CN103898147A - 一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法 - Google Patents
一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，它包括以下步骤：p10基因的扩增；MnSOD基因的扩增；将p10基因连接到pET-28a(+)载体，构建重组质粒pET-28a-p10；将MnSOD基因连接到重组载体pET-28a-p10中p10基因的羧基端，构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD；转化重组质粒，培养，诱导表达MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白。该方法得到的MnSOD融合p10蛋白表达在菌体超声后的上清中，解决了p10蛋白连接到MnSOD羧基端后容易降解的问题。
Description
技术领域
本发明涉及基因重组和表达技术领域，具体涉及一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法。
背景技术
家蚕核型多角体病毒的p10基因是病毒的两个极晚期高效表达基因之一。p10基因全长1099bp，含有1个213bp的开放阅读框，编码70个氨基酸，因其蛋白分子量约为10kDa而得名。
p10蛋白属于比较小的蛋白，不利于直接获得其晶体，通过把p10蛋白连接到其他易于结晶和已知三级结构的载体蛋白上进行融合表达，既能有效提高p10蛋白的表达量，又有利于p10蛋白的结晶和结构解析。
之前有研究把p10蛋白连接到MnSOD的羧基端进行融合表达，但融合蛋白经过纯化、结晶以及X射线衍射解析出晶体结构后发现，MnSOD羧基端所连接的p10蛋白已经大部分降解了，故无法进一步解析出p10蛋白的三级结构(参考文献:张小蓓等.MnSOD融合表达家蚕核型多角体病毒p10蛋白并进行共结晶条件初筛.中国科技论文在线)。究其原因，是因为该方法得到的MnSOD融合p10蛋白表达在菌体超声后的沉淀中，这使得后续的纯化和结晶对融合蛋白的构象破坏严重，从而使无法解析出p10蛋白的三级结构。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术的不足，提供一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，该方法得到的MnSOD融合p10蛋白表达在菌体超声后的上清中，解决了p10蛋白连接到MnSOD羧基端后容易降解的问题。
本发明所采用的技术方案为：
一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，该方法包括以下步骤：
（1）p10基因的扩增；
（2）MnSOD基因的扩增；
（3）将p10基因连接到pET-28a(+)载体，构建重组质粒pET-28a-p10；
（4）将MnSOD基因连接到重组载体pET-28a-p10中p10基因的羧基端，构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD；
（5）转化重组质粒，培养，诱导表达MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白。
所述步骤（1）中p10基因的扩增具体是指：以pGEX-6p-1-p10重组质粒为模板，以5'-CCATATGTCAAAGCCTAACGTTTTGAC-3'（其中下划线为NdeⅠ酶切位点）为上游引物、5'-CGAAGCTTGGAGTCTGGAGGATCC-3'（其中下划线为HindIII酶切位点）为下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增的具体程序为95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸30s、循环30次、最后72℃延伸10min，回收产物，得到p10基因。
所述步骤（2）中MnSOD基因的扩增具体是指：以MnSOD基因为模板，以5'-CGAAGCTTATGCCATTTGAATTGCC-3'（其中下划线为HindIII酶切位点）为上游引物、5'-CCCTCGAGTTACTTCGCTTTCGCTTCG-3'（其中下划线为XhoⅠ酶切位点）为下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增的具体程序为95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸45s、循环30次、最后72℃延伸10min，回收产物，得到MnSOD基因。
所述步骤（3）中构建重组质粒pET-28a-p10具体是指：p10基因和pET-28a(+)载体利用NdeⅠ和HindIII同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行连接60min并转化E.coliTG1感受态细胞，挑取单菌落摇菌培养后提取质粒，得到重组质粒pET-28a-p10。
所述步骤（4）中构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD具体是指：MnSOD基因和pET-28a-p10载体利用HindIII和XhoⅠ同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行连接60min并转化E.coliTG1感受态细胞，挑取单菌落摇菌培养后提取质粒，得到重组质粒pET-28a-p10-MnSOD。
所述步骤（5）中诱导表达具体是指：将重组质粒pET-28a-p10-MnSOD转化至E.coliBL21中，在含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中37℃，220rpm振荡培养至OD600=0.5，加入终浓度为1mM的IPTG，37℃，220rpm诱导表达4h。
与现有技术相比，本发明具有以下显著优点和有益效果：本发明通过设计引物，将p10连接到MnSOD的氨基端，然后通过调整工艺参数，包括PCR具体过程、控制诱导表达的起点和时间以及诱导物的加入浓度，构建了重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD，成功使得表达的目标蛋白部分存在于上清溶液中，解决了p10蛋白连接到MnSOD羧基端后容易降解的问题，为以后研究其三级结构和生物学功能奠定了基础。
附图说明
图1所示的是本发明重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD的测序鉴定结果；
图2所示的是本发明对重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD的表达产物进行SDS-PAGE鉴定的结果，其中M:蛋白分子标记；1：pET-28a-p10-MnSOD未诱导对照；2：pET-28a-p10-MnSOD诱导表达；3：pET-28a-p10-MnSOD诱导表达后上清；4：pET-28a-p10-MnSOD诱导表达后沉淀；
图3所示是本发明对重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD的表达产物进行WesternBlotting鉴定的结果，其中M：蛋白分子标记；1：pET-28a-p10-MnSOD未诱导对照；2：pET-28a-p10-MnSOD诱导表达后上清；3：pET-28a-p10-MnSOD诱导表达后沉淀；
图4所示是本发明对重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD的表达产物进行MS/MS质谱鉴定的结果：A：PBS上清中目的蛋白的肽段二级质谱匹配图；B：PBS沉淀中目的蛋白的肽段二级质谱匹配图。
序列表信息：
SEQIDNO.1：p10基因的核苷酸序列；
SEQIDNO.2：MnSOD基因的核苷酸序列；
SEQIDNO.3：p10-MnSOD融合蛋白的氨基酸序列；
SEQIDNO.4：p10基因的上游引物序列；
SEQIDNO.5：p10基因的下游引物序列；
SEQIDNO.6：MnSOD基因的上游引物序列；
SEQIDNO.7：MnSOD基因的下游引物序列。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。
1、原材料：
pGEX-6p-1-p10重组质粒购自特菲（天津）生物医药科技有限公司、pET-28a(+)载体购自Invitrogen公司、E.coliTG1感受态细胞购自Fermentas公司、E.coliBL21购自Fermentas公司。
2、试剂：
各内切酶购自Fermentas公司、PCR试剂购自Invitrogen公司、割胶回收试剂盒购自Invitrogen公司、连接酶ligationhigh购自TOYOBO、质粒提取试剂盒购自康为世纪生物科技公司、卡那霉素购自上海恒远生物科技有限公司、LB培养基购自Oxoid公司。
3、仪器设备：
PCR仪购自BIOMETRA公司、摇床购自天津市天拓科学仪器设备有限公司、离心机购自ThermoFisherScientific、超声仪购自宁波新芝生物科技股份有限公司。
实施例1：重组质粒pET-28a-p10的构建
（1）p10基因的扩增：
扩增p10目的基因，基因序列如SEQIDNO.1所示，引物设计如下：
F1:5'-CCATATGTCAAAGCCTAACGTTTTGAC-3'（下划线为NdeⅠ酶切位点）；
R1:5'-CGAAGCTTGGAGTCTGGAGGATCC-3'（下划线为HindIII酶切位点）。
以pGEX-6p-1-p10重组质粒为模板，用所设计引物F1和R1扩增特异性片段。在50μL离心管中，加入下列组分：
各组分混合均匀后，放入PCR仪中，设计程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次；最后72℃延伸10min。待反应结束后，割胶回收目的片段，得到p10基因。
（2）构建重组质粒pET-28a-p10：
将得到的p10基因和pET-28a(+)载体利用NdeⅠ和HindIII同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行室温连接60min，并转化到E.coliTG1感受态细胞中；挑取单菌落摇菌培养后利用质粒提取试剂盒抽提质粒，得到重组质粒pET-28a-p10。
实施例2：重组质粒pET-28a-p10-MnSOD的构建
（1）MnSOD基因的扩增：
扩增MnSOD目的基因，引物设计如下：
F2:5'-CGAAGCTTATGCCATTTGAATTGCC-3'（下划线为HindIII酶切位点）；
R2:5'-CCCTCGAGTTACTTCGCTTTCGCTTCG-3'（下划线为XhoⅠ酶切位点）。
以MnSOD基因（根据NCBI已知序列，如SEQIDNO.2所示，由华大基因合成）为模板，用所设计引物F2和R2扩增特异性片段。在50μL离心管中，加入下列组分：
各组分混合均匀后，放入PCR仪中，设计程序为：95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸45s、循环30次、最后72℃延伸10min。待反应结束后，割胶回收目的片段，得到MnSOD基因。
（2）构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD：
将得到的MnSOD基因和pET-28a-p10重组质粒利用HindIII和XhoI同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行室温连接60min，并转化到E.coliTG1感受态细胞中；挑取单菌落摇菌培养后利用质粒提取试剂盒抽提质粒，得到重组质粒pET-28a-p10-MnSOD，并送华大基因测序，其结果如图1。由图1可以看出，重组质粒的核苷酸序列未发现突变。
实施例3：目的融合蛋白的表达
将实施例2重组好的表达载体pET-28a-p10-MnSOD转化至E.coliBL21中得到重组菌，在含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中37℃，220rpm振荡培养至OD600≈0.5，加入IPTG(至终浓度1mM)，37℃，220rpm诱导培养4h。
实施例4：目的融合蛋白的鉴定
将实施例3中诱导培养的菌液以6000rpm离心5min收集表达菌体，菌体沉淀按湿重比1:15加入pH7.4的PBS溶液，进行超声破碎，超声功率为60%，每次超声时间为1.5s，间歇3s，总时间为60min，超声破碎后所得液体经12000rpm离心20min，保存上清，沉淀用pH7.4的PBS溶液溶解，对重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD未诱导表达、诱导表达、诱导表达后上清和诱导表达后沉淀进行SDS-PAGE、WesternBlotting和质谱分析，结果如图2、图3和图4所示。结果表明所表达的重组目的蛋白为p10-MnSOD融合蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，且融合蛋白部分存在于沉淀之中，部分存在于上清之中。
本发明通过设计引物，将p10连接到MnSOD的氨基端，然后通过调整工艺参数，包括PCR具体过程、控制诱导表达的起点和时间以及诱导物的加入浓度，构建了重组表达载体pET-28a-p10-MnSOD，成功使表达的目标蛋白部分存在于上清溶液中，解决了p10蛋白连接到MnSOD羧基端后容易降解的问题。为了尽快得到保护，本发明先就MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法申请此专利，接下来我们会对该存在于上清溶液中的融合蛋白进行大量制备、纯化和结晶，以期得到p10蛋白的三级结构，为研究其生物学功能奠定基础。
实施例所用的实验材料和试剂，除另有说明外，均为适合基因克隆和表达的市售产品。
本发明的上述实施例是对本发明的说明而不能用于限制本发明，与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。
<210>1
<211>213
<212>DNA
<213>Bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus
<400>SEQIDNO.1
<210>2
<211>615
<212>DNA
<213>Geobacillussp.
<400>SEQIDNO.2
<210>3
<211>276
<212>PRT
<213>Fusionprotein
<400>SEQIDNO.3
<210>4
<211>27
<212>DNA
<213>Forwardprimer
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CCATATGTCAAAGCCTAACGTTTTGAC<210>5
<211>24
<212>DNA
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CGAAGCTTGGAGTCTGGAGGATCC
<210>6
<211>25
<212>DNA
<213>Forwardprimer
<400>SEQIDNO.6
CGAAGCTTATGCCATTTGAATTGCC
<210>7
<211>27
<212>DNA
<213>Reverseprimer
<400>SEQIDNO.7
CCCTCGAGTTACTTCGCTTTCGCTTCG
Claims (6)
1.一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）p10基因的扩增；
（2）MnSOD基因的扩增；
（3）将p10基因连接到pET-28a(+)载体，构建重组质粒pET-28a-p10；
（4）将MnSOD基因连接到重组载体pET-28a-p10中p10基因的羧基端，构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD；
（5）转化重组质粒，培养，诱导表达MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（1）中p10基因的扩增具体是指：以pGEX-6p-1-p10重组质粒为模板，以SEQIDNO.4所示为上游引物、SEQIDNO.5所示为下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增的具体程序为95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸30s、循环30次、最后72℃延伸10min，回收产物，得到p10基因。
3.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（2）中MnSOD基因的扩增具体是指：以MnSOD基因为模板，以SEQIDNO.6所示为上游引物、SEQIDNO.7所示为下游引物，进行PCR扩增，PCR扩增的具体程序为95℃预变性5min、95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸45s、循环30次、最后72℃延伸10min，回收产物，得到MnSOD基因。
4.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（3）中构建重组质粒pET-28a-p10具体是指：p10基因和pET-28a(+)载体利用NdeⅠ和HindIII同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行连接60min并转化E.coliTG1感受态细胞，挑取单菌落摇菌培养后提取质粒，得到重组质粒pET-28a-p10。
5.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（4）中构建重组质粒pET-28a-p10-MnSOD具体是指：MnSOD基因和pET-28a-p10载体利用HindIII和XhoⅠ同时进行双酶切，将酶切回收的产物用ligationhigh进行连接60min并转化E.coliTG1感受态细胞，挑取单菌落摇菌培养后提取质粒，得到重组质粒pET-28a-p10-MnSOD。
6.根据权利要求1所述的一种MnSOD融合家蚕核型多角体病毒p10蛋白的表达方法，其特征在于：所述步骤（5）中诱导表达具体是指：将重组质粒pET-28a-p10-MnSOD转化至E.coliBL21中，在含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中37℃、220rpm振荡培养至OD600=0.5，加入终浓度为1mM的IPTG，37℃、220rpm诱导表达4h。
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Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张小蓓: "家蚕核型多角体病毒P10蛋白的原核表达、纯化与结晶条件筛选", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)农业科技辑》, 15 December 2013 (2013-12-15) * |
| 张小蓓等: "MnSOD融合表达家蚕核型多角体病毒p10蛋白并进行共结晶条件初筛", 《中国科技论文在线》, 26 November 2012 (2012-11-26) * |
Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
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