea)、安吖啶(Amsacrine)、丙卡巴肼(Procarbazine)、米托坦(Mitotane)、米托蒽醌(Mitoxantrone)、左旋咪唑(Levamisole)、诺维本(Na velbene)、阿那曲唑(Anastrazole)、来曲唑(Letrazole)、卡培他滨(Cape citabine)、雷洛昔芬(Reloxafine)、卓洛昔芬(Droloxafine)、六甲蜜胺(H examethylmelamine)、阿伐斯汀(Avastin)、赫赛汀(herceptin)、百克沙(B exxar)、万珂(Velcade)、泽瓦林(Zevalin)、曲森洛(Trisenox)、希罗达(X eloda)、长春瑞滨(Vinorelbine)、卟吩姆(Porfimer)、爱必妥(Erbitux)、脂质体(Liposomal)、噻替派(Thiotepa)、六甲蜜胺(Altretamine)、美法仑(Melphalan)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、来曲唑(Lerozole)、氟维司群(Fulvestrant)、依西美坦(Exemestane)、氟维司群(Fulvestrant)、异环磷酰胺(Ifosfomide)、利妥昔单抗(Rituximab)、C225、坎帕斯(Campat h)、氯法拉滨(Clofarabine)、克拉屈滨(cladribine)、阿非迪霉素(aphidi colon)、利妥昔(rituxan)、舒尼替尼(sunitinib)、达沙替尼(dasatinib)、替扎他滨(tezacitabine)、Sml1、氟达拉滨(fludarabine)、喷司他丁(pentostatin)、曲平(triapine)、代多克斯(didox)、曲米多克斯(trimidox)、阿米多克斯(amidox)、3-AP、MDL-101,731以及苯达莫司汀(bendamusti ne)(曲安达(Treanda))。

示例性化学治疗剂包括蛋白酶体抑制剂(例如硼替佐米(bortezomib))、沙利度胺(thalidomide)、雷利米德(revlimid)以及DNA破坏剂，如美法仑、多柔比星、环磷酰胺、长春新碱、依托泊苷、亚硝脲氮芥等。

示例性类固醇包括皮质类固醇，如地塞米松(dexamethasone)或泼尼松。

示例性Bcr-Abl抑制剂包括美国专利第5,521,184号、WO04/005281以及美国第60/578,491号中公开的属类和种类的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合Flt-3抑制剂包括如WO03/037347、WO03/099771以及WO04/046120中公开的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合RAF抑制剂包括如WO00/09495和WO05/028444中公开的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合FAK抑制剂包括如WO04/080980、WO04/056786、WO03/024967、WO01/064655、WO00/053595以及WO01/014402中公开的化合物和其药学上可接受的盐。

示例性适合mTOR抑制剂包括如WO2011/025889中公开的化合物和其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明的化合物可与一种或多种其它激酶抑制剂(包括伊马替尼(imatinib))组合使用，具体来说用于治疗对伊马替尼或其它激酶抑制剂具有抗性的患者。

在一些实施方案中，本发明的化合物可与化学治疗剂组合用于治疗癌症(如多发性骨髓瘤)，并且相较于对单独化学治疗剂的反应，可改良治疗反应而不加剧其毒性作用。用于治疗多发性骨髓瘤的其它药学药剂的实例例如可包括(但不限于)美法仑、美法仑加泼尼松[MP]、多柔比星、地塞米松和万珂(Velcade)(硼替佐米)。用于治疗多发性骨髓瘤的其它另外药剂包括Bcr-Abl、Flt-3、RAF和FAK激酶抑制剂。累加或协同效应为组合本发明PI3K抑制剂与另一药剂的所要结果。此外，多发性骨髓瘤细胞对如地塞米松的药剂的抗性可在用本发明PI3K抑制剂治疗后逆转。药剂可与本发明的化合物组合于单一或连续剂型中，或药剂可以单独剂型同时或依序施用。

在一些实施方案中，如地塞米松的皮质类固醇与本发明的化合物组合施用于患者，其中与连续地相反，间歇地施用地塞米松。

在一些其它实施方案中，本发明的化合物与其它治疗剂的组合可在骨髓移植或干细胞移植之前、期间和/或之后施用于患者。

药物制剂和剂型

当用作药品时，本发明的化合物可以药物组合物形式施用。这些组合物可以药学技术中熟知的方式制备，并且视是否需要局部治疗抑或全身性治疗和欲治疗的区域而定，可通过多种途径施用。给药可为局部(包括经皮、表皮、经眼和给向黏膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、经肺(例如通过吸入或吹入粉剂或气雾剂，包括使用喷雾器；气管内或鼻内)、经口或肠胃外给药。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌肉内注射或输注；或颅内(例如鞘内或脑室内)给药。肠胃外给药可呈单一大丸剂剂量形式，或可例如通过连续灌注泵达成。用于局部给药的药物组合物和制剂可包括经皮贴片、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。常规药学载体、水性、粉末状或油性基质、增稠剂等可为必需或合乎需要的。本发明还包括含有作为活性成分的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体(赋形剂)组合的药物组合物。在一些实施方案中，组合物适于局部给药。在制备本发明的组合物时，活性成分通常与赋形剂混合、由赋形剂稀释或封闭在这种载体内呈例如胶囊、药囊、纸或其它容器形式。当赋形剂充当稀释剂时，其可为充当活性成分的媒介物、载体或介质的固体、半固体或液体物质。因此，组合物可呈片剂、丸剂、粉剂、口含锭、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体形式或于液体介质中)、含有例如多达10重量％活性化合物的软膏剂、软质和硬质明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉剂的形式。

在制备制剂时，活性化合物可在与其它成分组合之前进行研磨以提供适当粒径。如果活性化合物实质上不可溶，则其可研磨成粒径小于200目。如果活性化合物实质上可溶于水，则粒径可通过研磨来调整以使得在制剂中实质上均一分布，例如约40目。

可使用已知研磨程序(如湿磨)来研磨本发明的化合物以获得适于形成片剂和其它制剂类型的粒径。本发明的化合物的细粉状(纳米颗粒)制剂可通过本领域内已知的方法制备，例如参见国际申请第WO2002/000196号。

适合赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆以及甲基纤维素。制剂可另外包括：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；以及调味剂。本发明的组合物可经配制以在通过使用本领域内已知的程序施用于患者之后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。

组合物可配制成单位剂型，各剂量含有约5至约1000mg(1g)、更通常约100至约500mg活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为用于人受试者和其它哺乳动物的单一剂量的物理个别单元，各单元含有经计算以产生所需治疗效果的预定量的活性物质以及适合药学赋形剂。

在一些实施方案中，本发明组合物含有约5至约50mg活性成分。本领域技术人员应了解这表示组合物含有约5至约10、约10至约15、约15至约20、约20至约25、约25至约30、约30至约35、约35至约40、约40至约45、或约45至约50mg活性成分。

在一些实施方案中，本发明组合物含有约50至约500mg活性成分。本领域技术人员应了解这表示组合物含有约50至约100、约100至约150、约150至约200、约200至约250、约250至约300、约350至约400、或约450至约500mg活性成分。

在一些实施方案中，本发明组合物含有约500至约1000mg活性成分。本领域技术人员应了解这表示组合物含有约500至约550、约550至约600、约600至约650、约650至约700、约700至约750、约750至约800、约800至约850、约850至约900、约900至约950、或约950至约1000mg活性成分。

本文所述的化合物的类似剂量可用于本发明的方法和用途中。

活性化合物可在广泛剂量范围内有效并且通常以药学有效量施用。然而，应了解实际施用的化合物的量将通常由医师根据相关情形来确定，所述情形包括欲治疗的病状、所选给药途径、施用的实际化合物、个别患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重性等。

对于制备如片剂的固体组合物，将主要活性成分与药学赋形剂混合以形成含有本发明的化合物的均质混合物的固体预配制组合物。当称这些预配制组合物为均质时，活性成分通常均匀分散在整个组合物中以使组合物可易于再分成等效单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊。此固体预制剂接着再分成含有例如约0.1至约1000mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型。

本发明的片剂或丸剂可经包覆或以其它方式混配以提供给予作用延长的优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包含内部剂量组分和外部剂量组分，后者呈位于前者之上的包膜形式。两种组分可由用于抵抗胃中的崩解并且允许内部组分完整进入十二指肠或延迟释放的肠溶层分隔开。多种物质可用于这类肠溶层或包衣，这些物质包括多种聚合酸和聚合酸与如虫胶(shellac)、十六醇和乙酸纤维素的物质的混合物。

本发明的化合物和组合物可并入以用于经口或通过注射给药的液体形式包括水溶液、经适当调味的糖浆、水性或油性悬浮液、及经调味的乳液，其含有可食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)以及酏剂和类似药学媒介物。

用于吸入或吹入的组合物包括于药学上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和混悬液、以及粉剂。液体或固体组合物可含有如上所述的药学上可接受的适合赋形剂。在一些实施方案中，组合物通过经口或经鼻呼吸途径施用以实现局部或全身性作用。组合物可通过使用惰性气体进行雾化。雾化溶液可直接自雾化装置呼吸或雾化装置可连接至面罩、塞条(tent)或间歇式正压呼吸机。溶液、混悬液或粉剂组合物可经口或经鼻自以适当方式递送制剂的装置施用。

局部制剂可含有一种或多种常规载体。在一些实施方案中，软膏剂可含有水和一种或多种选自例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林(white Vaseline)等的疏水性载体。乳膏剂的载体组成可基于水与甘油和一种或多种其它组分(例如单硬脂酸甘油酯、PEG-单硬脂酸甘油酯和十六基硬脂醇)的组合。可使用异丙醇和水，适当时与其它组分(如甘油、羟乙基纤维素等)组合来配制凝胶剂。在一些实施方案中，局部制剂含有至少约0.1、至少约0.25、至少约0.5、至少约1、至少约2或至少约5wt％本发明的化合物。局部制剂可适当地包装于例如100g的管中，所述管任选连同有治疗所选适应症，例如牛皮癣或其它皮肤病状的说明书。

施用于患者的化合物或组合物的量将根据所施用物、给药目的(如预防或治疗)、患者状态、给药方式等而变化。在治疗应用中，组合物可以足以治愈或至少部分遏制疾病和其并发症的症状的量施用于已罹患所述疾病的患者。有效剂量将取决于所治疗的疾病病状以及主治临床医师按照如疾病的严重性、患者的年龄、体重和一般状况等进行的判断。

施用于患者的组合物可呈上述药物组合物的形式。这些组合物可通过常规灭菌技术灭菌，或可经无菌过滤。水溶液可包装用于按原样使用或可冻干，其中冻干制剂在给药之前与无菌水性载体组合。化合物制剂的pH值通常将介于3与11之间、更优选为5至9并且最优选为7至8。应了解使用某些上述赋形剂、载体或稳定剂将导致形成药物盐。

本发明的化合物的治疗剂量可根据例如治疗所欲达成的特定用途、化合物的施用方式、患者的健康和状况、以及处方医师的判断而变化。本发明的化合物在药物组合物中的比例或浓度可视许多因素，包括剂量、化学特征(例如疏水性)以及给药途径而变化。例如，本发明的化合物可以含有约0.1至约10％w/v化合物的生理缓冲水溶液形式提供以用于肠胃外给药。一些典型剂量范围为每天每千克体重约1μg至约1g。在一些实施方案中，剂量范围为每天每千克体重约0.01mg至约100mg。剂量可能取决于如疾病或病症的类型和进展程度、特定患者的总体健康状态、所选化合物的相对生物功效、赋形剂的配方、及其给药途径的变数。有效剂量可自由体外或动物模型测试系统获得的剂量-反应曲线外推而来。

本发明组合物可进一步包括一种或多种其它药学药剂，如化学治疗剂、类固醇、消炎化合物或免疫抑制剂，其实例列于本文中。

经标记化合物和测定方法

本发明的另一方面是关于本发明的经标记化合物(放射性标记、荧光标记等)，其将不仅适用于成像技术中，而且也适用于定位和定量组织样品(包括人)中的PI3K和通过抑制经标记化合物的结合来鉴别PI3K配体的体外分析与体内测定两者中。因此，本发明包括含有这类经标记化合物的PI3K测定。

本发明进一步包括本发明的经同位素标记的化合物。“同位素”或“放射性标记”的化合物为其中一个或多个原子被原子质量或质量数不同于在自然界中通常所见(即天然存在)的原子质量或质量数的原子置换或取代的本发明的化合物。可并入本发明的化合物中的适合放射性核种包括(但不限于)³H(对于氚而言，亦写作T)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl、⁸²Br、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I。并入本发明放射性标记化合物中的放射性核种将取决于所述放射性标记化合物的特定应用。例如，对于体外PI3K标记和竞争测定，并有³H、¹⁴C、⁸²Br、¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S或的化合物将通常最适用。对于放射性成像应用，¹¹C、¹⁸F、¹²⁵I、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br或⁷⁷Br将通常最适用。

应了解“放射性标记”或“经标记化合物”为已并有至少一种放射性核种的化合物。在一些实施方案中，放射性核种选自由³H、¹⁴C、¹²⁵I、³⁵S和⁸²Br组成的组。在一些实施方案中，本文所述的任何化合物的一个或多个H原子各自被氘原子置换。

本发明可进一步包括使放射性同位素并入本发明的化合物中的合成方法。使放射性同位素并入有机化合物中的合成方法在本领域内为熟知的并且本领域技术人员将易于认识到适用于本发明的化合物的方法。

在筛检测定中可使用本发明的经标记化合物来鉴别/评估化合物。例如，可通过追踪标记以监测经标记的新近合成或鉴别的化合物(即测试化合物)在与PI3K接触时的浓度变化来评估其结合PI3K的能力。例如，可评估测试化合物(经标记)降低已知会结合PI3K的另一种化合物(即标准化合物)的结合的能力。因此，测试化合物与标准化合物竞争结合PI3K的能力直接与其结合亲和力相关。相反，在一些其它筛检测定中，标准化合物经标记并且测试化合物未标记。因此，监测经标记标准化合物的浓度以评估标准化合物与测试化合物之间的竞争，并且因此确定测试化合物的相对结合亲和力。

试剂盒

本发明还包括适用于例如治疗或预防PI3K相关性疾病或病症(如癌症)的药学试剂盒，其包括一个或多个含有包含治疗有效量的本发明的化合物的药物组合物的容器。这些试剂盒必要时可进一步包括一种或多种各种常规药学试剂盒组分，如含一种或多种药学上可接受的载体的容器、其它容器等，如对本领域技术人员而言显而易见。呈插页或标签形式的指示欲施用的组分的量、给药指导原则、和/或混合组分的指导原则的说明书还可包括在试剂盒中。

本发明将通过特定实例的方式更详细地描述。下列实例是出于说明目的而提供，并且不欲以任何方式限制本发明。本领域技术人员将易于认识到可进行改变或修改以产生基本上相同结果的多种非关键参数。已根据至少一种本文所述的测定发现实例的化合物为PI3K抑制剂。

实施例

除非另外规定，否则含有一个或多个手性中心的以下实施例化合物是以外消旋物形式或以异构混合物形式获得。任何以下产物的所指示的盐化学计量仅意图指示可能的化学计量，并且不应解释为排除可能以其它化学计量形成盐。缩写“h”和“min”分别指小时和分钟。

实施例1.1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.1-(5-氯-2-羟基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮

向1-(5-氯-2-羟基-4-甲基苯基)乙酮(来自Oakwood，50.0g，271mmol)于乙酸(300mL)中的搅拌溶液中添加N-碘丁二酰亚胺(73.1g，325mmol)并且在加热包上历经3.5小时在60～80℃之间搅拌所得混合物，接着冷却至室温并搅拌过夜。分数份添加水(500mL)至混合物中，导致形成深色固体。在搅拌10分钟之后，在另外用水洗涤下过滤固体。在真空下干燥浅棕色至深棕色固体4小时，接着历经周末风干得到81.3g(97％)所需产物。C₉H₉ClIO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝310.9；实验值：311.0。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ13.21(s,1H),7.71(s,1H),2.65(s,3H),2.63(s,3H)ppm。

步骤2.1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮

添加碳酸钾(72.4g，524mmol)至1-(5-氯-2-羟基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(81.3g，262mmol)和碘代甲烷(19.6mL，314mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(250mL)中的混合物中。在室温下搅拌混合物4小时。添加水(500mL)并且搅拌15分钟。过滤深色固体并且在真空中干燥得到42.3g所需产物。滤液用EtOAc(4×)萃取。合并的滤液用水(2×)和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且浓缩。在真空中干燥固体再得到37.2g所需产物。产物不经进一步纯化即使用。C₁₀H₁₁ClIO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝324.9；实验值：325.0。¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ7.62(s,1H),3.78(s,3H),2.65(s,3H),2.62(s,3H)ppm。

步骤3.3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将锌(1.71g，26.2mmol)悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(45.0mL)中并且添加1,2-二溴乙烷(210μL，2.5mmol)。在60℃下加热混合物10分钟并且接着冷却至室温。添加氯三甲基硅烷(330μL，2.6mmol)并且在60℃下搅拌10分钟并冷却至室温。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自Oakwood，6.25g，22.1mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中的溶液并且在室温下搅拌混合物1小时。依序添加1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(5.00g，15.4mmol)、三-(2-呋喃基)膦(358mg，1.54mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.70g，0.77mmol)并且升温反应混合物至70℃并搅拌过夜。冷却混合物至室温并且于乙酸乙酯(EtOAc)与饱和NH₄Cl溶液之间分配。分离各层并且水层进一步用EtOAc(2×)萃取。合并的有机物用水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并且浓缩。残余物在硅胶上用含0-30％EtOAc的己烷洗脱纯化得到3.0g(55％)呈橙色固体的所需产物。C₁₈H₂₄ClNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝376.1；实验值：376.0。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.52(s,1H),4.32,(m,2H),4.16(m,3H),3.66(s,3H),2.59(s,3H),2.31(s,3H),1.45(s,9H)ppm。

步骤4.3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.3g，3.7mmol)于甲醇(20mL)中的搅拌溶液中添加四氢硼酸钠(0.167g，4.41mmol)。在0～5℃下搅拌混合物1小时。反应用水淬灭并且用EtOAc(3×)萃取。合并的萃取物经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到1.3g(100％)所需产物。C₁₈H₂₆ClNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝378.2；实验值：378.1。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.37(s,1H),5.10(q,1H),4.30(m,2H),4.14(m,3H),3.63(s,3H),2.25(s,3H),1.48(d,3H),1.44(s,9H)ppm。

步骤5.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

称量氰脲酰氯(来自Aldrich，1.22g，6.62mmol)至烧瓶中并且添加N,N-二甲基甲酰胺(0.512mL，6.62mmol)。在搅拌数分钟之后，添加3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.5g，4.2mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液。所得混合物在室温下搅拌过夜。添加水，并且接着用二氯甲烷稀释。分离各层并且有机物用饱和NaHCO₃溶液、水、盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并浓缩。所得残余物在硅胶上用含0-35％EtOAc的己烷洗脱纯化得到所需产物(1.36g，86％)。C₁₃H₁₇ClNO的LCMS计算值：(M-Cl-Boc+H)⁺:m/z＝238.1；实验值：238.1。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.46(s,1H),5.44,(q,1H),4.32(m,2H),4.18-4.10(m,3H),3.67(s,3H),2.27(s,3H),1.79(d,3H),1.44(s,9H)ppm。

步骤6.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在室温下，添加氢化钠(0.32g，8.0mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自ChemBridge，0.59g，4.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的悬浮液中。在室温下搅拌所得混合物25分钟，在所述时间期间悬浮液变成接近澄清溶液。向所得混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.35g，3.61mmol，来自实施例1，步骤5)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液。混合物在50℃下搅拌过夜。在冷却之后，混合物用水稀释并且用EtOAc(2×)萃取。合并的萃取物用水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并且浓缩。所得残余物在硅胶上用含0-10％MeOH的二氯甲烷洗脱纯化得到1.03g(59％)呈黄色胶状的所需产物。将外消旋产物施加在Phenomenex Lux-纤维素2柱(21.1×250mm，5微米粒径)上，用含10％乙醇的己烷以流速18mL/min洗脱，每次注射4mg，得到两种对映异构体。第一峰的停留时间为8.34分钟并且第二峰的停留时间为10.92分钟。峰1(463mg)，C₂₄H₃₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝487.2；实验值：487.1。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.21(s,1H),7.37(s,1H),6.30,(q,1H),5.40(s,2H),4.23(m,2H),4.17～4.00(m,3H),3.57(s,3H),2.58(s,3H),2.16(s,3H),1.76(d,3H),1.37(s,9H)ppm。

步骤7.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(318mg，0.653mmol)(来自以上峰1)于二氯甲烷(3.2mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(1.6mL，6.5mmol)。在室温下搅拌所得混合物75分钟。蒸发溶剂并且在真空中干燥残余物得到0.30g呈双HCl盐形式的所需产物。C₁₉H₂₄ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝387.2；实验值：387.1。

步骤8.1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(58mg，0.13mmol)、丙酮(18.5μL，0.252mmol)以及三乙胺(54.5μL，0.391mmol)于二氯甲烷(1.0mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠的树脂(108mg，0.249mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。过滤混合物并且浓缩。粗产物使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到50mg(60％)呈TFA盐形式的所需产物。C₂₂H₃₀ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝429.2；实验值：429.1。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.47(s,1H),7.46(s,1H),6.29(q,J＝6.9Hz,1H),4.52(m,2H),4.21(m,1H),4.15(t,J＝9.8Hz,1H),4.06(t,J＝9.7Hz,1H),3.53(s,3H),3.39～3.27(m,1H),2.61(s,3H),2.11(s,3H),1.75(d,J＝6.8Hz,3H),1.11(dd,J＝6.0,3.8Hz,6H)ppm。

实施例2.1-{1-[3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐

步骤1.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

向外消旋3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(146mg，0.300mmol)(来自实施例1步骤6的外消旋中间体)于二氯甲烷(1.5mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(0.75mL，3.0mmol)。在室温下搅拌2小时之后，蒸发溶剂并且在真空中干燥所得残余物得到138mg呈HCl盐形式的所需产物。C₁₉H₂₄ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝387.2；实验值：387.1。

步骤2.1-{1-[3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20.0mg，0.0435mmol，来自实施例2，步骤1)和三乙胺(30.3μL，0.217mmol)于二氯甲烷(0.20mL)中的混合物中添加乙酰氯(6.18μL，0.0870mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并且粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₆ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝429.2；实验值：429.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.35(s,1H),7.34(s,1H),6.26(q,1H),4.50(m,1H),4.28～4.20(m,2H),4.01(m,1H),3.88(m,1H),3.52(s,3H),2.58(s,3H),2.18(s,3H),1.75～1.71(m,6H)ppm。

实施例3.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-丙酰基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐

此化合物使用与实施例2的程序类似的程序，用丙酰氯替代乙酰氯来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₈ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝443.2；实验值：443.2。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.30(s,1H),7.33(s,1H),6.25(q,1H),4.49(m,1H),4.27～4.18(m,2H),4.02(m,1H),3.90(m,1H),3.54(s,3H),2.57(s,3H),2.18(s,3H),2.05(q,2H),1.72(d,3H),0.93(t,3H)ppm。

实施例4.1-(1-{5-氯-3-[1-(环丙基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-2-甲氧基-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和环丙烷甲醛(来自Aldrich)替代丙酮来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₃₀ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝441.2；实验值：441.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.06(s,1H),7.13(s,1H),5.96(q,1H),4.22(m,2H),4.07(m,1H),3.90(m,1H),3.80(m,1H),3.24(s,3H),2.68(t,2H),2.21(s,3H),1.80(s,3H),1.45(d,3H),0.64(m,1H),0.24(m,2H),0.01(m,2H)ppm。

实施例5.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和甲醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₀H₂₆ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝401.2；实验值：401.2。

实施例6.1-{1-[5-氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和乙醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₈ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝415.2；实验值：415.1。

实施例7.1-{1-[5-氯-3-(1-异丁基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和异丁醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₃₂ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝443.2；实验值：443.1。¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ8.29(s,1H),7.38(s,1H),6.37(q,1H),5.37(s,2H),4.01(m,2H),3.87(m,1H),3.57(s,3H),3.05(t,1H),2.86(t,1H),2.64(s,3H),2.18(d,2H),2.11(s,3H),1.82(d,3H),1.62(m,1H),0.89(d,6H)ppm。

实施例8.1-{1-[3-(1-仲丁基氮杂环丁烷-3-基)-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和2-丁酮替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C₂₃H₃₂ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝443.2；实验值：443.1。

实施例9.1-(1-{5-氯-2-甲氧基-3-[1-(2-甲氧基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物使用与实施例1的程序类似的程序，用来自实施例2，步骤1的外消旋1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和甲氧基乙醛替代丙酮来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₃₀ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝445.2；实验值：445.2。

实施例10.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺

此化合物使用与实施例2的程序类似的程序，用异氰酸甲酯替代乙酰氯来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝444.2；实验值：444.2。

实施例11.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮

向1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(5.00g，25.2mmol，来自Oakwood)于乙酸(100mL)中的搅拌溶液中添加N-溴丁二酰亚胺(4.93g，27.7mmol)并且在100℃下加热所得混合物18小时。在冷却至环境温度之后，反应混合物在真空中浓缩，接着用饱和碳酸氢钠中和，滤出不溶性丁二酰亚胺。滤液用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且接着在减压下浓缩至干燥。残余物在硅胶上用含0至50％EtOAc的己烷洗脱纯化得到所需产物(2.66g，38％)。C₁₀H₁₁BrClO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝277.0；实验值：277.0。¹HNMR(DMSO-d₆,300MHz):δ7.70(1H,s),3.77(3H,s),2.57(3H,s),2.50(3H,s)ppm。

步骤2.5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(0.38g，1.4mmol)和N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(来自PepTech，0.46g，1.6mmol)于1,4-二噁烷(6mL)中的混合物中添加含碳酸钾(0.38g，2.7mmol)的水(2mL)。反应混合物用N₂鼓泡。添加四(三苯膦)钯(0)(0.095g，0.082mmol)并且反应在100℃下搅拌过夜。反应用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0-100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物。C₁₈H₂₀ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝347.1；实验值：347.1。

步骤3.5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(106mg，0.306mmol)于甲醇(2mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加四氢硼酸钠(14mg，0.37mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水淬灭，用EtOAc萃取。有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到粗醇。C₁₈H₂₂ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝349.1；实验值：349.1。

步骤4.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下添加氰脲酰氯(85mg，0.46mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.036mL，0.46mmol)中。在形成白色固体(10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(2mL)和5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(115mg，0.330mmol，来自实施例11，步骤3)。在添加之后，混合物在室温下搅拌过夜。添加水，并且接着用二氯甲烷稀释。有机相用饱和NaHCO₃溶液、水和盐水洗涤，接着经MgSO₄干燥，浓缩。残余物在硅胶上(用含0至80％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(76mg，63％)。C₁₈H₂₁Cl₂N₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝367.1；实验值：367.0。

步骤5.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

在0℃下向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(6.1mg，0.041mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，2.0mg，0.082mmol)并且在室温下搅拌混合物10分钟。向所得混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(15.0mg，0.0408mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的溶液。混合物在室温下搅拌过夜。粗混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.1。

实施例12.5-{3-[1-(4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三氟乙酸盐

向7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺硫酸盐(来自Oakwood，20mg，0.086mmol)、碳酸铯(42mg，0.13mmol)以及碘化钾(1.4mg，0.0086mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.91mL)中的混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(32mg，0.086mmol)并且在140℃下搅拌所得混合物1小时。混合物用甲醇稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₆ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝465.2；实验值：465.1。

实施例13.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮

在N₂下在搅拌下向4-氯-3-氟苯酚(来自Aldrich，20g，100mmol)中添加乙酰氯(14.1mL，199mmol)。所得混合物在室温下快速变成澄清溶液并且在60℃下对其加热2小时。分数份向所得混合物中添加三氯化铝(25.0g，187mmol)并且在180℃下加热反应混合物30分钟。固体在高温下缓慢溶解。接着冷却反应混合物至室温同时小心涡旋烧瓶以使固体在烧瓶内部形成薄层，并且接着在于冰浴中冷却并搅拌过夜下用1.0N HCl(300mL)缓慢淬灭。黄色沉淀物用水洗涤并且在真空下干燥得到呈黄色固体状的所需产物(23.8g)，其不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。

步骤2.1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮

1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(23.8g，126mmol)于乙酸(100mL)中的溶液用N-碘丁二酰亚胺(34.1g，151mmol)处理并且在70℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，用EtOAc稀释并且用饱和NaHCO₃溶液淬灭直至起泡停止。分离有机层，用水洗涤，经MgSO₄干燥并且汽提得到所需产物，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。

步骤3.1-(5-氯-4-氟-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮

将1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮(13g，41mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(41.3mL)中。依次添加碘代甲烷(3.9mL，62mmol)和碳酸钾(11g，83mmol)。在60℃下加热反应1小时。冷却混合物至室温，用乙醚稀释。分离有机层并合并，用水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0至10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(10g，70％)。C₉H₈ClFIO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝328.9；实验值：328.9。

步骤4.3-(3-乙酰基-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将锌(0.682g，10.4mmol)与1,2-二溴乙烷(0.0598mL，0.694mmol)一起悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(12mL)中。在70℃下加热混合物10分钟并且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(0.088mL，0.69mmol)并且持续搅拌1小时。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.5g，8.7mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液并且在40℃下加热混合物1小时，随后添加1-(5-氯-4-氟-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮(3.0g，9.1mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.16g，0.17mmol)以及三-(2-呋喃基)膦(0.081g，0.35mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物。升温反应混合物至70℃并且搅拌过夜。接着冷却混合物至室温并且于乙醚与饱和NH₄Cl溶液之间分配。有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0至25％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.8g)。C₁₇H₂₁ClFNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝380.1；实验值：380.1。

步骤5.3-[3-氯-2-氟-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-(3-乙酰基-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.17g，0.48mmol)于甲醇(3mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加四氢硼酸钠(0.022g，0.57mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水淬灭，用EtOAc萃取。合并有机层，经MgSO₄干燥并且浓缩得到粗醇(0.19g)。C₁₇H₂₃ClFNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝382.1；实验值：382.0。

步骤6.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氟-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在室温下添加氰脲酰氯(140mg，0.78mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.059mL，0.77mmol)中。在形成白色固体(约10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(4mL)和3-[3-氯-2-氟-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(197mg，0.547mmol)。在添加之后，混合物在室温下搅拌过夜。添加水，并且接着用二氯甲烷稀释。有机相用饱和NaHCO₃溶液、水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并且浓缩。所得残余物在硅胶上(用含0至30％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(110mg，53％)。

步骤7.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.9mg，0.053mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，2.5mg，0.11mmol)并且在室温下搅拌混合物10分钟。向混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氟-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.053mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中的溶液。反应混合物在35℃下搅拌过夜，接着用水淬灭，用乙醚萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到所需产物，其直接用于下一步骤中。C₂₃H₂₉ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝491.2；实验值：491.1。

步骤8.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

在室温下，3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(14mg，0.028mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的混合物用4.0M氯化氢的二噁烷溶液(0.2mL，0.8mmol)处理1小时，并且接着移除溶剂得到1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺HCl盐。向粗HCl盐于乙腈(0.1mL)/甲醇(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加N,N-二异丙基乙胺(0.1mL，0.6mmol)和丙酮(0.050mL，0.68mmol)。搅拌混合物30分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.030g，0.14mmol)。反应在室温下搅拌过夜，接着淬灭并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₇ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝433.2；实验值：433.1。

实施例14.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮

将1-(5-氯-2-羟基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(18.9g，60.9mmol)(来自实施例1，步骤1)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(60.8mL)中。依次添加碘乙烷(7.3mL，91mmol)和碳酸钾(17g，120mmol)。在60℃下加热反应1小时。冷却混合物至室温，用乙醚稀释。合并有机层，用水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0-10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(18.9g，91.7％)。C₁₁H₁₃ClIO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝339.0；实验值：339.0。

步骤2.5-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(0.69g，2.0mmol)和N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(0.68g，2.4mmol)于1,4-二噁烷(10mL)中的混合物中添加含碳酸钾(0.56g，4.1mmol)的水(3mL，200mmol)。反应用N₂鼓泡。添加四(三苯膦)钯(0)(0.24g，0.20mmol)并且鼓泡N₂。反应在95℃下搅拌过夜。反应用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0至90％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.6g，82％)。C₁₉H₂₂ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝361.1；实验值：361.0。

步骤3.5-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向5-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(0.60g，1.7mmol)于甲醇(10mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加四氢硼酸钠(0.075g，2.0mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水淬灭，用EtOAc萃取。萃取物经MgSO₄干燥并且浓缩得到粗醇(0.6g)。C₁₉H₂₄ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝363.1；实验值：363.0。

步骤4.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下添加氰脲酰氯(0.43g，2.3mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.18mL，2.3mmol)中。在形成白色固体(10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(10mL)和5-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(0.6g，2mmol)。在添加之后，混合物在室温下搅拌过夜，接着用二氯甲烷稀释并且用饱和NaHCO₃溶液洗涤。有机层经MgSO₄干燥，浓缩。残余物在硅胶上(用含0至50％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.58，90％)。C₁₉H₂₃Cl₂NO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝381.1；实验值：381.0。

步骤5.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

在0℃下向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(47mg，0.31mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液中添加氢化钠(60％，12.6mg，0.524mmol)并且在室温下搅拌所得混合物10分钟。向混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(100mg，0.3mmol，来自实施例14，步骤4)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液。反应在35℃下搅拌过夜。淬灭反应并且施加在RP-HPLC上(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)得到呈双TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₉ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝494.2；实验值：494.1。

实施例15.5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自CNH Technologies，120mg，0.46mmol)、碳酸铯(200mg，0.62mmol)以及碘化钾(7.0mg，0.042mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(160mg，0.42mmol，来自实施例14，步骤4)并且在140℃下搅拌混合物1小时。反应混合物用水稀释，用乙醚萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0至10％MeOH的二氯甲烷洗脱)纯化得到所需产物(0.12g，47％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₆ClIN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝606.1；实验值：606.0。

实施例16.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇

在0℃下添加四氢硼酸钠(0.31g，8.1mmol)至1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(来自实施例11，步骤1)(1.5g，5.4mmol)于甲醇(25mL)中的混合物中并且在室温下搅拌所得反应混合物1小时。移除溶剂并且所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，接着经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至40％EtOAc的己烷洗脱纯化(0.30g，90％)。

步骤2.4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈

将1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(0.30g，1.1mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲腈(来自Combi-Blocks，0.27g，1.2mmol)、碳酸钠(230mg，2.1mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(100mg，0.13mmol)于乙腈(8mL)/水(2mL)中的混合物脱气并且接着用N₂再填充。在95℃下搅拌反应2小时，接着冷却并且用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至40％EtOAc的己烷洗脱纯化(0.249g，75％)。C₁₆H₁₆ClN₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝303.1；实验值：303.0。

步骤3.4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈

在室温下搅拌氰脲酰氯(170mg，0.94mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(73μL，0.94mmol)的混合物10分钟并且接着添加4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(190mg，0.628mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物不经纯化即直接用于下一步骤中(121mg，60％)。C₁₆H₁₅Cl₂N₂O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝321.0；实验值：321.0。

步骤4.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈

添加氢化钠(20mg，0.50mmol)至4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(90mg，0.28mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(63mg，0.42mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中并且反应在30℃下搅拌过夜。冷却混合物，用水处理并且接着过滤得到所需产物。C₂₂H₂₁ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝434.1；实验值：434.2。

步骤5.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸

添加含氢氧化钠(1.0M)的水(0.70mL，0.70mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(0.060g，0.14mmol)于乙醇(1.0mL)中的混合物中并且在95℃下加热所得混合物6小时。此时，添加浓HCl以将pH值调整至约3。移除溶剂并且残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₂H₂₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝453.1；实验值：453.2。

步骤6.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下添加2.0M二甲胺的THF溶液(0.14mL，0.28mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(9.6mg，0.021mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时。粗混合物使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.2。

实施例17.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-甲基吡啶甲酰胺

此化合物使用与实施例16，步骤6的程序类似的程序，用2.0M甲胺的THF溶液替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₅ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝466.2；实验值：466.2。

实施例18.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)吡啶-2-甲酰胺

此化合物使用与实施例16，步骤6的程序类似的程序，用乙醇胺替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₇ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝496.2；实验值：496.2。

实施例19.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺

此化合物使用与实施例16，步骤6的程序类似的程序，用2-(甲基氨基)乙醇替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₉ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝510.2；实验值：510.2。

实施例20.2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇

步骤1.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯

在室温下搅拌氰脲酰氯(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟并且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(来自实施例16，步骤1)(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至10％EtOAc的己烷洗脱纯化(1.01g，60％)。

步骤2.1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

添加氢化钠(36mg，0.91mmol)至3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯(150mg，0.503mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.76mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中并且反应在30℃下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至70％EtOAc的CH₂Cl₂洗脱纯化(103mg，50％)。C₁₆H₁₈BrClN₅O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝410.0；实验值：410。将外消旋产物施加在Phenomenex Lux-纤维素1柱(21.1×250mm，5微米粒径)上，用含5％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射约13mg，得到两种对映异构体。

步骤3.1-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑

在0℃下添加含叔丁醇钾(1.0M)的THF(0.60mL，0.60mmol)至4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.1g，0.5mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物5分钟，接着冷却至0℃并且用(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(0.2mL，0.8mmol)处理。反应在室温下搅拌过夜，接着用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物，其通过硅胶色谱法用含0至30％EtOAc的己烷洗脱纯化。C₁₇H₃₄BN₂O₃Si的计算值：(M+H)⁺:m/z＝353.2；实验值：353.1。

步骤4.2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙醇

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.026g，0.062mmol)(手性纯，来自步骤2的第一峰)、1-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.024g，0.069mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(6.1mg，0.0075mmol)于乙腈(0.5mL)/水(0.1mL)中的混合物脱气并且接着用N₂再填充。在95℃下搅拌反应混合物2小时，接着用浓HCl(0.1mL)处理并且接着在室温下搅拌1小时。粗混合物使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化，得到所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₁H₂₅ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.2；实验值：442.2。

实施例21.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-4-甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1.3'-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸甲酯

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(60mg，0.15mmol，手性纯，来自实施例20，步骤2的第一峰)、[3-氟-4-(甲氧基羰基)苯基]硼酸(来自Combi-Blocks，0.041g，0.20mmol)、碳酸钠(36mg，0.34mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(6mg，0.007mmol)于乙腈(1.2mL)/水(0.3mL)中的混合物抽真空并且接着用N₂再填充。在95℃下搅拌反应2小时。接着移除溶剂并且粗混合物通过硅胶色谱法用含0至70％EtOAc的CH₂Cl₂洗脱纯化，得到所需产物(54mg，75％)。C₂₄H₂₄ClFN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝484.2；实验值：484.1。

步骤2.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸

添加氢氧化锂一水合物(13mg，0.31mmol)至以上制备的3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸甲酯(0.030g，0.062mmol)于甲醇(0.2mL)/四氢呋喃(0.2mL)/水(0.09mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应1.5小时，接着用浓HCl(60μL)处理以将pH值调整至2。移除溶剂得到粗产物，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₃H₂₂ClFN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝470.1；实验值：470.2。

步骤3.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-4-甲酰胺三氟乙酸盐

在室温下添加2.0M二甲胺的THF溶液(0.1mL，0.2mmol)至以上制备的3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-6'-甲基联苯-4-甲酸(12mg，0.026mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(20mg，0.04mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(11μL，0.077mmol)。搅拌反应1小时，用水淬灭。将粗混合物施加在RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到呈TFA盐形式的所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₂₇ClFN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝497.2；实验值：497.2。

实施例22.3'-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5'-氯-3-氟-2'-甲氧基-N,6'-二甲基联苯-4-甲酰胺三氟乙酸盐

此化合物使用与实施例21，步骤3的程序类似的程序，用2.0M甲胺的THF溶液替代2.0M二甲胺的THF溶液来制备。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₂₅ClFN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝483.2；实验值：483.2。

实施例23.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-(2-羟乙基)吡啶甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1.5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈

将1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(0.15g，0.54mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲腈(来自Frontier，0.14g，0.59mmol)、碳酸钠(110mg，1.1mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(52mg，0.064mmol)于乙腈(4mL)/水(1mL)中的混合物脱气并且接着用N₂再填充。在95℃下搅拌反应2小时，冷却，用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，并且接着经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至40％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所需产物(114mg，70％)。C₁₆H₁₆ClN₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝303.1；实验值：303.0。

步骤2.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈

在室温下搅拌氰脲酰氯(170mg，0.94mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(73μL，0.94mmol)的混合物10分钟并且接着添加5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(190mg，0.628mmol)于二氯甲烷(4mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，接着过滤并且浓缩。所得粗产物不经进一步纯化即直接用于下一步骤中(110mg，55％)。C₁₆H₁₅Cl₂N₂O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝321.0；实验值：321.0。

步骤3.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈

添加氢化钠(20mg，0.50mmol)至5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(90mg，0.28mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(63mg，0.42mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中并且反应在30℃下搅拌过夜。混合物用水处理并且接着过滤得到所需产物。C₂₂H₂₁ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝434.1；实验值：434.2。

步骤4.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸

添加含氢氧化钠(1.0M)的水(0.70mL，0.70mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(0.060g，0.14mmol)于乙醇(1.0mL)中的混合物中。反应在95℃下加热6小时，随后添加浓HCl以将pH值调整至约3。移除溶剂并且所得残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₂H₂₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝453.1；实验值：453.2。

步骤5.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-(2-羟乙基)吡啶甲酰胺三氟乙酸盐

在室温下添加乙醇胺(15μL，0.25mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(9.6mg，0.021mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时，并且接着用水淬灭。将粗混合物施加在RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到呈TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₇ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝496.2；实验值：496.2。

实施例24.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺三氟乙酸盐

此化合物使用与实施例23的程序类似的程序，用2-(甲基氨基)乙醇替代乙醇胺来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₉ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝510.2；实验值：510.2。

实施例25.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下搅拌氰脲酰氯(来自Aldrich，690mg，3.7mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(290μL，3.7mmol)的混合物10分钟并且接着添加5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(869mg，2.49mmol)于二氯甲烷(14mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至100％EtOAc的己烷洗脱纯化。

步骤2.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(来自VWR，4.8mg，0.030mmol)、碳酸铯(14mg，0.044mmol)和碘化钾(0.50mg，0.0030mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)中的混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(11mg，0.030mmol)。在140℃下搅拌混合物1小时。将反应混合物施加在RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到所需产物。C₂₅H₂₆ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝493.2；实验值：493.1。将外消旋产物施加在Phenomenex Lux-纤维素1柱(21.1×250mm，5微米粒径)上，用含30％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射4.2mg，得到两种分离的对映异构体。此第一分离峰的停留时间为15.39分钟并且第二峰的停留时间为22.98。对于第二峰：¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ9.86(d,J＝5.6Hz,1H),8.36(m,1H),8.30(s,1H),7.65～7.58(m,2H),7.37(m,2H),6.84(q,J＝7.2Hz,1H),6.22(d,J＝8.0Hz),5.95(d,J＝5.2Hz,1H),3.08(s,3H),3.05(s,3H),2.93(m,3H),2.09(s,3H),1.68(d,J＝7.2Hz,3H)ppm。

实施例26.4-氨基-8-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯基}乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

步骤1.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯

在室温下搅拌氰脲酰氯(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟并且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至10％EtOAc的己烷洗脱纯化。

步骤2.4-氨基-8-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮

向4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(0.80g，4.9mmol)、碳酸铯(2.4g，7.3mmol)以及碘化钾(82mg，0.49mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的混合物中添加3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯(1.47g，4.93mmol)并且在140℃下搅拌混合物1小时。混合物用水和乙酸乙酯稀释。收集沉淀物并且干燥得到所需化合物。C₁₇H₁₇BrClN₄O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝423.0；实验值：423.0。

步骤3.4-氨基-8-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯基}乙基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

将4-氨基-8-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(25mg，0.059mmol)、3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶(来自PepTech，18mg，0.065mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(5.8mg，0.0071mmol)于乙腈(0.5mL)/水(0.1mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在90℃下搅拌2小时。冷却粗混合物并且通过RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₃ClN₅O₄S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝500.1；实验值：500.0。

实施例27.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}烟碱甲腈双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用3-氰基吡啶-5-硼酸频哪醇酯(来自Frontier)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₀ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝447.1；实验值：447.1。

实施例28.4-氨基-8-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-吡啶-3-基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用吡啶-3-硼酸(来自Aldrich)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₁ClN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝422.1；实验值：422.0。

实施例29.4-氨基-8-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-嘧啶-5-基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用嘧啶-5-硼酸(来自Frontier)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₀ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝423.1；实验值：423.0。

实施例30.3'-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5'-氯-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-3-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用3-(N,N-二甲基氨基羰基)苯硼酸(来自Frontier)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₇ClN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝492.2；实验值：492.1。

实施例31.4-氨基-8-{1-[5-氯-3-(5-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用5-氟吡啶-3-硼酸(来自Combi-Blocks)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₀ClFN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝440.1；实验值：440.0。

实施例32.3'-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5'-氯-2'-甲氧基-N,N,6'-三甲基联苯-3-磺酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用N,N-二甲基3-硼苯磺酰胺(来自Combi-Blocks)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₇ClN₅O₄S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝528.1；实验值：528.1。

实施例33.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例26的程序类似的程序，用2-(N-甲基酰氨基羧基)-5-吡啶硼酸频哪醇酯(来自Frontier)替代3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₄ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝479.2；实验值：479.1。

实施例34.4-氨基-8-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(来自VWR)(8.6mg，0.053mmol)、碳酸铯(26mg，0.080mmol)以及碘化钾(0.89mg，0.0053mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20mg，0.05mmol，来自实施例1，步骤5，外消旋中间体)。在140℃下搅拌混合物1小时，接着冷却并且用水稀释，用乙醚萃取。有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到粗产物，其直接用于下一步骤中。C₂₅H₃₁ClN₅O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝500.2；实验值：500.1。

步骤2.4-氨基-8-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮

在室温下，3-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(27mg，0.053mmol)于二氯甲烷(0.25mL)中的溶液用4.0M氯化氢的二噁烷溶液(0.13mL，0.50mmol)处理1小时，接着汽提至干燥得到呈HCl盐形式的4-氨基-8-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮。向粗HCl盐于乙腈(0.2mL)/甲醇(0.2mL)/四氢呋喃(0.2mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(0.046mL，0.27mmol)。在室温下搅拌混合物直至固体溶解，接着用丙酮(0.032mL，0.43mmol)处理。搅拌所得混合物30分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.034g，0.16mmol)。在室温下搅拌反应混合物4小时，接着淬灭并且施加在RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₉ClN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.2；实验值：442.1。

实施例35.4-氨基-8-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

步骤1.3-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯

将锌(0.967g，14.8mmol)与1,2-二溴乙烷(0.085mL，0.98mmol)一起悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(17mL)中。在70℃下加热混合物10分钟并且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(0.125mL，0.984mmol)并且持续搅拌1小时。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(来自PharmaBlock)(3.9g，12mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液并且在40℃下加热混合物1小时，随后添加1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(4.4g，13mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.22g，0.24mmol)以及三-(2-呋喃基)膦(0.12g，0.50mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合物。反应混合物升温至70℃并且搅拌过夜。接着冷却混合物至室温并且于乙醚与饱和NH₄Cl溶液之间分配。有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用含0至20％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(3.87g，78％)。C₂₂H₂₅ClNO₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝402.1；实验值：402.1。

步骤2.3-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯

向3-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(0.35g，0.87mmol)于甲醇(5mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加四氢硼酸钠(0.040g，1.0mmol)。在室温下搅拌混合物1小时，接着用水稀释，用EtOAc萃取。有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到粗醇(0.31g，88％)。C₂₂H₂₇ClNO₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝404.2；实验值：404.0。

步骤3.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯

在室温下添加氰脲酰氯(200mg，1.1mmol)至N,N-二甲基甲酰胺(0.083mL，1.1mmol)中。在形成白色固体(约10分钟)之后，依次添加二氯甲烷(5mL)和3-[3-氯-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(310mg，0.77mmol)。在添加之后，所得混合物在室温下搅拌过夜。添加水，并且接着用二氯甲烷稀释。有机相用饱和NaHCO₃溶液、水和盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶上(用0至40％EtOAc/己烷洗脱)纯化得到所需产物(140mg，43％)。C₂₂H₂₆Cl₂NO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝422.1；实验值：422.0。

步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯

向4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(11.5mg，0.0708mmol)、碳酸铯(34mg，0.10mmol)以及碘化钾(1.2mg，0.0071mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(30mg，0.07mmol)。在140℃下搅拌混合物1小时，冷却并且接着用水稀释，用乙醚萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到粗产物，其直接用于下一步骤中。C₂₉H₃₁ClN₅O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝548.2；实验值：548.2。步骤5.4-氨基-8-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮双(三氟乙酸盐)

向3-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(23mg，0.042mmol)和5％钯/碳(10mg)于甲醇(1.6mL)中的混合物中添加0.25M氯化氢的水溶液(0.42mL，0.10mmol)。在室温下在H₂气球压力下氢化悬浮液2小时。在滤出催化剂之后，滤液用饱和NaHCO₃溶液中和，用二氯甲烷萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到4-氨基-8-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(7mg，40％)。向粗胺于乙腈(0.1mL)/甲醇(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加N,N-二异丙基乙胺(0.02mL，0.1mmol)和丙酮(0.03mL，0.4mmol)。搅拌混合物30分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.044g，0.21mmol)。在室温下搅拌反应4小时，接着用水淬灭并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₃₁ClN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.1。

实施例36.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

向4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(47mg，0.29mmol)、碳酸铯(130mg，0.39mmol)以及碘化钾(4.4mg，0.026mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.8mL)中的混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(100mg，0.3mmol，来自实施例14，步骤4，外消旋中间体)并且在140℃下搅拌混合物1小时。所得混合物用MeOH稀释，过滤并且滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₈ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝507.2；实验值：507.1。

实施例37.6-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-4-氯-N-乙基-3',5'-二氟-3-甲基联苯-2-甲酰胺

步骤1.3-乙酰基-5-氯-2-羟基-6-甲基苯甲腈

在200℃下加热1-(3-溴-5-氯-2-羟基-4-甲基苯基)乙酮(4.85g，18.4mmol)和氰化铜(2.47g，27.6mmol)于N-甲基吡咯烷酮(15mL)中的混合物1小时。在冷却至室温之后，混合物用EtOAc和1N HCl稀释。分离各层并且水层用EtOAc萃取。合并的有机层依次用水和盐水洗涤，并且经硫酸镁干燥，接着在减压下浓缩至干燥。残余物直接用于下一步骤中(3.7g，96％)。C₁₀H₉ClNO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝210.0；实验值：210.1。

步骤2.三氟甲烷磺酸6-乙酰基-4-氯-2-氰基-3-甲基苯酯

在-78℃下向3-乙酰基-5-氯-2-羟基-6-甲基苯甲腈(3.70g，17.6mmol)于二氯甲烷(70mL)中的混合物中依次添加三乙胺(7.4mL，53mmol)和三氟甲烷磺酸酐(4.4mL，26mmol)。使反应逐渐升温至室温并且在室温下搅拌30分钟。在用水淬灭之后，混合物用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且浓缩至干燥。残余物在硅胶上用含0至40％EtOAc的己烷洗脱纯化得到所需产物(2.54g，42％)。C₁₁H₈ClF₃NO₄S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝342.0；实验值：342.1。

步骤3.6-乙酰基-4-氯-3',5'-二氟-3-甲基联苯-2-甲腈

将三氟甲烷磺酸6-乙酰基-4-氯-2-氰基-3-甲基苯酯(3.07g，8.98mmol)和(3,5-二氟苯基)硼酸(1.70g，10.8mmol)于甲苯(30mL)/0.8M碳酸氢钠的水溶液(30mL，30mmol)(此为饱和NaHCO₃水溶液)中的双相溶液用N₂脱气。添加四(三苯膦)钯(0)(0.414g，0.359mmol)。混合物用N₂脱气5分钟并且在80℃下加热2小时。在冷却至室温之后，混合物用EtOAc稀释。分离各层并且水层用更多EtOAc萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤，并且浓缩得到粗制深色固体。将物质溶解于CHCl₃中并且在硅胶柱上用含0至20％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所需产物(2.71g，99％)。C₁₆H₁₁ClF₂NO的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝306.0；实验值：306.1。

步骤4.4-氯-3',5'-二氟-6-(1-羟乙基)-3-甲基联苯-2-甲醛

在-78℃下向6-乙酰基-4-氯-3',5'-二氟-3-甲基联苯-2-甲腈(2.43g，7.95mmol)于二氯甲烷(50mL)中的混合物中添加1.0M氢化二异丁基铝的己烷溶液(19.9mL，19.9mmol)。反应在搅拌下历经2小时升温至室温。缓慢添加5.0M氯化氢的水溶液(70mL)，并且持续搅拌1小时。所得混合物用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且接着浓缩至干燥。残余物在硅胶上用含0至50％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所需产物(2.4g，97％)。C₁₆H₁₂ClF₂O的LCMS计算值：(M-OH)⁺:m/z＝293.1；实验值：293.1。

步骤5.4-氯-3',5'-二氟-6-(1-羟乙基)-3-甲基联苯-2-甲酸

向4-氯-3',5'-二氟-6-(1-羟乙基)-3-甲基联苯-2-甲醛(1.00g，3.22mmol)于甲醇(40mL)中的溶液中依次添加1.0M氢氧化钠的水溶液(16mL，16mmol)和1.0M氢氧化钠的水溶液。在室温下搅拌过夜之后，用1N HCl缓慢酸化混合物至pH5，接着用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，并且在减压下浓缩至干燥。粗残余物直接用于下一步骤中(1.05g，100％)。

步骤6.4-氯-N-乙基-3',5'-二氟-6-(1-羟乙基)-3-甲基联苯-2-甲酰胺

在室温下搅拌4-氯-3',5'-二氟-6-(1-羟乙基)-3-甲基联苯-2-甲酸(250mg，0.76mmol)、乙胺盐酸盐(94mg，1.1mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(0.51g，1.1mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物10分钟。向所得混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(0.40mL，2.3mmol)。在室温下搅拌过夜之后，反应用水淬灭，用EtOAc萃取。合并的有机层用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥，并且接着浓缩至干燥。残余物在硅胶上用含0至80％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所需产物(185mg，68％)。C₁₈H₁₉ClF₂NO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝354.1；实验值：354.0。

步骤7.甲烷磺酸1-{4-氯-6-[(乙基氨基)羰基]-3',5'-二氟-5-甲基联苯-2-基}乙酯

向4-氯-N-乙基-3',5'-二氟-6-(1-羟乙基)-3-甲基联苯-2-甲酰胺(185mg，0.523mmol)于二氯甲烷(3mL)中的混合物中依次添加N,N-二异丙基乙胺(0.18mL，1.0mmol)和甲烷磺酰氯(0.061mL，0.78mmol)。反应在室温下搅拌10分钟，通过倾倒在冰水上而淬灭，并且用二氯甲烷萃取。合并的有机层用碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，并且蒸发至干燥。残余物直接用于下一步骤中(0.226g，100％)。C₁₉H₂₁ClF₂NO₄S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝432.1；实验值：432.1。

步骤8.6-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-4-氯-N-乙基-3',5'-二氟-3-甲基联苯-2-甲酰胺

向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自ChemBridge)(26mg，0.17mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物中添加氢化钠(14mg，0.35mmol)。在室温下搅拌30分钟之后，向所得混合物中添加甲烷磺酸1-{4-氯-6-[(乙基氨基)羰基]-3',5'-二氟-5-甲基联苯-2-基}乙酯(50mg，0.1mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物。反应在室温下搅拌过夜并且接着用水淬灭。所得混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₄ClF₂N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝485.2；实验值：485.1。

实施例38.4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈

添加氢化钠(20.mg，0.50mmol)至4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吡啶-2-甲腈(来自实施例16，步骤3)(90mg，0.28mmol)、4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶(来自Acros Organics)(57mg，0.42mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中并且反应在30℃下搅拌过夜。混合物用水处理并且接着过滤得到所需产物。C₂₁H₁₉ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝420.1；实验值：420.1。

步骤2.4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸

添加1.0M氢氧化钠的水溶液(0.3mL，0.3mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(60mg，0.14mmol)于乙醇(0.3mL)中的混合物中。在95℃下加热反应混合物6小时，接着用浓HCl处理以将pH值调整至约3。在减压下移除溶剂并且所得残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₁H₂₀ClN₆O₃的计算值：(M+H)⁺:m/z＝439.1；实验值：439.2。

步骤3.4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下添加含二甲胺(2.0M)的THF(0.14mL，0.28mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(18.6mg，0.042mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时，接着用水淬灭。混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₅ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝466.2；实验值：466.2。

实施例39.4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)吡啶-2-甲酰胺

在室温下添加含乙醇胺(2.0M)的THF(0.14mL，0.28mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(来自实施例38，步骤2)(18.6mg，0.042mmol)、六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时，接着用水淬灭。混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₅ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝482.2；实验值：482.2。

实施例40.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺

催化剂预先形成：无水二甲基乙酰胺(DMA)在使用之前先用温和N₂流吹扫30分钟。用10mL二甲基乙酰胺和26.8μL浓H₂SO₄制备50mM H₂SO₄溶液并且接着用N₂吹扫10分钟。向配备有磁性搅拌棒和隔膜盖的8mL小瓶中添加Pd(OAc)₂(22.5mg，100μmol)和2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯(95.3mg，200μmol)。将小瓶抽空并且用N₂填充三次，用温和N₂流吹扫10分钟。添加H₂SO₄(2.0mL，50mM于DMA中)，并且在油浴中在80℃下搅拌催化剂混合物30分钟得到均质咖啡色-棕色溶液。

添加以上催化剂(0.05mL)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-(2-羟乙基)-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(来自实施例19)(4.0mg，0.0078mmol)、锌(0.22mg，0.0034mmol)和氰化锌(0.92mg，0.0078mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(0.1mL)中的混合物中。将混合物脱气并且反应接着在120℃下加热1.5小时。将粗混合物施加在RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)上得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₉N₈O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝501.2；实验值：501.2。

实施例41.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

步骤1：N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-胺

在微波中在150℃下加热4-氯-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶(330mg，1.9mmol)和1-(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(0.58mL，3.9mmol)于1-丁醇中的溶液40分钟。经由制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(240mg，42％)。C₁₆H₁₉N₄O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝299.1；实验值：299.2。

步骤2：5-[3-氯-5-(1-{4-[(2,4-二甲氧基苯甲基)氨基]-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基}乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

N-(2,4-二甲氧基苯甲基)-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-4-胺(110mg，0.37mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液用氢化钠(30mg，0.75mmol)处理并且在20℃下搅拌30分钟。反应混合物用5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(130mg，0.34mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液处理并且在50℃下加热过夜。反应混合物用水稀释并且用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩成粗残余物。经由制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(110mg，49％)。C₃₄H₃₈ClN₆O₄的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝629.3；实验值：629.1。

步骤3：5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

5-[3-氯-5-(1-{4-[(2,4-二甲氧基苯甲基)氨基]-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基}乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(85mg，0.14mmol)于二氯甲烷(2mL)中的溶液用三氟乙酸(2mL)处理并且在20℃下搅拌3小时并在40℃下搅拌20分钟。经由制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％三氟乙酸的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(44mg，46％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₈ClN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝479.2；实验值：479.0。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ12.8(br s,0.5H),8.50(br s,0.5H),8.37(br s,2H),7.91-7.86(m,0.5H),7.80-7.75(m,0.5H),7.68-7.58(m,3H),7.17(d,J＝7.3Hz,1H),6.19(q,J＝6.9Hz,1H),3.04(s,3H),3.01(s,3H),2.94(s,3H),2.61(s,3H),2.05(s,3H),1.83(d,J＝6.9Hz,3H)。

实施例42.5-{3-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

所需化合物是根据实施例41，步骤2的程序，使用5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺[ACES Pharma,57974]作为起始物质来制备，产率18％。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₈ClN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝479.2；实验值：479.3。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.46(br s,1H),8.31(br s,1H),8.28(s,1H),7.87-7.83(m,1H),7.65-7.61(m,1H),7.51(s,1H),7.48(s,1H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),3.08(s,3H),3.01(s,3H),2.95(s,3H),2.40(s,3H),2.05(s,3H),1.78(d,J＝7.2Hz,3H)。

实施例43.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈

步骤1.1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮

添加1-(5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(例如来自实施例13，步骤1)(20.0g，101mmol，1.00当量)和50％硫酸水溶液(120mL)至烧瓶中。在水浴中在搅拌下加热所得混合物至60℃。在8分钟间隔内分三份(7.0g+7.0g+7.52g)添加N-溴丁二酰亚胺(21.52g，120.9mmol，1.20当量)。在60℃下加热反应混合物3小时之后，反应完成。反应混合物用水(160ml)和二氯甲烷(DCM)(300ml)稀释，并且搅拌混合物0.5小时。分离有机层并且水层用二氯甲烷(100ml)萃取。合并的有机层用1N HCl(100ml×2)、水(100ml)、盐水(60ml)洗涤，并且在减压下浓缩得到呈浅黄色固体状的粗产物(29.1g)。将粗产物溶解于HOAc(100ml)中并且接着在搅拌下用水(200ml)稀释。在室温下搅拌所得混合物20分钟并且产物通过过滤收集并干燥，得到呈浅黄色固体状的1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(21.8g，80.9％)。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ13.18(s,1H,-OH),7.78(d,J＝7.78Hz,1H),2.63(s,3H)。

步骤2.4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈

将1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(2.0g，7.5mmol)与氰化钾(0.58g，9.0mmol)一起组合于N,N-二甲基甲酰胺(16mL，210mmol)中并且在油浴中加热至85℃。在加热18小时之后，使反应冷却至室温并且添加碘乙烷(0.90mL，11mmol)和碳酸钾(2.1g，15mmol)。加热反应至65℃并且通过LC/MS监测。在加热3小时之后，反应完成并且使其冷却至室温，接着溶解于乙酸乙酯中并用水、盐水洗涤，并且经硫酸镁干燥。浓缩所得溶液得到呈棕色油状的粗产物。产物通过硅胶快速柱色谱法用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈固体残余物形式的4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(1.15gm，50％)，C₁₁H₉BrClNO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝301.9,303.9；实验值：(无离子化)。

步骤3.2-溴-6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)苯甲腈

在0℃下添加四氢硼酸钠(38mg，0.99mmol)至4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(200mg，0.7mmol)于甲醇(5mL，100mmol)中的混合物中。在室温下搅拌反应1小时，浓缩并且于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到呈澄清油状的粗2-溴-6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)苯甲腈(0.15gm，100％)，C₁₁H₁₁BrClNO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝303.9,305.9；实验值：304.0,305.9。

步骤4.2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈

将氰脲酰氯(0.11g，0.59mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中。在搅拌数分钟之后，添加2-溴-6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)苯甲腈(150mg，0.49mmol)于二氯甲烷(3mL，50mmol)中的溶液。所得混合物在室温下搅拌过夜。反应于水与二氯甲烷之间分配。有机层用饱和NaHCO₃溶液、水、盐水洗涤，经MgSO₄干燥，并且浓缩。粗产物通过快速柱色谱法用0-30％EtOAc/己烷的梯度洗脱纯化得到呈半固体状的2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈(0.12gm，75％)，C₁₁H₁₀BrCl₂NO的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝323.9,320.9；实验值：(不良离子化)。

步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈

添加氢化钠(16mg，0.41mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(33mg，0.22mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中的混合物中并且搅拌10分钟。添加含2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈(60mg，0.2mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)并且反应在50℃下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物通过快速柱色谱法用CH₂Cl₂/MeOH0-10％洗脱纯化，得到呈固体状的4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.05gm，60％)。C₁₇H₁₆BrClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝437.0,435.0；实验值：436.9,434.7。

步骤6.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈

向4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(20mg，0.04mmol)和3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶(19mg，0.069mmol)于乙腈(2mL，40mmol)中的混合物中添加含碳酸钠(10mg，0.09mmol)的水(0.5mL，30mmol)。反应以鼓泡氮气进行脱气。添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2mg，0.002mmol)并且用N₂再脱气。反应在100℃下加热2小时。粗产物经制备型LC-MS(乙腈、水、TFA)纯化得到呈白色非晶固体状的所需产物(0.004g，20％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₂ClN₇O₃S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝512.1；实验值：512.2。¹H NMR(500MHz,DMSO)δ9.20(d,J＝2.1Hz,1H),9.12(d,J＝1.9Hz,1H),8.61(t,J＝2.0Hz,1H),8.12(s,1H),7.80(s,1H),6.36(q,J＝7.0Hz,1H),3.54(dt,J＝14.0,7.0Hz,1H),3.37(s,3H),3.36-3.30(m,1H),2.58(s,3H),1.81(d,J＝7.0Hz,3H),0.92(t,J＝6.9Hz,3H)。

实施例44.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺

标题化合物是以与实施例43，步骤6类似的方式，但使用N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶甲酰胺(Peptech，目录号BE1622)制备得到粗产物，其经制备型LC-MS(乙腈、水、TFA)纯化得到呈白色非晶固体状的所需产物(0.005g，22％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₅ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝505.1；实验值：505.1。¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.72(dd,J＝2.1,0.7Hz,1H),8.14-8.12(m,1H),8.11(s,1H),7.75(s,1H),7.71(dd,J＝8.0,0.7Hz,1H),6.35(q,J＝7.0Hz,1H),3.61-3.48(m,1H),3.42-3.31(m,1H),3.03(s,3H),2.95(s,3H),2.57(s,3H),1.80(d,J＝7.1Hz,3H),0.92(t,J＝7.0Hz,3H)。

实施例45.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.4-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈

添加氢化钠(16mg，0.41mmol)至4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(36mg，0.22mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中的混合物中并且搅拌10分钟。添加含2-溴-6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基苯甲腈(实施例43，步骤4)(60mg，0.2mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)并且反应在50℃下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物通过FCC用CH₂Cl₂/MeOH(0-10％)洗脱纯化，得到呈固体状的4-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.04g，50％)，C₁₈H₁₅BrClN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝450.0,448.0；实验值：450.0,448.0。

步骤2.5-{3-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向4-[1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(20mg，0.04mmol)和{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸(13mg，0.069mmol)于乙腈(2mL，40mmol)中的混合物中添加含碳酸钠(10mg，0.09mmol)的水(0.5mL，30mmol)。反应以鼓泡氮气进行脱气。添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2mg，0.002mmol)并且用N2再脱气。反应在100℃下加热1小时。粗产物经制备型LC-MS(乙腈、水、TFA)纯化得到呈白色非晶固体状的所需产物(0.005g，20％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₄ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝518.1；实验值：518.1。

实施例46.4-(1-(4-氨基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基)-6-氯-3-乙氧基-2-(5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)苯甲腈

标题化合物是以与实施例45，步骤2类似的方式，但使用3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶(来自AnisynInc.，目录号CT601515-3)制备得到粗产物，其经制备型LC-MS(乙腈、水、TFA)纯化得到呈白色非晶固体状的所需产物(0.005g，22％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₁ClN₆O₂S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝525.1；实验值：525.2。

实施例47.5-(3-{1-[4-氨基-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

在N₂下向5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(来自实施例15)(15mg，0.025mmol)、(3-氟苯基)硼酸(来自Aldrich)(6.9mg，0.050mmol)、碳酸钠(16mg，0.15mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)/水(74μL)中的溶液中添加四(三苯膦)钯(0)(2.9mg，0.0025mmol)。混合物在100℃下加热过夜。在冷却至室温之后，过滤混合物并且滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₃₀H₃₀ClFN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝574.2；实验值：574.2。

实施例48.5-(3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(来自Aldrich)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₇H₂₉ClN₉O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝546.2；实验值：546.2。

实施例49.5-(3-{1-[4-氨基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(来自Aldrich)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₈H₃₁ClN₉O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝560.2；实验值：560.2。

实施例50.5-(3-{1-[4-氨基-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(来自Frontier)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₈H₃₁ClN₉O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝560.2；实验值：560.2。

实施例51.5-(3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(来自Aldrich)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。粗混合物在室温下用浓HCl(0.1mL)处理1小时，随后纯化。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₇H₂₉ClN₉O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝546.2；实验值：546.2。

实施例52.5-[3-(1-{4-氨基-3-[1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用1-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(来自实施例20，步骤3)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。粗混合物在室温下用浓HCl(0.1mL)处理1小时，随后纯化。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₉H₃₃ClN₉O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝590.2；实验值：590.2。

实施例53.5-{3-[1-(4-氨基-3-环丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(11mg，0.018mmol，来自实施例15的外消旋中间体)、环丙基三氟硼酸钾(3.2mg，0.022mmol)、磷酸钾(12mg，0.054mmol)以及四(三苯膦)钯(0)(0.42mg，0.00036mmol)于甲苯(0.05mL)/水(0.02mL)(v/v，3/1)中的混合物在回流下加热过夜。混合物用MeOH稀释，并且接着过滤。滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₇H₃₁ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝520.2；实验值：520.2。

实施例54.5-{3-[1-(4-氨基-3-氰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(13mg，0.021mmol，来自实施例15的外消旋中间体)和氰化铜(12mg，0.13mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的混合物在120℃下加热过夜。过滤混合物并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₆ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝505.2；实验值：505.2。

实施例55.5-(3-{1-[4-氨基-3-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用4-氟苯基硼酸(来自Aldrich)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₃₀H₃₀ClFN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝574.2；实验值：574.2。

实施例56.5-{4-氨基-1-[1-(5-氯-3-{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(来自PepTech)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₃₂H₃₅ClN₉O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝628.3；实验值：628.3。

实施例57.5-(3-{1-[4-氨基-3-(5-氰基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)烟碱甲腈(来自Frontier)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₃₀H₂₉ClN₉O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝582.2；实验值：582.2。

实施例58.5-(3-{1-[4-氨基-3-(2-氨基嘧啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)嘧啶-2-胺替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₈H₃₀ClN₁₀O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝573.2；实验值：573.2。

实施例59.5-{3-[1-(4-氨基-3-{6-[(甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用N-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(来自Frontier)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₃₁H₃₃ClN₉O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝614.2；实验值：614.2。

实施例60.5-{3-[1-(4-氨基-3-吡啶-4-基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用4-吡啶基硼酸(来自Aldrich)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₉H₃₀ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝557.2；实验值：557.2。

实施例61.5-{3-[1-(4-氨基-3-吡啶-3-基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用3-吡啶基硼酸(来自Aldrich)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₉H₃₀ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝557.2；实验值：557.2。

实施例62.5-{3-[1-(4-氨基-3-{5-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)烟碱酰胺(来自PepTech)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₃₂H₃₅ClN₉O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝628.3；实验值：628.3。

实施例63.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-氧杂环丁烷-3-基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(21mg，0.046mmol，来自实施例2，步骤1的外消旋中间体)、氧杂环丁烷-3-酮(来自Synthonix，3.6mg，0.050mmol)以及三乙胺(20μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.32mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠的树脂(40mg，0.091mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并且浓缩并接着通过RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2mg，9.9％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₈ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝443.2；实验值：443.1。

实施例64.1-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[1-(四氢-2H-吡喃-4-基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(21mg，0.046mmol，来自实施例2，步骤1的外消旋中间体)、四氢-4H-吡喃-4-酮(来自Aldrich，4.6μL，0.050mmol)以及三乙胺(20μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.32mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠的树脂(40mg，0.091mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩并且接着通过RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₃₂ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝471.2；实验值：471.2。

实施例65.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(手性纯，来自实施例20，步骤2的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)烟碱酰胺(来自PepTech)(25mg，0.091mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌2小时。过滤混合物并且滤液通过RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.2。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.64(1H,s),8.54(1H,br s),8.13(1H,s),7.82(1H,m),7.53(1H,s),7.42(2H,br s),6.28(1H,q,J＝6.5Hz),3.22(3H,s),2.95(6H,m),2.58(3H,s),2.04(3H,s),1.77(3H,d,J＝6.5Hz)ppm。

实施例66.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(手性纯，来自实施例20，步骤2的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(25mg，0.091mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌2小时。在冷却至室温之后，过滤混合物并且滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.2。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:8.78(2H,br s),8.48(1H,m),8.36(1H,s),7.86(1H,brs),7.65(1H,br s),7.58(1H,s),6.33(1H,q,J＝7.0Hz),3.19(3H,s),3.03(3H,s),2.97(3H,s),2.62(3H,s),2.06(3H,s),1.81(3H,d,J＝7.0Hz)ppm。

实施例67.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

在室温下在二氯甲烷(17mL)中用4.0M氯化氢的二噁烷溶液(8.15mL，32.6mmol)处理3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.6g，3.2mmol，来自实施例13，步骤7)2小时。浓缩混合物至干燥得到所需产物。C₁₈H₂₁ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝391.1；实验值：391.1。

步骤2.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(0.90g，1.9mmol，实施例67，步骤1)、丙酮(1.0mL，14mmol)以及三乙胺(2.5mL，18mmol)于二氯甲烷(20mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(2.5g，5.8mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，接着过滤，用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物(870mg，100％)。C₂₁H₂₇ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝433.2；实验值：433.1。

步骤3.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺的单一对映异构体

在Phenomenex Lux纤维素-2柱上分离1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(870mg，2.0mmol)的对映异构体，用含10％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，并且柱装载量为每次注射约8mg，分离两种对映异构体。第一峰停留时间10.9分钟；第二峰停留时间13.6分钟。浓缩含有第一峰(110mg，13％)的洗脱份并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₁H₂₇ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝433.2；实验值：433.1。

实施例68.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.032mmol，来自实施例67，步骤1)和三乙胺(18μL，0.13mmol)于乙醇(0.53mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(6.8μL，0.097mmol)。在90℃下加热所得混合物3小时，接着经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。在Phenomenex Lux纤维素C-4柱(5μM，21.2×250mm)上分离对映异构体，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，得到两种对映异构体。第一峰(2.7mg，18％)停留时间8.9分钟；C₂₁H₂₇ClFN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝449.2；实验值：449.1。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz)δ8.11(1H,s),7.42(1H,d,J＝8.5Hz),7.25(2H,br s),6.21(1H,q,J＝7.5Hz),4.28(1H,d,J＝4.0Hz),3.82(3H,m),3.62(3H,s),3.55(1H,m),3.05(1H,m),2.97(1H,m),2.55(3H,s),2.28(2H,m),1.70(2H,d,J＝7.5Hz),1.00(3H,d,J＝6.0Hz)ppm。第二峰停留时间10.0分钟。

实施例71.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(19mg，0.041mmol，来自实施例67，步骤1的外消旋中间体)和三乙胺(28μL，0.20mmol)于甲醇(0.1mL)/乙腈(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(39μL，0.20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(22mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。混合物在室温下用6.0M氯化氢的水溶液(0.07mL，0.4mmol)处理10分钟并且接着经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.5mg，13％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₀H₂₅ClFN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝435.2；实验值：435.1。

实施例72.1-{1-[5-氯-4-氟-2-甲氧基-3-(1-氧杂环丁烷-3-基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(19mg，0.041mmol，来自实施例67，步骤1的外消旋中间体)和三乙胺(28μL，0.20mmol)于甲醇(0.1mL)/乙腈(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)中的混合物中依次添加37％甲醛(15μL，0.20mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(22mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.2mg，6.3％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₁₉H₂₃ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝405.2；实验值：405.1。

实施例73.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氟-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.77g，2.0mmol，来自实施例13，步骤6的外消旋中间体)、3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.58g，2.2mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(6.9mL)中的混合物中添加碘化钾(34mg，0.20mmol)和碳酸铯(0.99g，3.0mmol)。所得混合物在140℃下加热并搅拌3小时。在冷却之后，将澄清溶液加入水和乙酸乙酯(EtOAc)中。固体用水和EtOAc稀释，并且搅拌直至溶解。合并有机层、浓缩并且在硅胶上(用含0至100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.55g，45％)。C₂₂H₂₆ClFIN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝603.1；实验值：602.9。

步骤2.3-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在N₂下向3-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.55g，0.91mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(0.281g，1.82mmol)、碳酸钠(0.580g，5.47mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)/水(2.73mL)中的溶液中添加四(三苯膦)-钯(0)(0.105g，0.0910mmol)。混合物在100℃下加热过夜。在冷却至室温之后，混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。浓缩合并的有机层并且在硅胶上(依次用含0至100％EtOAc的己烷和含0至10％MeOH的二氯甲烷洗脱)纯化得到所需产物(0.34g，74％)。C₂₄H₂₉ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝503.2；实验值：503.1。

步骤3.3-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(340mg，0.680mmol)于叔丁醇(5mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(87mg，0.74mmol)和水(2.1mL)。接着向此溶液中添加4％四氧化锇(0.21mL，0.034mmol)。在搅拌3小时之后，再添加一当量N-甲基吗啉N-氧化物。反应在室温下搅拌过夜。溶液用水稀释，并且用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物(0.4g，100％)，其直接用于下一步骤中。C₂₄H₃₁ClFN₆O₅的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝537.2；实验值：537.2。

步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.40g，0.74mmol)于四氢呋喃(5.6mL)/水(3.4mL)中的溶液中添加乙酸(0.011mL，0.19mmol)和过碘酸钠(0.478g，2.23mmol)。在搅拌2小时之后，反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到所需产物(0.35g，92％)，其直接用于下一步骤中。C₂₃H₂₇ClFN₆O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝505.2；实验值：505.1。

步骤5.3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g，0.69mmol)于二氯甲烷(4mL)中的在0℃下冷却的溶液中逐滴添加三氟化二乙基氨基硫(0.23mL，1.7mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，接着用二氯甲烷稀释，用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，接着浓缩并且在硅胶上(用含0至100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.21g，57％)。C₂₃H₂₇ClF₃N₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝527.2；实验值：527.2。

步骤6.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

在室温下在二氯甲烷(4mL)中用4.0M氯化氢的二噁烷溶液(1mL，4mmol)处理3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.21g，0.40mmol)2小时。浓缩混合物得到所需产物(0.177g，89％)。C₁₈H₁₉ClF₃N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝427.1；实验值：427.1。

步骤7.1-{1-[5-氯-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(45mg，0.090mmol)、丙酮(37mg，0.63mmol)以及三乙胺(63μL，0.45mmol)于二氯甲烷(0.9mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(0.12g，0.27mmol)。混合物在室温下搅拌2小时，接着过滤，浓缩并且经RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.5mg，6.8％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₅ClF₃N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.2。

实施例74.2-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-基]乙醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(45mg，0.090mmol)、{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(110mg，0.63mmol)以及三乙胺(63μL，0.45mmol)于二氯甲烷(0.9mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(0.12g，0.27mmol)。在室温下搅拌混合物2小时，接着过滤。滤液用6.0M氯化氢的水溶液(0.2mL，0.9mmol)处理，并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.5mg，5.6％)。C₂₀H₂₃ClF₃N₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝471.1；实验值：471.2。在PhenomenexLux纤维素-4柱上分离外消旋产物，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，并且柱装载量为每次注射约4mg，分离两种对映异构体。第一峰停留时间13.1分钟；第二峰停留时间16.3分钟。

实施例76.(2S)-1-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-基]丙-2-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-4-氟-2-甲氧基苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(51mg，0.10mmol，来自实施例73，步骤6的外消旋中间体)和三乙胺(57μL，0.41mmol)于乙醇(1.7mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(18μL，0.26mmol)。所得混合物在90℃下加热3小时，并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.7mg，5.3％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₅ClF₃N₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝485.2；实验值：485.1。

实施例77.5-(1-(4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-氟-3-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基苯甲腈

向含有(2S)-1-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-6-氟-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-基]丙-2-醇(16mg，0.032mmol，来自实施例76)的微波小瓶中添加锌(1.0mg，0.016mmol)、双(三-叔丁基膦)钯(6.5mg，0.013mmol)以及N-甲基吡咯烷酮(0.20mL，2.0mmol)。将混合物用N₂脱气数分钟，随后添加氰化锌(7.5mg，0.064mmol)。所得混合物在130℃下搅拌过夜并且接着冷却并经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.8mg，11.2％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₅F₃N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝476.2；实验值：476.2。

实施例79.5-[3-(1-{4-氨基-3-[(3R)-3-羟基丁-1-炔-1-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

在N₂下用(2R)-丁-3-炔-2-醇(11.3mg，0.162mmol)、三乙胺(4.5μL，0.032mmol)以及四-(三苯膦)-钯(0)(1.9mg，0.0016mmol)处理5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(9.8mg，0.016mmol，来自实施例15的外消旋中间体)和碘化铜(I)(0.6mg，0.003mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.32mL)中的混合物。在室温下在N₂下搅拌混合物1小时。接着混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(4.3mg，44％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₈H₃₁ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝548.2；实验值：548.1。

实施例80.5-[3-(1-{4-氨基-3-[(3S)-3-羟基丁-1-炔-1-基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例79类似的程序，用(2S)-丁-3-炔-2-醇替代(2R)-丁-3-炔-2-醇来制备。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C₂₈H₃₁ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝548.2；实验值：548.1。

实施例81.5-{3-[1-(4-氨基-3-乙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.5-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在N₂下向5-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(130mg，0.21mmol，来自实施例15的外消旋中间体)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(66mg，0.43mmol)、碳酸钠(136mg，1.29mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)/水(0.64mL)中的溶液中添加四(三苯膦)钯(0)(25mg，0.021mmol)。混合物在100℃下加热过夜。在冷却至室温之后，混合物用水稀释，并且用二氯甲烷萃取。浓缩有机层并且在硅胶上(依次用含0至100％EtOAc的己烷和含0至10％MeOH的二氯甲烷洗脱)纯化得到所需产物(94mg，86％)。C₂₆H₂₉ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝506.2；实验值：506.2。

步骤2.5-{3-[1-(4-氨基-3-乙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

将5-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(14mg，0.028mmol)和5％铂/碳(14mg)组合于甲醇(1mL)中，向其中添加0.25M氯化氢的水溶液(0.28mL，0.069mmol)。悬浮液在室温下在H₂气球压力下氢化3小时。过滤悬浮液并且滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(3.9mg，28％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₃₁ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝508.2；实验值：508.3。

实施例82.5-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.5-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向5-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(80mg，0.16mmol，来自实施例81，步骤1)于叔丁醇(1mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(20mg，0.17mmol)和水(0.50mL)。接着向此溶液中添加4％四氧化锇(5.0μL，0.00079mmol)。在搅拌3小时之后，再添加一当量N-甲基吗啉N-氧化物。反应在室温下搅拌过夜。溶液用水稀释，并且用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且过滤，

浓缩得到所需产物(0.64g，95％)。C₂₆H₃₁ClN₇O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝540.2；实验值：540.2。

步骤2.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在0℃下向5-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(70mg，0.13mmol)于四氢呋喃(0.98mL)和水(0.59mL)中的溶液中添加乙酸(1.9μL，0.034mmol)和过碘酸钠(83mg，0.39mmol)。在搅拌2小时之后，反应混合物用水稀释，并且用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到所需产物(0.059g，90％)。C₂₅H₂₇ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝508.2；实验值：508.1。

步骤3.5-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

向5-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(8.8mg，0.017mmol)于二氯甲烷(0.1mL)中的在0℃下冷却的溶液中逐滴添加三氟化二乙基氨基硫(5.7μL，0.043mmol)。在室温下搅拌混合物3小时，用MeOH稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(0.7mg，8％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₇ClF₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝530.2；实验值：530.0。

实施例83.5-(3-{1-[4-氨基-3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

在室温下用含四氢硼酸钠(0.5mg，0.01mmol)的甲醇(0.09mL)处理5-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(5.6mg，0.011mmol，来自实施例82，步骤2)1小时。混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(2.5mg，45％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₉ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝510.2；实验值：510.0。

实施例84.5-[3-(1-{4-氨基-3-[(甲基氨基)甲基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

向5-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(8.8mg，0.017mmol，来自实施例82，步骤2)于甲醇(1mL)中的溶液中添加2.0M甲胺的THF溶液(43μL，0.087mmol)。混合物在室温下搅拌过夜，随后添加四氢硼酸钠(1.3mg，0.035mmol)。混合物在室温下搅拌2小时，接着用MeOH稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(4.2mg，48％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₃₂ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝523.2；实验值：523.0。

实施例85.5-[3-(1-{4-氨基-3-[(二甲基氨基)甲基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺三(三氟乙酸盐)

此化合物使用与实施例84类似的程序，用2.0二甲胺的THF溶液替代2.0M甲胺的THF溶液来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₇H₃₄ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝537.2；实验值：537.1。

实施例86.5-(3-{1-[4-氨基-3-(氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

向5-(3-{1-[4-氨基-3-(羟基甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(22mg，0.043mmol，来自实施例83)于二氯甲烷(0.1mL)中的在0℃下冷却的溶液中缓慢添加2-甲氧基-N-(2-甲氧基乙基)-N-(三氟-λ(4)-硫基)乙胺(12μL，0.065mmol)。混合物在室温下搅拌4小时，用MeOH稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(3.9mg，18％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₈ClFN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝512.2；实验值：512.0。

实施例87.3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮

将1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮(1.1g，3.2mmol，来自实施例14，步骤1)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(0.66mL，3.9mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(0.26g，0.32mmol)以及碳酸钾(1.3g，9.4mmol)于1,4-二噁烷(10mL)/水(5mL)中的混合物用N₂脱气并且在80℃下加热过夜。在冷却至室温之后，反应混合物用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，浓缩并且在硅胶上(用含0至10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.64g，82％)。C₁₃H₁₆ClO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝239.1；实验值：239.1。

步骤2.1-[5-氯-3-(1,2-二羟乙基)-2-乙氧基-4-甲基苯基]乙酮

向1-(5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮(0.59g，2.5mmol)于叔丁醇(20mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(0.318g，2.72mmol)和水(7.8mL)。接着向此溶液中添加4％四氧化锇(0.078mL，0.012mmol)。在3小时之后，再添加一当量N-甲基吗啉N-氧化物。再搅拌反应3小时。溶液用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且浓缩得到所需产物(0.64g，95％)。C₁₃H₁₇ClO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝295.1；实验值：295.1。

步骤3.3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯甲醛

在0℃下向1-[5-氯-3-(1,2-二羟乙基)-2-乙氧基-4-甲基苯基]乙酮(0.64g，2.3mmol)于四氢呋喃(18mL)和水(11mL)中的溶液中添加乙酸(35μL，0.61mmol)和过碘酸钠(1.50g，7.04mmol)。在搅拌30分钟之后，反应混合物用水稀释，并且用EtOAc萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到所需产物(0.58g，100％)。C₁₂H₁₄ClO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝241.1；实验值：241.1。

步骤4.3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯甲酸

在冰浴中冷却3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯甲醛(0.58g，2.4mmol)和磷酸二氢钠一水合物(116mg，0.844mmol)于乙腈(11.8mL)和水(2.5mL)中的溶液。依次添加30％过氧化氢(0.98mL，9.6mmol)和固体亚氯酸钠(0.545g，4.82mmol)。搅拌混合物1小时。混合物用1M HCl溶液稀释，并且用EtOAc萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到所需产物(0.67g，100％)。C₁₂H₁₃ClO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝279.1；实验值：279.0。

步骤5.3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

向3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯甲酸(0.26g，1.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(0.67g，1.5mmol)。在搅拌10分钟之后，添加N,N-二异丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)和2.0M乙胺的THF溶液(2.5mL，5.1mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时。反应溶液用水稀释，并且用二氯甲烷萃取。浓缩合并的有机层并且在硅胶柱上(用含0％至50％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.2g，70％)。C₁₄H₁₉ClNO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝284.1；实验值：284.1。

步骤6.3-氯-6-乙氧基-N-乙基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯甲酰胺

在室温下用含四氢硼酸钠(0.032g，0.84mmol)的甲醇(6mL)处理3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺(0.2g，0.7mmol)1小时。混合物用水稀释，用二氯甲烷萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且过滤，浓缩得到所需产物。C₁₄H₂₁ClNO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝286.1；实验值：286.1。

步骤7.3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺

在室温下搅拌氰脲酰氯(0.15g，0.84mmol)与N,N-二甲基甲酰胺(0.065mL，0.84mmol)的混合物10分钟并且接着添加3-氯-6-乙氧基-N-乙基-5-(1-羟乙基)-2-甲基苯甲酰胺(0.16g，0.56mmol)于二氯甲烷(3.1mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用水洗涤，浓缩并且在硅胶上(用含0至40％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.13g，76％)。C₁₄H₂₀Cl₂NO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝304.1；实验值：304.1。

步骤8.3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

在140℃下加热3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-N-乙基-2-甲基苯甲酰胺(130mg，0.43mmol)、3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(120mg，0.47mmol)、碳酸铯(210mg，0.64mmol)以及碘化钾(7.1mg，0.043mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，用水洗涤，并且浓缩。残余物在硅胶上(用含0至100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.14g，62％)。C₁₉H₂₃ClIN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝529.1；实验值：528.9。

步骤9.3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

在N₂下向3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺(9.0mg，0.017mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(6.6mg，0.034mmol)、碳酸钠(11mg，0.10mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.1mL)/水(51μL)中的溶液中添加四(三苯膦)钯(0)(2.0mg，0.0017mmol)。混合物在100℃下加热过夜。在冷却至室温之后，过滤混合物并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(0.9mg，10％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₆ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.0。

实施例88.3-{1-[4-氨基-3-(3-氟-5-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

此化合物使用与实施例87，步骤9(外消旋中间体)类似的程序，用(3-氟-5-羟基苯基)硼酸替代4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₇ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝513.2；实验值：513.0。

实施例89.3-(1-(4-氨基-3-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

此化合物使用与实施例87，步骤9(外消旋中间体)类似的程序，用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1,3-苯并噁唑-2-胺替代4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₈ClN₈O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝535.2；实验值：535.0。

实施例90.3-{1-[4-氨基-3-(2-氨基-1,3-苯并噻唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

此化合物使用与实施例87，步骤9(外消旋中间体)类似的程序，用6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1,3-苯并噻唑-2-胺替代4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₈ClN₈O₂S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝551.2；实验值：551.0。

实施例91.3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

此化合物使用与实施例87，步骤9(外消旋中间体)类似的程序，用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶替代4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₈ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝519.2；实验值：519.0。

实施例92.3-{1-[4-氨基-3-(1H-吲唑-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

此化合物使用与实施例87，步骤9(外消旋中间体)类似的程序，用6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吲唑替代4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₈ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝519.2；实验值：519.0。

实施例93.3-{1-[4-氨基-3-(1H-吲哚-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-N-乙基-6-甲基苯甲酰胺

此化合物使用与实施例87，步骤9(外消旋中间体)类似的程序，用5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吲哚替代4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₇H₂₉ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝518.2；实验值：518.0。

实施例94.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯

在140℃下加热3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(0.375g，0.888mmol，来自实施例35，步骤3)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.16g，1.1mmol)、碳酸铯(0.43g，1.3mmol)和碘化钾(15mg，0.089mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2.8mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，并且用水洗涤。浓缩有机层并且在硅胶上(用含0至100％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.24g，50％)。C₂₈H₃₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝535.2；实验值：535.0。在Phenomenex Lux纤维素C-2柱(5μM，21.2×250mm)上分离对映异构体，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，并且柱装载量为每次注射约4.5mg，分离两种对映异构体。第一峰停留时间:21.2分钟；第二峰停留时间:24.6分钟。

步骤2.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

将3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(170mg，0.32mmol，外消旋中间体)和5％钯(80mg)组合于甲醇(12mL)中，向其中添加0.25M氯化氢的水溶液(3.2mL，0.79mmol)。悬浮液在室温下在H₂气球压力下氢化2小时。过滤悬浮液。滤液用饱和NaHCO₃溶液中和，并且用二氯甲烷萃取。合并的有机层经MgSO₄干燥并且过滤，浓缩得到所需产物(117mg，92％)。C₂₀H₂₆ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝401.2；实验值：401.1。

步骤3.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺双(三氟乙酸盐)

添加丙酮(9.3μL，0.13mmol)至含1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10.2mg，0.0254mmol)的甲醇(0.1mL)/四氢呋喃(0.1mL)/乙腈(0.1mL)中并且在室温下搅拌混合物10分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(16mg，0.076mmol)。反应混合物在室温下搅拌4小时，并且接着经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(2.3mg，22％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₃H₃₂ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝443.2；实验值：443.1。

实施例95.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇双(三氟乙酸盐)

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.9mg，0.020mmol，来自实施例94，步骤2的外消旋中间体)于四氢呋喃(0.09mL)/乙腈(0.09mL)/甲醇(0.09mL)中的混合物中添加{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(19μL，0.098mmol)并且搅拌混合物10分钟，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(12mg，0.059mmol)。所得混合物在室温下搅拌4小时，接着用6.0M氯化氢的水溶液(30μL，0.2mmol)处理10分钟。混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(3.2mg，40％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₃₀ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝445.2；实验值：445.1。

实施例96.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇双(三氟乙酸盐)

在Phenomenex Lux纤维素C-2柱(5μM，21.2×250mm)上分离来自实施例94，步骤1的对映异构体，用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，并且柱装载量为每次注射约4.5mg，分离两种对映异构体。第一峰停留时间:21.2分钟；第二峰停留时间:24.6分钟。

如实施例94，步骤2中所述在5％钯存在下氢化3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸苯甲酯(来自先前步骤的第一峰的手性中间体)得到所需手性产物。C₂₀H₂₆ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝401.2；实验值：401.1。

步骤3.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇双(三氟乙酸盐)

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.02mmol，来自步骤2的手性中间体)和三乙胺(9μL，0.07mmol)于异丙醇(0.05mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(4.5μL，0.064mmol)。所得混合物在90℃下搅拌过夜，冷却并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(3.4mg，34％)。产物分离为单一非对映异构体。C₂₃H₃₂ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝459.2；实验值：459.1。

实施例99.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧基丙-2-醇三氟乙酸盐

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9.8mg，0.024mmol，来自实施例94，步骤2的外消旋中间体)、六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲(uronium)(14mg，0.037mmol)以及三乙胺(10μL，0.073mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.15mL)中的混合物中添加85％(2S)-2-羟基丙酸的水溶液(3.2μL，0.037mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时。混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈三氟乙酸(TFA)盐形式的所需产物(2.9mg，29％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₃₀ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝473.2；实验值：473.1。

实施例101.1-[1-(5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-{1-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)羰基]氮杂环丁烷-3-基}苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺三氟乙酸盐

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(9.6mg，0.024mmol，来自实施例94，步骤2的外消旋中间体)和三乙胺(10μL，0.072mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的混合物中添加1-甲基-1H-吡唑-4-羰基氯(5.2mg，0.036mmol)。混合物在室温下搅拌4小时，并且在减压下蒸发至干燥。所得残余物用MeOH稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(1.3mg，13％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₃₀ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝509.2；实验值：509.1。

实施例102.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(21mg，0.046mmol)(实施例1，步骤7，来自峰1的手性中间体)和三乙胺(20μL，0.1mmol)于异丙醇(0.10mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(3.2μL，0.046mmol)。在90℃下搅拌所得混合物。在90分钟之后，再添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(6.4μL)并且在90℃下搅拌过夜。在冷却之后，混合物用甲醇稀释并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6mg(30％)产物。产物分离为单一非对映异构体。C₂₂H₃₀ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝445.2；实验值：445.2。

实施例104.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.04mmol)(实施例1，步骤7，来自峰1的手性中间体)、{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(8.3mg，0.048mmol)以及三乙胺(19μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(38mg，0.087mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并且浓缩。将粗产物溶解于四氢呋喃(1mL)中并且冷却至0℃。添加1.0M氟化四正丁基铵的THF溶液(0.44mL，0.44mmol)并且升温至室温。在3小时之后，蒸发溶剂。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到8.1mg(40％)所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₁H₂₈ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝431.2；实验值：431.3。

实施例105.(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙腈

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(16mg，0.035mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)和三乙胺(14μL，0.10mmol)于乙腈(0.7mL)中的混合物中添加溴乙腈(2.7μL，0.038mmol)。在室温下搅拌所得混合物2.5小时。混合物用乙腈稀释并且通过使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物。部分蒸发纯洗脱份并且接着通过添加1N NaOH使其呈碱性。水性混合物用二氯甲烷(2×)萃取。干燥(MgSO4)萃取物、过滤并且浓缩。在真空中干燥固体得到6.9mg(46％)所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₁H₂₅ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝426.2；实验值：426.0。

实施例108.1-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在室温下历经周末搅拌1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.024mmol，来自实施例1，步骤7的第一峰的手性中间体)、三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(6.8mg，0.029mmol)以及三乙胺(12μL，0.085mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物。蒸发溶剂并且粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到4.5mg(39％)所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₁H₂₅ClF₃N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.1。

实施例110.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N-甲基丙酰胺三氟乙酸盐

1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(26mg，0.067mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)、(2R)-2-溴丙酸(7.3μL，0.081mmol)以及三乙胺(19μL，0.13mmol)于乙腈(0.8mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。反应未完成，因此将其加热至50℃。在4小时之后，蒸发溶剂。向粗残余物中添加氯化甲基铵(4.5mg，0.067mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)、三乙胺(19μL，0.13mmol)以及六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(45mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。添加反应混合物至含有饱和NaHCO₃的小瓶中并且用EtOAc(2×)萃取。干燥(MgSO₄)有机物、过滤并且浓缩。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到1.4mg(3.6％)呈TFA盐形式的所需产物。产物分离为单一非对映异构体。C₂₃H₃₁ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝472.2；实验值：472.2。

实施例113.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-3,3,3-三氟丙-1-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.04mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)和三乙胺(19μL，0.13mmol)于乙腈(0.6mL)中的混合物中添加2-溴-3,3,3-三氟丙-1-醇(来自Synquest Labs，9.2mg，0.048mmol)。添加N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)，这产生澄清溶液，将其在70℃下搅拌过夜。混合物用水稀释并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6.6mg(30％)所需产物。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C₂₂H₂₇ClF₃N₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝499.2；实验值：499.1。

实施例115.(2R)-3-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1,1,1-三氟丙-2-醇

在微波中在120℃下加热1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.044mmol，来自实施例1，步骤7的峰1的手性中间体)、(2R)-2-(三氟甲基)环氧乙烷(9.4μL，0.11mmol)以及三乙胺(18μL，0.13mmol)于乙醇(0.3mL)中的混合物25分钟。混合物用MeOH稀释并且通过RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6.2mg(28％)所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₂H₂₇ClF₃N₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝499.2；实验值：499.1。

实施例117.1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-{1-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)羰基]氮杂环丁烷-3-基}苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.033mmol)(来自实施例1，步骤7，峰1的手性物质)和三乙胺(14μL，0.098mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的混合物中添加1-甲基-1H-吡唑-4-羰基氯(来自Maybridge，6.1mg，0.042mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并且粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到7.1mg(44％)产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₂₈ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝495.2；实验值：495.2。

实施例118.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧基丙-2-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(15mg，0.033mmol，来自实施例1，步骤7，峰1的手性中间体)、(2S)-2-羟基丙酸(4.3μL，0.049mmol)(L-乳酸，85％水溶液)和三乙胺(14μL，0.098mmol)的混合物于N,N-二甲基甲酰胺(0.2mL)中的混合物中添加六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲(19mg，0.049mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。混合物用MeOH稀释并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到3.0mg(20％)所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₂H₂₈ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝459.2；实验值：459.2。

实施例121.(2R)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-1-氧基丙-2-醇三氟乙酸盐

此化合物使用与实施例118的程序类似的程序(自来自实施例1，步骤7，峰1的手性物质起始)，用(R)-2-羟基丙酸替代(2S)-2-羟基丙酸(4.3μL，0.049mmol)、和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻替代六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲来制备。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₂H₂₈ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝459.2；实验值：459.2。

实施例125.[3-(3-{1-[4-氨基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]乙腈双(三氟乙酸盐)

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.7mmol)(来自实施例1，步骤5，外消旋中间体)和3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.629g，2.94mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中添加碘化钾(44mg，0.27mmol)和碳酸铯(1.30g，4.01mmol)。加热所得混合物至120℃并且搅拌4小时。在冷却之后，添加水并且短暂搅拌，随后过滤固体。所得固体用水洗涤，在硅胶上(用含0-10％MeOH的二氯甲烷洗脱)纯化得到1.11g(75％)呈黄色胶状的所需产物。C₂₃H₂₉BrClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝551.1；实验值：551.1。

步骤2.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

添加三氟乙酸(1.2mL，16mmol)至3-{3-[1-(4-氨基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(224mg，0.407mmol)于二氯甲烷(2.5mL)中的溶液中并且在室温下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释并且添加1N NaOH并快速搅拌数分钟。分离各层并且水层用二氯甲烷萃取。干燥(MgSO₄)合并的有机物、过滤并且浓缩。在真空中干燥得到163mg(91％)游离碱。C₁₈H₂₁BrClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝451.1；实验值：451.0。

步骤3.(3-{3-[1-(4-氨基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙腈

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.2mmol)和三乙胺(37μL，0.27mmol)于乙腈(3mL)中的混合物中添加溴乙腈(19μL，0.27mmol)。在室温下搅拌所得混合物。在1小时之后，反应混合物仍然混浊，并且并非所有物质皆溶解。添加若干滴DMF，这产生澄清溶液。混合物在室温下搅拌过夜并且接着蒸发大部分溶剂。所得残余物在硅胶上(用含0-10％MeOH的二氯甲烷洗脱)纯化得到29mg(30％)所需产物。C₂₀H₂₂BrClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝490.1；实验值：490.1。

步骤4.[3-(3-{1-[4-氨基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]乙腈双(三氟乙酸盐)

向微波小瓶中添加(3-{3-[1-(4-氨基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙腈(14mg，0.029mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(12mg，0.058mmol)、四(三苯膦)钯(0)(3.4mg，0.0029mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(0.15mL)以及2.0M碳酸钠的水溶液(73μL，0.14mmol)。封盖小瓶并且在100℃下加热3小时。混合物用二氯甲烷稀释，过滤并且浓缩。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到4.6mg(22％)呈TFA盐形式的产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₇ClN₉O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝492.2；实验值：492.1。

实施例126.[3-(3-{1-[4-氨基-3-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]乙腈

向微波小瓶中称入1-(1-乙氧基乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(16mg，0.058mmol)和四(三苯膦)钯(0)(3.4mg，0.0029mmol)。依次添加(3-{3-[1-(4-氨基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)乙腈(14mg，0.029mmol，来自实施例125，步骤3的外消旋中间体)于N,N-二甲基甲酰胺(0.25mL)中的溶液和2.0M碳酸钠的水溶液(73μL，0.14mmol)。在120℃下搅拌所得混合物5小时。过滤混合物并且浓缩。向粗偶联产物于四氢呋喃(0.3mL)中的混合物中添加3.0M盐酸水溶液(100μL，0.3mmol)并且在室温下搅拌2小时。混合物用饱和NaHCO₃中和并且用二氯甲烷萃取。干燥(MgSO₄)有机物、过滤并且浓缩。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到1.0mg(对于2个步骤而言7.2％)所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₅ClN₉O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝478.2；实验值：478.1。

实施例127和128.1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺和5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-{3-[1-(4-氨基-3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.1g，2.0mmol，来自实施例125，步骤1的外消旋中间体)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加四(三苯膦)钯(0)(230mg，0.20mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(0.68mL，4.0mmol)。在N₂下添加2.0M碳酸钠的水溶液(5.0mL，1.0mmol)并且在100℃下加热混合物3小时，接着在室温下搅拌过夜。反应混合物经硅藻土过滤，并且用EtOAc洗涤。滤液用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且浓缩。粗物质在硅胶上(用含40％-100％乙酸乙酯的己烷洗脱)纯化得到0.75g(75％)所需产物。C₂₅H₃₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝499.2；实验值：499.0(M+H)；¹H NMR(300MHz,CDCl₃):δ8.30(s,1H),7.50-7.40(m,1H),6.99(dd,J＝17.7,11.3Hz,1H),6.44(q,J＝7.0Hz,1H),5.95(dd,J＝17.7,1.3Hz,1H),5.83(br s,1H),5.65(dd,J＝11.3,1.3Hz,1H),4.39-3.96(m,4H),3.63(d,J＝6.7Hz,3H),2.99-2.78(m,1H),2.22(s,4H),1.84(d,J＝7.1Hz,3H),1.43(s,9H)。

步骤2.3-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.87g，1.7mmol)于叔丁醇(11mL)中的悬浮液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(225mg，1.92mmol)、水(5.5mL)以及四氧化锇(26mg，0.10mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。依次添加水和EtOAc至反应中。分离各层并且水层用EtOAc萃取。合并的有机物用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并且浓缩得到0.93g粗产物。C₂₅H₃₄ClN₆O₅的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝533.2；实验值：533.2。

步骤3.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.93g，1.7mmol)于四氢呋喃(13mL)和水(8mL)中的溶液中添加乙酸(26μL，0.45mmol)和过碘酸钠(1.12g，5.23mmol)。在仅略微升温下搅拌3小时之后，反应尚未完成，因此将其置放在冰箱中过夜。添加水至反应中并且用二氯甲烷(3×)萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并且浓缩。粗物质在硅胶上(用含40％-85％乙酸乙酯的己烷洗脱)纯化得到0.47g(54％)所需产物。C₂₄H₃₀ClN₆O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝501.2；实验值：501.3。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ10.05(s,1H),8.37(s,1H),7.39(s,1H),6.55(q,J＝7.1Hz,1H),5.89(s,1H),4.42-3.95(m,6H),3.67(s,3H),2.25(s,3H),1.90(d,J＝7.1Hz,3H),1.44(s,9H)ppm。

步骤4.3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.96g，1.9mmol)于二氯甲烷(10mL)中的搅拌溶液中添加三氟化二乙基氨基硫(0.63mL，4.8mmol)。在0℃下搅拌混合物数分钟，接着升温至室温并且搅拌2.5小时。添加水和二氯甲烷并且分离各层。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并且浓缩。粗物质在硅胶上(用含0-5％MeOH的二氯甲烷洗脱)纯化得到所需产物。C₂₄H₃₀ClF₂N₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝523.2；实验值：523.2。

步骤5.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

向3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(30mg，0.057mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的混合物中添加4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(0.10mL，0.40mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时并且接着浓缩。在真空中干燥残余物得到27mg(100％)呈盐形式的产物。C₁₉H₂₂ClF₂N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝423.1；实验值：423.0。

步骤6.1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(27mg，0.054mmol)、丙酮(4.4μL，0.060mmol)以及三乙胺(23.5μL，0.169mmol)于二氯甲烷(0.4mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(47mg，0.11mmol)。在室温下搅拌所得混合物2小时。过滤混合物并且浓缩并在真空中干燥得到22mg粗产物，其将不经纯化即使用。C₂₂H₂₈ClF₂N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝465.2；实验值：465.1。

步骤7.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

添加0.5mL预先形成的催化剂(来自实施例40)至1-{1-[5-氯-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(22mg，0.047mmol)、锌(1.3mg，0.021mmol)以及氰化锌(5.6mg，0.047mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(0.7mL)中的混合物中。混合物用N₂吹拂并且在120℃下加热过夜。反应完成约50％并且将其终止以便分离两种化合物。在用二氯甲烷洗涤下过滤反应混合物，并且浓缩。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到两种标题化合物。产物以外消旋混合物形式分离。实施例126：产量＝6.6mg(30％)；C₂₂H₂₈ClF₂N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝465.2；实验值：465.2；实施例127：产量＝3.0mg(14％)；C₂₃H₂₈F₂N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.2。

实施例129.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-甲氧基-2-甲基-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

步骤1.3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

称量锌(11mg，0.17mmol)和双(三-叔丁基膦)钯(71mg，0.14mmol)至微波小瓶中，接着添加3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(182mg，0.348mmol，来自实施例127/128，步骤4的外消旋中间体)于N-甲基吡咯烷酮(2.0mL)中的溶液。将混合物用N₂脱气数分钟，随后添加氰化锌(82mg，0.70mmol)。在130℃下搅拌所得混合物3小时。在冷却之后，混合物经硅藻土垫过滤并且浓缩。粗物质在硅胶上用含0-5％MeOH的二氯甲烷洗脱纯化。产物即刻与NMP一起洗脱。合并洗脱份并且浓缩，接着溶解于EtOAc中并且用盐水(3×)洗涤。干燥有机物、过滤并且浓缩得到0.17g(96％)所需产物。C₂₅H₃₀F₂N₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝514.2；实验值：514.1。

步骤2.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐

向3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.20g，0.39mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(0.60mL，2.4mmol)。在室温下搅拌所得混合物3.5小时。蒸发溶剂并且在真空中干燥残余物得到0.23g呈HCl盐形式的产物。C₂₀H₂₂F₂N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝414.2；实验值：414.1。

步骤3.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-甲氧基-2-甲基-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

向5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(20mg，0.04mmol)和三乙胺(20μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物中添加三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(11mg，0.049mmol)。在40℃下搅拌所得混合物3小时。蒸发溶剂并且粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到3.4mg(20％)所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₃F₅N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝496.2；实验值：496.1。

实施例130.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

向5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(20mg，0.04mmol，实施例129，步骤2)、{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛(9.1μL，0.048mmol)和三乙胺(19μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(38mg，0.087mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。过滤混合物并且浓缩。将粗产物溶解于四氢呋喃(1.0mL)中并且添加1.0M氟化四正丁基铵的THF溶液(0.44mL，0.44mmol)并在室温下搅拌。在1.5小时之后，蒸发溶剂。粗残余物使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到4.1mg(20％)所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₆F₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝458.2；实验值：458.2。

实施例131.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

向5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(20mg，0.04mmol，来自实施例129，步骤2的外消旋中间体)和三乙胺(18μL，0.13mmol)于异丙醇(0.1mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(9.1μL，0.13mmol)。在90℃下搅拌所得混合物5小时。粗混合物使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到2.5mg(10％)所需产物。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C₂₃H₂₈F₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝472.2；实验值：472.2。

实施例133.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-[1-(2-羟基-2-甲基丙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

在微波中在120℃下加热5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(21mg，0.043mmol，来自实施例129，步骤2的外消旋中间体)、2,2-二甲基-环氧乙烷(11μL，0.13mmol)、N,N-二异丙基乙胺(19μL，0.11mmol)和乙醇(0.5mL)的混合物30分钟。粗混合物用乙腈稀释并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到6.1mg(29％)所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₃₀F₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝486.2；实验值：486.2。

实施例134.(2S)-2-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]-N-甲基丙酰胺

步骤1.(2S)-2-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]丙酸

向5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(30mg，0.06mmol，来自实施例129，步骤2的外消旋中间体)和(2S)-2-氯丙酸甲酯(7.9μL，0.074mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.35mL)中的混合物中添加碳酸钾(26mg，0.19mmol)。所得混合物在60℃下搅拌过夜。在冷却之后，添加水并且用EtOAc(3×)萃取。干燥(MgSO₄)合并的萃取物、过滤并且浓缩。向粗残余物中添加甲醇(0.3mL)、水(40μL，2mmol)和氢氧化锂一水合物(13mg，0.31mmol)。在室温下搅拌所得混合物2.5小时。浓缩混合物并且照原样用于下一反应。C₂₃H₂₆F₂N₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝486.2；实验值：486.2。

步骤2.(2S)-2-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]-N-甲基丙酰胺

向(2S)-2-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-基]丙酸(30mg，0.06mmol)、氯化甲基铵(6.6mg，0.098mmol)以及三乙胺(18μL，0.13mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中的混合物中添加六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(43mg，0.098mmol)。在室温下搅拌所得混合物3小时。混合物用乙腈稀释，过滤，并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到4.7mg(10％，3个步骤)所需产物。产物以非对映异构体的混合物形式分离。C₂₄H₂₉F₂N₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝499.2；实验值：499.1。

实施例136.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-[1-(2,2-二氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(21mg，0.043mmol，来自实施例129，步骤2的外消旋中间体)、2-溴-1,1-二氟乙烷(3.8μL，0.048mmol)以及三乙胺(18μL，0.13mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。混合物用甲醇(MeOH)稀释并且使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到3.3mg(16％)所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₄F₄N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝478.2；实验值：478.1。

实施例137.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

此化合物使用与实施例129，步骤1类似的程序制备，例外之处为产物使用Phenomenex Lux-纤维素1柱(21.1×250mm，5微米粒径)纯化，用含10％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射5mg，得到两种对映异构体。对于峰1：停留时间：1.12分钟；C₂₅H₃₀F₂N₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝514.2；实验值：514.1。峰2停留时间为2.58分钟。

此化合物使用与实施例128，步骤2类似的程序，用3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自步骤1的峰1)替代3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氰基-2-甲氧基-6-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯来制备。C₂₀H₂₂F₂N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝414.2；实验值：414.1。

步骤3.5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

向5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(25mg，0.051mmol)、(2S)-2-{[叔丁基(二苯基)硅烷基]氧基}丙醛(18mg，0.057mmol)以及三乙胺(22μL，0.15mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(45mg，0.10mmol)。混合物搅拌过夜，接着过滤并且浓缩。向残余物中添加四氢呋喃(1.0mL)和1.0M氟化四正丁基铵的THF溶液(0.51mL，0.51mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并且粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到1.6mg(6.6％)所需产物。产物分离为单一非对映异构体。C₂₃H₂₈F₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝472.2；实验值：472.2。

实施例138.3-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈

5-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-3-氮杂环丁烷-3-基-4-甲氧基-2-甲基苯甲腈二盐酸盐(21mg，0.043mmol，来自实施例129，步骤2的外消旋中间体)、乙酰氯(3.4μL，0.048mmol)以及三乙胺(18μL，0.13mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂并且粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₄F₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.2。

实施例139.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺的对映异构体

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮

此化合物是根据实施例13步骤3的程序，使用1-(5-氯-4-氟-2-羟基-3-碘苯基)乙酮和碘乙烷作为起始物质来制备。C₁₀H₁₀ClFIO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝342.9；实验值：342.9。

步骤2.3-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向配备有磁性搅拌棒和橡胶隔膜的圆底烧瓶装入氯化锂(3.9g，91mmol)。在140℃下在高真空下加热烧瓶10分钟并且在冷却至室温之后用氮气回填。添加锌(6.0g，91mmol)并且在140℃下在高真空下加热烧瓶10分钟并在冷却至室温之后用氮气回填。经由注射器添加四氢呋喃(THF)(38mL)和1,2-二溴乙烷(233μL，2.70mmol)。在60℃下加热混合物10分钟并且接着冷却至室温。添加氯三甲基硅烷(68μL，0.54mmol)和含碘(69mg，0.27mmol)的THF(1mL)并且在60℃下搅拌所得混合物10分钟，接着冷却至室温。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(12.17g，42.99mmol)于THF(10mL)中的溶液并且在40℃下搅拌混合物1小时并在室温下搅拌混合物1小时。在高真空下将装有1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(13.0g，38.0mmol)、乙酸钯(170mg，0.76mmol)、2'-(二环己基膦基)-N,N,N',N'-四甲基联苯-2,6-二胺(660mg，1.5mmol)和甲苯(35mL)的另一烧瓶抽空并且用氮气回填。冷却混合物至0℃并且经由注射器缓慢添加以上制备的锌试剂。在添加之后，加热反应至50℃过夜。反应溶液于EtOAc与饱和NH₄Cl溶液之间分配。分离各层并且水层进一步用EtOAc(2×)萃取。合并的有机物用水、盐水洗涤，接着经MgSO4干燥，并且浓缩。粗混合物在硅胶柱上纯化得到呈橙色油状的所需产物(6.3g，45％)。C₁₈H₂₃ClFNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝394.1；实验值：394.1。

步骤3.3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

此化合物是根据实施例13步骤5的程序，使用3-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和四氢硼酸钠作为起始物质来制备。C₁₈H₂₅ClFNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝396.1；实验值：396.1。

步骤4.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

此化合物是根据实施例13步骤6的程序，使用3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(外消旋)和氰脲酰氯作为起始物质来制备。

步骤5.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.10g，7.37mmol)、碳酸铯(3.2g，10mmol)以及碘化钾(111mg，0.670mmol)于DMF(20mL)中的混合物中添加3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.63g，6.70mmol)并且在90℃下搅拌混合物3小时。在真空中移除溶剂。残余物用乙酸乙酯和水稀释。水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。残余物在硅胶柱上(用100％乙酸乙酯洗脱)纯化得到呈泡沫状的所需产物(2.15g，63％)。C₂₄H₃₁ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝505.2；实验值：505.2。

步骤6.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(275mg，0.544mmol)于二氯甲烷(2.4mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的二噁烷溶液(1.1mL，4.4mmol)。在室温下搅拌反应溶液6小时。在减压下移除溶剂得到呈白色固体状的所需产物(250mg，96％)。C₁₉H₂₃ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝405.2；实验值：405.1。

步骤7.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(49mg，0.10mmol)、丙酮(8.28μL，0.113mmol)以及三乙胺(44.3μL，0.318mmol)于二氯甲烷(0.67mL)中的混合物中添加三乙酰氧基硼氢化钠树脂(89mg，0.20mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。过滤混合物并浓缩并接着通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％TFA的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到外消旋产物。LCMS：实验值：m/z＝447.2(M+H)⁺。外消旋混合物通过手性HPLC(柱IA，用5％乙醇/95％己烷在流速18mL/min下洗脱)分离得到两个峰(异构体1：9.5mg，21％；异构体2：9.2mg，20％)。

异构体1(首先洗脱，停留时间：4.4分钟)：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ□8.10(s,1H),7.45(d,1H),6.21(m,1H),3.70(m,5H),2.91(m,2H),2.53(s,3H),2.17(m,1H),1.66(d,3H),1.31(t,3H),0.81(m,6H)ppm；C₂₂H₂₉ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝447.2；实验值：447.2。

异构体2(其次洗脱，停留时间：19.5分钟)：C₂₂H₂₉ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝447.2；实验值：447.2。

实施例140.1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(20mg，0.042mmol，来自实施例139，步骤6的外消旋中间体)和三乙胺(18μL，0.12mmol)于乙醇(1mL)中的混合物中添加2,2-二甲基-环氧乙烷(6.98μL，0.0837mmol)。在微波反应器中在120℃下加热所得混合物45分钟。反应用甲醇稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈白色固体状的所需产物(3.4mg，17％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₃₁ClFN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝477.2；实验值：477.3。

实施例1411-(1-{5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-[1-(2,2,2-三氟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(19mg，0.040mmol，来自实施例139，步骤6的外消旋中间体)和三乙胺(20μL，0.14mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的混合物中添加三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙酯(11mg，0.048mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。在减压下蒸发溶剂并且粗混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(3.8mg，19％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₄ClF₄N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝487.2；实验值：487.1。

实施例149(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯的对映异构体

外消旋混合物通过手性HPLC(柱IA，用5％乙醇/95％己烷在流速18mL/min下洗脱)分离得到两个峰；异构体1(首先洗脱)：停留时间：16.8分钟；C₂₄H₃₁ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝505.2；实验值：505.2；异构体2(其次洗脱)：停留时间：19.5分钟；C₂₄H₃₁ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝505.2；实验值：505.2。

步骤21-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

此化合物使用与实施例139步骤6的程序类似的程序，用3-{3-[(1S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自手性分离的第一峰)作为起始物质来制备。C₁₉H₂₃ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝405.2；实验值：405.1。

步骤3.(2S)-1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-2-醇

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(46mg，0.11mmol)(来自异构体1)和三乙胺(50μL，0.4mmol)于异丙醇(0.3mL)中的混合物中添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(16μL，0.23mmol)。在90℃下搅拌所得混合物3小时。在冷却之后，混合物用乙腈稀释并且通过RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(12mg，23％)。产物分离为单一非对映异构体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.05(s,1H),7.38(d,1H),6.15(m,1H),4.26(d,1H),3.76-3.60(m,6H),2.99(m,2H),2.48(s,3H),2.22(m,2H),1.62(d,3H),1.25(t,3H),0.93(d,3H)ppm；C₂₂H₂₉ClFN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝463.2；实验值：463.2。

实施例1501-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1：3-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

此化合物使用与实施例139步骤5的程序类似的程序，用来自实施例139步骤4的外消旋3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备。C₂₃H₂₈ClFIN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝617.1；实验值：617.1。

步骤23-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

3-{3-[1-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.32g，2.14mmol)、吡啶-三乙烯基环硼氧烷(1:1)(0.51g，2.1mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(90mg，0.1mmol)以及碳酸钾(0.89g，6.4mmol)于1,4-二噁烷(10mL)/水(7mL)中的混合物在100℃下加热过夜。在冷却至室温之后，反应混合物用水和乙酸乙酯稀释。水层用乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶柱上纯化得到所需产物(0.71g，64％)。C₂₅H₃₁ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝517.2；实验值：517.2。

步骤3.3-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

向3-{3-[1-(4-氨基-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.707g，1.37mmol)于叔丁醇(8.6mL)中的悬浮液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(176mg，1.50mmol)、水(4.3mL)以及四氧化锇(20mg，0.080mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。依次添加水和EtOAc至反应中。分离各层并且水层用EtOAc萃取。合并的有机物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。C₂₅H₃₃ClFN₆O₅的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝551.2；实验值：551.2。

步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-(3-{1-[4-氨基-3-(1,2-二羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.754g，1.37mmol)于THF(10mL)和水(6mL)中的溶液中添加乙酸(20μL，0.36mmol)和过碘酸钠(0.878g，4.10mmol)。在搅拌过夜之后，添加水至反应中并且用二氯甲烷(3×)萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。C₂₄H₂₉ClFN₆O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝519.2；实验值：519.2。

步骤5.3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下向3-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.61g，1.2mmol)于二氯甲烷(7mL)中的溶液中添加三氟化二乙基氨基硫(0.39mL，2.9mmol)。在0℃下搅拌混合物数分钟，接着升温至室温并且搅拌2.5小时。添加水和二氯甲烷并且分离各层。有机物用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩。在真空中干燥黄色胶状物得到所需产物(0.60g，94％)。C₂₄H₂₉ClF₃N₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝541.2；实验值：541.2。

步骤6.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

向3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.64g，1.2mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加4.0M氯化氢的二噁烷溶液(2.4mL，9.5mmol)。在室温下搅拌反应溶液6小时。移除溶剂得到呈白色固体状的所需产物(0.61g，100％)。C₁₉H₂₁ClF₃N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝441.1；实验值：441.1。

步骤7.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯基]乙基}-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物使用与实施例1步骤8的程序类似的程序，用1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和丙酮作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₂₇ClF₃N₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝483.2；实验值：483.2。

实施例1522-[3-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)氮杂环丁烷-1-基]乙醇

此化合物使用与实施例1步骤8的程序类似的程序，用1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基)乙基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(外消旋)和{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙醛作为起始物质来制备。在还原性胺化之后，添加氟化四丁基铵以移除叔丁基(二甲基)硅烷基。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₅ClF₃N₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝485.2；实验值：485.2。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.23(s,1H),7.38(m,2H),6.29(m,1H),3.78-3.67(m,4H),3.53(m,1H),3.12(m,2H),2.99-2.87(m,2H),2.34(m,2H),1.68(d,3H),1.22(m,3H)ppm。

实施例156(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-1-醇

步骤1.(2S)-2-溴丙酸甲酯

在0℃下添加DMF(28μL，0.36mmol)至(2S)-2-溴丙酸(0.552g，3.61mmol)和乙二酰氯(0.61mL，7.2mmol)于二氯甲烷(4.6mL)中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中移除溶剂。将残余物溶解于二氯甲烷中并且用甲醇(1.5mL，36mmol)和吡啶(0.44mL，5.4mmol)处理。在室温下搅拌反应溶液2小时。反应溶液用饱和碳酸氢钠溶液淬灭并且用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到所需产物(0.51g，85％)。

步骤2.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸甲酯

向1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(20.1mg，0.0475mmol，来自实施例1，步骤7的手性中间体)于乙腈(1mL)中的溶液中添加三乙胺(23μL，0.17mmol)和(2S)-2-溴丙酸甲酯(9.5mg，0.057mmol)。在室温下搅拌反应溶液4小时。移除溶剂得到所需产物(6.2mg，28％)。C₂₃H₃₀ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝473.2；实验值：473.3。

步骤3.(2R)-2-(3-{3-[(1S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙-1-醇

在0℃下用1.0M氢化二异丁基铝的甲苯溶液(0.1mL，0.1mmol)处理(2R)-2-(3-{3-[(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸甲酯(6.2mg，0.013mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的溶液3小时。反应用甲醇淬灭并且用制备型RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(0.8mg，14％)。产物分离为单一非对映异构体。C₂₂H₃₀ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝445.2；实验值：445.1。

实施例1581-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙-2-醇

此化合物使用与实施例140类似的程序，用1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(来自实施例1，步骤7的手性中间体)和2,2-二甲基-环氧乙烷作为起始物质来制备。产物分离为单一对映异构体。C₂₃H₃₂ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝459.2；实验值：459.1。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.04(s,1H),7.23(bs,2H),7.16(s,1H),6.14(m,1H),3.96(s,1H),3.85(m,3H),3.45(s,3H),2.94(m,1H),2.80(m,1H),2.49(s,3H),2.14(s,2H),2.00(s,3H),1.63(d,3H),0.98(s,6H)ppm。

实施例159(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N,N-二甲基丙酰胺

步骤1.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸

向(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸甲酯(来自实施例156步骤2的手性中间体)(13mg，0.027mmol)于乙腈(0.6mL)和水(0.2mL)中的溶液中添加氢氧化锂(2.4mg，0.10mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。反应溶液用乙酸乙酯和1M HCl溶液稀释。分离有机层并且经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到所需产物(10.2mg，83％)。C₂₂H₂₈ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝459.2；实验值：459.1。

步骤2.(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-N,N-二甲基丙酰胺

在室温下向(2R)-2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)丙酸(4mg，0.009mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(4mg，0.009mmol)于DMF(0.3mL)中的溶液中添加三乙胺(4μL，0.03mmol)和二甲胺盐酸盐(0.9mg，0.01mmol)。搅拌反应混合物1小时，接着用甲醇稀释并且通过制备型RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.7mg，63％)。产物分离为单一非对映异构体。C₂₄H₃₃ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝486.2；实验值：486.1。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ□8.09(s,1H),7.23(s,1H),6.18(m,1H),3.78(m,3H),3.50(s,3H),3.01(s,3H),3.0-2.9(m,3H),2.77(s,3H),2.54(s,3H),2.06(s,3H),1.67(d,3H),0.98(d,3H)ppm。

实施例161[1-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-基)环丁基]乙腈

向1-[(1-(3-氮杂环丁烷-3-基-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(10mg，0.022mmol，来自实施例1，步骤7的手性中间体)于乙腈(0.1mL)中的溶液中依次添加亚环丁基乙腈(4.1mg，0.044mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(13μL，0.087mmol)。所得混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙腈稀释并且通过制备型RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(4.3mg，41％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₃₁ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.0。

实施例1631-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1.4-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

此化合物使用与实施例139步骤2的程序类似的程序，用1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮和4-碘哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始物质来制备。C₂₀H₂₈ClNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝404.1；实验值：404.1。

步骤2.4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

此化合物是根据实施例13步骤5的程序，使用4-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)哌啶-1-甲酸叔丁酯和四氢硼酸钠作为起始物质来制备。C₂₀H₃₀ClNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝406.1；实验值：406.1。

步骤3.4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯

此化合物是根据实施例13步骤6的程序，使用4-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(外消旋)和氰脲酰氯作为起始物质来制备。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.44(s,1H),5.46(m,1H),4.23(bs,2H),3.73(s,3H),3.29(bs,1H),2.78(bs,2H),2.40(s,3H),2.27-2.09(m,2H),1.78(d,3H),1.63(m,2H),1.43(s,9H)ppm。

步骤4.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-甲酸叔丁酯

此化合物是根据实施例139步骤5的程序，使用4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]哌啶-1-甲酸叔丁酯和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备。C₂₆H₃₆ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝515.3；实验值：515.2。

步骤5.1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-哌啶-4-基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

此化合物是根据实施例139步骤6的程序，使用4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始物质来制备。C₂₁H₂₈ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝415.2；实验值：415.2。

步骤6.1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

此化合物是根据实施例139步骤7的程序，使用1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-哌啶-4-基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐和甲醛作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₂H₃₀ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝429.2；实验值：429.1。

实施例1641-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}哌啶-1-基)-2-甲基丙-2-醇

此化合物使用与实施例140的程序类似的程序，用1-[1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-哌啶-4-基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(来自实施例163，步骤5的外消旋中间体)和2,2-二甲基-环氧乙烷作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₃₆ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝487.3；实验值：487.3。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.05(s,1H),,7.24(bs,2H),7.22(s,1H),6.16(m,1H),4.01(bs,1H),3.67(s,3H),2.97(m,3H),2.49(s,3H),2.32(s,3H),2.15-2.04(m,6H),1.63(d,3H),1.40(m,2H),1.03(s,6H)ppm。

实施例1655-(3-{1-[4-氨基-3-(氰基甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

此化合物是根据实施例47中所述的程序，使用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)异噁唑(来自Frontier)替代(3-氟苯基)硼酸来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₆H₂₈ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝519.2；实验值：519.2。

实施例1663-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}环丁醇三氟乙酸盐

步骤1.1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮

将1-(5-氯-3-碘-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(1.0g，3.2mmol，来自实施例1，步骤2)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(0.66mL，3.9mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(0.26g，0.32mmol)以及碳酸钾(1.3g，9.4mmol)于1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中的混合物用N₂脱气并且在80℃下加热过夜。在冷却至室温之后，反应混合物用水和乙酸乙酯稀释。有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，浓缩并且在硅胶柱上(用含0至10％EtOAc的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.60g，82％)。C₁₂H₁₄ClO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝225.1；实验值：225.1。

步骤2.3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)环丁酮

向1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮(530mg，2.4mmol)于乙醚(10mL)中的溶液中添加锌-铜偶(1.8g，14mmol)。在40℃下加热反应混合物并且历经2小时缓慢添加三氯乙酰氯(1.4mL，13mmol)和磷酰氯(1.2mL，13mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(3mL)中的溶液。在添加之后，反应混合物在回流下搅拌过夜。反应用饱和NaHCO₃溶液淬灭并且用乙醚稀释。有机层用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。在室温下搅拌含残余物和锌(0.31g，4.7mmol)的乙酸(10mL)2小时并且接着回流过夜。再添加一份锌并且再回流4小时。混合物用水稀释并且用乙醚萃取。有机相连续用饱和NaHCO₃溶液、水和盐水洗涤，接着经MgSO₄干燥并且浓缩。粗物质用急骤色谱(用含0至30％乙酸乙酯的己烷洗脱)纯化得到所需产物(0.17g，27％)。C₁₄H₁₆ClO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝267.1；实验值：267.0。

步骤3.3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇

此化合物是根据实施例13步骤5的程序，使用3-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)环丁酮和四氢硼酸钠作为起始物质来制备。C₁₄H₁₉ClO₃Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝293.1；实验值：293.1。

步骤4.3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇

向3-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇(170mg，0.628mmol)于二甲亚砜(1mL)中的溶液中添加氰脲酰氯(64mg，0.34mmol)。在搅拌过夜之后，反应混合物用乙醚和水稀释。水层用乙酸乙酯萃取一次。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗物质用硅胶柱纯化得到所需产物(39.6mg，22％)。C₁₄H₁₈ClO₂的LCMS计算值：(M-Cl)⁺:m/z＝253.1；实验值：253.2。

步骤5.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}环丁醇三氟乙酸盐

此化合物是根据实施例139步骤5的程序，使用3-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]环丁醇和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₀H₂₅ClN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝402.2；实验值：402.2。

实施例167.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮

步骤2.1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇

在0℃下添加四氢硼酸钠(0.31g，8.1mmol)至1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(1.5g，5.4mmol)于甲醇(25mL)中的混合物中并且在室温下搅拌所得反应混合物1小时。移除溶剂并且所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，接着经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至40％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所需产物(0.30g，90％)。

步骤3.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯

在室温下搅拌氰脲酰氯(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟并且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙醇(来自实施例16，步骤1)(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至10％EtOAc的己烷洗脱纯化，得到所需产物(1.01g，60％)。

步骤4.1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在140℃下搅拌3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯(150mg，0.503mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.76mmol，ACES Pharma产品列表，条目号47024)、碘化钾(9.0mg，0.05mmol)以及碳酸铯(330mg，1.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物1小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至70％EtOAc的CH₂Cl₂洗脱纯化，得到所需产物(103mg，50％)。C₁₆H₁₈BrClN₅O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝410.0；实验值：410.2。将外消旋产物施加在Phenomenex Lux-纤维素1柱(21.1×250mm，5微米粒径)上，用含5％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射约13mg，得到两种对映异构体。峰1，停留时间：12.35分钟；峰2，停留时间：14.98分钟。

步骤5.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(来自先前步骤手性分离的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(25mg，0.091mmol，来自PepTech公司氨基酸类似物和硼酸丛书，条目号BE1622-1)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌2小时。在冷却至室温之后，过滤混合物并且滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(2.9mg，6.7％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.2。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ:8.78(2H,br s),8.48(1H,m),8.36(1H,s),7.86(1H,br s),7.65(1H,br s),7.58(1H,s),6.33(1H,q,J＝7.0Hz),3.19(3H,s),3.03(3H,s),2.97(3H,s),2.62(3H,s),2.06(3H,s),1.81(3H,d,J＝7.0Hz)ppm。

实施例174.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-环丙基-N-甲基烟碱酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

步骤1.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}烟碱甲腈

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4手性分离的第一峰，106mg，0.25mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)烟碱甲腈(70.mg，0.31mmol，来自Combi-Blocks目录，条目号PN-8893)、碳酸钠(43mg，0.41mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(33mg，0.041mmol)于乙腈(2mL)/水(0.6mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物(95mg，87％)通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH5％)洗脱纯化。C₂₂H₂₁ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝434.2；实验值：434.2。

步骤2.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)烟碱酸二盐酸盐

添加4.0M氢氧化钠的水溶液(0.3mL，1mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}烟碱甲腈(0.090g，0.21mmol)于乙醇(1.0mL)中的混合物中并且接着在95℃下加热混合物6小时。此时，添加浓HCl以将PH值调整至约3。移除溶剂并且残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₂H₂₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝453.1；实验值：453.2。

步骤3.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N-环丙基-N-甲基烟碱酰胺

在室温下添加N-甲基环丙胺盐酸盐(4.0mg，0.04mmol)至5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)烟碱酸二盐酸盐(9.6mg，0.021mmol)和BOP(10mg，0.03mmol)于DMF(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(13μL，0.10mmol)。搅拌反应1小时。产物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(2.6mg，17％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₆H₂₉ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝506.2；实验值：506.2。

实施例1793-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-甲基丙酰胺2,2,2-三氟乙酸盐

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}丙酸叔丁酯

向微波小瓶中添加1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4手性分离的峰1，35mg，0.085mmol)、(3-叔丁氧基-3-氧基丙基)三氟硼酸钾(30.mg，0.13mmol，来自Frontier Scientific，条目号P10370)、磷酸钾(54mg，0.26mmol)和四(三苯膦)钯(0)(9.8mg，0.0085mmol)和甲苯(0.7mL)/水(0.2mL)。密封小瓶并且用N₂脱气三次。在110℃下加热反应20小时。过滤粗物质并且产物(20mg，50％)通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH6％)洗脱纯化。C₂₃H₃₁ClN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝460.2；实验值：460.3。

步骤2.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}丙酸三氟乙酸盐

添加TFA(0.3mL，4mmol)至3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}丙酸叔丁酯(35mg，0.076mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的溶液中并且在室温下搅拌混合物2小时。移除溶剂并且产物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₁₉H₂₃ClN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝404.1；实验值：404.0。

步骤3.3-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N-甲基丙酰胺2,2,2-三氟乙酸盐

在室温下添加2.0M甲胺的THF溶液(30μL，0.06mmol)至3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}丙酸(8.9mg，0.022mmol)以及BOP(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时。产物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(3.2mg，27％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₀H₂₆ClN₆O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝417.2；实验值：417.0。

实施例1811-(1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1.4-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4手性分离的峰1，42mg，0.1mmol)、4-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(48mg，0.13mmol，来自Combi-Blocks目录，条目号FM-2957)、碳酸钠(18mg，0.17mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(14mg，0.017mmol)于乙腈(2mL)/水(0.4mL)中的混合物用N₂脱气并且在95℃下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH5％)洗脱纯化。C₂₉H₃₈ClN₈O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝581.2；实验值：581.3。

步骤2.1-(1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基)苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在室温下添加TFA(0.3mL，4mmol)至4-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(30mg，0.052mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的溶液中并且搅拌混合物1小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。C₂₄H₃₀ClN₈O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝481.2；实验值：481.1。

步骤3.1-(1-{5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-[1-(1-甲基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在0℃下添加12.0M甲醛的水溶液(0.01mL，0.2mmol)至1-{-1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-哌啶-4-基-1H-吡唑-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8.0mg，0.017mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.012mL，0.066mmol)于二氯甲烷(0.2mL)中的混合物中。搅拌反应混合物10分钟，此时添加三乙酰氧基硼氢化钠(5.3mg，0.025mmol)并且在0℃下搅拌反应1小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.0mg，24％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₃₂ClN₈O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝495.2；实验值：495.0。

实施例182.1-(1-{3-[1-(1-乙酰基哌啶-4-基)-1H-吡唑-4-基]-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基}乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在0℃下添加乙酰氯(2.4μL，0.033mmol)至1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-哌啶-4-基-1H-吡唑-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(8.0mg，0.017mmol，来自实施例181，步骤2的手性中间体)和N,N-二异丙基乙胺(14μL，0.083mmol)于二氯甲烷(0.3mL)中的溶液中并且在室温下搅拌反应15分钟。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.0mg，7.8％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₆H₃₂ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝523.2；实验值：523.2。

实施例183.1-[1-(5-氯-3-{1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吡唑-4-基}-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1.1-(2-氯乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑

在75℃下搅拌4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.39g，2.0mmol)、1-溴-2-氯乙烷(0.3mL，3mmol)以及碳酸铯(1.3g，4.0mmol)于乙腈(6mL)中的混合物5小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水，盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩并通过色谱法用己烷/EtOAc(最大EtOAc30％)洗脱纯化产物(0.45g，88％)。C₁₁H₁₉BClN₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝257.1；实验值：257.0。

步骤2.N,N-二甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙胺

1-(2-氯乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.10g，0.39mmol)、碘化钠(58mg，0.39mmol)以及2.0M二甲胺的THF溶液(1.0mL，2.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的混合物在80℃下搅拌过夜。移除溶剂得到所需产物，其用于下一步骤中。C₁₃H₂₅BN₃O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝266.2；实验值：266.3。

步骤3.1-[1-(5-氯-3-{1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吡唑-4-基}-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4的峰1，10mg，0.024mmol)、N,N-二甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]-乙胺(8.6mg，0.036mmol)、碳酸钠(5.2mg，0.049mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(4.0mg，0.0049mmol)于乙腈(0.5mL)/水(0.1mL)中的混合物抽真空并且用N₂再填充并在95℃下搅拌2小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(3.1mg，28％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₃H₃₀ClN₈O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.2。

实施例184.2-[(5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-基)氨基]乙醇

步骤1.1-{1-[5-氯-3-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4的峰1，25.0mg，0.06mmol)、2-氟-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶(20.mg，0.088mmol)、碳酸钠(12mg，0.12mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.5mg，0.012mmol)于乙腈(1mL)/水(0.3mL)中的混合物用N₂脱气并且在95℃下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH5％)洗脱纯化。C₂₁H₂₁ClFN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝427；实验值：427.2。

步骤2.2-[(5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-基)氨基]乙醇

在130℃下搅拌1-{1-[5-氯-3-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.023mmol)和乙醇胺(0.10mL)于1-丁醇(1mL)中的混合物5小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.6mg，15％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₃H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝468.2；实验值：468.2。

实施例188.2-(5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶-2-基氧基)乙醇

添加氢化钠(20mg，0.5mmol)至1,2-乙烷二醇(0.5mL，9mmol)中并且在室温下搅拌混合物10分钟。此时添加1-{1-[5-氯-3-(6-氟吡啶-3-基)-2-甲氧基-4-甲基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.023mmol)并且反应接着在110℃下搅拌过夜。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.8mg，17％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₃H₂₆ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.1。

实施例189.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-(2,2-二氟乙氧基)-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

步骤1.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-羟基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺

在-78℃下添加1.0M三溴化硼的CH₂Cl₂溶液(250μL，0.25mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(实施例167，步骤5，(第一峰)60mg，0.13mmol)于二氯甲烷(1.2mL)中的混合物中并且接着使反应升温至室温。此时，添加浓HCl(0.1mL)并且搅拌混合物4小时。反应通过添加饱和NaHCO₃淬灭。接着用二氯甲烷萃取混合物。合并的萃取物用盐水洗涤，干燥并且浓缩得到所需粗产物(40mg，68％)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₃H₂₅ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝466.2；实验值：466.2。

步骤2.5-[3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-(2,2-二氟乙氧基)-6-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在0℃下添加偶氮二甲酸二异丙酯(13μL，0.064mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-羟基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(15.0mg，0.0322mmol)、2,2-二氟乙醇(7.9mg，0.096mmol，来自Alfa Aesar，条目号B22201)以及三苯膦(17mg，0.064mmol)于四氢呋喃(0.5mL)中的混合物中并且接着在室温下搅拌反应24小时。粗物质经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(1.6mg，6.6％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₂₇ClF₂N7O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝530.2；实验值：530.2。

实施例190.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-(环丙基甲氧基)-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

在0℃下添加偶氮二甲酸二异丙酯(13μL，0.064mmol)至5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-羟基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(15mg，0.032mmol，来自实施例189，步骤1的手性中间体)、环丙基甲醇(7.0mg，0.096mmol)以及三苯膦(17mg，0.064mmol)于四氢呋喃(0.5mL)中的混合物中并且接着在室温下搅拌反应24小时。粗物质经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(2.4mg，10％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₇H₃₁ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝520.2；实验值：520.3。

实施例191.5-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在140℃下搅拌3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-甲氧基-2-甲基苯(0.60g，2.0mmol，来自实施例167,步骤3)、3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(590mg，2.2mmol，来自AnaSpec)、碳酸铯(0.98g，3.0mmol)以及碘化钾(30mg，0.2mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物1小时。冷却混合物并且接着完全移除溶剂。残余物在室温下与CH₂Cl₂(30mL)一起搅拌20分钟并且接着过滤。浓缩滤液并且产物(0.65g，63％)通过色谱法用CH₂Cl₂/EtOAc(最大EtOAc60％)洗脱纯化。C₁₅H₁₅BrClIN₅O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝521.9；实验值：521.9。

步骤2.1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

添加二氯(双{二-叔丁基[4-(二甲基氨基)苯基]正膦基})钯(12mg，0.017mmol)至乙烯基硼酸MIDA(110mg，0.6mmol，来自Aldrich，条目号704415)、1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.30g，0.57mmol)以及碳酸钠(0.14g，1.1mmol)于1,4-二噁烷(1mL)和水(0.1mL)中的混合物中并且接着将反应用N₂脱气3次。在95℃下搅拌反应4小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物通过色谱法用CH₂Cl₂/EtOAc(最大EtOAc60％)洗脱纯化。C₁₇H₁₈BrClN₅O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝422.0；实验值：422.2。

步骤3.1-{4-氨基-1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基}乙烷-1,2-二醇

向1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-乙烯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.236mmol)于叔丁醇(2mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉N-氧化物(30.5mg，0.260mmol)和水(0.74mL)。接着向溶液中添加四氧化锇水溶液(0.075mL，4％)。在3小时之后，再添加一当量N-甲基吗啉N-氧化物。反应在室温下搅拌过夜。溶液用水稀释，用乙酸乙酯萃取，经MgSO₄干燥并且浓缩得到产物，其直接用于下一步骤中。C₁₇H₂₀BrClN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝456.0；实验值：456.0。

步骤4.4-氨基-1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲醛

在0℃下向1-{4-氨基-1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基}乙烷-1,2-二醇(0.10g，0.22mmol)于四氢呋喃(1.6mL)/水(1.0mL)中的溶液中添加乙酸(0.0032mL，0.057mmol)和过碘酸钠(0.140g，0.657mmol)。在搅拌2小时之后，反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥并且浓缩得到所需粗产物，其直接用于下一步骤中。C₁₆H₁₆BrClN₅O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝424.0；实验值：423.9。

步骤5.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

将4-氨基-1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-甲醛(20mg，0.047mmol)、{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸(23mg，0.12mmol)、碳酸钠(10mg，0.094mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(7.7mg，0.0094mmol)于乙腈(0.3mL)/乙醇(0.1mL)/水(0.1mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌3小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH6％)洗脱纯化。C₂₄H₂₅ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝494.2；实验值：494.1。

步骤6.5-(3-{1-[4-氨基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向5-{3-[1-(4-氨基-3-甲酰基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(0.015g，0.030mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的在0℃下冷却的溶液中逐滴添加三氟化二乙基氨基硫(0.020mL，0.15mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.7mg，11％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₂₅ClF₂N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝516.2；实验值：516.2。

实施例192.1-[1-(5-氯-3-环丙基-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

向微波小瓶中添加1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.037mmol，来自实施例167，步骤4的峰1)、环丙基三氟硼酸钾(8mg，0.06mmol，来自Frontier Scientific，条目号C10298)、磷酸钾(23mg，0.11mmol)以及四(三苯膦)钯(4.2mg，0.0036mmol)并接着添加甲苯(0.3mL)/水(0.1mL)。密封小瓶并且用N₂脱气三次。在110℃下加热反应20小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(1.1mg，8％)。产物分离为单一对映异构体。C₁₉H₂₃ClN₅O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝372.2；实验值：372.2。

实施例194.{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}乙腈

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.073mmol)(来自实施例167，步骤4的峰1)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)异噁唑(0.018g，0.095mmol，来自Combi-Blocks目录，条目号PN-8875)、氟化钾(13mg，0.22mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(12mg，0.015mmol)于二甲亚砜(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在130℃下搅拌16小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.4mg，9％)。产物分离为单一对映异构体。C₁₈H₂₀ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝371.1；实验值：371.1。

实施例195.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

步骤1.1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙酮

向圆底烧瓶中置放含1-(3-溴-5-氯-2-羟基-4-甲基苯基)乙酮(6.0g，23mmol)的无水DMF(22.8mL)。接着依次添加碳酸钾(6.3g，46mmol)和碘乙烷(2.73mL，34.2mmol)。在60℃下搅拌所得悬浮液2小时。将混合物倒入100mL水中并且用200mL乙醚萃取。分离有机层、合并并且用水和饱和NaCl溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到6.0g褐色油状物。C₁₁H₁₃BrClO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝293.0；实验值：293.0。

步骤2.1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙醇

在0℃下添加四氢硼酸钠(0.31g，8.1mmol)至1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙酮(1.5g，5.4mmol)于甲醇(25mL)中的混合物中并且在室温下搅拌所得反应混合物1小时。移除溶剂并且所得残余物用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，接着经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至30％EtOAc的己烷洗脱纯化(0.30g，90％)。

步骤3.3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-乙氧基-2-甲基苯

在室温下搅拌氰脲酰氯(1.7g，9.2mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(710μL，9.2mmol)的混合物10分钟并且接着添加1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙醇(1.72g，6.15mmol)于二氯甲烷(34mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至10％EtOAc的己烷洗脱纯化(1.01g，60％)。

步骤4.1-(1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基)-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在140℃下搅拌3-溴-1-氯-5-(1-氯乙基)-4-乙氧基-2-甲基苯(150mg，0.50mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(110mg，0.76mmol)、碘化钾(9mg，0.05mmol)以及碳酸铯(330mg，1.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物1小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用含0至70％EtOAc的CH₂Cl₂洗脱纯化(103mg，50％)。C₁₇H₂₀BrClN₅O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝423.1；实验值：423.0。将外消旋产物施加于Phenomenex Lux-纤维素1柱(21.1×250mm，5微米粒径)上，用含4％乙醇的己烷在流速18mL/min下洗脱，每次注射约13mg，得到两种对映异构体。峰1，停留时间：8.64分钟；峰2，停留时间：10.64分钟。

步骤5.5-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(25mg，0.061mmol)(来自先前步骤手性分离的第一峰)、N,N-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲酰胺(25mg，0.09mmol)、碳酸钠(13mg，0.12mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(9.9mg，0.012mmol)于乙腈(0.8mL)/水(0.3mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌2小时。在冷却至室温之后，过滤混合物并且滤液经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(2.3mg，5％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₂₉ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝494.2；实验值：494.2。

实施例200.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

步骤1.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自实施例167，步骤4的峰1，322mg，0.76mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶-2-甲腈(210mg，0.91mmol，来自Combi-Blocks目录，条目号PN-0143)、碳酸钠(130mg，1.2mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(99mg，0.12mmol)于乙腈(5mL)/水(2mL)中的混合物用N₂脱气并且在95℃下搅拌反应2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物(0.28g，85％)通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH6％)洗脱纯化。C₂₂H₂₁ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝434.1；实验值：434.1。

步骤2.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吡啶甲酸二盐酸盐

添加1.0M氢氧化钠(2.9mL，2.9mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲腈(0.250g，0.576mmol)于乙醇(4.0mL)中的混合物中并且在95℃下加热所得混合物6小时。此时，添加浓HCl以将pH值调整至约3。移除溶剂并且残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₂₂H₂₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝453.1；实验值：453.2。

步骤3.4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶甲酰胺双(2,2,2-三氟乙酸盐)

在0℃下添加2.0M二甲胺的THF溶液(2.0mL，4.0mmol)至4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吡啶-2-甲酸(250mg，0.552mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(370mg，0.83mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(0.23mL，1.6mmol)。搅拌反应1小时。粗混合物经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝480.2；实验值：480.2。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz)δ8.67(br s,1H),8.36(s,1H),7.58(s,1H),7.41(m,2H),6.32(q,2H),3.20(s,3H),3.00(s,3H),2.94(s,3H),2.62(s,3H),2.03(s,3H),1.80(d,3H)ppm。

实施例203.2-(4-(3-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基)-1H-吡唑-1-基)乙酰胺

步骤1.[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙酸叔丁酯

在0℃下添加1.0M叔丁醇钾的THF溶液(2.4mL，2.4mmol)至4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.39g，2.0mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(6.0mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物5分钟。在冷却至0℃之后，向混合物中添加溴乙酸叔丁酯(0.5mL，3mmol)。在室温下搅拌反应2小时，接着用乙酸乙酯稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物(0.5g，81％)通过色谱法用己烷/EtOAc(最大EtOAc30％)洗脱纯化。C₁₅H₂₆BN₂O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝309.2；实验值：309.1。

步骤2.(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯

将1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(70mg，0.16mmol)(来自实施例195，步骤4的第一峰)、[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙酸叔丁酯(65mg，0.21mmol)、碳酸钠(30.mg，0.28mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(23mg，0.028mmol)于乙腈(3mL)/水(0.7mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌2小时。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和NaHCO₃、水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。产物(65mg，78％)通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH5％)洗脱纯化。C₂₆H₃₃ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝526.2；实验值：526.3。

步骤3.(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸双三氟乙酸盐

添加三氟乙酸(0.5mL)至(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸叔丁酯(0.065g，0.12mmol)于二氯甲烷(0.5mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应4小时。移除溶剂得到粗产物，其用于下一步骤中。C₂₂H₂₅ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝470.2；实验值：470.1。

步骤4.2-(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酰胺

在室温下添加碳酸铵(20mg，0.21mmol)至(4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-1H-吡唑-1-基)乙酸双三氟乙酸盐(10mg，0.021mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(10mg，0.03mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中的溶液中，随后添加三乙胺(8.8μL，0.064mmol)。搅拌反应1小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.5mg，25％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₂H₂₆ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.2。

实施例208.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺双(三氟乙酸盐)

步骤1.1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

在室温下将1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.050g，0.12mmol，来自实施例195，步骤4的峰1)与含乙酸钾(0.035g，0.35mmol)和4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二噁硼烷](0.060g，0.24mmol)的二甲亚砜(0.44mL)组合于微波小瓶中。将其用氮气脱气并且接着添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(0.01g，0.01mmol)。在油浴中加热反应至105℃过夜。使其冷却，接着溶解于乙酸乙酯中并且用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩。产物(15mg，20％)通过色谱法用CH₂Cl₂/MeOH(最大MeOH10％)洗脱纯化。C₂₃H₃₂BClN₅O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝472.2；实验值：472.3。

步骤2.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基烟碱酰胺双(三氟乙酸盐)

将1-{1-[5-氯-2-乙氧基-4-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(15mg，0.032mmol)、6-氯-N,N-二甲基烟碱酰胺(12mg，0.064mmol)、碳酸钠(9.0mg，0.085mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(6.9mg，0.0085mmol)于乙腈(0.9mL)/水(0.2mL)中的混合物用N₂脱气并且接着在95℃下搅拌过夜。粗物质使用RP-HPLC((XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈TFA盐形式的所需产物(2mg，9％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₂₉ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝494.2；实验值：494.2。

实施例209.5-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-4-甲氧基-2-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯甲腈

添加预先形成的催化剂(0.05mL，来自实施例40)至1-{1-[5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.7mg，0.019mmol)、锌(0.54mg，0.0082mmol)以及氰化锌(2.2mg，0.019mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(0.3mL)中的混合物中。将混合物用氮气脱气3次。在120℃下加热反应1.5小时。粗物质使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.1mg，27％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₁H₂₃N₈O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝403.2；实验值：403.2。

实施例211.3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯甲腈

连续添加N,N,N',N'-四甲基伸乙二胺(10μL，0.07mmol)、氰化锌(3mg，0.03mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.9mg，0.001mmol)以及(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基膦)(2mg，0.003mmol)至于微波管中1-[1-(3-溴-5-氯-2-乙氧基-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(14mg，0.033mmol，来自实施例195，步骤4的峰1)于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液中。将管密封并脱气并且用N₂再填充三次，并且接着在微波照射下在160℃下加热400秒。冷却混合物、过滤并且粗滤液使用RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.4mg，20％)。产物分离为单一对映异构体。C₁₈H₂₀ClN₆O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝371.1；实验值：371.2。

实施例69、70、75、78、97、98、100、103、106、107、109、111、112、114、116、119、120、122-124、132、135、142-148、151、153-155、157、160、162、168-173、175-178、180、185-187、193、196-199、201、202、204-207和210的化合物的实验程序概述于表1和表2中。

表1

¹根据所列化合物的实验程序合成；

²化合物以外消旋混合物形式分离；

³化合物分离为单一对映异构体；

⁴化合物以非对映异构体的混合物形式分离；

⁵化合物分离为单一非对映异构体。

表2

¹根据所列化合物的实验程序合成；

²化合物以外消旋混合物形式分离；

⁴化合物以非对映异构体的混合物形式分离。

分析数据

实施例69、70、75、78、97、98、100、102-138、142-148、151、153-155、157、160、162、168-173、175-178、180、185-187、193、196-199、201、202、204-207和210的化合物的¹H NMR数据(Varian Inova500光谱仪、Mercury400光谱仪、或Varian(或Mercury)300光谱仪)以及LCMS质谱数据(MS)提供于下表3中。

表3

实施例212.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮

所需化合物是根据用以形成外消旋中间体的实施例13，步骤3的程序，使用碘乙烷替代碘甲烷作为起始物质来制备，产率90％。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.68(d,J＝8.3Hz,1H),3.94(q,J＝7.0Hz,2H),2.61(s,3H),1.48(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₀H₁₀ClFIO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝342.9,344.9；实验值：342.9,344.8。

步骤2.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈

1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(7.3g，21mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中的溶液用氰化钾(2.1g，32mmol)处理并且在40℃下搅拌5小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并且倒入饱和碳酸氢钠溶液/水(1:1)中。分离有机层，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗棕色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到呈黄色固体状的所需产物(6.1g，81％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.57(s,1H),3.93(q,J＝7.0Hz,2H),2.61(s,3H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₁H₁₀ClINO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝349.9；实验值：349.9。

步骤3.3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

添加锌(4.60g，70.3mmol)和烘干的硅藻土(870mg)至烧瓶中并且在高真空下用热风器加热烧瓶5分钟并接着用氮气回填。依次添加N,N-二甲基乙酰胺(57mL)和1,2-二溴乙烷(430μL，5.0mmol)并且在70℃下加热混合物10分钟并接着冷却至室温。反应混合物用氯三甲基硅烷(630μL，5.0mmol)逐滴处理并且在室温下搅拌1小时。反应混合物用3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(18g，62mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(28mL)中的溶液逐滴处理(用水浴保持内部温度低于40℃)并且在40℃下加热2小时。锌-碘试剂(经由套管转移)经塑料过滤器(适当密封以避免气氛暴露)直接过滤至经氮气吹拂的清洁干燥烧瓶中。反应混合物用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(720mg，0.79mmol)和三-(2-呋喃基)膦(370mg，1.6mmol)处理并且用氮气脱气数分钟。反应混合物用4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(14g，41mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(130mL)中的溶液(用氮气脱气)快速处理并且在70℃下加热2小时。反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并且用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有机萃取物用水(4×500mL)和盐水(1×500mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗深色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(5％-45％)纯化得到所需产物(14g，88％)。¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ7.46(s,1H),4.42-4.20(m,5H),3.80(q,J＝7.0Hz,2H),2.59(s,3H),1.44(s,9H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₅H₁₆ClN₂O₄的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)⁺:m/z＝323.1；实验值：323.0。

步骤4.3-[3-氯-2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯(9.7g，35mmol)于四氢呋喃(100mL)中的溶液用1.0M硼烷-THF络合物的四氢呋喃溶液(42mL，42mmol)处理并且在20℃下搅拌15分钟。冷却反应混合物至-30℃并且用3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(13g，35mmol)于四氢呋喃(110mL)中的溶液缓慢处理。含有起始物质酮的烧瓶再用四氢呋喃(20mL)冲洗并且添加至反应混合物中。历经30分钟的时期使反应混合物升温至0℃并且在0℃下搅拌15分钟。反应混合物在0℃下用水淬灭，倒入饱和碳酸氢钠溶液中，并且用乙酸乙酯萃取。分离水层并且用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗深色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-70％)纯化得到呈对映异构体的98:2混合物形式的呈黄色泡沫状的所需产物(10.4g，78％)(停留时间＝7.73分钟和9.41分钟；ChiralPak AD-H柱，4.6×150mm，5微米粒径，用含5％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.56(s,1H),5.15-5.07(m,1H),4.41-4.17(m,5H),3.74(q,J＝7.0Hz,2H),2.12(d,J＝3.7Hz,1H),1.49-1.37(m,15H)。C₁₅H₁₈ClN₂O₄的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)⁺:m/z＝325.1；实验值：325.1。

步骤5.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下3-[3-氯-2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自步骤4的对映异构体的98:2混合物)(10g，27mmol)于二氯甲烷(260mL)中的溶液依次用三乙胺(11mL，82mmol)和甲烷磺酸酐(7.1g，41mmol)处理并且在0℃下搅拌15分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释并且用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗甲磺酸酯，其不经进一步纯化即使用。粗甲磺酸酯中间体于N,N-二甲基甲酰胺(140mL)中的溶液用碳酸铯(13g，41mmol)和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(4.7g，31mmol)处理并且在60℃下加热1小时。反应混合物用水稀释并且用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗油状物。粗物质通过快速柱色谱法(100％二氯甲烷至含有3％甲醇的70％乙腈/30％二氯甲烷)纯化得到呈对映异构体的95:5混合物形式的呈黄色泡沫状的所需产物(8.7g，对于2个步骤而言62％)(RT＝4.29分钟和6.00分钟；Phenomenex Lux纤维素C-1柱，4.6×150mm，5微米粒径，用含15％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。此物质通过手性HPLC(Phenomenex Lux纤维素C-1柱，21.2×250mm，5微米粒径，用含15％乙醇的己烷在10ml/min下洗脱)分离得到7.0g所需峰1物质(停留时间8.20分钟)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ8.24(s,1H),7.51(s,1H),6.32(q,J＝7.1Hz,1H),5.48(brs,2H),4.40-4.18(m,5H),4.05-3.93(m,1H),3.81-3.65(m,1H),2.64(s,3H),1.81(d,J＝7.1Hz,3H),1.48(t,J＝7.0Hz,3H),1.43(s,9H)。C₂₅H₃₁ClN₇O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝512.2；实验值：512.3。

步骤6.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈

3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(来自步骤5的峰1对映异构体)(2.2g，4.2mmol)于二氯甲烷(11mL)中的溶液用三氟乙酸(11mL)逐滴处理并且在室温下搅拌30分钟。浓缩反应混合物得到油状物，其自乙醇(2×)再浓缩得到残余物。将此物质溶解于最小量的甲醇中，逐滴添加至冰冷饱和碳酸氢钠溶液(100ml)中，并且用2:1二氯甲烷/异丙醇萃取若干次得到所需产物(1.8g，定量)，其不经进一步纯化即使用。少量所需产物通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.37-4.26(m,1H),3.91-3.61(m,6H),2.54(s,3H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.32(t,J＝7.0Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClN₇O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝412.2；实验值：412.1。

实施例213.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(实施例212，步骤6中的手性中间体)(0.30g，0.73mmol)于甲醇(7.3mL)中的溶液用甲醛(37％于水中)(0.54mL，7.3mmol)处理并且其在室温下搅拌5分钟。反应混合物用氰基硼氢化钠(0.092g，1.5mmol)处理并且在室温下搅拌2小时。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(0.16g，50％)。产物分离为单一对映异构体。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.48(s,1H),6.27-6.18(m,1H),4.10-3.98(m,1H),3.96-3.86(m,2H),3.83-3.74(m,1H),3.72-3.64(m,1H),3.10-2.98(m,2H),2.54(s,3H),2.20(s,3H),1.71(d,J＝6.9Hz,3H),1.32(t,J＝6.7Hz,3H)。C₂₁H₂₅ClN₇O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝426.2；实验值：426.2。

实施例219.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(300mg，0.74mmol，来自实施例212的手性中间体)于四氢呋喃(14mL)中的溶液依次用三乙胺(260μL，1.8mmol)和2-溴乙醇(63μL，0.89mmol)逐滴处理并且在60℃下搅拌6小时。反应混合物再用2-溴乙醇(26μL，0.37mmol)处理并且在60℃下再搅拌6小时。反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液中并且用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(0.15g，44％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.19(s,1H),7.56(s,1H),6.36-6.25(m,1H),4.48(br s,1H),4.19-4.07(m,1H),4.04-3.94(m,2H),3.91-3.82(m,1H),3.81-3.72(m,1H),3.20-3.08(m,2H),2.62(s,2H),2.57(s,3H),1.79(d,J＝6.8Hz,3H),1.40(t,J＝6.6Hz,3H)。C₂₂H₂₇ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.1。

实施例220.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(50mg，0.12mmol，来自实施例212的手性中间体)于乙醇(1.7mL)中的溶液用(S)-(-)-甲基环氧乙烷(21μL，0.30mmol)处理并且在微波中在125℃下加热15分钟。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(27mg，47％)。产物分离为单一非对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.48(s,1H),6.23(q,J＝6.9Hz,1H),4.35(d,J＝4.5Hz,1H),4.13-3.99(m,1H),3.97-3.88(m,2H),3.85-3.63(m,2H),3.61-3.51(m,1H),3.15-2.99(m,2H),2.55(s,3H),2.28(d,J＝5.9Hz,2H),1.71(d,J＝7.0Hz,3H),1.32(t,J＝6.9Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)。C₂₃H₂₉ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝470.2；实验值：470.2。

实施例236.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸叔丁酯

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.38g，0.92mmol，来自实施例212的手性中间体)于N,N-二甲基甲酰胺(4.6mL)中的溶液依次用碳酸钾(0.51g，3.7mmol)和2-溴-2-甲基丙酸叔丁酯(0.86mL，4.6mmol)处理并且在60℃下加热3小时。反应混合物倒入水中并且用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含甲醇的二氯甲烷(0％-10％)纯化得到所需产物(0.43g，83％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.10(s,1H),7.44(s,1H),6.22(q,J＝6.8Hz,1H),4.12-3.97(m,1H),3.88-3.70(m,4H),3.62-3.48(m,2H),2.54(s,3H),1.70(d,J＝7.0Hz,3H),1.33(t,J＝6.9Hz,3H),1.17(s,9H),1.05(s,6H)。C₂₈H₃₇ClN₇O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝554.3；实验值：554.3。

实施例237.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-1,1-二甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

步骤1.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸双(三氟乙酸盐)

将2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸叔丁酯(0.36g，0.65mmol，来自实施例236的手性中间体)溶解于三氟乙酸(3.2mL)/水(0.065mL)的预混合溶液中并且在室温下搅拌3小时并在50℃下搅拌30分钟。浓缩反应混合物并且自乙腈(2×)再浓缩得到呈胶状的所需产物。此胶状物用少量甲基-叔丁基醚处理，涡旋直至形成固体。倾析甲基-叔丁基醚并且浓缩残余物得到所需产物(0.51g，109％)，其不经进一步纯化即使用。C₂₄H₂₉ClN₇O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝498.2；实验值：498.3。

步骤2.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-1,1-二甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

冷却2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸双(三氟乙酸盐)(0.10g，0.16mmol)于四氢呋喃(0.9mL)中的溶液至-25℃，用4-甲基吗啉(0.072mL，0.65mmol)和氯甲酸异丁酯(0.085mL，0.65mmol)处理，并且在-15℃下搅拌15分钟。反应混合物经一次性过滤器滤筒过滤至另一圆底烧瓶中。接着冷却此溶液至-20℃并且逐滴添加四氢硼酸钠(0.031g，0.82mmol)于最小量水中的溶液。反应混合物在-15℃下搅拌30分钟，倒入水中，并且用乙酸乙酯萃取。分离有机层，浓缩，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(3.5mg，4％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.50(s,1H),7.35(brs,2H),6.23(q,J＝6.7Hz,1H),4.44-4.35(m,1H),4.04-3.88(m,1H),3.86-3.73(m,1H),3.72-3.57(m,3H),3.12(d,J＝4.7Hz,2H),2.54(s,3H),1.71(d,J＝6.9Hz,3H),1.31(t,J＝6.9Hz,3H),0.80(s,6H)。C₂₄H₃₁ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝484.2；实验值：484.2。

实施例239.2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酰胺

2-(3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-基)-2-甲基丙酸双(三氟乙酸盐)(0.05g，0.069mmol，来自实施例237，步骤1的手性中间体)和2.0M氨的乙醇溶液(0.17mL，0.34mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液用三乙胺(0.048mL，0.35mmol)和六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻(0.046g，0.10mmol)处理并且在室温下搅拌1小时。反应混合物用几滴水淬灭，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(25mg，73％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.51(s,1H),7.23(s,1H),6.98(s,1H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.09-3.96(m,1H),3.84-3.61(m,4H),3.39-3.34(m,1H),3.32-3.28(m,1H),2.54(s,3H),1.71(d,J＝7.0Hz,3H),1.31(t,J＝6.9Hz,3H),1.02(s,6H)。C₂₄H₃₀ClN₈O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝497.2；实验值：497.3。

实施例247.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙酰基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(0.04g，0.097mmol，来自实施例212的手性中间体)和2-羟基-2-甲基-丙酸(0.012g，0.12mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.54mL)中的溶液依次用三乙胺(0.034mL，0.24mmol)和六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(0.048g，0.13mmol)处理并且在室温下搅拌30分钟。反应混合物用甲醇和乙腈稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用甲醇/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(7mg，14％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.54(d,J＝4.5Hz,1H),6.25(q,J＝7.2Hz,1H),5.08(s,1H),4.88-4.77(m,1H),4.73-4.60(m,1H),4.50-4.35(m,1H),4.29-4.09(m,2H),3.85-3.73(m,2H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H),1.37(t,J＝6.3Hz,3H),1.26(s,3H),1.22(s,3H)。C₂₄H₂₉ClN₇O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝498.2；实验值：498.2。

实施例261.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈

步骤1.4-乙酰基-6-氯-2-碘-3-甲氧基苯甲腈

1-(5-氯-4-氟-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮(来自实施例13，步骤3的中间体)(18g，54mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中的溶液用氰化钾(5.2g，81mmol)处理并且在40℃下搅拌6小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并且倒入饱和碳酸氢钠溶液/水(1:1)中。分离有机层，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗棕色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到呈黄色固体状的所需产物(11g，61％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.60(s,1H),3.81(s,3H),2.62(s,3H)。C₁₀H₈ClINO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝335.9；实验值：335.9。

步骤2.3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

添加锌(5.0g，77mmol)和烘干的硅藻土(520mg)至烧瓶中并且在高真空下用热风器加热烧瓶5分钟并接着用氮气回填。依次添加N,N-二甲基乙酰胺(53mL)和1,2-二溴乙烷(400μL，4.6mmol)并且在70℃下加热混合物15分钟并接着冷却至室温。反应混合物用氯三甲基硅烷(580μL，4.6mmol)逐滴处理并且在室温下搅拌1小时。反应混合物用3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(16g，58mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(26mL)中的溶液逐滴处理(用水浴保持内部温度低于40℃)并且在40℃下加热2小时。锌-碘试剂(经由套管转移)经塑料过滤器(适当密封以避免气氛暴露)直接过滤至经氮气吹拂的清洁干燥烧瓶中。反应混合物用三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(670mg，0.73mmol)和三-(2-呋喃基)膦(340mg，1.5mmol)处理并且用氮气脱气数分钟。反应混合物用4-乙酰基-6-氯-2-碘-3-甲氧基苯甲腈(13g，39mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(120mL)中的溶液(用氮气脱气)快速处理并且在70℃下加热2小时。反应混合物倒入饱和氯化铵溶液中并且用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。合并的有机萃取物用水(4×500mL)和盐水(1×500mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗深色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(5％-40％)纯化得到所需产物(12g，85％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.79(s,1H),4.39-4.29(m,1H),4.28-4.11(m,4H),3.68(s,3H),2.58(s,3H),1.38(s,9H)。

步骤3.3-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

(3aS)-1-甲基-3,3-二苯基四氢-3H-吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯(4.3g，16mmol)于四氢呋喃(46mL)中的溶液用1.0M硼烷-THF络合物的四氢呋喃溶液(19mL，19mmol)处理并且在20℃下搅拌15分钟。冷却反应混合物至-30℃并且用3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(5.7g，16mmol)于四氢呋喃(49mL)中的溶液缓慢处理。含有起始物质酮的烧瓶再用四氢呋喃(9mL)冲洗并且添加至反应混合物中。在添加完成之后，反应温度为-20℃。历经30分钟的时期使反应混合物升温至-5℃。反应混合物在0℃下用水淬灭，倒入饱和碳酸氢钠溶液中，并且用乙酸乙酯萃取。分离水层并且用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗深色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-100％)纯化得到呈对映异构体的97:3混合物形式的呈米色泡沫状的所需产物(5.5g，97％)(停留时间＝12.19分钟和13.18分钟；Phenomenex Lux纤维素C-2柱，4.6×150mm，5微米粒径，用含8％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.62(s,1H),5.48(d,J＝4.6Hz,1H),5.00-4.90(m,1H),4.43-4.31(m,1H),4.30-4.10(m,4H),3.66(s,3H),1.38(s,9H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H)。C₁₄H₁₆ClN₂O₄的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)⁺:m/z＝311.1；实验值：311.1。

步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下3-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(8.6g，23mmol)(来自步骤3的对映异构体的97:3混合物)于二氯甲烷(220mL)中的溶液依次用三乙胺(8.2mL，59mmol)和甲烷磺酸酐(6.1g，35mmol)处理并且在0℃下搅拌15分钟。反应混合物用二氯甲烷稀释并且用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗甲磺酸酯，其不经进一步纯化即使用。冷却粗甲磺酸酯中间体于N,N-二甲基甲酰胺(82mL)中的溶液至0℃，用氢化钠(1.2g，30mmol)(60％于矿物油中)处理，并且在0℃下搅拌30分钟。历经10分钟的时期，反应混合物用3-(3-氯-2-氰基-6-甲氧基-5-{1-[(甲基磺酰基)氧基]乙基}苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(11g，24mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(170mL)中的溶液逐滴处理并且在0℃下搅拌30分钟并在50℃下加热1小时。反应混合物用水和饱和碳酸氢钠溶液稀释并且用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。合并的有机萃取物用水(4×150mL)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗油状物。粗物质通过快速柱色谱法(2％甲醇/98％二氯甲烷至7％甲醇/93％二氯甲烷[二氯甲烷含有0.5％三乙胺])纯化得到呈对映异构体的9:1混合物形式的所需产物(9.1g，对于2个步骤而言77％)。此物质通过手性HPLC(停留时间＝5.81分钟和8.94分钟；Chiracel AD-H柱，20×250mm，5微米粒径，用含10％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱，每次注射10mg)分离得到6.9g所需峰1物质。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.52(s,1H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.45-4.33(m,1H),4.27-4.13(m,4H),3.70(s,3H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.37(s,9H)。C₂₀H₂₁ClN₇O₃的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)⁺:m/z＝442.1；实验值：442.1。

步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈

3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.7g，3.3mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液用三氟乙酸(20mL)处理并且在室温下搅拌20分钟。浓缩反应混合物得到残余物，其用甲醇(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(50mL)稀释。其水溶液用盐水(50mL)稀释并且用二氯甲烷/异丙醇的5:1混合物(5×100mL)萃取。合并的有机萃取物经硫酸钠干燥并且浓缩得到所需产物(1.4g，97％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.34(br s,2H),6.24(q,J＝6.9Hz,1H),4.40-4.26(m,1H),3.90-3.68(m,4H),3.63(s,3H),2.55(s,3H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H)。C₁₉H₂₁ClN₇O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝398.1；实验值：398.1。

实施例262.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基-2-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(50mg，0.13mmol)于甲醇(3mL)中的溶液依次用氰基硼氢化钠(20mg，0.31mmol)和甲醛(37％于水中)(37μL，0.50mmol)处理并且在室温下搅拌20分钟。反应混合物用乙酸(170μL，2.9mmol)淬灭，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(30mg，58％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.37(br s,2H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.10-3.96(m,1H),3.95-3.85(m,2H),3.63(s,3H),3.05-2.94(m,2H),2.55(s,3H),2.18(s,3H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClN₇O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝412.2；实验值：412.1。

实施例268.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(400mg，1.0mmol)于四氢呋喃(14mL)中的溶液用三乙胺(350μL，2.5mmol)和2-溴乙醇(85μL，1.2mmol)处理并且在60℃下搅拌过夜。浓缩反应混合物，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(0.14g，31％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),6.24(q,J＝6.9Hz,1H),4.41(t,J＝5.4Hz,1H),4.12-4.03(m,1H),3.97-3.88(m,2H),3.64(s,3H),3.38-3.34(m,2H),3.09-3.01(m,2H),2.55(s,3H),2.41(t,J＝5.9Hz,2H),1.72(d,J＝7.0Hz,3H)。C₂₁H₂₅ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝442.2；实验值：442.2。

实施例268和269的化合物是由实施例261中的相同手性中间体合成。根据实施例269中的晶体结构测定，在乙-1,1-二基的1位上的碳处的立体化学为S。因为实施例268的化合物是由与实施例269相同的手性中间体合成，所以本领域技术人员将预期在实施例268的乙-1,1-二基的1位上的碳也呈S构型。因此，相信实施例268的化合物为(S)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟乙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈。

实施例269.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(2.5g，6.3mmol)于乙醇(130mL)中的溶液用(S)-(-)-甲基环氧乙烷(1.1mL，16mmol)处理并且在微波中在120℃下加热25分钟。浓缩反应混合物得到残余物，其通过快速柱色谱法使用含甲醇的二氯甲烷(0％-10％；甲醇含有0.5％三乙胺)和通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)进行纯化得到所需产物(0.76g，26％)。产物分离为单一非对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.34(br s,2H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.35(br s,1H),4.14-3.99(m,1H),3.98-3.87(m,2H),3.64(s,3H),3.60-3.52(m,1H),3.13-2.99(m,2H),2.55(s,3H),2.28(d,J＝5.9Hz,2H),1.75-1.69(m,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)。C₂₂H₂₇ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.2。

实施例269的化合物的晶体结构测定

C22,H26,N7,O2,CL1+H₂O

晶体数据：C22H28Cl F0N7O3，自ACN/水，无色，针状，约0.500×0.070×0.050mm，单斜晶，C2， β＝101.967(4)°，Z＝4，T＝-100.℃，式量＝473.96，密度＝1.401g/cm³，μ(Mo)＝0.21mm^-1

数据收集：Bruker SMART APEX-II CCD系统，MoKalpha辐射，标准聚焦管，阳极功率＝50kV×42mA，晶体至板的距离＝5.0cm，512×512像素/帧，射束中心＝(256.13,253.14)，总帧数＝704，振动/帧＝0.50°，暴露/帧＝120.1秒/帧，SAINT积分，hkl最小/最大＝(-27,34，-6,6，-23,11)，输入shelx的数据＝7578，独特数据＝5186，2θ范围＝3.20至56.74°，2θ56.74的完成率＝99.70％，R(int-xl)＝0.0331，应用SADABS校正。

解析和细化：结构使用XS(Shelxtl)解析，使用shelxtl软件包细化，通过F²全矩阵最小平方细化，散射因子来自Int.Tab.Vol C表4.2.6.8和6.1.1.4，数据数＝5186，约束数＝2，参数数＝313，数据/参数比＝16.57，F²拟合良度＝1.02，R指数[I>4σ(I)]R1＝0.0524，wR2＝0.1033，R指数(所有数据)R1＝0.0826，wR2＝0.1162，细化flack参数＝0.05(8)，除NH2和水氢之外的所有氢原子都已使用骑式模型(riding model)加以理想化。

结果：不对称单元含有如第1图中所示的一个分子和一个水分子，其中热椭圆体接近50％概率水平。预期结构得到确认。基于在C21处的已知S构型确定绝对构型。在C7处的构型确定为S。flack参数也确认构型正确。基于晶体结构，相信实施例269的化合物为4-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈。晶体结构展示于图1中。

表A1.原子坐标(×10^4)和等效各向同性位移参数(A^2×10^3)。U(eq)定义为正交化Uij张量的迹线的三分之一。

表A2.键长[A]和键角[度]

表A3.各向异性位移参数(A^2×10^3)。各向异性位移因子指数采用形式：-2π^2[h^2a*^2U11+...+2h k a*b*U12]

表A4.氢坐标(×10^4)和各向同性位移参数(A^2×10^3)

表A5.扭转角[度]

实施例272和273.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-2-[1-(2-羟基-1-甲基乙基)氮杂环丁烷-3-基]-3-甲氧基苯甲腈的非对映异构体

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(40mg，0.10mmol)于甲醇(2mL)中的溶液依次用氰基硼氢化钠(16mg，0.25mmol)和丙酮醇(28μL，0.40mmol)处理并且在室温下搅拌1小时。反应混合物用乙酸(100μL，1.8mmol)淬灭，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到呈非对映异构体的混合物形式的所需产物。此非对映异构体混合物通过手性HPLC(RT＝3.70分钟和6.58分钟；Phenomenex Lux纤维素C-4柱，21.2×250mm，5微米粒径，用含20％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱，每次注射5mg)分离得到所需峰1异构体(化合物272)(19mg，41％)和峰2异构体(化合物273)(23mg，50％)。峰1：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.34(brs,2H),6.24(q,J＝6.9Hz,1H),4.43(t,J＝5.2Hz,1H),4.07-3.82(m,3H),3.64(s,3H),3.31-3.24(m,1H),3.17-3.06(m,2H),3.06-2.97(m,1H),2.55(s,3H),2.21-2.11(m,1H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H),0.81(d,J＝6.3Hz,3H)。C₂₂H₂₇ClN₇O₂的LCMS：(M+H)+:m/z＝456.2；实验值：456.2。峰2：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.35(brs,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.43(t,J＝5.5Hz,1H),4.06-3.91(m,2H),3.89-3.79(m,1H),3.64(s,3H),3.30-3.24(m,1H),3.15-3.00(m,3H),2.55(s,3H),2.21-2.10(m,1H),1.72(d,J＝7.1Hz,3H),0.82(d,J＝6.2Hz,3H)。C₂₂H₂₇ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.2。

实施例281.2-(1-乙酰基氮杂环丁烷-3-基)-4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基苯甲腈

在0℃下4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(60mg，0.15mmol)于四氢呋喃(2mL)中的溶液依次用三乙胺(53μL，0.38mmol)和乙酰氯(13μL，0.18mmol)处理并且在20℃下搅拌过夜。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(39mg，59％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.52(d,J＝2.5Hz,1H),7.36(br s,2H),6.26(q,J＝7.0Hz,1H),4.57-4.36(m,3H),4.30-4.21(m,1H),4.18-4.08(m,1H),3.71(d,J＝3.1Hz,3H),2.55(s,3H),1.78-1.71(m,6H)。C₂₁H₂₃ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝440.2；实验值：440.1。

实施例285.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-甲氧基-2-[1-(甲基磺酰基)氮杂环丁烷-3-基]苯甲腈

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(40mg，0.10mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液用三乙胺(35μL，0.25mmol)处理，冷却至0℃，用甲烷磺酰氯(9.3μL，0.12mmol)处理并且在0℃下搅拌1小时。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(20mg，42％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.12(s,1H),7.55(s,1H),7.35(br s,2H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.54-4.40(m,1H),4.27-4.12(m,4H),3.68(s,3H),3.01(s,3H),2.55(s,3H),1.74(d,J＝7.1Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClN₇O₃S的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝476.1；实验值：476.1。

实施例289.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸甲酯

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(20mg，0.05mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液依次用三乙胺(20μL，0.14mmol)和氯甲酸甲酯(4.7μL，0.06mmol)处理并且在室温下搅拌1小时。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(12mg，52％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.51(s,1H),7.34(br s,2H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.53-4.38(m,1H),4.36-4.17(m,4H),3.71(s,3H),3.55(s,3H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H)。C₂₁H₂₃ClN₇O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.1。

实施例292.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N-(叔丁基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(20mg，0.05mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液依次用三乙胺(20μL，0.14mmol)和2-异氰酸基-2-甲基-丙烷(7.2μL，0.063mmol)处理并且在室温下搅拌过夜。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(16mg，64％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₄H₃₀ClN₈O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝497.2；实验值：497.2。

实施例293.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酰胺

在微波中在120℃下加热3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N-(叔丁基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(来自实施例292的手性中间体)(16mg，0.032mmol)于三氟乙酸(2mL)中的溶液10分钟。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(7mg，50％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.12(s,1H),7.62(s,1H),7.35(br s,2H),6.28(q,J＝6.9Hz,1H),5.70(br s,1H),4.62-4.49(m,1H),4.34-4.20(m,1H),3.83(s,3H),3.78-3.49(m,2H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H)。C₂₀H₂₂ClN₈O₂的LCMS：(M+H)+:m/z＝441.2；实验值：441.1。

实施例296.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基氮杂环丁烷-1-甲酰胺

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(来自实施例261的手性中间体)(40mg，0.10mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液依次用三乙胺(40μL，0.29mmol)和氯甲酸对硝基苯酯(23μL，0.13mmol)处理并且在室温下搅拌1小时。反应混合物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物，其即刻使用。氨基甲酸对硝基苯酯中间体于四氢呋喃(1mL)中的溶液依次用三乙胺(15μL，0.11mmol)和1.0M二甲胺的四氢呋喃溶液(150μL，0.15mmol)处理并且在密封管中在60℃下加热2小时。浓缩反应混合物，用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(13mg，28％)。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.49(s,1H),7.36(br s,2H),6.25(q,J＝7.0Hz,1H),4.44-4.23(m,3H),4.22-4.10(m,2H),3.69(s,3H),2.76(s,6H),2.55(s,3H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H)。C₂₂H₂₆ClN₈O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝469.2；实验值：469.1。

实施例298.1-{1-[4,5-二氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

步骤1.1-(4,5-二氯-2-羟基苯基)乙酮

在60℃下搅拌3,4-二氯苯酚[AK Scientific](30g，18mmol)于乙酰氯(19mL，270mmol)中的溶液2小时。冷却反应混合物至20℃，用三氯化铝(37g，280mmol)逐份处理，并且在180℃下加热30分钟。冷却反应混合物至20℃并且溶液硬化成不容易分裂开的固体块。冷却此物质至0℃并且用1M HCl分数份缓慢淬灭。用足够HCl使物质固体块缓慢分裂开并且此异质混合物在20℃下搅拌过夜以确保均一性。过滤固体，用大量水洗涤，并且在真空下干燥得到呈褐色固体状的所需产物(38g，定量)。

步骤2.1-(4,5-二氯-2-羟基-3-碘苯基)乙酮

1-(4,5-二氯-2-羟基苯基)乙酮(12g，59mmol)于乙酸(70mL)中的溶液用N-碘丁二酰亚胺(16g，71mmol)处理并且在90℃下搅拌18小时。反应混合物再用N-碘丁二酰亚胺(8g，36mmol)处理并且在90℃下搅拌4小时。浓缩反应混合物，用乙酸乙酯稀释，并且用饱和碳酸氢钠淬灭直至起泡停止。分离有机层并且水层用乙酸乙酯再萃取。干燥合并的有机层并且浓缩得到棕色固体。此物质自甲醇中再结晶得到呈褐色固体状的所需产物(9.0g，46％)。¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ13.36(s,1H),7.85(s,1H),2.65(s,3H)。C₈H₆Cl₂IO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝330.9,332.9；实验值：330.8,332.9。

步骤3.1-(4,5-二氯-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮

1-(4,5-二氯-2-羟基-3-碘苯基)乙酮(16g，47mmol)和碳酸钾(17g，120mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液用碘代甲烷(6.4mL，100mmol)处理并且在60℃下搅拌1小时。反应混合物用水稀释并且用乙酸乙酯(2×)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗固体。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(5％-30％)纯化得到呈橙色固体状的所需产物(14g，84％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.69(s,1H),3.79(s,3H),2.60(s,3H)。C₉H₈Cl₂IO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝344.9,346.9；实验值：344.8,346.9。

步骤4.3-(3-乙酰基-5,6-二氯-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将锌(4.5g，69mmol)与1,2-二溴乙烷(420μL，4.9mmol)一起悬浮于N,N-二甲基甲酰胺(54mL)中。在70℃下加热混合物10分钟并且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(620μL，4.9mmol)并且持续搅拌1小时。接着添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(17g，61mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液并且在40℃下加热混合物1小时，随后快速添加1-(4,5-二氯-3-碘-2-甲氧基苯基)乙酮(14g，41mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(710mg，0.77mmol)和三-(2-呋喃基)膦(360mg，1.6mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(120mL)中的混合物。反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物接着于乙酸乙酯与饱和氯化铵溶液之间分配。有机层用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到粗残余物，其通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-25％)纯化得到所需产物(12g，77％)。C₁₇H₂₁Cl₂NO₄Na的LCMS：(M+Na)⁺:m/z＝396.1；实验值：396.0。

步骤5.3-[2,3-二氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在0℃下历经5分钟用四氢硼酸钠(1.9g，51mmol)逐份处理3-(3-乙酰基-5,6-二氯-2-甲氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(9.6g，26mmol)于甲醇(240mL)中的溶液并且在0℃下搅拌30分钟。反应混合物在0℃下用乙酸(7.3mL，130mmol)淬灭并且用饱和碳酸氢钠溶液(约50mL)处理。浓缩反应混合物以移除大部分甲醇(至约60mL)，倒入饱和碳酸氢钠溶液(150ml)中，并且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到所需产物(9.6g，定量)，其不经进一步纯化即使用。C₁₃H₁₆Cl₂NO₄的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)⁺:m/z＝320.0；实验值：320.0。

步骤6.3-[2,3-二氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

在室温下添加N,N-二甲基甲酰胺(0.92mL，12mmol)至固体氰脲酰氯(2.2g，12mmol)中(DMF由固体吸收)。混合物静置10分钟，用二氯甲烷(60mL)处理，并且搅拌数分钟以分散固体。反应混合物用3-[2,3-二氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(3.0,8.0mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液处理并且在35-40℃下搅拌2小时。反应混合物再用N,N-二甲基甲酰胺(1mL)处理并且在35-40℃下搅拌4小时。反应需要在35-40℃下在搅拌下再用N,N-二甲基甲酰胺(1mL)处理过夜以进行至完成。反应混合物用水和二氯甲烷稀释。分离有机相并且用饱和碳酸氢钠溶液、水以及盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩成粗残余物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(5％-40％)纯化得到所需产物(2.8g，90％)。C₁₃H₁₅Cl₃NO₃的LCMS：([M-(t-Bu)+H]+H)⁺:m/z＝338.0,340.0；实验值：337.9,339.9。

步骤7.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5,6-二氯-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

3-[2,3-二氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.0g，2.5mmol)和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.43g，2.9mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(23mL)中的溶液用碳酸铯(1.2g，3.8mmol)和碘化钾(42mg，0.25mmol)处理并且在100℃下加热10小时。反应混合物用乙酸乙酯(75mL)和水(75mL)稀释。分离水层并且用乙酸乙酯(2×50mL)再萃取。合并的有机层用水、饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩成粗残余物。粗物质通过快速柱色谱法使用含甲醇的二氯甲烷(0％-10％)纯化得到所需产物(0.97g，75％)。C₂₃H₂₉Cl₂N₆O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝507.2,509.2；实验值：507.0,509.0。

步骤8.1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-4,5-二氯-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-1-基)乙基]-5,6-二氯-2-甲氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.97g，1.9mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液用三氟乙酸(10mL)处理并且在20℃下搅拌30分钟。浓缩反应混合物并且残余物用甲醇(约20mL)稀释并且用饱和碳酸氢钠溶液处理(至pH值为约8)。浓缩反应混合物以移除甲醇。油状物悬浮于水层中，萃取至二氯甲烷/异丙醇的5:1混合物中，经硫酸镁干燥，过滤，并且浓缩得到所需产物(0.77g，99％)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。C₁₈H₂₁Cl₂N₆O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝407.1,409.1；实验值：407.0,409.0。

步骤9.1-{1-[4,5-二氯-3-(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)-2-甲氧基苯基]乙基}-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

1-[1-(3-氮杂环丁烷-3-基-4,5-二氯-2-甲氧基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(40mg，0.098mmol)于甲醇(2.6mL)中的溶液依次用氰基硼氢化钠(15mg，0.25mmol)和乙醛(22μL，0.39mmol)处理并且在20℃下搅拌20分钟。反应混合物用乙酸(130μL，2.3mmol)淬灭，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到呈对映异构体的混合物形式的所需产物。此外消旋混合物通过手性HPLC(RT＝18.6分钟和22.0分钟；Phenomenex Lux纤维素C-4柱，21.2×250mm，5微米粒径，用含5％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱，每次注射2.5mg)分离得到所需峰1异构体(11mg，26％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.45(s,1H),7.33(br s,2H),6.21(q,J＝6.9Hz,1H),3.98-3.77(m,3H),3.57(s,3H),2.92-2.83(m,1H),2.79-2.72(m,1H),2.55(s,3H),2.35-2.22(m,2H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),0.86(t,J＝7.1Hz,3H)。C₂₀H₂₅Cl₂N₆O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝435.1；实验值：435.0。

实施例307.4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈

步骤1.3-{3-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

所需化合物是根据实施例212，步骤5(手性中间体)的程序，使用5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺[ACES Pharma]替代3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺作为起始物质来制备，产率18％。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.13(s,1H),6.93(br s,1H),6.79(s,1H),6.17(q,J＝7.1Hz,1H),5.24(s,2H),4.40-4.27(m,4H),4.27-4.18(m,1H),4.03-3.92(m,1H),3.80-3.70(m,1H),2.43(s,3H),1.74(d,J＝7.1Hz,3H),1.43(s,9H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H)。C₂₆H₃₂ClN₆O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝511.2；实验值：511.2。

步骤2.4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈

所需化合物是根据实施例212，步骤6的程序，使用3-{3-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯替代3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯作为起始物质来制备，产率99％。C₂₁H₂₄ClN₆O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝411.2；实验值：411.1。

步骤3.4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)苯甲腈

所需化合物是根据实施例213的程序，使用4-[1-(4-氨基-5-甲基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈替代4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-6-氯-3-乙氧基苯甲腈、和丙酮替代甲醛作为起始物质来制备，产率65％。产物分离为单一对映异构体。¹H NMR(300MHz,dmso)δ7.95(s,1H),7.19(s,1H),7.16-7.13(m,1H),6.58(s,2H),6.11(q,J＝7.1Hz,1H),4.04-3.67(m,5H),3.04-2.92(m,2H),2.36(s,3H),2.27-2.12(m,1H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.30(t,J＝6.9Hz,3H),0.85(dd,J＝6.1,1.8Hz,6H)。C₂₄H₃₀ClN₆O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝453.2；实验值：453.3。

合成的化合物

化合物实施例214-218、221-235、238、240-246、248-260、263-267、270、271、274-280、282-284、286-288、290、291、294、295、297、299-306、308和309的实验程序概述于表4和表5中。

表4

¹根据所列化合物的实验程序合成；

³化合物分离为单一对映异构体；

⁵化合物分离为单一非对映异构体。

表5

¹根据所列化合物的实验程序合成；

³化合物分离为单一对映异构体；

⁵化合物分离为单一非对映异构体。

分析数据

实施例214-218、221-235、238、240-246、248-260、263-267、270、271、274-280、282-284、286-288、290、291、294、295、297、299、300-306、308和309的化合物的¹H NMR数据(Varian Inova500光谱仪、Mercury400光谱仪、或Varian(或Mercury)300光谱仪)以及LCMS质谱数据(MS)提供于下表6中。

表6

实施例313.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1：5-溴-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

将5-溴吡啶-2-甲酸(20g，100mmol，Frontier Scientific目录号B1704)于二氯甲烷(30mL)中搅拌并且冷却至0℃。缓慢添加2.0M乙二酰氯的二氯甲烷溶液(100mL)，随后添加N,N-二甲基甲酰胺(0.8mL)。在0℃下搅拌混合物30分钟并且接着在室温下搅拌过夜。蒸发混合物，再溶解于二氯甲烷(130mL)中并且缓慢添加至二甲胺盐酸盐(9.8g，120mmol)和三乙胺(56.1mL，400mmol)于二氯甲烷(130mL)中的冷却至0℃的混合物中。在室温下搅拌反应混合物2小时。此混合物用二氯甲烷(200mL)稀释并且用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。产物通过硅胶上的FCC使用含乙酸乙酯的己烷(0-60％)梯度纯化得到5-溴-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(22.0g，100％)。C₈H₁₀BrN₂O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝229.0,231.0；实验值：228.9,230.9。

步骤2：{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸

将5-溴-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(23g，98mmol)、4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二噁硼烷](27g，110mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(Aldrich，目录号379670)(1:1)(4.8g，5.9mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(Aldrich，目录号177261)(3.3g，5.9mmol)和乙酸钾(30g，300mmol)于1,4-二噁烷(600mL)中的混合物用氮气脱气并且在120℃下加热16小时。冷却混合物至室温并且用乙酸乙酯(600mL)和水(600mL)稀释。在真空中浓缩水层得到固体残余物。固体溶解于乙腈中并且过滤以移除残余不溶性盐。在真空中移除乙腈得到{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸(12g，60％)。C₈H₁₂BN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝195.1；实验值：195.1。

步骤3.4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-甲氧基苯甲腈

将1-(3-溴-5-氯-4-氟-2-羟基苯基)乙酮(2.0g，7.5mmol，实施例43，步骤1)与氰化钾(0.58g，9.0mmol)组合于N,N-二甲基甲酰胺(16mL)中并且在油浴中加热至85℃。在加热18小时之后，使反应冷却至室温并且添加碘甲烷(0.90mL，11mmol)和碳酸钾(2.1g，15mmol)。加热反应至65℃并且通过LC/MS监测。在加热3小时之后，反应完成并且使其冷却至室温，接着溶解于乙酸乙酯中并用水、盐水洗涤，并且经硫酸镁干燥。浓缩所得溶液得到呈深色油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈固体残余物形式的4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(1.65g，75％)。C₁₀H₈BrClNO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝287.9,289.9；实验值：288.1,290.0。

步骤4：5-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

添加含碳酸钠(3.0g，20mmol)的水(20mL)至4-乙酰基-2-溴-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(2.5g，8.7mmol)和{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸(1.9g，10.mmol，实施例301步骤2)于乙腈(100mL)中的混合物中。将反应用N₂脱气并且添加[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(400mg，0.4mmol)并将反应混合物用N₂再次脱气。在100℃下加热反应4小时并且根据LC/MS指示反应完成。使反应冷却至室温并且于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，浓缩得到粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈黄色油状的5-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.2g，71％)。C₁₈H₁₇ClN₃O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝358.1；实验值：358.1。

步骤5：5-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

添加四氢硼酸钠(320mg，8.4mmol)至5-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2g，6mmol)于甲醇(100mL)中的在0℃下冷却的混合物中。在0℃下搅拌反应1小时，用水淬灭并且于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到呈澄清油状的粗5-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.0g，100％)。C₁₈H₁₉ClN₃O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝360.1；实验值：360.1。

步骤6：5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氰基-6-甲氧基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下逐滴添加亚硫酰氯(800μL，10mmol)至5-[3-氯-2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2g，6mmol)、二氯甲烷(100mL)和N,N-二甲基甲酰胺(100μL)的溶液中。搅拌反应5小时并且根据LC/MS指示反应完成。反应混合物于EtOAc与水之间分配。合并的有机层用饱和NaHCO₃、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到呈油状的粗5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氰基-6-甲氧基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(1.8g，80％)。C₁₈H₁₈Cl₂N₃O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝378.1；实验值：378.1。

步骤7：5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

添加碳酸铯(3000mg，10mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1100mg，7.1mmol)和5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-2-氰基-6-甲氧基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(1.8g，4.8mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物中。在80℃下搅拌反应3小时并且使其冷却至室温。反应用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。其通过硅胶上的FCC用(己烷/含10％EtOH的EtOAc，0-100％)梯度洗脱纯化得到呈淡黄色油状的标题化合物(2.0g，80％)。C₂₄H₂₄ClN₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝491.1；实验值：491.2。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.74(d,J＝1.4Hz,1H),8.15(d,J＝2.2Hz,1H),8.13(s,1H),7.77(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(s,1H),6.43(q,J＝7.0Hz,1H),3.32(s,3H),3.16(s,3H),3.07(s,3H),2.64(s,3H),1.89(d,J＝7.1Hz,3H)。

对映异构体通过手性柱HPLC分离，使用：Phenomenex Lux-纤维素1柱，21.1×250mm，5微米粒径，含15％乙醇的己烷，18mL/min，每次注射约5mg，得到下列结果：第一峰停留时间：2.09分钟，5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；第二峰停留时间：3.92分钟，5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-6-氰基-2-甲氧基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺。

实施例314.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1：4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈

将1-(4-溴-2-羟基-5-甲基苯基)乙酮(8.5g，37mmol，Alfa Aesar目录号H29125)与氰化锌(8.7g，74mmol)组合于经氮气脱气的N,N-二甲基甲酰胺(75mL)中并且添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Aldrich目录号328774)(1.0g，1.1mmol)和(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基膦)(Aldrich目录号526460)(1.5g，2.6mmol)。将反应用氮气再次脱气并且加热至120℃并通过LC/MS监测。在加热18小时之后，反应完成，使反应冷却至室温，溶解于乙酸乙酯中并且用水(2X)、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深琥珀色油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈固体状的4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈(6.3g，98％)。C₁₀H₁₀NO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝176.1；实验值：176.2。

步骤2：4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈

将4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈(6.7g，38mmol)溶解于乙酸(80mL)中并且添加N-碘丁二酰亚胺(10.g，46mmol)。在油浴中加热反应至80℃并且通过LC/MS监测。在加热4小时之后，反应完成。使其冷却并且在真空中浓缩得到深色油状物。油状物溶解于乙酸乙酯中并且用水、碳酸氢钠(3X，直至残余物呈略微碱性)、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深色油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈浅黄色固体状的4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈(7.2g，62％)。C₁₀H₉INO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝301.9；实验值：301.9。

步骤3：4-乙酰基-2-碘-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈

将4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈(5.0g，17mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(50.0mL)中并且添加碳酸钾(4.6g，33mmol)和碘代乙烷(2.1mL，33mmol)。加热反应至60℃并且通过LC/MS监测。在加热2小时之后，反应完成。使其冷却，用乙酸乙酯(300mL)稀释并且过滤以移除残余固体。有机层用水(3X)、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深色固体状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈浅黄色结晶固体状的4-乙酰基-3-乙氧基-2-碘-6-甲基苯甲腈(5.0g，96％)。C₁₂H₁₃INO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝329.9；实验值：330.0。

步骤4：5-(3-乙酰基-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

添加含碳酸钠(3g，30mmol)的水(20mL)至4-乙酰基-3-乙氧基-2-碘-6-甲基苯甲腈(3g，9mmol)和{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸(1700mg，8.8mmol，实施例313，步骤2)于乙腈(100mL)中的混合物中。混合物用氮气脱气并且添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(400mg，0.4mmol)。反应用氮气再次脱气并且加热至100℃维持4小时。使反应冷却至室温，用水稀释并且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶上的FCC用(己烷/EtOAc，0-100％)梯度洗脱纯化得到呈黄色固体状的5-(3-乙酰基-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺产物(2.3g，75％)。C₂₀H₂₂N₃O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝352.1；实验值：352.2。

步骤5：5-[2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-3-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在0℃下添加四氢硼酸钠(370mg，9.8mmol)至5-(3-乙酰基-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.3g，6.5mmol)于甲醇(100mL)中的混合物中。在0℃下搅拌反应1小时。反应于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到呈澄清油状的粗产物5-[2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-3-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.3g，99％)。C₂₀H₂₄N₃O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝354.1；实验值：354.2。

步骤6：5-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

在室温下逐滴添加亚硫酰氯(900μL，10mmol)至5-[2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)-3-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.3g，6.5mmol)于二氯甲烷(100mL)和N,N-二甲基甲酰胺(100μL)中的溶液中。搅拌反应3小时，用二氯甲烷(100mL)稀释并且用水饱和NaHCO₃洗涤。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗5-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.2g，91％)。C₂₀H₂₃ClN₃O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝372.1；实验值：372.2。

步骤7：5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

添加碳酸铯(4000mg，10mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1300mg，8.5mmol)和5-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(2.1g，5.6mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的混合物中。在80℃下搅拌反应3小时并且通过LC/MS监测。反应混合物用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶上的FCC用(己烷/含10％EtOH的EtOAc，梯度0-100％)梯度洗脱纯化得到标题化合物(2.1g，77％)。C₂₆H₂₉N₈O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝485.2；实验值：485.2。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.70-8.63(m,1H),8.10(s,1H),8.06(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),7.69(d,J＝8.1Hz,1H),7.51(s,1H),6.34(q,J＝7.0Hz,1H),3.59-3.47(m,1H),3.33(m,1H),3.03(s,3H),2.96(s,3H),2.57(s,3H),2.45(s,3H),1.79(d,J＝7.1Hz,3H),0.90(t,J＝7.0Hz,3H)。对映异构体通过手性柱HPLC分离，使用：AD柱20×25cm，用己烷；30％乙醇在13mL/min下洗脱，每次注射约5mg，得到：第一峰停留时间：1.63分钟，5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺；第二峰停留时间：4.13分钟，5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-乙氧基-5-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺。

实施例315.4-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈

步骤1：4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈

将1-(4-溴-2-羟基-5-甲基苯基)乙酮(8.5g，37mmol，Alfa Aesar目录号H29125)与氰化锌(8.7g，74mmol)组合于经氮气脱气的N,N-二甲基甲酰胺(75mL)中并且添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(1.0g，1.1mmol)和(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基膦)(1.5g，2.6mmol)。将反应用氮气再次脱气并且加热至120℃并通过LC/MS监测。在加热18小时之后，反应完成，使反应冷却至室温，溶解于乙酸乙酯中并且用水(2X)、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深琥珀色油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈固体状的4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈(6.3g，98％)。C₁₀H₁₀NO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝176.1；实验值：176.2。

步骤2：4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈

将4-乙酰基-5-羟基-2-甲基苯甲腈(6.7g，38mmol)溶解于乙酸(80mL)中并且添加N-碘丁二酰亚胺(10.g，46mmol)。在油浴中加热反应至80℃并且通过LC/MS监测。在加热4小时之后，反应完成。使其冷却并且在真空中浓缩得到深色油状物。油状物溶解于乙酸乙酯中并且用水、碳酸氢钠(3×，直至残余物呈略微碱性)、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深色油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈浅黄色固体状的4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈(7.2g，62％)。C₁₀H₉INO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝301.9；实验值：301.9。

步骤3：4-乙酰基-2-碘-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈

将4-乙酰基-3-羟基-2-碘-6-甲基苯甲腈(5.0g，17mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中并且添加碳酸钾(4.6g，33mmol)和碘代甲烷(2.1mL，33mmol)。加热反应至60℃并且通过LC/MS监测。在加热2小时之后，反应完成。使其冷却，用乙酸乙酯(300mL)稀释并且过滤以移除残余固体。有机层用水(3X)、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深色固体状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈浅黄色结晶固体状的4-乙酰基-3-甲氧基-2-碘-6-甲基苯甲腈(5.0g，96％)。C₁₁H₁₁INO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝315.9；实验值：316.0。

步骤4：3-(3-乙酰基-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将锌(1.70g，26.0mmol)与硅藻土(烘干，500mg)一起在烧瓶中研磨直至固体呈现为均质，在高真空下用热风器加热烧瓶5分钟并且接着用氮气回填。将固体悬浮于N,N-二甲基乙酰胺(4.2mL)中并且添加1,2-二溴乙烷(0.13mL，1.5mmol)。在70℃下加热反应混合物30分钟并且接着冷却至室温。逐滴添加氯三甲基硅烷(0.16mL，1.3mmol)并且在室温下持续搅拌2小时。接着缓慢添加3-碘氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.70g，9.52mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(4.35mL)中的溶液并且在50℃下加热所得混合物2小时。使锌-碘试剂冷却至室温并且在注射器中溶解并经PTFE过滤器(配有针)直接过滤至三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.111g，0.121mmol)和三-(2-呋喃基)膦(0.056g，0.24mmol)和4-乙酰基-2-碘-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈(2.0g，6.3mmol)于N,N-二甲基乙酰胺(19.6mL)中的通过鼓泡N₂而预脱气的悬浮液中。反应混合物用氮气再次脱气并且加热至70℃。在加热30分钟之后，根据LC/MS指示反应完成。使其冷却，溶解于乙酸乙酯中并且用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩得到呈油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷；乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈澄清油状的3-(3-乙酰基-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。(1.8g，82％)。C₁₅H₁₇N₂O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝289.1；实验值：289.1。

步骤5：3-[2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-3-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将3-(3-乙酰基-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.2g，6.4mmol)溶解于甲醇(20mL)中并且在冰浴中冷却。逐份添加四氢硼酸钠(0.26g，7.0mmol)并且通过LC/MS监测反应。在搅拌1小时之后，反应完成。其用乙酸乙酯和水稀释。合并的有机层用水、饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈黄色泡沫状的粗3-[2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-3-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.1g，99％)。C₁₅H₁₉N₂O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝291.1；实验值：291.1。

步骤6：3-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

3-[2-氰基-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-3-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.1g，6.4mmol)溶解于二氯甲烷(50.0mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.59mL)中，在冰浴中冷却并且缓慢添加亚硫酰氯(0.56mL，7.7mmol)。在搅拌2小时之后，根据LC/MS指示反应完成，并且于乙酸乙酯与水之间分配。合并的有机层用水饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈油状的粗3-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.2g，100％)。C₁₅H₁₈ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝309.1；实验值：309.1。

步骤7：3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯

将3-[3-(1-氯乙基)-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(2.3g，6.3mmol)与碳酸铯(4.1g，13mmol)和3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(1.4g，9.4mmol)一起溶解于N,N-二甲基甲酰胺(68mL)中并且在油浴中加热至80℃。搅拌反应18小时并且使其冷却至室温。反应混合物溶解于乙酸乙酯中，过滤，用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶上的FCC用(己烷:含10％乙醇的乙酸乙酯)梯度洗脱纯化得到呈半固体状的3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(1.5g，50％)。C₂₅H₃₂N₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝478.2；实验值：478.2。对映异构体通过手性柱HPLC分离，使用：Phenomenex LUX纤维素柱，21.1×250mm，5微米，含15％乙醇的己烷，18mL/min，每次注射约5mg，得到：第一峰停留时间：2.1分钟，3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯；第二峰停留时间：3.9分钟，3-{3-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯。

步骤8：4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)

在室温下将3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氰基-2-甲氧基-5-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(0.35g，0.73mmol)(步骤7，峰1)溶解于二氯甲烷(3.0mL)和三氟乙酸(1.0mL)中。在搅拌1小时之后，根据LC/MS指示反应完成。在真空中浓缩反应得到呈黏稠琥珀色油状的4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)(0.50g，100％)。C₂₀H₂₄N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝378.2；实验值：378.2。

步骤9：4-[-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-{1-[(2S)-2-羟丙基]氮杂环丁烷-3-基}-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈

将4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)(0.074g，0.10mmol)溶解于乙醇(3.0mL)和DIPEA(0.071mL，0.41mmol)中并且添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(0.0071g，0.12mmol)。反应于密封管中加热至90℃并且通过LC/MS监测。在加热6小时之后，反应不经处理即通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水：乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物(0.018g，40％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₃H₃₀N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝436.2；实验值：436.3。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.09(s,1H),7.21(s,1H),6.22(q,J＝7.1Hz,1H),4.34(d,J＝4.5Hz,1H),4.09-3.83(m,3H),3.60(s,3H),3.58-3.51(m,1H),3.12-2.95(m,2H),2.55(s,3H),2.33(s,3H),2.27(d,J＝5.9Hz,2H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)。

实施例316.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]苯甲腈

步骤1.5-溴-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺

添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(500mg，5mmol)至六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲(1400mg，3.7mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1000μL，7mmol)以及5-溴吡啶-2-甲酸(500mg，2mmol，Frontier Scientific目录号B1704)于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中。反应混合物在室温下搅拌过夜并且根据LC/MS指示反应完成。反应于水与EtOAc之间分配。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:EtOAc(0-30％)梯度洗脱纯化得到5-溴-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺澄清油状物(0.50g，60％)。C₈H₁₀BrN₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝244.9,246.9；实验值：244.9,246.9。

步骤2.1-(5-溴吡啶-2-基)乙酮

在0℃下逐滴添加3.0M氯化甲基镁的THF溶液(0.5mL)至5-溴-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(200mg，0.8mmol)于四氢呋喃(10mL)中的混合物中。在室温下搅拌1小时之后，反应用1N NH₄Cl淬灭并且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤并且经MgSO₄干燥，浓缩得到粗产物1-(5-溴吡啶-2-基)乙酮(0.15g，90％)。C₇H₇BrNO的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝199.9,201.9；实验值：199.9,201.9。

步骤3.2-(5-溴吡啶-2-基)丙-2-醇

在0℃下逐滴添加3.0M氯化甲基镁的THF溶液(0.3mL)至1-(5-溴吡啶-2-基)乙酮(100mg，0.5mmol)于四氢呋喃(10mL)中的混合物中。在室温下搅拌1小时之后，反应用1NNH₄Cl淬灭并且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤并且经MgSO₄干燥，浓缩得到粗2-(5-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(0.1g，100％)。C₈H₁₁BrNO的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝215.9,217.9；实验值：215.8,217.8。

步骤4.[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]硼酸

2-(5-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(70mg，0.3mmol)、4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二噁硼烷](90.mg，0.36mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(10mg，0.01mmol)以及乙酸钾(100mg，1mmol)于1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在120℃下加热过夜。根据LC/MS指示反应完成，在真空中浓缩得到粗[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]硼酸。C₈H₁₃BNO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝182.1；实验值：182.1。

步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]苯甲腈双(2,2,2-三氟乙酸盐)

添加含碳酸钠(10mg，0.09mmol)的水(0.5mL)至4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-溴-6-氯-3-乙氧基苯甲腈(20mg，0.04mmol，来自实施例43，步骤5的外消旋中间体)和[6-(1-羟基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]硼酸(12mg，0.069mmol，实施例306，步骤4)于乙腈(1mL)中的混合物中。将反应混合物用N₂脱气并且添加[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2mg，0.002mmol)。反应用N₂再次脱气并且加热至100℃维持1小时。使反应冷却至室温并且不经处理即通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水；乙腈梯度(经TFA缓冲)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₅H₂₇ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝492.1；实验值：492.1。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.60(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(s,1H),7.96(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),7.80(d,J＝8.3Hz,1H),7.73(s,1H),6.36(q,J＝7.0Hz,1H),3.52-3.40(m,1H),3.40-3.30(m,1H),2.59(s,3H),1.80(d,J＝7.0Hz,3H),1.48(d,J＝2.3Hz,6H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H)。

实施例317.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-甲氧基-6-甲基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈

使用与实施例314类似的程序，但在步骤3中使用碘代甲烷替代碘代乙烷制备4-乙酰基-2-碘-3-甲氧基-6-甲基苯甲腈，并且使用3-(甲基磺酰基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)吡啶替代{6-[(二甲基氨基)羰基]吡啶-3-基}硼酸(来自步骤4的外消旋中间体)，制备标题化合物4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-甲氧基-6-甲基-2-[5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基]苯甲腈。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₃H₂₄N₇O₃S的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝478.1；实验值：478.2。¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ9.24(d,J＝2.2Hz,1H),9.03(d,J＝2.0Hz,1H),8.59(t,J＝2.1Hz,1H),8.31(s,1H),7.68(s,1H),6.56(q,J＝7.1Hz,1H),3.38(s,3H),3.31(s,3H),2.72(s,3H),2.59(s,3H),1.98(d,J＝7.1Hz,3H)。

实施例318.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈

步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈

4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈是通过实施例43，步骤1和步骤2中所述的类似方法，但使用N-碘丁二酰亚胺来制备。C₁₁H₁₀ClINO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝349.9；实验值：350.0。

步骤2.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈

将4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(0.20g，0.57mmol)与吡咯烷(0.052mL，0.63mmol)组合于含碳酸铯(0.19g，0.57mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中并且在密封管中加热至120℃。在加热18小时之后，使反应冷却，溶解于乙酸乙酯中，用水、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈深色油状的粗产物。产物通过硅胶上的FCC用己烷:乙酸乙酯梯度洗脱纯化得到呈油状的4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，27％)。C₁₅H₁₈ClN₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝293.1；实验值：293.1。

步骤3.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-吡咯烷-1-基苯甲腈

将4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，0.15mmol)溶解于甲醇(3mL)中并且在冰浴中冷却。添加四氢硼酸钠(0.0058g，0.15mmol)并且通过LC/MS监测反应。在搅拌1小时之后，反应溶解于乙酸乙酯中并且用水、碳酸氢钠、盐水洗涤并经硫酸镁干燥得到呈澄清油状的粗6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，100％)。C₁₅H₂₀ClN₂O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝295.1；实验值：295.1。

步骤4.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈

6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.045g，0.15mmol)溶解于二氯甲烷(3.0mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.002mL，0.03mmol)中并且在冰浴中冷却。添加亚硫酰氯(0.017mL，0.23mmol)并且通过LC/MS监测反应。在搅拌2小时之后，反应完成。反应接着溶解于乙酸乙酯中，用碳酸氢钠、盐水洗涤，经硫酸镁干燥并且浓缩得到呈黄色油状的粗6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.048g，100％)。C₁₅H₁₉Cl₂N₂O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝313.1；实验值：313.1。

步骤5.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈

将6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-吡咯烷-1-基苯甲腈(0.048g，0.15mmol，外消旋混合物)与3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.034g，0.23mmol)和碳酸铯(0.10g，0.31mmol)组合于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中并且在油浴中加热至85℃。在加热18小时之后，反应完成。粗反应不经处理即通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水：乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物(0.012g，18％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₅ClN₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝426.1；实验值：426.1。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),6.91(s,1H),6.25(q,J＝7.1Hz,1H),3.71(dp,J＝15.7,8.1,7.2Hz,4H),3.49-3.35(m,2H),2.55(s,3H),2.00-1.76(m,4H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.34(t,J＝7.0Hz,3H)。

实施例319.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈

步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈

向4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(50mg，0.1mmol，实施例318，步骤1)、3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐(21mg，0.17mmol，Chem-Impex目录号20140)和碳酸铯(70.mg，0.21mmol)于1,4-二噁烷(4mL)中的混合物中添加(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基膦)(40mg，0.07mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(60mg，0.07mmol)。反应混合物用N₂脱气。在80℃下加热反应2小时并且通过LC/MS监测。使反应冷却至室温，用水稀释并且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。产物通过硅胶上的FCC用(己烷:EtOAc0-70％)梯度洗脱纯化得到呈澄清油状的4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(0.030g，70％)。C₁₅H₁₈ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝309.1；实验值：309.1。

步骤2.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈

将4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(30mg，0.1mmol)溶解于冷却至0℃的甲醇(5mL)中并且添加四氢硼酸钠(5.5mg，0.14mmol)。在0℃下搅拌反应1小时。反应于EtOAc与水之间分配。合并的有机层用水和饱和NaHCO₃、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(0.030g，100％)。C₁₅H₂₀ClN₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝311.1；实验值：311.1。

步骤3.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈

将6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(30mg，0.1mmol)(外消旋混合物)溶解于二氯甲烷(5mL)和N,N-二甲基甲酰胺(100μL，1mmol)中。在室温下逐滴添加亚硫酰氯(18μL，0.24mmol)并且搅拌反应2小时。反应用EtOAc稀释，用水和饱和NaHCO₃、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(0.030g，100％)。C₁₅H₁₉Cl₂N₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝329.1；实验值：329.1。

步骤4.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈

添加碳酸铯(50mg，0.2mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(16mg，0.10mmol)和6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(3-甲氧基氮杂环丁烷-1-基)苯甲腈(30mg，0.09mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(3mL，40mmol)中的混合物中并且反应在80℃下搅拌过夜。混合物用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩成粗产物。产物通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水：乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物(0.007g，20％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₁H₂₅ClN₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.1；实验值：442.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),6.80(s,1H),6.18(d,J＝7.1Hz,1H),4.58-4.44(m,2H),4.18(m,1H),4.13-4.01(m,2H),3.81-3.62(m,2H),3.23(s,3H),2.55(s,3H),1.69(d,J＝7.1Hz,3H),1.35(t,J＝7.0Hz,3H)。

实施例320.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-6-甲基苯甲腈

步骤1：4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)

使用实施例315中所述的方法，但在步骤3中使用碘代乙烷替代碘代甲烷，制备中间体4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈双(三氟乙酸盐)。C₂₁H₂₆N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝392.2；实验值：392.2。

步骤2.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)-6-甲基苯甲腈

向4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈(70mg，0.2mmol)于甲醇(50mL)中的混合物中添加丙酮(0.1mL，2mmol)和氰基硼氢化钠(17mg，0.27mmol)。在室温下搅拌反应1小时，并且根据LC/MS指示反应完成。反应用水淬灭并且用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩得到粗产物。产物通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水：乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物(0.030g，40％)。产物以外消旋混合物形式分离。C₂₄H₃₂N₇O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝434.2；实验值：434.3。¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ8.17(s,1H),7.35(s,1H),6.37(q,J＝7.1Hz,1H),4.17-3.98(m,4H),3.90-3.71(m,3H),2.65(s,3H),2.46(s,4H),1.84(d,J＝7.1Hz,3H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H),1.03(dd,J＝6.2,1.4Hz,6H)。

实施例321.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙基)氮杂环丁烷-3-基]-6-甲基苯甲腈

在室温下使4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈(0.055g，0.14mmol，来自实施例320，步骤1的手性中间体)与四氢呋喃(22mL)、DIPEA(0.049mL，0.28mmol)以及2,2-二甲基-环氧乙烷(0.018mL，0.21mmol)组合。加热反应至95℃并且搅拌过夜。使反应冷却至室温并且不经处理即通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水:乙腈梯度(pH10缓冲)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物(0.035g，50％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₃₄N₇O₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝464.3；实验值：464.3。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.09(s,1H),7.23(s,1H),6.21(q,J＝6.8Hz,1H),4.00(m,4H),3.81-3.54(m,2H),3.15(m,2H),2.53(s,3H),2.33(s,3H),2.27(bs,2H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.30(t,J＝6.9Hz,3H),1.04(s,6H)。

实施例322.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-3-乙氧基-2-[1-(2-羟基-2-甲基丙酰基)氮杂环丁烷-3-基]-6-甲基苯甲腈

将4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-2-氮杂环丁烷-3-基-3-乙氧基-6-甲基苯甲腈(0.075g，0.10mmol，来自实施例320，步骤1的手性中间体)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)和DIPEA(0.089mL，0.51mmol)中并且添加2-羟基-2-甲基-丙酸(0.013g，0.12mmol)和六氟磷酸N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲(0.058g，0.15mmol)。在室温下搅拌反应18小时并且并且根据LC/MS指示反应完成。产物不经处理即通过在C-18柱上进行制备型HPLC用水：乙腈梯度(缓冲至pH10)洗脱纯化得到呈白色非晶固体状的标题化合物(0.025g，51％)。产物分离为单一对映异构体。C₂₅H₃₂N₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝478.2；实验值：478.2。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.10(s,1H),7.29(s,1H),6.24(q,J＝6.8Hz,1H),5.07(s,1H),4.90-4.75(m,1H),4.73-4.58(m,1H),4.39(p,J＝8.5Hz,1H),4.30-4.05(m,2H),3.75(d,J＝7.1Hz,2H),2.54(s,3H),2.38(s,3H),1.72(d,J＝6.9Hz,3H),1.35(t,J＝6.1Hz,3H),1.26(s,3H),1.23(s,3H)。

合成的化合物

化合物实施例326-344的实验程序概述于表7和表8中。

表7

¹根据所列化合物的实验程序合成；

²化合物以外消旋混合物形式分离；

³化合物分离为单一对映异构体。

表8

¹根据所列化合物的实验程序合成；

²化合物以外消旋混合物形式分离；

³化合物分离为单一对映异构体。

分析数据

实施例326-344的化合物的¹H NMR数据(Varian Inova500光谱仪、Mercury400光谱仪、或Varian(或Mercury)300光谱仪)和LCMS质谱数据(MS)提供于表9中。

表9

实施例310和311.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙醇

所需化合物是根据实施例212，步骤4的程序(外消旋混合物)，使用1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙酮替代3-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯作为起始物质制备成对映异构体的96:4混合物，产率94％(RT＝3.56分钟和4.28分钟；Chiral Technologies ChiralPak AD-H柱，20×250mm，5微米粒径，用含5％乙醇的己烷在1ml/min下洗脱)。C₁₁H₁₃ClIO的LCMS：(M-(OH))⁺:m/z＝323.0；实验值：322.9。

步骤2.1-[1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺

所需化合物是根据实施例212，步骤5的程序，使用1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙醇(来自步骤1的96:4混合物)替代3-[3-氯-2-氰基-6-乙氧基-5-(1-羟乙基)苯基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯作为起始物质制备成单一对映异构体，产率32％(所需峰1，停留时间＝3.39分钟；ChiralPak IA柱，20×250mm，5微米粒径，用含3％乙醇的己烷在18ml/min下洗脱)。C₁₇H₂₀ClIN₅O的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝472.0；实验值：472.0。

步骤3.(2E)-3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}丙烯酸甲酯

将密封管中的1-[1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙基]-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(来自步骤2的峰1单一异构体)(0.61g，1.3mmol)于乙腈(7.4mL)中的悬浮液用氮气脱气并且用三苯膦(0.048g，0.18mmol)、丙烯酸甲酯(0.41mL，4.5mmol)以及乙酸钯(0.029g，0.13mmol)处理，随后用三乙胺(0.54mL，3.9mmol)处理并且在100℃下加热16小时。冷却反应混合物至室温，过滤，并且固体用乙腈洗涤。滤液浓缩成残余物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯(含有3％甲醇)的己烷(0％-100％)纯化得到所需产物(0.40g，72％)。C₂₁H₂₅ClN₅O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝430.2；实验值：430.2。

步骤4.3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-4-硝基丁酸甲酯的非对映异构体

(2E)-3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}丙烯酸甲酯(0.40,g，0.93mmol)于硝基甲烷(6.3mL)中的溶液用1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(0.14mL，0.93mmol)处理并且在90℃下搅拌22小时。浓缩反应混合物，用甲醇稀释，并且通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用含乙腈的具有0.1％三氟乙酸的水在流速60mL/min下洗脱)纯化。浓缩LCMS洗脱份以移除乙腈，用固体碳酸氢钠处理，并且萃取至乙酸乙酯中。浓缩乙酸乙酯得到呈非对映异构体的混合物形式的所需产物(0.22g，48％)。C₂₂H₂₈ClN₆O₅的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝491.2；实验值：491.2。

步骤5.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体

3-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}-4-硝基丁酸甲酯(0.089g，0.18mmol)于甲醇(1.3mL)中的溶液用氯化镍六水合物(0.087g，0.36mmol)处理并且搅拌5分钟。冷却反应混合物至0℃，用四氢硼酸钠(0.073g，1.9mmol)分四份处理，并且在室温下搅拌30分钟。在60℃下加热反应混合物1.5小时，冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)和二氯甲烷(25mL)稀释，并且经硅藻土过滤。硅藻土用二氯甲烷洗涤并且滤液转移至分液漏斗中。分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩成残余物。粗残余物用甲醇稀释并且通过制备型LCMS(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需峰1非对映异构体(16mg，21％)和峰2非对映异构体(19mg，24％)。峰1(化合物310)：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.10(s,1H),7.89(s,1H),7.34(s,1H),6.21(q,J＝7.1Hz,1H),4.38-4.22(m,1H),3.93-3.80(m,1H),3.79-3.67(m,1H),3.65-3.55(m,1H),3.28-3.20(m,1H),2.54(s,3H),2.29(dd,J＝17.5,8.3Hz,1H),2.21(s,3H),1.70(d,J＝7.0Hz,3H),1.40(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₁H₂₆ClN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝429.2；实验值：429.2。峰2(化合物311)：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.11(s,1H),7.89(s,1H),7.33(s,1H),6.20(q,J＝7.1Hz,1H),4.38-4.22(m,1H),3.90-3.68(m,2H),3.65-3.56(m,1H),3.28-3.17(m,1H),2.54(s,3H),2.32(dd,J＝17.3,8.5Hz,1H),2.21(s,3H),1.69(d,J＝7.0Hz,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₁H₂₆ClN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝429.2；实验值：429.2。

实施例323.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈

步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-乙烯基苯甲腈

4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-碘苯甲腈(1.3g，3.6mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(740μL，4.3mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(100mg，0.20mmol)以及碳酸钾(1.5g，11mmol)于1,4-二噁烷(20mL)和水(10mL)中的混合物在80℃下加热过夜。冷却混合物至室温并且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。使用含乙酸乙酯的己烷(0-20％)在硅胶上纯化得到所需化合物，780mg，87％。C₁₃H₁₃ClNO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝250.1；实验值：250.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.78(s,1H),6.83(m,1H),6.10(m,1H),5.83(m,1H),3.84(m,2H),2.58(s,3H),1.22(m,3H)。

步骤2.[2-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯

添加0.2M四氧化锇的水溶液(0.5mL)至[(4-氯苯甲酰基)氧基]氨基甲酸叔丁酯(参考Lawrence Harris,J.Org.Chem,2011,76,358-372)(0.91g，3.3mmol)于乙腈(10mL)中的溶液中并且搅拌10分钟。添加4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-乙烯基苯甲腈(0.56g，2.2mmol)于乙腈(10mL)中的溶液至氨基甲酸酯溶液中，随后添加水(2mL)并且反应在室温下搅拌3小时。反应用饱和10M二亚硫酸二钾水溶液(12mL)淬灭并且搅拌5分钟。添加水并且反应混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤并且经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所需化合物，610mg，72％。C₁₈H₂₄ClN₂O₅的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝383.1；实验值：383.1。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.62(s,1H),7.03(br s,1H),5.68(br s,1H),3.96(m,1H),3.69(m,1H),3.31(m,1H),3.19(m,1H),2.60(s,3H),1.30(m,12H)。

步骤3.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈

[2-(3-乙酰基-5-氯-6-氰基-2-乙氧基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(290mg，0.76mmol)(来自步骤2的外消旋混合物)用4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(6.1mL)处理15分钟并且蒸发混合物。将残余物溶解于四氢呋喃(2.3mL)和N,N-二异丙基乙胺(0.66mL，3.8mmol)中。添加N,N-羰基二咪唑(250mg，1.5mmol)并且反应混合物在70℃下回流过夜。蒸发反应混合物。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所需化合物，110mg，47％。C₁₄H₁₄ClN₂O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝309.1；实验值：309.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.00(br s,1H),7.93(s,1H),5.99(m,1H),3.89(m,1H),3.81(m,2H),3.52(m,1H),2.58(s,3H),1.23(m,3H)。

步骤4.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈

在0℃下添加四氢硼酸钠(19mg，0.50mmol)至4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈(100mg，0.34mmol)(来自步骤3的外消旋混合物)于甲醇(1.6mL，38mmol)中的混合物中并且在室温下搅拌反应混合物10分钟并蒸发。残余物用乙酸乙酯稀释，用1N HCl、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到呈四种非对映异构体的混合物形式的所需化合物，58mg，55％。C₁₄H₁₆ClN₂O₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝311.1；实验值：311.1。

步骤5.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈

向6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈(58mg，0.19mmol)(来自步骤4的四种非对映异构体的混合物)、N,N-二甲基甲酰胺(36μL)于二氯甲烷(1mL)中的混合物中添加亚硫酰氯(40.μL，0.56mmol)并且在室温下搅拌混合物20分钟。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠、水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到呈四种非对映异构体的混合物形式的所需化合物，55mg，91％。C₁₄H₁₅Cl₂N₂O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝329.0；实验值：329.1。

步骤6.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈

添加碳酸铯(0.11g，0.34mmol)至3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(30mg，0.20mmol)(来自步骤5的四种非对映异构体的混合物)于N,N-二甲基甲酰胺(0.91mL)中的混合物中并且搅拌10分钟。向混合物中添加含6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(2-氧基-1,3-噁唑烷-5-基)苯甲腈(56mg，0.17mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)并且在90℃下搅拌反应1小时。通过制备型LCMS(pH10)使用RP-HPLC(XBridgeC18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)进行纯化得到作为以下的所需化合物：峰1(两种非对映异构体的外消旋混合物)：C₂₀H₂₁ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.1；实验值：442.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.17(s,1H),8.00(br s,1H),7.79(s,1H),6.25(m,1H),5.92(m,1H),3.90(m,3H),3.57(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)；峰2(2种非对映异构体的外消旋混合物)：

C₂₀H₂₁ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.1；实验值：442.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.12(s,1H),8.00(br s,1H),7.71(s,1H),6.23(m,1H),5.96(m,1H),3.85(m,3H),3.58(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)。

在18mL/min下使用含20％乙醇的己烷在Phenomenex Lux纤维素-1(21.2×250mm，5微米粒径)上对峰2(两种非对映异构体的外消旋混合物)进行手性纯化得到峰3和峰4。峰3，停留时间＝12.22分钟(单一对映异构体)：C₂₀H₂₁ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.1；实验值：442.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.12(s,1H),7.98(brs,1H),7.71(s,1H),6.23(m,1H),5.96(m,1H),3.85(m,3H),3.58(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)。峰4，停留时间＝16.25分钟(单一对映异构体)。C₂₀H₂₁ClN₇O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝442.1；实验值：442.1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.12(s,1H),7.98(br s,1H),7.71(s,1H),6.23(m,1H),5.96(m,1H),3.85(m,3H),3.58(m,1H),2.58(s,3H),1.75(m,3H),1.40(m,3H)。

实施例324.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮

步骤1.1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮

1-(3-溴-5-氯-2-甲氧基-4-甲基苯基)乙酮(2.6g，9.5mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(1.9mL，11mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(400mg，0.5mmol)以及碳酸钾(4.0g，29mmol)于1,4-二噁烷(60mL)和水(30mL)中的混合物。在80℃下加热所得混合物3小时。冷却混合物至室温并且用乙酸乙酯萃取。使用含乙酸乙酯的己烷(0-20％)在硅胶上纯化得到所需化合物，2.0g，94％。C₁₂H₁₄ClO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝225.1；实验值：225.1。

步骤2.[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯

添加0.2M四氧化锇的水溶液(1mL)至[(4-氯苯甲酰基)氧基]氨基甲酸叔丁酯(2.0g，7.2mmol)(参考Lawrence Harris,J.Org.Chem,2011,76,358-372)于乙腈(22mL)中的溶液中并且搅拌10分钟。添加1-(5-氯-2-甲氧基-4-甲基-3-乙烯基苯基)乙酮(1.1g，4.8mmol)于乙腈(22mL)中的溶液至氨基甲酸酯溶液中，随后添加水(5mL)。在室温下搅拌反应3小时。反应用饱和10M二亚硫酸二钾水溶液(25mL)淬灭并且搅拌5分钟。添加水至反应中并且混合物用乙酸乙酯萃取。有机萃取物用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在减压下蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所需化合物，1.2g，69％。C₁₇H₂₄ClNO₅Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝380.1；实验值：380.1。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ7.48(s,1H),6.80(m,1H),5.50(br s,1H),5.20(br s,1H),3.83(s,3H),3.32(m,1H),3.22(m,1H),2.59(s,3H),2.55(s,3H),1.32(s,9H)。

使用含8％乙醇的己烷在流速18mL/min下在ChiralPakAD-H(20×250mm，ChiralTechnologies，5微米粒径)上进行手性纯化得到峰1(单一对映异构体)(停留时间＝9.86分钟)和峰2(单一对映异构体)(停留时间＝11.47分钟)。

步骤3.N-[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]-2-氯乙酰胺

[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.47mmol)(来自步骤2的峰1)用4.0M氯化氢的1,4-二噁烷溶液(12mL)处理15分钟。蒸发溶剂，添加二氯甲烷(6mL)和三乙胺(200μL，1.4mmol)并且冷却混合物至0℃。缓慢添加氯乙酰氯(45μL，0.56mmol)并且在0℃下搅拌10分钟。蒸发溶剂至干燥。添加水并且混合物用乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且浓缩得到呈单一对映异构体形式的粗残余物。C₁₄H₁₇Cl₂NO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝356.1；实验值：356.1。

步骤4.6-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吗啉-3-酮

向N-[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]-2-氯乙酰胺(170mg，0.50mmol)(来自步骤3的单一对映异构体)于四氢呋喃(4mL)中的在0℃下冷却的溶液中添加氢化钠(于矿物油中的60％分散液；39mg，1.0mmol)的混合物并且搅拌1小时。反应用水淬灭并且用乙酸乙酯萃取。合并的萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且浓缩得到呈单一对映异构体形式的粗残余物，61mg，41％。C₁₄H₁₇ClNO₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝298.1；实验值：298.1。

步骤5.6-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮

在0℃下向6-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)吗啉-3-酮(27mg，0.090mmol)(来自步骤4的单一对映异构体)于甲醇(2mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(6.8mg，0.18mmol)并且搅拌1小时。通过制备型LCMS(pH10)纯化得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所需化合物，20mg，76％。C₁₄H₁₇ClNO₃的LCMS计算值：(M-OH)⁺:m/z＝282.1；实验值：282.1。

步骤6.6-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮

在室温下搅拌亚硫酰氯(15μL，0.21mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(10.0μL)的混合物10分钟。添加6-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮(19.0mg，0.0634mmol)(来自步骤5的两种非对映异构体的外消旋混合物)于二氯甲烷(1.0mL)中的溶液并且混合物在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠、水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所需化合物，19mg，94％。C₁₄H₁₇ClNO₃的LCMS计算值：(M-Cl)⁺:m/z＝282.1；实验值：282.1。

步骤7.6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮

在140℃下加热6-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]吗啉-3-酮(19.0mg，0.0597mmol)(来自步骤6的两种非对映异构体的外消旋混合物)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(11mg，0.072mmol)、碳酸铯(29mg，0.090mmol)以及碘化钾(0.99mg，0.006mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.19mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，用水洗涤，浓缩并且通过制备型LCMS(pH10)使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)进行纯化得到2.5mg，10％的峰1(单一对映异构体，停留时间10.15分钟)：C₂₀H₂₄ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝431.2；实验值：431.1，和2.7mg，10％的峰2(单一对映异构体，停留时间10.76分钟)：C₂₀H₂₄ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝431.2；实验值：431.1。

实施例325.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮

步骤1.5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮

向[2-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.40mmol)(峰1，来自实施例324，步骤2的单一对映异构体)于四氢呋喃(2.5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)和N,N-羰基二咪唑(130mg，0.80mmol)。使反应在70℃下回流10分钟。蒸发反应物至干燥。使用含(0-50％)乙酸乙酯的己烷在硅胶上纯化得到呈单一对映异构体形式的所需化合物，78mg，69％。C₁₃H₁₅ClNO₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝284.1；实验值：284.1。

步骤2.5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮

在0℃下向5-(3-乙酰基-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮(21mg，0.072mmol)(来自步骤1的单一对映异构体)于甲醇(1mL)中的溶液中添加四氢硼酸钠(5.5mg，0.14mmol)。在0℃下搅拌混合物1小时。其用甲醇稀释并且使用pH10缓冲液经制备型LCMS纯化得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所需化合物，17mg，83％。C₁₃H₁₅ClNO₃的LCMS计算值：(M-OH)⁺:m/z＝268.1；实验值：268.1。

步骤3.5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮

在室温下搅拌氰脲酰氯(16mg，0.084mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(15μL)的混合物10分钟。添加5-[3-氯-5-(1-羟乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(16mg，0.056mmol)(来自步骤2的两种非对映异构体的外消旋混合物)于二氯甲烷(0.3mL)中的溶液并且反应在室温下搅拌过夜。添加亚硫酰氯(12μL，0.17mmol)并且搅拌10分钟。混合物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠、水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所需化合物，17mg，100％。C₁₃H₁₆Cl₂NO₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝304.0；实验值：304.1。

步骤4.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮

在140℃下加热5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(17mg，0.056mmol)(来自步骤3的两种非对映异构体的外消旋混合物)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(10mg，0.067mmol)、碳酸铯(27mg，0.084mmol)以及碘化钾(0.93mg，0.0056mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(0.18mL)中的混合物1小时。混合物用乙醚稀释，用水洗涤，浓缩并且通过制备型LCMS(pH10)纯化得到呈两种非对映异构体的外消旋混合物形式的所需化合物，2.2mg，9％；C₁₉H₂₂ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝417.1；实验值：417.1。

实施例345-348.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体

步骤1.1-(5-氯-2-乙氧基-3-碘-4-甲基苯基)乙醇

1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(20.0g，58.4mmol；实施例212，步骤1)和1,2-乙烷二醇(6.5mL，120mmol)于甲苯(190mL)中的溶液用对甲苯磺酸一水合物(1.1g，5.8mmol)处理。向烧瓶配备填充有筛的迪安-斯达克分水器(Dean-Stark trap)，并且回流3小时。冷却反应混合物并且添加至冰冷饱和碳酸氢钠溶液(250mL)中并用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到粗橙色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-20％)纯化得到所需产物(22g，99％)。C₁₂H₁₄ClFIO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝387.0；实验值：386.9。

步骤2.(2E)-3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]丙烯酸乙酯

将2-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)-2-甲基-1,3-二氧戊环(22g，58mmol)(来自步骤1)、(2E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)丙烯酸乙酯(16mL，70mmol)以及碳酸钾(24g，170mmol)于1,4-二噁烷(230mL)和水(110mL)中的混合物用氮气脱气10分钟。反应混合物用[1,1'-双(二苯基膦基\)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(2.4g，2.9mmol)处理，用氮气再脱气10分钟，并且在80℃下加热2小时。反应混合物经硅藻土过滤并且用乙酸乙酯(300mL)洗涤。滤液倒入水(400mL)中。分离水层并且再用乙酸乙酯(300mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到粗制棕色固体。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到所需产物(20g，96％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.74(d,J＝16.5Hz,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,1H),6.70(dd,J＝16.5,0.9Hz,1H),4.26(q,J＝7.1Hz,2H),4.10-3.99(m,2H),3.91(q,J＝7.0Hz,2H),3.87-3.76(m,2H),1.73(s,3H),1.44(t,J＝7.0Hz,3H),1.33(t,J＝7.1Hz,3H)。C₁₇H₂₁ClFO₅的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝359.1；实验值：359.1。

步骤3.3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]-4-硝基丁酸乙酯

(2E)-3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基\)苯基]丙烯酸乙酯(10g，28mmol)(来自步骤2)于硝基甲烷(100mL)中的溶液用1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(4.6mL，31mmol)处理并且在60℃下搅拌15小时。反应混合物倒入水(400mL)中并且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩成粗制橙色油状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙酸乙酯的己烷(0％-30％)纯化得到呈对映异构体的混合物形式的所需产物(10.4g，89％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.52(d,J＝9.1Hz,1H),4.82(ddd,J＝12.5,7.6,1.4Hz,1H),4.68(dd,J＝12.5,7.2Hz,1H),4.54-4.40(m,1H),4.15-3.90(m,6H),3.89-3.75(m,2H),2.85(ddd,J＝16.0,8.6,1.4Hz,1H),2.73(dd,J＝16.1,6.2Hz,1H),1.70(s,3H),1.47(t,J＝7.0Hz,3H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H)。C₁₈H₂₄ClFNO₇的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝420.1；实验值：420.1。

步骤4.4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]吡咯烷-2-酮的对映异构体

使3-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]-4-硝基丁酸乙酯(1.0g，2.4mmol)(来自步骤3)于乙醇(16mL)中的悬浮液升温以溶解固体。使溶液冷却回环境温度，用氮气脱气，并且用2800雷尼镍(Raney Nickel)于水中的浆料(1.5mL)处理。反应混合物用氮气再次脱气并且用氢气球氢化3小时。反应混合物经硅藻土过滤并且浓缩得到中间体氨基酯(0.93g，100％)。将中间体氨基酯溶解于甲苯(12mL)中并且在110℃下加热12小时。冷却反应混合物至环境温度，此时有固体自溶液沉淀。冷却此混合物至0℃，搅拌30分钟，过滤，用冷甲苯洗涤，并且干燥得到呈对映异构体的混合物形式的所需产物(0.61g，75％)。C₁₆H₂₀ClFNO₄的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝344.1；实验值：344.1。对映异构体的混合物通过手性HPLC分离得到作为峰1和峰2的个别对映异构体(RT分别＝5.39分钟和7.01分钟；Phenomenex Lux纤维素C-1，21.2×250mm，5微米粒径，用含20％乙醇的己烷在18mL/min下洗脱)。

步骤5.4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮的对映异构体

来自步骤4的经分离的对映异构体各自单独处理成最终化合物。4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯基]吡咯烷-2-酮(1.7g，5.0mmol)(来自步骤4)于甲醇(17mL)中的溶液用6.0M氯化氢的水溶液(11mL，69mmol)逐滴处理并且在20℃下搅拌30分钟。逐滴添加反应混合物至冰冷饱和碳酸氢钠溶液(75ml)中并且用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到所需产物[来自峰1(1.5g，99％)；来自峰2(1.5g，99％)]，其不经进一步纯化即使用。来自峰1：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.84(s,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,1H),4.16-3.99(m,1H),3.83(q,J＝7.0Hz,2H),3.65-3.54(m,1H),3.30-3.23(m,1H),2.55(s,3H),2.33(dd,J＝16.8,8.4Hz,1H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₄H₁₆ClFNO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝300.1；实验值：300.0。来自峰2：¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.84(s,1H),7.70(d,J＝8.6Hz,1H),4.13-4.00(m,1H),3.87-3.77(m,2H),3.65-3.55(m,1H),3.31-3.23(m,1H),2.55(s,3H),2.32(ddd,J＝16.9,8.4,1.6Hz,1H),1.30(t,J＝7.0Hz,3H)。C₁₄H₁₆ClFNO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝300.1；实验值：300.1。

步骤6.4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]吡咯烷-2-酮的非对映异构体

来自步骤5的对映异构体各自单独处理成最终产物。在0℃下在氮气气氛下用四氢硼酸钠(0.10g，2.7mmol)处理4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(0.402g，1.34mmol)(来自步骤5)于无水甲醇(6.7mL)中的溶液并且在0℃下搅拌30分钟。反应混合物在0℃下用水淬灭并且在搅拌下倒入水(50mL)/乙酸乙酯(100mL)中。使混合物升温至环境温度并且分离水层并再用乙酸乙酯(50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到白色泡沫状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙腈(含有7％甲醇)的二氯甲烷(0％-100％)纯化得到呈非对映异构体的混合物形式的所需产物[来自峰1(0.40g，99％)；来自峰2(0.40g，99％)]。来自峰1：C₁₄H₁₈ClFNO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝302.1；实验值：302.0。来自峰2：C₁₄H₁₈ClFNO₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝302.1；实验值：302.1。

步骤7.4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]吡咯烷-2-酮的非对映异构体

来自步骤6的非对映异构体的混合物各自单独处理成最终产物。4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]吡咯烷-2-酮(0.41g，1.4mmol)(来自步骤6)于二氯甲烷(12mL)中的溶液依次用N,N-二甲基甲酰胺(0.011mL，0.14mmol)和亚硫酰氯(0.21mL，2.9mmol)逐滴处理并且在20℃下搅拌30分钟。逐滴添加反应混合物至冰冷饱和碳酸氢钠溶液中并且用二氯甲烷萃取。分离有机层并且用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到所需产物[来自峰1(0.38g，87％)；来自峰2(0.39g，89％)]和由氯化物消除形成的17％-18％的苯乙烯。这些混合物不经进一步纯化即使用。来自峰1：C₁₄H₁₇Cl₂FNO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝320.1；实验值：320.0。来自峰2：C₁₄H₁₇Cl₂FNO₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝320.1；实验值：320.0。

步骤8.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮的非对映异构体

来自步骤7的非对映异构体的混合物各自单独处理成最终产物。在100℃下加热4-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]吡咯烷-2-酮(0.36g，1.1mmol)(来自步骤7)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.19g，1.3mmol)、碳酸铯(0.54g，1.7mmol)以及碘化钾(18mg，0.11mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(7.4mL)中的混合物4.5小时。反应混合物倒入水(30ml)中并且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取得到非对映异构体((S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮；以及(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮)的混合物。非对映异构体的混合物通过制备型LCMS(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速60mL/min下洗脱)纯化得到所需产物[自峰1分离出峰A(化合物345)(0.13g，54％)和峰B(化合物346)(0.11g，46％)；自峰2分离出峰A(化合物347)(0.15g，63％)和峰B(化合物348)(0.14g，55％)]。化合物346：¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.12(s,1H),7.82(s,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(br s,1H),6.23(q,J＝7.0Hz,1H),4.05-3.90(m,1H),3.88-3.78(m,2H),3.63-3.53(m,1H),3.29-3.20(m,1H),2.54(s,3H),2.38-2.21(m,1H),1.70(d,J＝7.1Hz,3H),1.39(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClFN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝433.2；实验值：433.1。化合物347：¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.12(s,1H),7.77(s,1H),7.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.26(br s,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.04-3.94(m,1H),3.93-3.85(m,1H),3.84-3.77(m,1H),3.61-3.53(m,1H),3.27-3.22(m,1H),2.54(s,3H),2.30(dd,J＝18.1,8.6Hz,1H),1.71(d,J＝7.1Hz,3H),1.40(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₀H₂₃ClFN₆O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝433.2；实验值：433.1。

实施例349-352.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体

步骤1.4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈的对映异构体

在80℃下搅拌4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮(0.20g，0.67mmol)(来自实施例345，步骤5)和氰化钠(0.057g，1.2mmol)于二甲亚砜(1.5mL)中的外消旋混合物3小时。反应混合物倒入水(35mL)中并且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到粗残余物。粗物质通过快速柱色谱法使用含乙醚(含有10％甲醇)的己烷(0％-100％)纯化得到呈对映异构体的混合物形式的所需产物(0.15g，71％)。C₁₅H₁₆ClN₂O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝307.1；实验值：307.0。对映异构体的混合物通过手性HPLC分离得到作为峰1和峰2的个别对映异构体(RT＝5.00分钟和10.4分钟；Phenomenex Lux纤维素C-2，21.2×250mm，5微米粒径，用含60％乙醇的己烷在18mL/min下洗脱)。

步骤2.6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体

来自步骤1的对映异构体各自单独处理成最终产物。在0℃下在氮气气氛下用四氢硼酸钠(0.20g，5.4mmol)处理4-乙酰基-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈(来自峰1：0.83g，2.7mmol；来自峰2：0.86g，2.8mmol)于无水甲醇(14mL)中的溶液并且在0℃下搅拌30分钟。反应混合物在0℃下用水淬灭并且在搅拌下倒入水(50mL)/乙酸乙酯(100mL)中。使混合物升温至环境温度并且分离水层并再用乙酸乙酯(50mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到呈非对映异构体的混合物形式的所需产物[来自峰1(0.83g，99％)；来自峰2(0.87g，99％)]。来自峰1：C₁₅H₁₈ClN₂O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝309.1；实验值：309.1。来自峰2：C₁₅H₁₈ClN₂O₃的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝309.1；实验值：309.1。

步骤3.6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体

来自步骤2的非对映异构体的混合物各自单独处理成最终产物。6-氯-3-乙氧基-4-(1-羟乙基)-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈(来自峰1：0.83g，2.7mmol；来自峰2：0.87g，2.8mmol)于二氯甲烷(23mL)中的溶液依次用N,N-二甲基甲酰胺(0.021mL，0.27mmol)和亚硫酰氯(0.490mL，6.72mmol)逐滴处理并且在20℃下搅拌2小时。逐滴添加反应混合物至冰冷饱和碳酸氢钠溶液中并且用二氯甲烷萃取。分离有机层并且用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到呈非对映异构体的混合物形式的所需产物[来自峰1(0.85g，97％)；来自峰2(0.90g，98％)]。这些混合物不经进一步纯化即使用。来自峰1：C₁₅H₁₇Cl₂N₂O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝327.1；实验值：327.1。来自峰2：C₁₅H₁₇Cl₂N₂O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝327.1；实验值：327.1。

步骤4.4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈的非对映异构体

来自步骤3的非对映异构体的混合物各自单独处理。在90℃下加热6-氯-4-(1-氯乙基)-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈(来自峰1：0.85g，2.6mmol；来自峰2：0.89g，2.7mmol)、3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(0.46g，3.1mmol)、碳酸铯(1.3g，3.9mmol)以及碘化钾(43mg，0.26mmol)于N,N-二甲基甲酰胺(17mL，220mmol)中的混合物3小时。反应混合物倒入水(100mL)/乙酸乙酯(100mL)中并且经硅藻土过滤以移除黑色固体。分离水层并且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并且浓缩得到白色泡沫状物。粗物质通过快速柱色谱法使用含甲醇的二氯甲烷(0％-20％)纯化得到呈非对映异构体的混合物形式的所需产物[来自峰1(0.49g，43％)；来自峰2(0.53g，44％)]。对来自峰1的非对映异构体进行的分析型手性HPLC分析揭示归因于差向异构存在四个峰而非所需两个峰的混合物。对来自峰2的非对映异构体进行的分析亦揭示四个峰。合并所述两组混合物并且经由手性HPLC纯化得到四个单独峰(RT＝6.41分钟、8.13分钟、9.93分钟、14.4分钟；Phenomenex Lux纤维素C-2，21.2×250mm，5微米粒径，用含60％乙醇的己烷在18mL/min下洗脱)。接着在实施例A3和B2的分析中测试峰1(化合物351)、峰2(化合物349)、峰3(化合物352)和峰4(化合物350)的化合物。化合物349：¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.12(s,1H),7.88(s,1H),7.58(s,1H),7.30(br s,2H),6.26(q,J＝7.0Hz,1H),4.32-4.20(m,1H),4.00-3.91(m,1H),3.90-3.81(m,1H),3.65-3.59(m,1H),3.49-3.42(m,1H),2.55(s,3H),1.74(d,J＝7.0Hz,3H),1.43(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₁H₂₃ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝440.2；实验值：440.2。化合物352：¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ8.12(s,1H),7.88(s,1H),7.56(s,1H),7.30(br s,2H),6.26(q,J＝7.0Hz,1H),4.32-4.19(m,1H),3.97-3.82(m,2H),3.67-3.59(m,1H),3.49-3.40(m,1H),2.59-2.52(m,3H),1.73(d,J＝7.0Hz,3H),1.42(t,J＝6.9Hz,3H)。C₂₁H₂₃ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝440.2；实验值：440.2。

实施例353和354.4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮的非对映异构体

步骤1：1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-乙烯基苯基)乙酮

在80℃下加热1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-碘苯基)乙酮(13.3g，38.8mmol)(来自实施例139，步骤1)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二噁硼烷(7.9mL，46mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(1.0g，1.0mmol)以及碳酸钾(16g，120mmol)于1,4-二噁烷(200mL)和水(100mL)中的混合物2小时。冷却混合物至室温并且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。使用含乙酸乙酯的己烷(0-30％)在硅胶上纯化得到所需化合物，7.0g，74％。C₁₂H₁₃ClFO₂的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝243.0；实验值：243.1。

步骤2：1-[5-氯-3-(1,2-二羟乙基)-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮

将AD-混合物-α(5.8g，7.3mmol)(Aldrich#392758)与水(21mL)一起于叔丁醇(21mL)中搅拌15分钟。添加1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-乙烯基苯基)乙酮(1.0g，4.1mmol)(来自步骤1)并且搅拌悬浮液16小时。添加亚硫酸钠(6.2g，49mmol)并且搅拌悬浮液15分钟。反应混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤并且经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-80％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所需化合物，900mg，80％。使用含20％乙醇的己烷在流速18mL/min下在Phenomenex Lux纤维素C-2(21.2×250mm，ChiralTechnologies，5微米粒径)上进行手性纯化得到峰1(单一对映异构体)(停留时间＝7.88分钟)和峰2(单一对映异构体)(停留时间＝11分钟)；所需对映异构体为峰2。C₁₂H₁₃ClFO₃的LCMS计算值：(M-OH)⁺:m/z＝259.1；实验值：259.1。

步骤3：1-[3-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-1-羟乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮

将1-[5-氯-3-(1,2-二羟乙基)-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(700mg，2mmol)(来自步骤2，峰2)与N,N-二异丙基乙胺(4.0mL，23mmol)一起于1,2-二氯乙烷(6mL)中搅拌并且添加1.0M叔丁基二甲基硅烷基氯的1,2-二氯乙烷溶液(7.6mL)。加热混合物至80℃维持3小时并且冷却至室温。蒸发并使用含乙酸乙酯的己烷(0-50％)在硅胶上纯化得到所需化合物，800mg，80％。C₁₈H₂₈ClFO₄SiNa的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝413.1；实验值：413.1。

步骤4：甲烷磺酸1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙酯

在室温下将1-[3-(2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}-1-羟乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(700mg，2.0mmol)(来自步骤3)与三乙胺(2.0mL，14mmol)和甲烷磺酸酐(670mg，3.8mmol)一起于1,2-二氯乙烷(15mL)中搅拌1.5小时。混合物倒入盐水中并且用二氯甲烷萃取。萃取物经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发得到所需化合物，830mg，100％。C₁₈H₂₇ClFO₃Si的LCMS计算值：(M-OMs)⁺:m/z＝373.1；实验值：373.1。

步骤5：1-[3-(1-迭氮基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮

将甲烷磺酸1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙酯(0.83g，1.77mmol)(来自步骤4)于二甲亚砜(10mL)中搅拌并且添加迭氮化钠(0.12g，1.8mmol)。加热混合物至50℃维持1小时并且冷却至室温。混合物倒入盐水中并且用乙酸乙酯萃取。萃取物经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发得到所需化合物，736mg，100％。C₁₈H₂₇ClFN₃O₃SiNa的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝438.1；实验值：438.1。

步骤6：1-[3-(1-氨基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮

将1-[3-(1-迭氮基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(750mg，1.8mmol)(来自步骤5)与水(0.33mL)一起于四氢呋喃(10mL)中搅拌并且添加三苯膦。加热混合物至60℃维持2小时并且冷却至室温。添加盐水并且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发得到所需化合物，700mg，100％。C₁₈H₃₀ClFNO₃Si的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝390.2；实验值：390.2。

步骤7：(1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)氨基甲酸叔丁酯

将1-[3-(1-氨基-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)-5-氯-2-乙氧基-4-氟苯基]乙酮(700mg，2.0mmol)(来自步骤6)与二碳酸二-叔丁酯(780mg，3.6mmol)一起于四氢呋喃(30mL)中搅拌并且添加N,N-二异丙基乙胺(0.94mL，5.4mmol)。在室温下搅拌混合物30分钟。添加盐水并且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-30％)在硅胶上纯化得到所需化合物，550mg，60％。C₂₃H₃₇ClFNO₅SiNa的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝512.2；实验值：512.2。

步骤8：[1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯

将(1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-{[叔丁基(二甲基)硅烷基]氧基}乙基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.0mmol)(来自步骤7)于四氢呋喃(10mL)中搅拌并且添加1.0M氟化四正丁基铵的四氢呋喃溶液(1.5mL)。在室温下搅拌混合物30分钟并且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-50％)在硅胶上纯化得到所需化合物，238mg，60％。C₁₇H₂₃ClFNO₅Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝398.1；实验值：398.1。

步骤9：4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮

将[1-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯(234mg，0.62mmol)(来自步骤8)溶解于1,2-二氯乙烷(12mL)中并且添加2.0M光气的甲苯溶液(0.93mL)。加热混合物至80℃维持1.5小时。蒸发并使用含乙酸乙酯的己烷(0-85％)在硅胶上纯化得到所需化合物，175mg，93％。C₁₃H₁₄ClFNO₄的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝302.1；实验值：302.1。

步骤10：4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮

在0℃下将4-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-1,3-噁唑烷-2-酮(175mg，0.58mmol)于甲醇(10mL)中搅拌并且添加四氢硼酸钠(33mg，0.87mmol)。在室温下搅拌混合物1小时并且蒸发。添加水并且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发得到非对映异构体的约1:1混合物，175mg，99％。C₁₃H₁₅ClFNO₄Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝326.1；实验值：326.1。

步骤11：4-[3-氯-5-(氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮

将4-[3-氯-6-乙氧基-2-氟-5-(1-羟乙基)苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(150mg，0.49mmol)(来自步骤10)与N,N-二甲基甲酰胺(96μL)一起于二氯甲烷(4mL)中搅拌并且添加亚硫酰氯(110μL，1.5mmol)。蒸发混合物。添加水并且混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发得到所需化合物，159mg，100％。

步骤12：4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮

将4-[3-氯-5-(氯乙基)-6-乙氧基-2-氟苯基]-1,3-噁唑烷-2-酮(160mg，0.50mmol)(来自步骤11)与碳酸铯(324mg，0.99mmol)一起于N,N-二甲基甲酰胺(21mL)中搅拌并且添加3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(89mg，0.60mmol)。加热混合物至80℃维持1.5小时并且冷却至室温。混合物用水稀释并且用乙酸乙酯萃取。萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。通过制备型LCMS(pH10)使用RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化分离出两种非对映异构体(峰1[化合物353]Rt＝4.9分钟和峰2[化合物354]Rt＝5.6分钟)；从而提供呈所需单一对映异构体形式的化合物354，28mg，13％。峰2：C₁₉H₂₁ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝435.1；实验值：435.1。¹H NMR(300MHz,CD₃OD):δ8.15(s,1H),7.62(m,1H),6.31(m,1H),5.39(m,1H),4.79(m,1H),4.40(m,1H),3.95(m,1H),3.80(m,1H),2.60(s,3H),1.80(m,3H),1.40(m,3H)。

实施例355-358.5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮的非对映异构体

步骤1：[2-(3-乙酰基-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)-2-羟乙基]氨基甲酸叔丁酯

添加0.2M四氧化锇的水溶液(10mL)至[(4-氯苯甲酰基)氧基]氨基甲酸叔丁酯(Lawrence Harris,J.Org.Chem,2011,76,358-372)(19g，70mmol)于乙腈(210mL)中的溶液中并且搅拌10分钟。添加1-(5-氯-2-乙氧基-4-氟-3-乙烯基苯基)乙酮(11.2g，46mmol)(来自实施例353，步骤1)于乙腈(210mL)中的溶液至氨基甲酸酯溶液中，随后添加水(50mL)并且在室温下搅拌反应3小时。反应用饱和10M二亚硫酸二钾水溶液(240mL)淬灭并且搅拌5分钟。添加水并且反应混合物用乙酸乙酯萃取。萃取物用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤并且经硫酸钠干燥，过滤并且蒸发。使用含乙酸乙酯的己烷(0-100％)在硅胶上纯化得到呈外消旋混合物形式的所需化合物，16.6g，95％。C₁₇H₂₃ClFNO₅Na的LCMS计算值：(M+Na)⁺:m/z＝398.1；实验值：398.0。

步骤2：5-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1,3-噁唑烷-2-酮

使用与实施例353(步骤8-12)相同的程序制备所需单一对映异构体(峰3)，例外之处为来自此实施例中的步骤1的中间体为外消旋物并且因此在步骤12中进行四种非对映异构体的最终分离。使用含30％乙醇的己烷在流速18mL/min下在Phenomenex Lux纤维素C-4(21×250mm，Chiral Technologies，5微米粒径)上进行手性纯化得到峰1：化合物355(单一对映异构体)(停留时间＝12.7分钟)，峰2：化合物356(单一对映异构体)(停留时间＝14.2分钟)，峰3：化合物357(单一对映异构体)(停留时间＝20.3分钟)，和峰4：化合物358(单一对映异构体)(停留时间＝28.9分钟)；活性最大的对映异构体为峰3。C₁₉H₂₁ClFN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝435.1；实验值：435.1。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ8.15(s,1H),7.81(s,1H),7.71(d,1H),7.26(bs,1H),6.23(m,1H),5.84(t,1H),3.92(m,1H),3.83(m,1H),2.52(s,3H),1.75(d,3H),1.40(m,3H)。

实施例359.5-(3-{1-[4-氨基-5-氧基-6-(1H-吡唑-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

步骤1.4-氨基-6-碘吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮

向4-氨基吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(来自VWR，0.48g，3.0mmol)于DMF(8mL)中的悬浮液中添加N-碘丁二酰亚胺(0.80g，3.6mmol)。所得混合物在环境温度下搅拌过夜。过滤反应混合物并且用乙酸乙酯洗涤得到呈黄色固体状的所需产物(0.81g，95％)。C₇H₆IN₄O的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝289.0；实验值：289.0。

步骤2.5-{3-[1-(4-氨基-6-碘-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

向4-氨基-6-碘吡啶并[2,3-d]嘧啶-5(8H)-酮(255mg，0.885mmol)、碳酸铯(0.43g，1.3mmol)以及碘化钾(14.7mg，0.0885mmol)于DMF(9.4mL)中的混合物中添加5-[3-氯-5-(1-氯乙基)-6-甲氧基-2-甲基苯基]-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(325mg，0.885mmol)(来自实施例25步骤1)并且在140℃下搅拌混合物1小时。混合物用甲醇稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需化合物(221mg，40％)。C₂₅H₂₅ClIN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝619.1；实验值：619.0。

步骤3.5-(3-{1-[4-氨基-5-氧基-6-(1H-吡唑-4-基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基]乙基}-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基)-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺

将5-{3-[1-(4-氨基-6-碘-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(10.3mg，0.0166mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑(3.5mg，0.018mmol)、碳酸钠(3.5mg，0.033mmol)以及[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(II)与二氯甲烷的络合物(1:1)(1.6mg，0.0020mmol)于乙腈(0.1mL)/水(0.03mL)中的混合物用N₂脱气并且在90℃下搅拌2.0小时。混合物用甲醇稀释并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.1％氢氧化铵的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到所需产物(2.7mg，30％)。C₂₈H₂₈ClN₈O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝559.2；实验值：559.2。

实施例360.5-{3-[1-(4-氨基-6-甲基-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺双(三氟乙酸盐)

向微波小瓶中装入含5-{3-[1-(4-氨基-6-碘-5-氧基吡啶并[2,3-d]嘧啶-8(5H)-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}-N,N-二甲基吡啶-2-甲酰胺(24.0mg，0.0388mmol)、三氟(甲基)硼酸钾(9.4mg，0.078mmol)、乙酸钯(2.1mg，0.0094mmol)、二环己基(2',6'-二异丙氧基联苯-2-基)膦(8.7mg，0.019mmol)以及碳酸铯(38mg，0.12mmol)的甲苯(0.5mL)和水(0.06mL)。将反应小瓶在高真空下抽空并且用N₂回填。反应混合物在100℃下加热过夜。混合物用甲醇稀释，过滤并且经RP-HPLC(XBridge C18柱，用乙腈/含有0.05％三氟乙酸的水的梯度在流速30mL/min下洗脱)纯化得到呈双TFA盐形式的所需产物(3.0mg，15％)。C₂₆H₂₈ClN₆O₃的LCMS计算值：(M+H)⁺:m/z＝507.2；实验值：507.0。

实施例361-363.4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-(2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈的对映异构体

基于实施例269的立体化学，相信每个对映异构体的立体化学是4-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((S)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈(实施例361)、4-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((R)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈(实施例362)以及4-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氯-2-(1-((R)-2-羟丙基)氮杂环丁烷-3-基)-3-甲氧基苯甲腈(实施例363)(以下展示的结构)

实施例361的合成：

向(R)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(6.00g，14.3mmol)添加甲醇(72mL)。在室温下向所得悬浮液添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(2.01mL，28.6mmol)并且在室温下搅拌混合物19小时。再添加(S)-(-)-甲基环氧乙烷(0.50mL，7.2mmol)并且再继续搅拌1小时。向反应混合物添加水(280mL)并且搅拌浑浊溶液。用二氯甲烷(300mL×4)萃取混合物。合并有机层并用盐水(50mL)洗涤并浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法用含MeOH(含有约0.5％氢氧化铵)的二氯甲烷洗脱纯化。收集含有产物的洗脱份并蒸发至干燥。此残余物进一步通过制备型HPLC纯化得到标题化合物。通过NMR光谱法和质谱法分析标题化合物的样品并且得到以下数据。¹HNMR(500MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.30(br s,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.32(br s,1H),4.07(m,1H),3.94(m,2H),3.65(s,3H),3.59(m,1H),3.08(m,2H),2.56(s,3H),2.38–2.19(m,2H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。C₂₂H₂₇ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.2。

实施例362的合成：

向(S)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(293.0mg，0.73mmol)添加甲醇(3.7mL)。在室温下向所得悬浮液添加(R)-(+)-甲基环氧乙烷(103μL，1.46mmol)并且在室温下搅拌混合物19小时。再添加(R)-(+)-甲基环氧乙烷(51.3μL，0.73mmol)并且再继续搅拌2.5小时。向反应混合物添加水(14mL)并且搅拌浑浊溶液。用二氯甲烷(4×16mL)萃取混合物。合并有机层并用盐水(50mL)洗涤并浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法用含MeOH(含有约0.5％氢氧化铵)的二氯甲烷洗脱纯化。收集含有产物的洗脱份并蒸发至干燥。此残余物进一步通过制备型HPLC纯化得到标题化合物。通过NMR光谱法和质谱法分析标题化合物的样品并且得到以下数据。¹HNMR(500MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.47(s,1H),7.30(br s,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.37(br s,1H),4.09(m,2H),3.93(m,2H),3.65(s,3H),3.59(m,1H),3.12(m,2H),2.56(s,3H),2.39–2.26(m,2H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。C₂₂H₂₇ClN₇O₂的LCMS：(M+H)⁺:m/z＝456.2；实验值：456.2。

实施例363的合成：

向(R)-4-(1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-2-(氮杂环丁烷-3-基)-6-氯-3-甲氧基苯甲腈(6.0g，14.3mmol)添加甲醇(72mL)。在室温下向所得悬浮液添加(R)-(+)-甲基环氧乙烷(2.01mL，28.6mmol)并且在室温下搅拌混合物18小时。向反应混合物添加水(280mL)并且搅拌浑浊溶液。用二氯甲烷(300mL×4)萃取混合物。合并有机层并用盐水(50mL)洗涤并浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法用含MeOH(含有约0.5％氢氧化铵)的二氯甲烷洗脱纯化。收集含有产物的洗脱份并蒸发至干燥。此残余物进一步通过制备型HPLC纯化得到标题化合物。通过NMR光谱法和质谱法分析标题化合物的样品并且得到以下数据。¹H NMR(500MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),7.46(s,1H),7.29(br s,2H),6.24(q,J＝7.0Hz,1H),4.31(d,J＝4.2Hz,1H),4.11–4.00(m,1H),3.98–3.90(m,1H),3.65(s,3H),3.61–3.53(m,2H),3.07(m,2H),2.56(s,3H),2.28(d,J＝5.9Hz,2H),1.73(d,J＝7.1Hz,3H),1.00(d,J＝6.2Hz,3H)ppm。

开发三种HPLC方法以从实施例269的化合物中分离立体异构体。方法A开发来从实施例269分离非对映异构体实施例361。实施例361与实施例269的停留时间分别为15.7分钟和11.5分钟。色谱条件描述于表B1。

表B1

柱	Phenomenex纤维素3(250mm，4.6mm，5微米)
		流动相	89.9％己烷/10％乙醇/0.1％二乙胺(预混合)
流速	1mL/min
		运行时间	30min
检测波长	247nm
		定量	峰面积比率

方法B开发来从实施例269分离非对映异构体实施例362。实施例362与实施例269的停留时间分别为26.4分钟和21.7分钟。色谱条件描述于表B2。

表B2

柱	Phenomenex纤维素4(250mm，4.6mm，5微米)
		流动相	84.9％己烷/15％乙醇/0.1％二乙胺(预混合)
流速	1mL/min
		运行时间	40min
检测波长	247nm
		定量	峰面积比率

方法C开发来从实施例269分离三种立体异构体实施例361、实施例362以及实施例363。立体异构体实施例361、实施例362以及实施例363作为宽带在停留时间12.9分钟洗脱，而实施例269在停留时间14.3分钟洗脱。对对映异构体实施例363水平的估计可通过组合方法A、B和C的数据来实现。色谱条件描述于表B3。

表B3

柱	Phenomenex纤维素1(250mm，4.6mm，5微米)
		流动相	88％己烷，12％乙醇(包含0.1％二乙胺)
流速	1mL/min
		运行时间	25min
检测波长	247nm
		定量	峰面积比率

实施例A1：PI3K酶测定

PI3激酶发光测定试剂盒是从Echelon Biosciences(Salt Lake City,UT)购得，所述试剂盒包括脂质激酶基质D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基、3-O-磷酸基连接的D-肌-磷脂酰肌醇4,5-双磷酸(PtdIns(4,5)P2)(PIP2)、生物素化I(1,3,4,5)P4、PI(3,4,5)P3检测蛋白。包括供体和受体珠粒的AlphaScreen^TM GST检测试剂盒是从PerkinElmer LifeSciences(Waltham,MA)购得。PI3Kδ(p110δ/p85α)是从Millipore(Bedford,MA)购得。ATP、MgCl₂、DTT、EDTA、HEPES和CHAPS是从Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)购得。

PI3Kδ的AlphaScreen^TM测定

在来自Thermo Fisher Scientific的384孔REMP板中以最终体积40μL进行激酶反应。抑制剂首先于DMSO中连续稀释并且添加至板孔中，随后添加其它反应组分。DMSO在分析中的最终浓度为2％。在室温下在50mM HEPES(pH7.4)、5mM MgCl₂、50mM NaCl、5mM DTT以及0.04％CHAPS中进行PI3K分析。反应通过添加ATP起始，将由20μM PIP2、20μM ATP、1.2nMPI3Kδ组成的最终反应混合物孵育20分钟。接着转移10μL反应混合物至5μL含50nM生物素化I(1,3,4,5)P4的淬灭缓冲液：50mM HEPES(pH7.4)、150mM NaCl、10mM EDTA、5mM DTT、0.1％吐温-20(Tween-20)中，随后添加10μL悬浮于含有25nM PI(3,4,5)P3检测蛋白的淬灭缓冲液中的AlphaScreen^TM供体和接受体珠粒。供体珠粒与接受体珠粒两者的最终浓度为20mg/ml。在密封板之后，在室温下在黑暗位置孵育板2小时。在Fusion-α微板读取器(Perkin-Elmer)上测定产物活性。通过使用GraphPad Prism3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来进行IC₅₀确定。

实施例A2：PI3K酶测定

材料：脂质激酶基质磷酸肌醇-4,5-双磷酸(PIP2)是从EchelonBiosciences(SaltLake City,UT)购得。PI3K同种型α、β、δ和γ是从Millipore(Bedford,MA)购得。ATP、MgCl₂、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS是从Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)购得。

在来自Thermo Fisher Scientific的透明底96孔板中以最终体积24μL进行激酶反应。抑制剂首先于DMSO中连续稀释并且添加至板孔中，随后添加其它反应组分。DMSO在分析中的最终浓度为0.5％。在室温下在20mM MOPS(pH6.7)、10mM MgCl₂、5mM DTT以及0.03％CHAPS中进行PI3K分析。制备含有50μM PIP2、激酶和不同浓度抑制剂的反应混合物。反应通过添加含有2.2μCi[γ-³³P]ATP的ATP至最终浓度1000μM来起始。PI3K同种型α、β、δ和γ在分析中的最终浓度分别为1.3、9.4、2.9和10.8nM。孵育反应180分钟并且通过添加100μL1M磷酸钾(pH8.0)、30mM EDTA淬灭缓冲液来终止。接着转移100μL反应溶液等分试样至96孔Millipore MultiScreen IP0.45μm PVDF过滤板中(过滤板分别用200μL100％乙醇、蒸馏水和1M磷酸钾(pH8.0)预先湿润)。在Millipore歧管上在真空下抽吸过滤板并且用18×200μL含有1M磷酸钾(pH8.0)和1mM ATP的洗涤缓冲液洗涤。在通过抽吸干燥和印迹之后，板在孵育箱中在37℃下风干过夜。Packard TopCount接头(Millipore)接着连接至板，随后在各孔中添加120μL Microscint20闪烁混合液(Perkin Elmer)。在密封板之后，通过在Topcount(Perkin-Elmer)上进行闪烁计数来测定产物的放射性。通过使用GraphPad Prism3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来进行IC₅₀确定。

实施例A3：PI3Kδ闪烁亲近测定

材料

[γ-³³P]ATP(10mCi/mL)是从Perkin-Elmer(Waltham,MA)购得。D(+)-sn-1,2-二-O-辛酰基甘油基、3-O-磷酸基连接的D-肌-磷脂酰肌醇4,5-双磷酸(PtdIns(4,5)P2)(PIP2)，CAS204858-53-7是从Echelon Biosciences(Salt Lake City,UT)购得。PI3Kδ(p110δ/p85α)是从Millipore(Bedford,MA)购得。ATP、MgCl₂、DTT、EDTA、MOPS和CHAPS是从Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)购得。麦胚凝集素(Wheat Germ Agglutinin，WGA)YSi SPA闪烁珠粒是从GE healthcare life sciences(Piscataway,NJ)购得。

在来自Thermo Fisher Scientific的聚苯乙烯384孔基质白色板中以最终体积25μL进行激酶反应。抑制剂首先于DMSO中连续稀释并且添加至板孔中，随后添加其它反应组分。DMSO在分析中的最终浓度为0.5％。在室温下在20mM MOPS(pH6.7)、10mM MgCl₂、5mMDTT和0.03％CHAPS中进行PI3K分析。反应通过添加ATP起始，最终反应混合物由20μM PIP2、20μM ATP、0.2μCi[γ-³³P]ATP、4nM PI3Kδ组成。孵育反应210分钟并且通过添加40μL悬浮于淬灭缓冲液：150mM磷酸钾(pH8.0)、20％甘油、25mM EDTA、400μM ATP中的SPA珠粒终止。SPA珠粒的最终浓度为1.0mg/mL。在密封板之后，各板在室温下振荡过夜并且在1800rpm下离心10分钟，通过在Topcount(Perkin-Elmer)上进行闪烁计数来测定产物的放射性。通过使用GraphPad Prism3.0软件相对于抑制剂浓度的对数拟合对照活性百分比曲线来进行IC₅₀确定。如通过测定A3所确定，实施例的IC₅₀数据呈现于表10中。如通过测定A2所确定，实施例361和363的IC₅₀数据展示于表10a中。

表10

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		1	+
2	+
		3	+
4	+
		5	+
6	+
		7	+
8	+
		9	+
10	+
		11	+
12	++++
		13	+
14	+
		15	+
16	+
		17	+
18	+
		19	+
20(第一峰)	+
		20(第二峰)	+++
21	+
		22	+
23	+
		24	+
25(第一峰)	++++
		25(第二峰)	+
26	+
		27	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		28	+
29	+
		30	+
31	+
		32	+
33	+
		34	+
35	+
		36	+
37	+
		38	++
39	+++
		40	++
41	+++
		42	+
43	+
		44	+
45	+
		46	+
47	+
		48	+
49	+
		50	+
51	+
		52	+
53	+
		54	++
55	++
		56	++
57	+
		58	+
59	+
		60	+
61	+
		62	+
63	+
		64	+
65	+
		66	+
67(第一峰)	+
		68(第一峰)	+
69	+
		70	+
71	+
		72	+
73	+
		74(第一峰)	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		75	+
76	+
		77	+
78	+
		79	+
80	+
		81	+++
82	+
		83	+
84	+++
		85	+++
86	+
		87	+
88	+
		89	+
90	+
		91	+
92	+
		93	+
94	+
		95	+
96	+
		97	+
98	+
		99	+
100	+
		101	+
102	+
		103	+
104	+
		105	+
106	+
		107	+
108	+
		109	+
110	+
		111	+
112	+
		113	+
114	+
		115	+
116	+
		117	+
118	+
		119	+
120	+
		121	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		122	+
123	+
		124	+
125	+
		126	+
127	+
		128	+
129	+
		130	+
131	+
		132	+
133	+
		134	+
135	+
		136	+
137	+
		138	+
139(第一峰)	+
		140	+
141	+
		142	+
143	+
		144	+
145	+
		146	+
147	+
		148	+
149	+
		150	+
151	+
		152	+
153	+
		154	+
155	+
		156	+
157	+
		158	+
159	+
		160	+
161	+
		162	+
163	+
		164	+
165	+
		166	+
167	+
		168	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		169	+
170	+
		171	+
172	+
		173	+
174	+
		175	+
176	+
		177	+
178	+
		179	+
180	+
		181	+
182	+
		183	+
184	+
		185	+
186	+
		187	+
188	+
		189	+
190	+
		191	+
192	++
		193	+++
194	+
		195	+
196	+
		197	+
198	+
		199	+
200	+
		201	+
202	+
		203	+
204	+
		205	+
206	+
		207	+
208	+
		209	++
210	+
		211	+
212	+
		213	+
214	+
		215	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		216	+
217	+
		218	+
219	+
		220	+
221	+
		222	+
223	+
		224	+
225	+
		226	+
227	+
		228	+
229	+
		230	+
231	+
		232	+
233	+
		234	+
235	+
		236	+
237	+
		238	+
239	+
		240	+
241	+
		242	+
243	+
		244	+
245	+
		246	+
247	+
		248	+
249	+
		250	+
251	+
		252	+
253	+
		254	+
255	+
		256	+
257	+
		258	+
259	+
		260	+
261	+
		262	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		263	+
264	+
		265	+
266	+
		267	+
268	+
		269	+
270	+
		271	+
272	+
		273	+
274	+
		275	+
276	+
		277	+
278	+
		279	+
280	+
		281	+
282	+
		283	+
284	+
		285	+
286	+
		287	+
288	+
		289	+
290	+
		291	+
292	+
		293	+
294	+
		295	+
296	+
		297	+
298(第一峰)	+
		299	+
300	+
		301	+
302	+
		303	+
304	+
		305	+
306	+
		307	+
308	+
		309	+

实施例编号	PI3KδSPA IC₅₀(nM)*
		313(第二峰)	+
314(第二峰)	+
		315	+
316	+
		317	+
318	+
		319	+
320	+
		321(第一峰)	+
322(第一峰)	+
		326	+
327	+
		328	+
329	+
		330	+
331	+
		332	+
333	+
		334	+
335	+
		336	+
337	+
		338	+
339	+
		340	+
341	+
		342	+
343	+
		344	+
310	+
		311	+
323(第一峰)	+
		323(第二峰)	+
323(第三峰)	+++
		323(第四峰)	+
324(第一峰)	+++
		324(第二峰)	+
325	+
		345	+++
346	+
		347	+
348	+++
		349	+
350	+++++
		351	+++
352	+

实施例编号	PI3Kδ SPA IC₅₀(nM)*
		353	+++++
354	+
		355	+++
356	+++
		357	+
358	+++++
		359	+
360	+
		362	+

*行符号：

+表示≤10nM

++表示>10nM至50nM

+++表示>50nM至200nM

++++表示>200nM至500nM

+++++表示>500nM

表10a

实施例编号	PI3Kδ IC₅₀(nM)*
		361	+++++
363	+++

*行符号：

+表示≤10nM

++表示>10nM至50nM

+++表示>50nM至200nM

++++表示>200nM至500nM

+++++表示>500nM

实施例B1：B细胞增殖分析

为获得B细胞，通过在Ficoll-Hypague(GE Healthcare,Piscataway,NJ)上进行标准密度梯度离心从正常无药物供体的周边血液分离人PBMC并且与抗CD19微珠粒(MiltenyiBiotech,Auburn,CA)一起孵育。接着根据制造商说明书通过使用autoMacs(MiltenyiBiotech)进行阳性免疫分选来纯化B细胞。

纯化的B细胞(2×10⁵/孔/200μL)于RPMI1640、10％FBS和山羊F(ab’)2抗人IgM(10μg/ml)(Invitrogen，Carlsbad,CA)中在不同量的测试化合物存在下于96孔超低结合板(Corning，Corning,NY)中培养3天。接着添加含[³H]-胸苷(1μCi/孔)(PerkinElmer，Boston,MA)的PBS至B细胞培养物中，再维持12小时，随后通过经GF/B过滤器(PackardBioscience，Meriden,CT)用水过滤来分离所并入的放射性并且通过用TopCount(PackardBioscience)进行液体闪烁计数加以测量。

实施例B2：Pfeiffer细胞增殖测定

Pfeiffer细胞系(弥漫性大B细胞淋巴瘤)是从ATCC(Manassas,VA)购得并且维持在推荐培养基(RPMI和10％FBS)中。为测量化合物的抗增殖活性，在一定浓度范围的测试化合物存在或不存在下，将Pfeiffer细胞与培养基一起涂铺(2×10³个细胞/孔/200μl)至96孔超低结合板(Corning，Corning,NY)中。在3-4天之后，接着添加含[³H]-胸苷(1μCi/孔)(PerkinElmer，Boston,MA)的PBS至细胞培养物中，再维持12小时，随后通过经GF/B过滤器(Packard Bioscience，Meridenj,CT)用水过滤来分离所并入的放射性并且通过用TopCount(Packard Bioscience)进行液体闪烁计数加以测量。所选化合物的IC50数据呈现于表11中。

表11

实施例编号	Pfeiffer IC₅₀(nM)*
		67(第一峰)	+

实施例编号	Pfeiffer IC₅₀(nM)*
		68(第一峰)	+
75	+
		96	+
102	+
		103	++
104	++
		111	+
114	+
		121	++
139(第一峰)	+
		140	+
142	+
		144	+
148	+
		149	+
152	+
		154	+
157	++
		163	++
167	+
		177	+
191	+
		195	+
196	+
		198	+
200	+
		213	+
214	+
		215	+
219	+
		220	+
221	+
		222	+
248	+
		257	+
262	+
		264	+
268	+
		269	+
270	+
		271	+
300	+
		303	+
313(第二峰)	+
		314(第二峰)	+
315	+
		354	+

实施例编号	Pfeiffer IC₅₀(nM)*
		357	+
346	+
		347	+
349	+

*行符号：

+表示≤10nM

++表示>10nM至50nM

实施例C：Akt磷酸化测定

Ramos细胞(来自伯基特氏淋巴瘤(Burkitts lymphoma)的B淋巴细胞)是从ATCC(Manassas,VA)获得并且维持在RPMI1640和10％FBS中。细胞(3×10⁷个细胞/管/3毫升于RPMI中)在37℃下与不同量的测试化合物一起孵育2小时并且接着在37℃水浴中用山羊F(ab’)2抗人IgM(5μg/mL)(Invitrogen)刺激17分钟。经刺激的细胞在4℃下用离心法短暂离心并且使用300μL溶解缓冲液(Cell Signaling Technology，Danvers,MA)制备完全细胞萃取物。对所得溶解产物进行声处理并且收集上清液。通过根据制造商说明书使用PathScan磷酸化Akt1(Ser473)夹心式ELISA试剂盒(Cell Signaling Technology)分析上清液中Akt的磷酸化水平。

除本文所述的修改之外，本发明的各种修改也将为本领域技术人员根据以上描述所显而易见。这些修改也意图属于随附权利要求的范围之内。本申请中所引用的各参考文献，包括所有专利、专利申请以及公布皆以引用的方式整体并入本文。

Claims

1.一种式VIIb的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

G为NH，n为1，并且V为O；或

G为NH，n为0，并且V为CH₂；或

G为O，n为0并且V为NH；

R⁶为H、卤代、OH、CN、C_1-4烷基、C_1-4卤烷基、C_1-4烷氧基或C_1-4卤烷氧基。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

G为NH；

n为0；

V为CH₂；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

G为NH；

n为1；

V为O；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代、CN或C_1-4烷基；

R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

4.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

G为O；

n为0；

V为NH；

R²为C_1-3烷氧基；

R⁴为卤代；

R⁵为卤代；并且

R⁶为H。

5.如权利要求1所述的化合物，其选自：

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-IH-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-甲基苯基}吡咯烷-2-酮；

6-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-甲氧基-6-甲基苯基}吗啉-3-酮；

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮；

4-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基]-6-氯-3-乙氧基-2-(5-氧基吡咯烷-3-基)苯甲腈；以及

4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}-1，3-噁唑烷-2-酮；

或任何上述化合物的其药学上可接受的盐。

6.如权利要求1所述的化合物，其为4-{3-[1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基]-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基}吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。

7.如权利要求1所述的化合物，其为(S)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。

8.如权利要求1所述的化合物，其为(R)-4-(3-((S)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。

9.如权利要求1所述的化合物，其为(S)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。

10.如权利要求1所述的化合物，其为(R)-4-(3-((R)-1-(4-氨基-3-甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙基)-5-氯-2-乙氧基-6-氟苯基)吡咯烷-2-酮，或其药学上可接受的盐。

11.一种药物组合物，其包含如权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及至少一种药学上可接受的载体。

12.一种药物组合物，其包含如权利要求6至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及至少一种药学上可接受的载体。

13.如权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制PI3K激酶的活性的药物中的用途。

14.如权利要求13所述的用途，其中所述PI3K是PI3Kδ。

15.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的疾病的药物中的用途，所述疾病选自：再狭窄、动脉粥样硬化、骨病症、糖尿病性视网膜病变、牛皮癣、良性前列腺肥大、肾病、重症肌无力、多发性硬化症和干燥综合征。

16.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的关节炎的药物中的用途。

17.如权利要求16所述的用途，其中所述关节炎为骨关节炎。

18.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的胰腺炎的药物中的用途。

19.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的炎性肠病的药物中的用途。

20.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的发炎的药物中的用途。

21.如权利要求15至20中任一项所述的用途，其中施用多于一种所述化合物。

22.如权利要求21所述的用途，其中所述化合物与抑制除PI3K激酶以外的激酶的激酶抑制剂组合施用。

23.如权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的免疫基疾病的药物中的用途。

24.如权利要求23所述的用途，其中所述免疫基疾病为类风湿性关节炎、过敏、哮喘、肾小球性肾炎、狼疮、或与任何上述疾病相关的发炎。

25.如权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的癌症的药物中的用途。

26.如权利要求25所述的用途，其中所述癌症为乳癌、前列腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、脑癌、膀胱癌、皮肤癌、子宫癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、胃癌或血液科癌症。

27.如权利要求26所述的用途，其中所述血液科癌症为急性髓母细胞性白血病、慢性骨髓性白血病或B细胞淋巴瘤。

28.如权利要求1至10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的肺病的药物中的用途。

29.如权利要求28所述的用途，其中所述肺病为急性肺损伤(ALI)或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。

30.如权利要求6-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗患者的弥漫性大B细胞淋巴瘤的药物中的用途。