CN103923999A - 转基因抗虫耐除草剂水稻g6h1及其衍生品种的定性pcr检测方法 - Google Patents

转基因抗虫耐除草剂水稻g6h1及其衍生品种的定性pcr检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，属于转基因水稻品种的定性检测领域。本发明首先公开了用于检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的8对特异性PCR检测引物对。在此基础上，本发明建立了一种特异性强、灵敏度高的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法。本发明进一步公开了转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒。特异性、灵敏度和检出限实验证明，本发明转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1品种的定性PCR检测方法特异性强、灵敏度高、检出限好，适于转基因G6H1水稻及其衍生品种制品的定性检测。

Description

转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法
技术领域
本发明涉及转基因水稻品种的定性PCR检测方法，尤其涉及转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测引物、定性检测方法及检测试剂盒，属于转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测领域。
背景技术
转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1品种，是将密码子经过优化的杀虫基因HJC-1和抗草甘膦基因G6导入到栽培水稻品种“秀水110”而得到的，插入序列全长约10.2kb(图1)。HJC-1是一个Cry1Ab和Vip3H的融合基因，这两个基因的融合具有对鳞翅目害虫更广谱的杀虫能力。G6是一个新的5-烯醇式丙酮酸3-磷酸合成酶基因(EPSPS)，它和其它抗草甘膦基因相似性低。温室试验、中间试验和环境释放试验表明，转HJC-1和G6-EPSPS基因抗虫耐除草剂水稻G6H1的抗虫和抗草甘膦能力良好。
PCR技术是目前国内外检测转基因产品中应用最广泛的方法。专利CN102162012B“转基因水稻科丰6号的定性PCR检测方法”公开了转基因水稻科丰6号的旁侧序列的定性PCR检测方法。但是，迄今为止，缺乏一种针对转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的特异性强、灵敏度高的定性PCR检测方法。
发明内容
本发明的目的之一是提供用于检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的特异性PCR检测引物对；
本发明的目的之二是提供一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法；
本发明的目的之三是提供一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
本发明根据G6H1水稻的插入序列设计引物，根据插入序列的5’端旁侧序列(插入序列的5’端旁侧序列为SEQ ID No.18所示；其中，1-480位为水稻基因组序列，481-872位为外源序列)设计8条引物，根据插入序列的3’端旁侧序列(插入序列的3’端旁侧序列为SEQ ID No.19所示；其中，1-518位为外源序列，519-831为水稻基因组序列)设计9条引物，分别将上述引物进行配对，目标序列长度在100～400bp之间。以质量分数分别为100％、1％和0.1％的G6H1水稻和非转基因水稻秀水110DNA为模板，应用常规PCR反应条件和反应体系，对21对引物进行PCR扩增，从中筛选出扩增结果较好的8对特异性检测引物，能够应用于定性检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种，所述8对特异性PCR检测引物对的具体序列如下：
引物对1：由SEQ ID No.2和SEQ ID No.6的核苷酸序列组成；
引物对2：由SEQ ID No.2和SEQ ID No.5的核苷酸序列组成；
引物对3：由SEQ ID No.4和SEQ ID No.6的核苷酸序列组成；
引物对4：由SEQ ID No.4和SEQ ID No.5的核苷酸序列组成；
引物对5：由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7的核苷酸序列组成；
引物对6：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.5的核苷酸序列组成；
引物对7：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7的核苷酸序列组成；
引物对8：由SEQ ID No.10和SEQ ID No.15的核苷酸序列组成。
为了进一步提高检测的特异性和灵敏度，本发明对上述8对引物检测的灵敏度进行了筛选实验。实验结果表明，由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5以及由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7具有较高的检测灵敏度(均可达到0.1％的检测灵敏度)，远远优于其它6对引物的检测灵敏度；本发明以由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5以及由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7作为候选引物，进行下一步的PCR反应体系和反应程序优化。结果表明，由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7在G6H1水稻质量分数为0.1％时的扩增效率高于由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5。
由上述实验结果可见，采用由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7所示的引物对7作为引物定性检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种不仅具有更佳的检测灵敏度，而且具有最好的扩增效率；因此，本发明最优选采用由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7所示的引物对7作为引物定性检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种。
本发明的目的之二是提供一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，该方法包括以下步骤：(1)提取待检测水稻样品的DNA；(2)以提取的DNA为模板，分别以引物对1-8为扩增上下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；(3)如果从待检测的样品中扩增出目的条带，则待检测的水稻样品是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种；如果从待检测的样品中未能扩增出目的条带，则待检测的水稻样品不是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种。
优选的，一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，该方法包括以下步骤：(1)提取待检测水稻样品的DNA；(2)以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.4和SEQ ID No.7所示核苷酸为扩增上下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；(3)如果从待检测的样品中扩增出290bp的条带，则待检测的水稻样品是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种；如果从待检测的样品中未能扩增出290bp的条带，则待检测的水稻样品不是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种。
本发明还提供了另一种较优的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，该方法包括以下步骤：(1)提取待检测水稻样品的DNA；(2)以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.1和SEQ IDNo.7所示核苷酸为扩增上下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；(3)如果从待检测的样品中扩增出243bp的条带，则待检测的水稻样品是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种；如果从待检测的样品中未能扩增出243bp的条带，则待检测的水稻样品不是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种。
其中，所述的从待检测水稻样品中提取DNA的方法，可以是从植物材料中提取DNA的各种常用方法，例如可以是CTAB法、异硫氰酸胍法或盐酸胍法等各种方法。
PCR反应体系中引物的终浓度以及退火温度对于检测结果的特异性、灵敏度均有一定的影响；本发明优化了PCR反应体系中引物终浓度以及退火温度，优化实验结果发现退火温度为58℃，引物终浓度为0.4μmol/L，扩增效率高，检测结果的特异性最强，灵敏度最高。
本发明中所述的PCR反应体系可参考以下方法建立：
PCR反应体系总体积为25.0μL，其中，10×PCR缓冲液2.5μL，25mmol/L氯化镁溶液1.5μL，dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)2.0μL，10μmol/L上游引物0.5μL，10μmol/L下游引物0.5μL，2.5U/μL Taq DNA聚合酶0.25μL，25mg/L DNA模板2μL，余量为双蒸水。
PCR反应程序优选为：94℃变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸60s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
本发明的目的之三是提供一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒，包括：10×PCR缓冲液，氯化镁溶液，dNTPs混合溶液，检测上下游引物对，Taq DNA聚合酶和双蒸水；其中，所述检测上下游引物对选自引物对1-8中的任意一对引物，优选为引物对5或引物对7，更优选为引物对7(由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对)。
对本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法进行特异性测试，结果表明，仅从质量分数为1％和0.1％的G6H1水稻样品中扩增到预期DNA条带，而在其它转基因水稻混合物(科丰6号、科丰8号、克螟稻等)、转基因玉米混合物(Bt11、Bt176、MON810等)、转基因大豆混合物(356043、305423、CV127等)、转基因棉花混合物(MON1445、MON531、MON15985等)、转基因油菜混合物(MS1、MS8、RF1等)和非转基因水稻中均未扩增到预期大小的条带，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法具有高度特异性。
灵敏度测试结果表明，在G6H1水稻质量分数为0.1％以上(含10％、5％、1％、0.5％、0.1％)的样品中均能稳定扩增到预期DNA片段，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的灵敏度可达到0.1％。
模拟加工品测试结果表明，利用本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法可从熟食产品中特异性地扩增到预期DNA片段，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法适用于G6H1水稻及其衍生品种制品的定性PCR检测。
检出限的测试结果表明，从20份质量分数为0.1％的G6H1水稻样品中均能稳定检测出预期DNA片段，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的检出限为0.1％。
本发明所涉及到的术语定义
除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。
术语“转基因植物”意指在实验室里通过重组DNA技术人工插入其他物种基因以创造出拥有新特性的植物。
术语“密码子”意指信使RNA链上决定一个氨基酸的相邻的三个碱基叫做一个“密码子”，亦称三联体密码。
术语“引物”意指一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。
术语“聚合酶链式反应”，简称PCR，意指一种分子生物学技术，用于放大扩增特定的DNA片段，PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温(经常是60℃左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72℃左右)，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
附图说明
图1为转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1中插入基因结构图；
图2为筛选出的8对特异性检测引物的PCR电泳图；
图3为灵敏度测试筛选出的2对特异性检测引物(即：引物对5和引物对7)的PCR电泳图；
图4为由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7作为引物进行的PCR反应程序和体系优化；
图5为由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5作为引物进行的PCR反应程序和体系优化；
图6为转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的特异性测试；
图7为转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的灵敏度测试；
图8为转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法用于G6H1水稻加工产品测试；
图9为转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法检出限的测试；1-20为20份质量分数为0.1％的G6H1水稻样品，每个样品3次平行PCR反应。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的引物筛选及PCR反应条件的优化
1、引物设计和筛选
根据G6H1水稻的插入序列(图1)设计引物，根据插入序列的5’端旁侧序列设计8条引物，根据插入序列的3’端旁侧序列设计9条引物，分别将上述引物进行配对，目标序列长度在100～400bp之间，引物序列见表1。
表1设计引物信息表
以质量分数分别为100％、1％和0.1％的G6H1水稻和非转基因水稻DNA为模板，空白对照中用双蒸水代替PCR反应体系的模板，应用常规PCR反应条件和反应体系，根据扩增序列位置及大小，利用两端的引物合理配对形成21对扩增引物，用21对引物进行PCR扩增，从中筛选出扩增结果较好的8对特异性检测引物(表2)，PCR结果见图2。
表2筛选到的8对引物信息表
将G6H1水稻与非转基因水稻按质量比，混合制成G6H1水稻质量分数分别为10％、5％、1％、0.5％、0.1％、0.05％的样品，以非转基因水稻为阴性对照，空白对照中用双蒸水代替PCR反应体系的模板，对上述8个引物组合进行灵敏度测试，结果表明，其中有2对引物组合(即，由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5，由SEQ ID No.1和SEQ IDNo.7组成的引物对7)可达到0.1％的检测灵敏度(图3)，尤其适合用于G6H1水稻的特异性检测；另外的6对引物组合只能达到1％的检测灵敏度。
因此，本发明选择由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5以及由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7作为候选引物进行下一步的PCR反应体系和反应程序优化。
2、PCR反应体系和反应程序优化
以质量分数分别为1％和0.1％的G6H1水稻为测试对象，以非转基因水稻秀水110为阴性对照，空白对照中用双蒸水代替PCR反应体系的模板，设置54℃、56℃、58℃、60℃等4种退火温度；0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.4μmol/L、0.8μmol/L等4种引物终浓度，采用正交实验设计，进行PCR扩增。
结果表明，由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7在质量分数为0.1％时的扩增效率显著高于由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7组成的引物对5(图4、图5)。此外，SEQ ID No.1和SEQ ID No.7所示的引物对7在退火温度为58℃时扩增效率很高，而且引物终浓度为0.4μmol/L时，已经表现出较高的扩增效率。因此，最终确定由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7组成的引物对7为最佳引物，退火温度优选为58℃，引物终浓度优选为0.4μmol/L。
实施例2转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR反应体系及反应程序的建立
根据实施例1中筛选的检测引物的Tm值以及扩增结果稳定性，确定转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR反应体系(见表3)以及反应程序：94℃变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸60s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
表3转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR反应体系
实验例1转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的特异性测试
1、植物材料
转基因水稻：G6H1、科丰6号、科丰8号、克螟稻、M12、TT51；
其它转基因植物：
玉米：Bt11、Bt176、MON810、MON863、GA21、NK603、T25、TC1507、MON89034、59122、MIR604、MON88017、3272、MON87460；
大豆：356043、305423、CV127、MON89788、A5547-127、A2704-12、GTS40-3-2；
棉花：MON1445、MON531、MON15985、LLCOTTON25、MON88913；油菜：MS1、MS8、RF1、RF2、RF3、T45、Oxy235、Topas19/2；
非转基因水稻秀水110；
转基因玉米、大豆、棉花和油菜购于西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；转基因水稻及非转基因水稻秀水110由本实验收集；其中，转基因水稻G6H1种子由研发者浙江大学沈志成教授提供。
2、实验方法及结果
利用下述9种样品，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.7为特异性引物对，用实施例2建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法进行特异性测试：
1)质量分数为1％的G6H1水稻；
2)质量分数为0.1％的G6H1水稻；
3)转基因水稻混合物(科丰6号、科丰8号、克螟稻、M12、TT51，每种转化体含量为1％)；
4)转基因玉米混合物(Bt11、Bt176、MON810、MON863、GA21、NK603、T25、TC1507、MON89034、59122、MIR604、MON88017、3272、MON87460，每种转化体含量为1％)；
5)转基因大豆混合物(356043、305423、CV127、MON89788、A5547-127、A2704-12、GTS40-3-2，每种转化体含量为1％)；
6)转基因棉花混合物(MON1445、MON531、MON15985、LLCOTTON25、MON88913，每种转化体含量为1％)；
7)转基因油菜混合物(MS1、MS8、RF1、RF2、RF3、T45、Oxy235、Topas19/2，每种转化体含量为1％)；
8)非转基因水稻(阴性对照)；
9)用双蒸水代替PCR反应体系的模板(空白对照)。
采用CTAB法提取各种材料的基因组DNA，利用实施例2建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法进行扩增；
PCR扩增条件如下：94℃变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸60s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
定性PCR反应体系同表3。
定性PCR检测结果表明，仅从G6H1水稻样品中(质量分数为1％和0.1％)扩增到预期DNA条带，而在其它样品中均未扩增到预期大小的条带(图6)，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法具有高度特异性。
实验例2转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的灵敏度测试
1、实验方法
将转基因G6H1水稻与对应的非转基因水稻秀水110按质量比，混合制成G6H1质量分数分别为10％、5％、1％、0.5％、0.1％、0.05％的样品，采用CTAB法提取基因组DNA，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.7为特异性引物对，按照实施例2建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法进行PCR扩增，以非转基因水稻秀水110为阴性对照，空白对照中用双蒸水代替PCR反应体系的模板。
2、实验结果
结果显示，在G6H1含量为0.1％以上(含0.1％)的样品中均能稳定扩增到预期DNA片段(图7)，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的灵敏度可达到0.1％。
实验例3本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1定性PCR检测方法用于模拟加工品测试
1、实验方法
以转基因G6H1水稻质量分数为1％的水稻粉为原料，高温高压121℃，处理30min。采用CTAB法提取模拟加工品的水稻基因组DNA，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.7为特异性引物对，按照实施例2建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法进行PCR扩增，以质量分数为1％G6H1水稻为阳性对照，以非转基因水稻秀水110为阴性对照，空白对照中用双蒸水代替PCR反应体系的模板。
2、实验结果
结果表明，利用本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法可从熟食产品中特异性地扩增到预期DNA片段(图8)，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法适用于G6H1水稻及其衍生品种制品的定性PCR检测。
实验例4转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法检出限的测试
1、实验方法
随机称取20份质量分数为0.1％的G6H1水稻样品，采用CTAB法提取基因组DNA，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.7为特异性引物对，按照实施例2建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法进行PCR扩增，每个样品设置3次平行PCR反应，以非转基因水稻秀水110为阴性对照，空白对照中用双蒸水代替PCR反应体系的模板。
2、实验结果
结果如图9所示，20份样品中均能稳定检测出预期DNA片段，表明本发明建立的转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法的检出限为0.1％。

Claims (10)

1.用于检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的特异性PCR检测引物对，其特征在于，选自以下8对引物中的任意一对：
引物对1：由SEQ ID No.2和SEQ ID No.6的核苷酸序列组成；
引物对2：由SEQ ID No.2和SEQ ID No.5的核苷酸序列组成；
引物对3：由SEQ ID No.4和SEQ ID No.6的核苷酸序列组成；
引物对4：由SEQ ID No.4和SEQ ID No.5的核苷酸序列组成；
引物对5：由SEQ ID No.4和SEQ ID No.7的核苷酸序列组成；
引物对6：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.5的核苷酸序列组成；
引物对7：由SEQ ID No.1和SEQ ID No.7的核苷酸序列组成；
引物对8：由SEQ ID No.10和SEQ ID No.15的核苷酸序列组成。
2.权利要求1所述的特异性PCR检测引物对在检测转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种中应用。
3.一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)提取待检测水稻样品的DNA；(2)以提取的DNA为模板，以权利要求1所述的特异性PCR检测引物对为扩增上下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；(3)如果从待检测的样品中扩增出目的条带，则待检测的水稻样品是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种；如果从待检测的样品中未能扩增出目的条带，则待检测的水稻样品不是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种。
4.一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待检测水稻样品的DNA；
(2)以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.1和SEQ ID No.7所示核苷酸为扩增上下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；
(3)如果从待检测的样品中扩增出243bp的条带，则待检测的水稻样品是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种；如果从待检测的样品中未能扩增出243bp的条带，则待检测的水稻样品不是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种。
5.一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)提取待检测水稻样品的DNA；(2)以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.4和SEQ ID No.7所示核苷酸为扩增上下游引物建立PCR扩增体系并进行PCR扩增；(3)如果从待检测的样品中扩增出290bp的条带，则待检测的水稻样品是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种；如果从待检测的样品中未能扩增出290bp的条带，则待检测的水稻样品不是转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1或其衍生品种。
6.按照权利要求3-6任何一项所述的定性PCR检测方法，其特征在于，PCR反应体系为：反应体系总体积为25.0μL，其中，10×PCR缓冲液2.5μL，25mmol/L氯化镁溶液1.5μL，dNTPs混合溶液2.0μL，10μmol/L上游引物0.5μL，10μmol/L下游引物0.5μL，2.5U/μL Taq DNA聚合酶0.25μL，25mg/L DNA模板2μL，余量为双蒸水。
7.按照权利要求3-6任何一项所述的定性PCR检测方法，其特征在于，其反应程序为：94℃变性5min；94℃变性30s，54-60℃退火45s，72℃延伸60s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
8.按照权利要求7所述的定性PCR检测方法，其特征在于，其反应程序为：94℃变性5min；94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸60s，共进行35次循环；72℃延伸7min。
9.一种转基因抗虫耐除草剂水稻G6H1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒，包括：10×PCR缓冲液，氯化镁溶液，dNTPs混合溶液，检测上下游引物对，Taq DNA聚合酶和双蒸水；其特征在于：所述检测上下游引物为权利要求1所述的特异性PCR检测引物对。
10.按照权利要求9所述的定性PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的特异性PCR检测引物对为权利要求1所述的引物对5或引物对7。
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