CN103908677A - 肿瘤靶向多肽-阿霉素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
肿瘤靶向多肽-阿霉素衍生物及其制备方法和应用，该化合物由以下步骤制得：将多肽溶于pH值7.8～8.2的磷酸盐缓冲液里，再将DOXO-EMCH溶于溶剂中得到溶液，所述多肽为T10肽或T15肽，所述溶剂为水与N，N’-二甲基甲酰胺的混合物，将DOXO-EMCH溶液滴加入到多肽溶液中，室温下避光搅拌反应，再将溶液离心去除沉淀，即可制得粗产物；采用制备色谱法对粗产物进行分离纯化，离心浓缩，制得精制品T10-DOXO-EMCH或T15-DOXO-EMCH。本发明化合物阿霉素腙衍生物在肿瘤酸性微环境中，腙键选择性断开，释放出药理活性的阿霉素，提高药物疗效，逆转肿瘤耐药性。
Description
技术领域
本发明属于生物与医药技术领域，具体涉及一种具有抗癌活性的多肽—阿霉素衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
阿霉素（DOX）属蒽环类化合物，是最有效的抗癌药物之一，在临床上被广泛用于治疗急性白血病、乳腺癌、淋巴瘤以及各种实体瘤。但与其它抗癌药物一样，由于其易产生耐药性，选择性差，阿霉素的临床应用受到严重的限制。在近20年中，人们针对阿霉素进行了大量的结构改造和修饰，以期增强肿瘤靶向性，提高疗效。
抗癌药物的耐药性和低选择性，可以通过以各种多肽或蛋白作为携带载体，利用载体所具有的受体介导的内吞机制，增加其对癌细胞直接的靶向性来获得改善。上述结合物的选择性既可以通过癌细胞膜上存在的可以被特异性片段识别的受体，也可由癌细胞膜上具有比正常细胞更高水平的受体来获得。文献报道，转铁蛋白受体在肿瘤细胞表面的表达水平远高于正常细胞，因此，我们选择转铁蛋白受体为我们特征性的受体。目前，转铁蛋白受体的配体，转铁蛋白作为头基广泛用于构建肿瘤靶向给药系统。但是机体的内源性转铁蛋白浓度高，竞争抑制转铁蛋白修饰的给药系统的靶向转运。近年通过噬菌体展示技术筛选出的T7肽（HAIYPRH）和T12肽（THRPPMWSPVWP），可靶向结合转铁蛋白受体，且对转铁蛋白受体的亲和性和转铁蛋白相当。而二者在转铁蛋白受体上的结合位点与转铁蛋白不同，不会与内源性的转铁蛋白产生竞争抑制，且不影响转铁蛋白本身的生理功能，相反转铁蛋白与受体的结合会促进T7肽和T12肽的入胞效率。同时，它们都是小分子多肽，具有可化学合成、稳定性好的优点，作为靶向头基空间位阻小，临床应用前景好。
经结构修饰的药物到达肿瘤部位后，能否以活性形式有效释放出来，关系到药物能否进入靶向部位发挥药效，是药物设计的又一关键问题。肿瘤细胞的旺盛生长伴随着大量酸性代谢产物的形成和外排，从而形成肿瘤酸性微环境。研究发现，腙键在酸性条件下选择性断开，而在正常生理环境中保持稳定。近年来，阿霉素的腙衍生物，例如（6-马来酰亚胺基己酰基）腙衍生物（DOXO-EMCH），作为共价键连接体，构建靶向给药系统，引起了广泛的关注。
发明内容
解决的技术问题：
本发明的目的是提供一种肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物及其制备方法和应用。
技术方案：
肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物，结构通式如式I所示：
其中R为T10肽：HAIYPRHGGC或T15肽：THRPPMWSPVWPGGC。
上述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，包括以下步骤：步骤1，将多肽溶于pH值7.8～8.2的磷酸盐缓冲液里，再将阿霉素前体药物（6-马来酰亚胺基己酰基）腙衍生物（DOXO-EMCH）溶于溶剂中得到溶液，所述多肽为T10肽或T15肽，所述溶剂为水与N，N’—二甲基甲酰胺的混合物，将DOXO-EMCH溶液滴加入到多肽溶液中，室温下避光搅拌反应，再将溶液离心去除沉淀，即可制得粗产物；步骤2，采用制备色谱法对粗产物进行分离纯化，离心浓缩，制得精制品T10-DOXO-EMCH或T15-DOXO-EMCH。
所述步骤1中，DOXO-EMCH溶于的溶剂为水与N，N’—二甲基甲酰胺的1:1体积比混合物。
所述步骤1中，DOXO-EMCH与多肽摩尔比为2:1。
所述步骤1中，DOXO-EMCH滴加入到多肽溶液中的速率为25μL/min。
所述步骤1中，避光室温搅拌时间为1.5h。
所述步骤2中，制备色谱法的色谱条件为：制备柱SanFire Prep C18OBD柱：18mm×150mm，10μm；流动相A为甲酸水溶液，其中甲酸体积百分比浓度为0.01%，流动相B为100%乙腈；梯度洗脱分离目标产物。T10‐DOXO‐EMCH的洗脱程序是：0～5min，5～20%B，5～15min，20%～50%B，15～20min，50%～80%B，20～25min，80%～20%B，25～30min，20%～5%B，T15‐DOXO‐EMCH的洗脱程序是：0～5min，10%～20%B，5～15min，20%～20%B，15～20min，20%～50%B，20～25min，50%～90%B，25～30min，90%～10%B。
上述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
抗肿瘤药物，有效成分为权利要求1式I所示的肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物。
上述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物在抗肿瘤中的应用。
有益效果：
1）选用阿霉素的6-马来酰亚胺基己酰基腙衍生物—DOXO-EMCH，与小分子多肽共价连接，采用化学法制备肿瘤靶向的多肽—阿霉素衍生物；
2）制备方法简单易行，反应速率高，耗时短，产物的纯度和产率较高，可直接用于细 胞和动物试验；
3）本发明的阿霉素衍生物由于多肽修饰的作用，使其具有了高效的入胞能力，可在相对较短的时间内得到较高的肿瘤细胞摄取效率，且在肿瘤细胞酸性pH介质的作用下，衍生物的腙键断裂，释放出游离阿霉素，提高了对肿瘤的治疗效率；
4）本发明的多肽—阿霉素衍生物具有更高的肿瘤细胞靶向特征和肿瘤生长抑制特征，以转铁蛋白受体高表达的人乳腺癌细胞MCF-7/ADR细胞为细胞模型，以荷瘤小鼠为动物模型，衍生物各组可增强肿瘤细胞对阿霉素的摄取，提高细胞内药物浓度，抑制肿瘤细胞的生长，诱导其凋亡，抑制裸鼠移植肿瘤的生长；
5）以多肽为靶向头基，与阿霉素腙衍生物共价连接，制备新的复合物，提高肿瘤细胞对药物的摄取能力，对酸敏感的腙键在肿瘤细胞的酸性环境中断裂，允许游离的阿霉素释放出来，结合拓扑异构酶，干扰DNA的合成，发挥药效；
6）本发明所述的T10肽和T15肽均为小分子多肽，可化学合成，稳定性好，作为靶向头基空间位阻小；
7）本发明所述的阿霉素腙衍生物在肿瘤酸性微环境中，腙键选择性断开，释放出药理活性的阿霉素，提高药物疗效，逆转肿瘤耐药性。
附图说明
图1为本发明的T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH的LC/MS/MS图谱；其中，A：T10-DOXO-EMCH的总离子图；B：T15-DOXO-EMCH的总离子图；C：T10-DOXO-EMCH的子离子图；D：T15-DOXO-EMCH的子离子图；
图2为MCF-7/ADR细胞对多肽—阿霉素衍生物和游离阿霉素的摄取比较示意图；其中，A：DOX；B：T10-DOXO-EMCH；C：T15-DOXO-EMCH；
图3为本发明的多肽—阿霉素衍生物和游离阿霉素对MCF-7/ADR肿瘤细胞生长抑制曲线；
图4为本发明的多肽—阿霉素衍生物和游离阿霉素引起的细胞凋亡情况检测示意图；其中，分别代表DAPI染核图像，TUNEL检测凋亡的细胞图像，合并后的图像；A：DOX；B：T10-DOXO-EMCH；C：T15-DOXO-EMCH；
图5为本发明的多肽—阿霉素衍生物和游离阿霉素引起的细胞凋亡率示意图；
图6显示了本发明的多肽—阿霉素衍生物和游离阿霉素对移植瘤裸鼠模型瘤体积的抑制情况示意图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1多肽-阿霉素复合物的合成及纯化
（1）T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH的制备
称取0.8mg的T10肽，溶于600μL pH7.8～8.2磷酸盐缓冲液中，再称取1.13mg的DOXO-EMCH，溶于600μL N，N’—二甲基甲酰胺水溶液中，其中N，N’—二甲基甲酰胺与水的体积比为1:1，以25μL/min的速率滴加入多肽溶液中，室温反应1.5h，生成T10-DOXO-EMCH，溶液转移到离心管中，8000×g离心5min去除未反应的物质，制得粗产物。
阿霉素前体药物（6-马来酰亚胺基己酰基）腙衍生物—DOXO-EMCH的结构如下：
称取1.23mg的T15肽，溶于600μL pH7.8～8.2磷酸盐缓冲液中，再称取1.13mg的DOXO-EMCH，溶于600μL N，N’—二甲基甲酰胺水溶液中，其中N，N’—二甲基甲酰胺与水的体积比为1:1，以25μL/min的速率滴加入多肽溶液中，室温反应1.5h，生成T15-DOXO-EMCH，溶液转移到离心管中，8000×g离心5min去除未反应的物质，制得粗产物。
（2）T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH的纯化
采用制备色谱法分离纯化反应粗产物，选用SanFire Prep C18OBD柱（18mm×150mm，10μm）；流动相A为甲酸水溶液，其中甲酸体积百分比浓度为0.01%，流动相B为100%乙腈；梯度洗脱，T10-DOXO-EMCH的洗脱程序是：0～5min，5%～20%B；5～15min，20%～50%B；15～20min，50%～80%B；20～25min，80%～20%B；25～30min，20%～5%B；T15-DOXO-EMCH的洗脱程序是：0～5min，10%～20%B；5～15min，20%～20%B；15～20min，20%～50%B；20～25min，50%～90%B；25～30min，90%～10%B；检测波长495nm；体积流量10mL/min，收集各个峰进行液质联用（LC/MS/MS）法和核磁共振（NMR）法分析，确认化合物T10-DOXO-EMCH及化合物T15-DOXO-EMCH。多次进样并收集目标峰，分置离心管中，4℃，转速6000×g下，离心浓缩，获得终产物，进样分析性色谱，测定纯化纯度，在98%以上。
T10‐DOXO‐EMCH的结构式为：
T15‐DOXO‐EMCH的结构式为：
（3）LC/MS/MS法和NMR法鉴定产物
LC/MS/MS法鉴定产物，采用Agilent1200系列高效液相色谱系统和6410三重四级杆液质联用仪，使用Thermo Biobasic C8（150×4.6mm，5μm）色谱柱在室温下进行色谱分离。流动相A为0.01%甲酸-水溶液，流动相B为100%乙腈；梯度洗脱，洗脱程序为：0～5min，75～50%B；5～15min；50%～25%B；15～20min，25%～75%B；质谱系统的离子源为电喷雾电离源（ESI）；正离子扫描模式；喷雾电压4000V；雾化压力45psi；雾化温度350℃；雾化气流10L/min；检测方式为全扫描（Full Scan）和子离子扫描（Product Scan），采集时间设在200ms；传输电压设为120V，碰撞能分别设为30eV，所有数据均通过Agilent MassHunter工作站软件（B.01.04版）采集和处理。
T10-DOXO-EMCH总离子流图见图1（A），ESI-MS/MS m/z：930.9[M+2H]2+和620.9[M+3H]3+；T15-DOXO-EMCH总离子流图见图1（B），ESI-MS/MS m/z：1230.4[M+2H]2+和820.6[M+3H]3+。当碰撞能设置为30eV时，可见质谱碎片特征。如图1（C）所示，T10-DOXO-EMCH含有肽段序列特异性的b离子（m/z138（b1），m/z209（b2），m/z322（b3））；以及DOXO-EMCH特征碎片（m/z376），可以验证该产物的合成。如图1（D）所示，T15-DOXO-EMCH含有肽段序列特异性的b离子（m/z239（b2），m/z395（b3），m/z 906（b7），m/z993（b8），m/z1189（b10）和m/z1375（b11））；含有y离子的特征碎片（m/z174（y1），m/z688.2（y3））；以及DOXO-EMCH的特征碎片（m/z376），可以验证该产物的合成。
采用1H-NMR法确证目标化合物。1H-NMR测试采用德国Bruker公司DSX400核磁共振波谱仪，以重水为溶剂，四甲基硅烷(TMS)为化学位移内标。在DOXO-EMCH氢谱中，6.70，6.66ppm为马来酰亚胺基团上双键氢的特征峰，而在T10-DOXO-EMCH氢谱图中，8.41ppm处T10主峰保留，3.82，2.96，3.16ppm处新峰的出现，表明DOXO-EMCH马来酰亚胺基团上的双键发生麦克尔加成反应，验证了T10-DOXO-EMCH的合成。在T15-DOXO-EMCH氢谱中，8.57ppm处T15的主峰保留，3.84，3.03，3.13ppm处新峰的出现，表明马来酰亚胺基团上的双键发生麦克尔加成反应，验证了T15-DOXO-EMCH的合成。
实施例2细胞内阿霉素积蓄实验
MCF-7/ADR细胞以1×105/孔的密度接种于6孔培养板中，置37℃、5%二氧化碳环境中孵育24h后，加入DOX及其衍生物T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH，终浓度为1.5μM，药物作用12h。吸弃含药培养液，用冷PBS洗细胞3次，荧光显微镜下观察各组处理细胞，结果见图2。MCF-7/ADR细胞经过不同的给药处理后，T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH组细胞内的荧光强度明显高于DOX组。
实施例3MTT法测定细胞存活率试验
将状态良好的MCF-7/ADR细胞消化，用培养液稀释至2×104cells/mL细胞密度，吹匀后于96孔板中每孔加入细胞悬液200μL，置37℃、5%二氧化碳环境中孵育24h，使其贴壁。换用200μL DOX、T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH含药培养液，每个浓度设5个平行孔，同时设置空白对照组，均置于培养箱中孵育72h，再向每孔加入MTT液（5mg/mL）20μL，继续培养4h，吸去培养液，加入DMSO200μL，室温下微孔板震荡器上震荡10min，在酶联免疫检测仪490nm下测定各孔吸光值。以对照细胞为100%，以给药组的细胞存活相对于对照细胞存活的百分率来测定其存活率。
通过MTT方法考察三种药物对MCF-7/ADR肿瘤细胞的细胞毒性作用，绘制细胞存活率曲线，计算IC50值，评价药物的体外细胞毒性。如图3所示，DOX的IC50值为41.5±2.4μM，而T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH的IC50分别为31.6±1.6μM、27.2±0.8μM，说明与DOX相比，T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH的细胞毒性显著增强（P<0.05）。实施例4缺口末端标记（Tunel）法检测细胞凋亡
将2×107/mL密度的细胞制成细胞涂片后，用4%多聚甲醛/PBS液，4℃固定20min。加入20μg/mL的蛋白酶K100μL作透化处理，室温孵育5min，PBS洗涤3次。滴加100μL平衡液，室温孵育30min，再加入TdT孵育缓冲液20μL，37℃温育1h，PBS洗涤后，再用DAPI复染，荧光显微镜下分析样品，结果如图4所示，DAPI染核呈蓝色，凋亡细胞呈绿色。
凋亡检测结果如图5所示。游离阿霉素组的平均细胞凋亡率为22.4%±1.6%，而T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH凋亡率明显增高，分别为35.4%±2.1%.、39.3%±2.4%。
实施例5体内抗肿瘤活性
将处于对数生长期的MCF-7/ADR乳腺癌细胞，用PBS调制细胞混悬液至细胞数为1×l07/mL，以每只0.1mL接种于小鼠右侧腋窝皮下，建立鼠乳腺癌瘤株腋下接种模型。
接种7-14天，待肿瘤体积生长至50-100mm3，对荷瘤小鼠进行尾静脉注射给药。将荷瘤小鼠随机分成4组（每组6只），分别为模型对照组（生理盐水）、DOX、T10-DOXO-EMCH、T15-DOXO-EMCH组，对照组尾静脉给予生理盐水，其余各组分别尾静脉注射给予相应药物，每隔1周给药1次，连续给药3次，给药剂量为5mg DOX/kg鼠重，其中T10-DOXO-EMCH、T15-DOXO-EMCH组需以DOX为有效成分，经换算后再按5mg DOX/kg鼠重标准给药。
给药后，每天观察小鼠的存活状态，用游标卡尺测量肿瘤体积。待各给药组与荷瘤对照组间的肿瘤体积存在明显差异后，结束观察。处死小鼠，称瘤重，计算抑瘤率。
如图6所示，衍生物各组与DOX组比较均能显著抑制肿瘤体积的增长，呈现一定的抗肿瘤活性，且具有良好的剂量依赖性，阿霉素的平均肿瘤抑制率为31.9%±3.98%，T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH的平均抑制率明显增加（p<0.05），分别为59.6%±8.99%，46.4%±6.49%。
综上，利用DOXO-EMCH马来酰亚胺基团上的碳碳双键可与多肽上游离的巯基共价连接的性质，我们设计了T10肽（HAIYPRHGGC）和T15肽（THRPPMWSPVWPGGC），与DOXO-EMCH发生加成反应，形成T10-DOXO-EMCH和T15-DOXO-EMCH衍生物，增加了药物在肿瘤细胞的富集，提高了药物疗效。
序列表
<110> 南京医科大学
<120> 肿瘤靶向多肽-阿霉素衍生物及其制备方法和应用
<130>
<160> 4
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
His Ala Ile Tyr Pro Arg His Gly Gly Cys
1 5 10
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Thr His Arg Pro Pro Met Trp Ser Pro Val Trp Pro Gly Gly Cys
1 5 10 15
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
His Ala Ile Tyr Pro Arg His
1 5
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Thr His Arg Pro Pro Met Trp Ser Pro Val Trp Pro
1 5 10
Claims (10)
1.肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物，其特征在于结构通式如式I所示：
其中R为T10肽：HAIYPRHGGC或T15肽：THRPPMWSPVWPGGC。
2.权利要求1所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，将多肽溶于pH值7.8～8.2的磷酸盐缓冲液里，再将DOXO-EMCH溶于溶剂中得到溶液，所述多肽为T10肽或T15肽，所述溶剂为水与N，N’—二甲基甲酰胺的混合物，将DOXO-EMCH溶液滴加入到多肽溶液中，室温下避光搅拌反应，再将溶液离心去除沉淀，即可制得粗产物；步骤2，采用制备色谱法对粗产物进行分离纯化，离心浓缩，制得精制品T10-DOXO-EMCH或T15-DOXO-EMCH。
3.根据权利要求2所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，DOXO-EMCH溶于的溶剂为水与N，N’—二甲基甲酰胺的1:1体积比混合物。
4.根据权利要求2所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，DOXO-EMCH与多肽摩尔比为2:1。
5.根据权利要求2所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，DOXO-EMCH滴加入到多肽溶液中的速率为25μL/min。
6.根据权利要求2所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，避光室温搅拌时间为1.5h。
7.根据权利要求2所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，制备色谱法的色谱条件为：制备柱SanFire Prep C18OBD柱：18mm×150mm，10μm；流动相A为甲酸水溶液，其中甲酸体积百分比浓度为0.01%，流动相B为100%乙腈；梯度洗脱分离目标产物。
8.权利要求1所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.抗肿瘤药物，其特征在于有效成分为权利要求1式I所示的肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物。
10.权利要求1所述肿瘤靶向多肽—阿霉素衍生物在抗肿瘤中的应用。
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| CN (1) | CN103908677B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105854025A (zh) * | 2016-04-01 | 2016-08-17 | 南京医科大学 | 多靶点多肽—阿霉素复合物及其制备方法和应用 |
| CN107686507A (zh) * | 2016-08-05 | 2018-02-13 | 首都医科大学 | Rgds‑阿霉素,其合成,活性和应用 |
| CN107686508A (zh) * | 2016-08-05 | 2018-02-13 | 首都医科大学 | 阿霉素‑rgds,其合成,活性和应用 |
| CN107987132A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-05-04 | 南京医科大学 | 一种抗her2多肽-阿霉素复合物及其制备方法和应用 |
| CN110386962A (zh) * | 2019-07-04 | 2019-10-29 | 苏州强耀生物科技有限公司 | 一种阿霉素偶联靶向多肽的合成方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010064207A2 (en) * | 2008-12-03 | 2010-06-10 | Koji Kawakami | Selective anticancer chimeric peptide |
| CN102048694A (zh) * | 2009-11-06 | 2011-05-11 | 复旦大学 | 一种多肽修饰的肝肿瘤靶向纳米给药系统及其制备方法 |
-
2014
- 2014-04-04 CN CN201410137337.7A patent/CN103908677B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010064207A2 (en) * | 2008-12-03 | 2010-06-10 | Koji Kawakami | Selective anticancer chimeric peptide |
| CN102048694A (zh) * | 2009-11-06 | 2011-05-11 | 复旦大学 | 一种多肽修饰的肝肿瘤靶向纳米给药系统及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HEIDI L. PEREZ ET AL.: "Antibody-drug conjugates: current status and future directions", 《DRUG DISCOVERY TODAY》 * |
| JAE H. LEE ET AL.: "Receptor mediated uptake of peptides that bind the human transferrin receptor", 《EUR. J. BIOCHEM.》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105854025A (zh) * | 2016-04-01 | 2016-08-17 | 南京医科大学 | 多靶点多肽—阿霉素复合物及其制备方法和应用 |
| CN105854025B (zh) * | 2016-04-01 | 2018-11-27 | 南京医科大学 | 多靶点多肽—阿霉素复合物及其制备方法和应用 |
| CN107686507A (zh) * | 2016-08-05 | 2018-02-13 | 首都医科大学 | Rgds‑阿霉素,其合成,活性和应用 |
| CN107686508A (zh) * | 2016-08-05 | 2018-02-13 | 首都医科大学 | 阿霉素‑rgds,其合成,活性和应用 |
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