CN104007242A - 采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法，具有以下步骤：①将氯化钠、琼脂以及多聚蛋白胨加入到蒸馏水中溶解，然后进行高压灭菌处理，接着加入氯化钙溶液和硫酸镁溶液，得到NGM培养基；②向NGM培养基表面涂布大肠杆菌OP50菌液，然后转移到培养皿中；③将秀丽隐杆线虫转移到培养皿中，作为参照组；④将秀丽隐杆线虫转移到培养皿中，然后再将待测样品加入到培养皿中，作为待测组；⑤将参照组和待测组置于培养箱中培养，直至秀丽隐杆线虫成长为成虫；⑥当待测组中秀丽隐杆线虫成虫体长小于参照组时，表明待测样品中含有瘦肉精，反之则不含有。本发明的检测方法成本较低，操作简便，最低检测限可达100μg/L。
Description
技术领域
本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法。
背景技术
瘦肉精是一类促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的药物统称，主要包括盐酸克伦特罗、莱克多巴胺等，属于β肾上腺素受体激动剂。
近年来，瘦肉精中毒事件屡屡发生，因此，对于瘦肉精的检测越来越受到重视。
目前对于盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残留的检测方法主要有质谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析法等，这些检测方法不但费用昂贵，而且操作要求较高。
秀丽隐杆线虫是一种可以独立生存的线虫，隶属于线形动物门，线虫纲，小杆线虫目，广杆线虫属。秀丽隐杆线虫饲养简便，饲养成本极低，繁殖速度快，遗传发育背景丰富，其成虫体长约1mm～1.5mm。
目前尚未发现采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的文献报道。
发明内容
本发明的目的在于解决上述问题，提供一种成本较低、操作简便的采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法。
实现本发明目的的技术方案是：一种采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法，具有以下步骤：①将氯化钠、琼脂以及多聚蛋白胨加入到蒸馏水中溶解，然后在100℃～140℃的温度下进行高压灭菌处理，接着冷却至50℃～60℃加入氯化钙溶液和硫酸镁溶液，得到NGM培养基；②向步骤①得到的NGM培养基表面涂布大肠杆菌OP50菌液，然后转移到培养皿中；③将同步化后到达L4时期的秀丽隐杆线虫转移到步骤②的培养皿中，作为参照组；④将同步化后到达L4时期的秀丽隐杆线虫转移到步骤②的培养皿中，然后再将待测样品加入到培养皿中，作为待测组；⑤将步骤③的参照组和步骤④的待测组置于培养箱中培养，直至秀丽隐杆线虫成长为成虫；⑥当待测组中秀丽隐杆线虫成虫体长小于参照组中秀丽隐杆线虫成虫体长时，表明待测样品中含有瘦肉精，反之则不含有。
上述步骤①的NGM培养基中氯化钠的浓度为2g/L～4g/L，琼脂的浓度为15g/L～20g/L，多聚蛋白胨的浓度为2g/L～3g/L。
上述步骤①的加入的氯化钙溶液的浓度为0.9mol/L～1.1mol/L，加入量为1mL～2mL；加入的硫酸镁溶液的浓度为0.9mol/L～1.1mol/L，加入量为1mL～2mL。
本发明具有的积极效果：（1）本发明采用秀丽隐杆线虫对瘦肉精进行检测，不仅成本较低，而且操作简便。（2）本发明的检测方法具有较高的检测灵敏度以及准确的检测结果，最低检测限可达100μg/L。
具体实施方式
（实施例1）
本实施例的采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法如下：
①将3g的氯化钠、17g的琼脂以及2.5g多聚蛋白胨加入到975mL蒸馏水中溶解，然后在130℃的温度下进行高压灭菌处理，接着冷却至55℃加入1mL浓度为1mol/L的氯化钙溶液以及1mL浓度为1mol/L的硫酸镁溶液，得到NGM培养基。
该NGM培养基中氯化钠的浓度为3g/L，琼脂的浓度为17g/L，多聚蛋白胨的浓度为2.5g/L。
②向步骤①得到的NGM培养基表面涂布大肠杆菌OP50菌液，然后转移到3cm的培养皿中。
③将同步化后到达L4时期的秀丽隐杆线虫转移到步骤②的培养皿中，作为参照组。
④将同步化后到达L4时期的秀丽隐杆线虫转移到步骤②的培养皿中，然后再将含有100μg/L盐酸克伦特罗的待测样品加入到培养皿中，作为待测组。
⑤将步骤③的参照组和步骤④的待测组置于20℃的培养箱中培养24h，直至秀丽隐杆线虫成长为成虫。
⑥分别将参照组和待测组中的秀丽隐杆线虫成虫制片后，利用显微镜照相，并运用photoshop统计得到其体长。
其中参照组体长为1.2mm，待测组体长为1.04mm，差异显著，表明该浓度的盐酸克伦特罗对秀丽隐杆线虫的发育产生了较大的影响，也即秀丽隐杆线虫能够检测到该浓度的盐酸克伦特罗。
（实施例2～实施例10）
各实施例与实施例1基本相同，不同之处在于待测样品中盐酸克伦特罗的浓度以及待测组的体长，具体见表1。
表1
| 盐酸克伦特罗 | 参照组 | 待测组 | 差异显著性 | |
| 实施例1 | 100μg/L | 1.2mm | 1.04mm | 差异显著 |
| 实施例2 | 500μg/L | 1.2mm | 1.02mm | 差异显著 |
| 实施例3 | 1000μg/L | 1.2mm | 0.93mm | 差异极显著 |
| 实施例4 | 5000μg/L | 1.2mm | 0.90mm | 差异极显著 |
| 实施例5 | 50μg/L | 1.2mm | 1.14mm | 差异不显著 |
| 实施例6 | 10μg/L | 1.2mm | 1.15mm | 差异不显著 |
| 实施例7 | 5μg/L | 1.2mm | 1.16mm | 差异不显著 |
| 实施例8 | 1μg/L | 1.2mm | 1.18mm | 基本无差异 |
| 实施例9 | 0.5μg/L | 1.2mm | 1.18mm | 基本无差异 |
| 实施例10 | 0.1μg/L | 1.2mm | 1.19mm | 基本无差异 |
（实施例11）
本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于待测样品中含有100μg/L莱克多巴胺，待测组的体长见表2。
（实施例12～实施例20）
各实施例与实施例11基本相同，不同之处在于待测样品中莱克多巴胺的浓度以及待测组的体长，具体见表2。
表2
| 莱克多巴胺 | 参照组 | 待测组 | 差异显著性 | |
| 实施例11 | 100μg/L | 1.2mm | 1.02mm | 差异显著 |
| 实施例12 | 500μg/L | 1.2mm | 1.00mm | 差异显著 |
| 实施例13 | 1000μg/L | 1.2mm | 0.90mm | 差异极显著 |
| 实施例14 | 5000μg/L | 1.2mm | 0.87mm | 差异极显著 |
| 实施例15 | 50μg/L | 1.2mm | 1.13mm | 差异不显著 |
| 实施例16 | 10μg/L | 1.2mm | 1.15mm | 差异不显著 |
| 实施例17 | 5μg/L | 1.2mm | 1.15mm | 差异不显著 |
| 实施例18 | 1μg/L | 1.2mm | 1.18mm | 基本无差异 |
| 实施例19 | 0.5μg/L | 1.2mm | 1.19mm | 基本无差异 |
| 实施例20 | 0.1μg/L | 1.2mm | 1.19mm | 基本无差异 |
（实施例21～实施例30）
各实施例与实施例1基本相同，不同之处在于NGM培养基中的各组分浓度、参照组以及待测组的体长，具体见表3。
表3
| 氯化钠 | 琼脂 | 多聚蛋白胨 | 氯化钙 | 硫酸镁 | 参照组 | 待测组 | |
| 实施例21 | 3g/L | 17g/L | 2.5g/L | 1mol/L | 1mol/L | 1.2mm | 1.04mm |
| 实施例22 | 2g/L | 15g/L | 2g/L | 1mol/L | 1mol/L | 1.2mm | 1.05mm |
| 实施例23 | 4g/L | 20g/L | 3g/L | 1mol/L | 1mol/L | 1.2mm | 1.05mm |
| 实施例24 | 3g/L | 17g/L | 2.5g/L | 0.9mol/L | 1.1mol/L | 1.1mm | 0.93mm |
| 实施例25 | 3g/L | 17g/L | 2.5g/L | 1.1mol/L | 0.9mol/L | 1.1mm | 0.94mm |
| 实施例26 | 3g/L | 18g/L | 3g/L | 0.9mol/L | 0.9mol/L | 1.1mm | 0.92mm |
| 实施例27 | 3.5g/L | 19g/L | 2.5g/L | 1.1mol/L | 1.1mol/L | 1.0mm | 0.84mm |
| 实施例28 | 2.5g/L | 18g/L | 2.5g/L | 0.9mol/L | 0.9mol/L | 1.0mm | 0.86mm |
| 实施例29 | 4g/L | 17g/L | 2g/L | 1mol/L | 1mol/L | 1.2mm | 1.05mm |
| 实施例30 | 2g/L | 17g/L | 3g/L | 1mol/L | 1mol/L | 1.2mm | 1.06mm |
Claims (3)
1.一种采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法，其特征在于具有以下步骤：
①将氯化钠、琼脂以及多聚蛋白胨加入到蒸馏水中溶解，然后在100℃～140℃的温度下进行高压灭菌处理，接着冷却至50℃～60℃加入氯化钙溶液和硫酸镁溶液，得到NGM培养基；
②向步骤①得到的NGM培养基表面涂布大肠杆菌OP50菌液，然后转移到培养皿中；
③将同步化后到达L4时期的秀丽隐杆线虫转移到步骤②的培养皿中，作为参照组；
④将同步化后到达L4时期的秀丽隐杆线虫转移到步骤②的培养皿中，然后再将待测样品加入到培养皿中，作为待测组；
⑤将步骤③的参照组和步骤④的待测组置于培养箱中培养，直至秀丽隐杆线虫成长为成虫；
⑥当待测组中秀丽隐杆线虫成虫体长小于参照组中秀丽隐杆线虫成虫体长时，表明待测样品中含有瘦肉精，反之则不含有。
2.根据权利要求1所述的采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法，其特征在于：步骤①的NGM培养基中氯化钠的浓度为2g/L～4g/L，琼脂的浓度为15g/L～20g/L，多聚蛋白胨的浓度为2g/L～3g/L。
3.根据权利要求1或2所述的采用秀丽隐杆线虫检测瘦肉精的方法，其特征在于：步骤①的加入的氯化钙溶液的浓度为0.9mol/L～1.1mol/L，加入量为1mL～2mL；加入的硫酸镁溶液的浓度为0.9mol/L～1.1mol/L，加入量为1mL～2mL。
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