CN104017057B

CN104017057B - 一种st2蛋白抑制剂多肽及其应用

Info

Publication number: CN104017057B
Application number: CN201410293555.XA
Authority: CN
Inventors: 康伟; 马庆祥; 李广; 康凯; 彭裕萍
Original assignee: Yulin City First Hospital
Current assignee: Yulin City First Hospital
Priority date: 2014-06-27
Filing date: 2014-06-27
Publication date: 2016-08-24
Anticipated expiration: 2034-06-27
Also published as: CN104017057A

Abstract

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制ST2蛋白表达，治疗子宫癌的多肽。其序列为TDFGEPRIQQEEAA是全新的序列，该多肽可体外抑制子宫癌细胞Hela细胞增殖，迁移，治疗子宫癌；在体荷瘤模型实验中成功的增加了小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

Description

一种ST2蛋白抑制剂多肽及其应用

技术领域

本发明涉及ST2蛋白抑制剂多肽1及其应用，具体涉及具有抑制ST2蛋白表达，治疗子宫癌的多肽。

背景技术

子宫癌子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一。治疗半年以手术为主辅，以放射治疗、化学治疗、孕酮抗雌激素等药物为辅。但是手术难以完全切除癌组织与亚临床病灶。其次就是放化疗，但是这两种治疗方式均对正常组织器官有明显副反应，进一步提高疗效并减少对正常组织的损伤是值得研究的课题。目前生物靶向治疗肿瘤是非常有前景的，靶向治疗是针对肿瘤发生过程中阻断某个或多个信号通路，达到治疗肿瘤的目的。

直到现在医学界还未可以确定是什么原因引致子宫癌，一般认为可能是多项因素的交叉协同作用所引起的，其危险因子有：子宫颈糜烂、性行为频繁、或性生活紊乱、或忽略性行为之清洁、忽略经期卫生、性伴侣包皮过长、且可能与疱疹二型病毒（HSV_2）及人乳头瘤（HPS）有密切关系，甚至连性病、披衣菌感染等炎症有关。肿瘤患者外周血淋巴细胞处于Th2 型细胞占优势的状态，并且肿瘤细胞本身也处于Th2 占优势的状态，由于Th1 细胞受到抑制，细胞免疫功能不能有效地激活，抗肿瘤免疫能力下降，从而不利于机体组织以细胞免疫为主的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞得以生存发展。ST2是比较强的 Th2 细胞诱导剂，在子宫癌中Th2 型细胞因子的大量释放，促成了 Th0 细胞向 Th2 方向极化，而 Th2极化又会产生大量的诸如 IL-6 的促炎细胞因子，引发和加剧了全身炎症反应。此外，在Th2 型细胞占优势时常伴随着免疫耐受，这也促成了子宫出血坏死加重。删除小鼠的子宫肿瘤的跨膜型 ST2 受体（ST2L）可导致肿瘤的生长和转移的降低，并增加了循环水平的促炎性细胞因子、活化的 NK 细胞和 CD8＋T 细胞。ST2蛋白功能升高是子宫癌生的一个重要因素。因此，抑制ST2蛋白表达，抑制子宫癌发展，是治疗子宫癌的新靶点。但是，尚未有开发成熟的ST2蛋白抑制剂多肽的治疗子宫癌的药物

本专利中的ST2蛋白抑制剂多肽已证明在子宫癌中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。

发明内容

发明目的

本发明提供全新的序列，该序列抑制ST2蛋白表达，对子宫癌具有很好的疗效。

技术方案

ST2蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为TDFGEPRIQQEEAA。

ST2蛋白抑制剂多肽在治疗子宫癌药物中的应用。

有益效果

ST2蛋白抑制剂多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外抑制子宫癌细胞Hela细胞增殖，迁移，治疗子宫癌；在体荷瘤模型实验中成功的增加了小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。

具体实施方式

本发明涉及多肽由吉尔生化（上海）合成。

实施例1

ST2蛋白抑制剂多肽对人子宫癌细胞Hela增殖的作用。

采用MTT法检测ST2蛋白抑制剂多肽抑制Hela细胞生长的活性，Hela细胞只用第2-6代。HELA细胞在37℃、5%CO₂的培养箱中培养至90%以上的汇合度时用胰蛋白酶消化收集，用培养液重悬细胞并在显微镜下计数，将细胞浓度调整为3×10⁴个/ml，将细胞悬液接种到96孔板中，100μl/孔，并于37℃，5%CO₂培养箱中培养过夜。ST2蛋白抑制剂多肽用培养液稀释到各个预定浓度。恩度用培养液稀释到终浓度。待细胞完全贴壁后，将各个稀释液分别加入96孔板中（100μl/孔）。以加入ST2蛋白抑制剂多肽稀释液的作为给药组，以加入恩度、紫杉醇作为阳性对照组，以不加任何药物的培养液作为阴性对照组。在37℃，5%CO₂培养箱孵育72h。向96孔板中加入5mg/ml的MTT，每孔20μl，继续培养4h。吸掉培养基，每孔加入100μlDMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀。用酶标仪在测定波长为570nm，参比波长为630nm处测定吸光值，并计算生长抑制率（proliferation inhibition, PI），公式如下：

PI(%)=1－给药组/阴性组

试验得到的结果以mean ± SD表示，并进行统计T检验，*P < 0.05为显著性差异，**P < 0.01为极显著性差异。

表1.ST2蛋白抑制剂多肽对人子宫癌细胞Hela增殖抑制作用

结果：见表1，与阴性对照相比，ST2蛋白抑制剂多肽能显著抑制HELA的增殖，并且呈现明显的剂量依赖关系。

实施例2

ST2蛋白抑制剂多肽对人子宫癌细胞Hela的迁移抑制试验

将10mg/ml Matrigel（BD公司，USA）用无血清的DMEM培养液以1:3稀释，涂布于Transwell小室（Greiner公司，USA）膜上，室温风干。将培养到对数生长期的HELA细胞用胰蛋白酶消化，收集，用无血清DMEM培养液重悬，于显微镜下计数，将细胞浓度调整到1×10⁵个/ml。配制各组试验用液，分组如下：空白对照组：为不含药物的无血清DMEM培养液；恩度组：用不含药物的无血清DMEM培养液将5mg/ml的恩度储液稀释到预定浓度；ST2蛋白抑制剂多肽组：用不含药物的无血清DMEM培养液将ST2蛋白抑制剂多肽稀释到各个预定浓度。将细胞接种到Transwell小室中，每孔100μl，并将各组试验用液加入小室中。24孔板中加入0.6ml含5%胎牛血清和1% 生长因子（ECGS）的DMEM培养液刺激细胞迁移，于5%CO₂，37℃孵育24小时。弃去孔中培液，用无水乙醇常温固定30分钟，0.1%结晶紫常温染色10分钟，清水漂净，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，显微镜下观察并随机选择四个视野拍照计数。按照公式计算迁移抑制率（migration inhibition,MI）：

MI（%）=(1-Ntest/Ncontrol)×100%

其中Ntest为测试组的细胞迁移数，Ncontrol为空白对照组的细胞迁移数。试验得到的结果以mean ± SD表示，并进行统计T检验，*P < 0.05为显著性差异，**P < 0.01为极显著性差异。

表7.ST2蛋白抑制剂多肽对人子宫癌细胞Hela迁移抑制作用

结果：见表2，在ST2蛋白抑制剂多肽的作用下，迁移的DMEM数显著减少。与空白对照组相比，ST2蛋白抑制剂多肽能抑制5%胎牛血清及1% ECGS诱导的HELA的迁移作用。在0.5μg/ml和1μg/ml两个剂量下，ST2蛋白抑制剂多肽对细胞迁移的抑制作用与空白对照相比有极显著性差异，当ST2蛋白抑制剂多肽的剂量为0.5μg/ml时，对HELA细胞迁移的抑制率达到最大。

SEQUENCE LISTING

<110> 苏州普罗达生物科技有限公司

<120> 一种ST2蛋白抑制剂多肽及其应用

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Ala Ala

1 5 10

Claims

1.ST2蛋白抑制剂多肽，其特征在于其序列为TDFGEPRIQQEEAA。

2.一种药物组合物，其特征在于其包含如权利要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物为注射剂。

4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于有效剂量为10mg/kg。

5.如权利要求1所述的ST2蛋白抑制剂多肽在制备治疗子宫癌药物中的应用。