CN1039825C - 菌落总数检测胶膜及制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种菌落总数检测胶膜及其制备方法，采用大孔径玻璃纤维做载体，热浸于蛋白胨、酵母浸膏、可溶性淀粉、胱氨酸、明胶、琼脂、肉浸液、肝心浸液等配成的营养液，然后再浸于葡萄糖、血消化液制成的营养液，取出后喷洒氯化三苯基四氮唑和中性红，低温烘干而制成，该胶膜可检测食品、化妆品、餐具、物体表面、水等的菌落总数，检测范围宽、检测工序简单。
Description
本发明涉及菌落总数检测胶膜及制备方法。
菌落总数是检测食品、物体表面、化妆品、餐具及水等被细菌污染程度的一项重要指标。既往国际上通用平皿倾注法，但此法费工、费料、操作繁琐，基层实验室不易推广。近些年国内外都在研究快速简易检测手段。美国在1989年4月印出的“菌落总数说明书”中介绍了一种菌落总数检验卡，可检验水和空气的菌落总数。日本89年《技术讲座》中所载“定量细菌检验法综述”VOL17、No 6、P536记载了一种检验菌落总数的スタンプ法，可检测手指、床、壁面的污染。国内于1986年在医学科学院专家指导下，重庆第二卫生防疫站研制了水和水样样品菌落总数检测器；天津市环保局研制了饮用水检验卡，这两种产品都只限于水和水样样品的检验。
国内外类似产品水的检测器，从研究思想分析，都是利用微生物学惯用的除菌滤膜做载体，下层放营养垫，外面套以模框，利用除菌滤膜孔径小，把细菌堵留在膜面上。如果利用除菌滤膜做载体，由于孔隙太小，水分子通过都很困难，必然的只可供给检验水。从上所述可看出这些现有技术检测范围是局限的，而且工艺麻烦，准确性差，成本高。
本发明的目的在于提供一种目前国内外尚未解决的多功能的菌落总数检测胶膜及制备方法，简化测试工序，扩大检测范围。
本发明的技术解决方案是菌落总数检测胶膜的制备方法，按下列步骤制成：
a、取蛋白胨20克，酵母浸膏1克，可溶性淀粉3克、氯化钠5克、磷酸氢二钾2.6克、胱氨酸0.13克、明胶5克、琼脂5克、肉浸液400毫升，肝心浸液100毫升。加蒸馏水至1000毫升，加热溶化调PH至7.4，经15磅压力下灭菌15分钟为营养液I，
b、取葡萄糖3克加入血消化液200毫升中为营养液II。
c、大孔径玻璃纤维纸做载体放入90℃热营养液I中浸透，然后再浸于60℃营养液II，取出后喷洒氯化三苯基四氮唑和中性红，低温烘干，装袋，以钴60100～250万拉德剂量照射即可。
本发明的方法蛋白胨取胰胨5克。多胨10克。大豆胨5克，肝心浸液取肝浸液20毫升，心浸液80毫升。
本发明的产品分析外环境各类细菌不同营养要求而选择了营养剂蛋白胨，可溶性淀粉，肝心浸液、酵母、葡萄糖，选择了填充剂和吸附剂明胶及琼脂。这是胶膜的基础成份，它使细菌被吸附在膜上生长，由此制成的膜通透性和分散性好，可以接受大颗粒样品的检验。本发明的产品采用了复合指示剂氯化三苯基四氮唑和中性红，它保证一般条件下无色，只有细菌生长时使菌落显色。本发明的产品寻找了指示剂的增强剂胱氨酸、血消化液、肝心浸液，该增强剂不仅增强指示剂的色度，同时对细菌生长有促进作用。菌落总数的判定，必须在24小时进行，可是，一部分细菌在24小时以后在胶膜上才逐渐显示出来。加入生长促进因子血消化液，使这部分细菌在16小时就能生长。本发明产品的氯化钠及磷酸氢二钾起缓冲作用，保证细菌平衡不受损伤。
本发明的菌落总数检测胶膜具有以下优点：
1、本产品胶膜通水性好，样品在膜面上能迅速扩散，这种特性使得带渣子的样品也能够检验，故适用于多种检样，即对食品。化妆品、餐具、物体表面、水等都可检测，从而检验范围比以往检验水的产品检验量大20～30倍。
2、与美国的检验卡、天津检验卡、重庆检测器相比，使用方便，加样准确，面额大(美国的产品只有1.5cm2，天津产品7cm2，重庆产品10cm2，本产品48cm2)，可容纳2000个细菌均匀生长。
3、与平板倾注法相比，可免去玻璃器材的购置，储存、刷洗、灭菌、器材破损消耗、溶化倾倒平板，免去培养基原料的购置、储存及制作，故简化测试工序，使用方便，而且菌落呈红色，易于辨认，计数准确，又能减少眼肌疲劳。
4、本发明的产品在室温保存可使用半年，便于运输，检测后可置冰箱内半年，便于监督部门定期核查，它与大肠菌群检测纸片配套使用，极大地方便食品，环境卫生监督部门对基层化验室工作质量的监督管理，为实现产品批批检验合格出厂创造条件。
结合实例进一步说明本发明的技术解决方案。本发明的方法按以下步骤操作：
1、肉、心、肝浸液的制备
取1000克去脂碎牛肉或心、肝加入2000毫升水在冰箱冷浸15小时后煮沸1小时制成。
2、血消化液的制备
取牛血1000毫升，加入蒸馏水1000毫升煮沸15分，冷却至40℃加入碳酸钠调PH值8.5，再加胰酶60毫升，在37℃温度下放置48小时，经蛋白胨定性试验阴性，停止消化，滤过，在冰箱里保存备用。
3、取胰胨5克，10克、大豆胨5克、酵母浸膏1克、可溶性淀粉3克、氯化钠5克、磷酸氢二钾2.6克。胱氨酸0.13克，明胶5克、琼脂5克、肉浸液400毫升、肝浸液20毫升、心浸液80毫升，加蒸馏水至1000毫升，加热溶化调PH至7.4，经15磅压力下灭菌15分钟为营养液I。
4、取葡萄糖3克加入血消化液200毫升，为营养液II。
5、取浙江省杭州市新华造纸厂产的大孔径玻璃纤维纸做载体放入90℃热营养液I中浸透，然后再浸于60℃营养液II，取出后喷洒氯化三苯基四氮唑和中性红，在40℃温度下烘干，装袋，以钴60100～250万拉德剂量照射即可。
本发明产品的使用方法：样品按常规处理后，每个稀释度用两张胶膜，各加1毫升样品，样品渗透后取出，置37℃温度条件下培养18～24小时，查胶膜上的红色菌落，按常规法计数报告。
应用实例
一、送检单位：哈尔滨市卫生防疫站
考核单位：中国科学院微生物研究所
二、送检日期：一九八八年八月，一九八九年三月
三、送检目的：
(一)各类菌能否在胶膜上生长
(二)胶膜法与平皿倾注法在反映菌落数量上有否差异。
四、方法：
(一)测定菌株：
1、365大肠埃希氏菌
2、89金黄色葡萄球菌
3、31普通变形菌
4、8821-1地衣芽胞杆菌
5、8816短小芽胞杆菌
6、8840，8514铜绿假单胞菌
7、595粪链球菌
8、8801假丝酵母
9、396炭黑曲霉
(二)步骤：
1、菌悬液配制：挑取一小环24小时的斜面培养物，均匀悬浮于10毫升无菌生理盐水中，以100倍依次稀释到十万分之一。
2、培养：选择合适浓度，分别取1毫升加至胶膜，在37℃培养48小时。
3、计数：对纸片上的红点进行计数。
五、结果：
(一)各类菌的生长试验：胶膜可支持所测定菌类的生长，详见表一。
表一各类菌的生长测定
(二)胶膜法与平皿法的比较：胶膜法和平皿法稍有差异，见表2。
| 菌 名 | 菌株号 | 生长情况 |
| 节杆菌假丝酵母铜绿假单胞菌短小芽胞杆菌大肠埃希氏菌金黄色葡萄球菌炭黑曲霉 | 88012.1182851488161.3651.893.396 | +++++++ |
表二胶膜法与平板法的比较
| 菌号 | 胶膜(个/1 ML) | 平 板 | ||||
| 105 | 106 | 107 | 105 | 106 | 107 | |
| 1.3651.89318821-11.5958840 | 443345133240767 | 3021061173852653 | 27 | 5608407841902880 | 16116013076013525 | 11 |
六、结论：
(一)所测定的细菌、酵母及曲霉在胶膜上均能生长，胶膜营养可支持多种菌类生长，应用范围也可随之扩大。
(二)从表二可见，胶膜法计数稍低于平皿法，二者计数误差在同一数量级上。
(三)所显示的红色菌落边缘清晰，甚至对易扩散的变形菌群也能看到清楚的单个菌落，便于计数。
Claims (4)
1、一种菌落总数检测胶膜的制备方法，其特征在于：依次按下列步骤完成：
a、取蛋白胨20克、酵母浸膏1克、可溶性淀粉3克、氯化钠5克、磷酸氢二钾2.6克、胱氨酸0.13克、明胶5克、琼脂5克、肉浸液400毫升、肝心浸液100毫升，加蒸馏水至1000毫升，加热溶化调PH至7.4，经15磅压力下灭菌15分钟为营养液I；
b、取牛血1000毫升，加入蒸馏水1000毫升煮沸15分钟，冷却至40℃加入碳酸钠调PH值8.5，再加胰酶60毫升，在37℃温度下放置48小时，经蛋白胨定性试验阴性，停止消化，滤过得血消化液，在冰箱里保存备用；
c、取葡萄糖3克加入血消化液200毫升中为营养液II；
d、大孔径玻璃纤维纸做载体放入90℃热营养液I中浸透，然后再浸于60℃营养液II，取出后喷洒氯化三苯基四氮唑和中性红，低温烘干，装袋，以钴60100～250万拉德剂量照射即可。
2、根据权利要求1所述方法，其特征在于蛋白胨取胰胨5克、多胨10克、大豆胨5克。
3、根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于肝心浸液取肝浸液20毫升、心浸液80毫升。
4、一种菌落总数检测胶膜，其特征在于采用权利要求1的方法制备的产品。
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