CN103860668B

CN103860668B - 一种治疗溶血性贫血的药物组合物及其应用

Info

Publication number: CN103860668B
Application number: CN201410098924.XA
Authority: CN
Inventors: 陈金杰
Original assignee: 陈金杰
Current assignee: Qidong Yongchang fruit and vegetable professional cooperatives
Priority date: 2014-03-18
Filing date: 2014-03-18
Publication date: 2015-11-18
Anticipated expiration: 2034-03-18
Also published as: CN103860668A

Abstract

本发明公开了一种治疗溶血性贫血的药物组合物及其应用，该药物组合物中活性成分由白头翁水提物和依维莫司组成，优选白头翁水提物和依维莫司的用量比为25-100：1。本发明为治疗溶血性贫血提供了新的候选药物，具有非常重要的临床意义。

Description

一种治疗溶血性贫血的药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体而言，涉及一种贫血用药，尤其涉及一种治疗溶血性贫血的药物组合物及其应用。

背景技术

贫血是指人体血红蛋白水平低于10～l2g/dL或循环红细胞数量减少，导致需氧组织和器官产生“饥饿感”，由此使得患者表现为容易疲劳和总生活质量下降，严重病例若不治疗还可能有生命危险。贫血按其发病原因，主要以下几类贫血类型。

慢性病贫血(anemiaofchronicdisease，ACD)，又称炎症性贫血(anemiaofinflammation)，其特点为血清铁、转铁蛋白饱和度、总铁结合力降低、贮铁不正常或贮铁水平升高，血清转铁蛋白受体水平不增高及单核-巨噬细胞系统铁水平增高，肠道铁吸收受到抑制。众多的疾病均能引起炎症性贫血，主要分为四大类：慢性感染(骨髓炎、肺炎、深部脓肿、感染性心内膜炎、脑膜炎、HIV感染、真菌和分支杆菌感染)、结缔组织病(系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎)、恶性肿瘤性疾病(何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤、肉瘤、转移癌、多发性骨髓瘤)、慢性病(充血性心力衰竭、肝病、炎性肠病)。

再生障碍性贫血（aplasticanemia，AA，简称再障）是一种获得性骨髓造血功能衰竭症，主要表现为骨髓造血功能低下，全血细胞减少和贫血、出血、感染综合征，免疫抑制治疗有效。发病原因可能为：①病毒感染，特别是肝炎病毒、微小病毒B19等。临床上可见到乙型肝炎相关的再生障碍性贫血病例。②化学因素，特别是氯霉素类抗生素、磺胺类药物及杀虫剂引起的再障与剂量关系不大，但与个人敏感有关。③长期接触X射线、镭及放射性核素等可影响DNA的复制，抑制细胞有丝分裂，干扰骨髓细胞生成，造血干细胞数量减少。

溶血是指红细胞遭破坏寿命缩短的过程，溶血超过造血代偿时出现的贫血即溶血性贫血（hemolyticanemia，HA）。溶血发生而骨髓能够代偿时（骨髓有正常造血6～8倍的代偿能力）可以不出现贫血，称为溶血性疾病。按发病机制，溶血性贫血的临床分类如下：①红细胞自身异常性溶血性贫血，包括红细胞膜异常性溶血性贫血、遗传性红细胞酶缺乏性溶血性贫血、珠蛋白和血红素异常性溶血性贫血。②红细胞周围环境异常所致的溶血性贫血，包括免疫性溶血性贫血、血管性溶血性贫血、生物因素、理化因素等。

肾性贫血是指各种因素造成肾脏促红细胞生成素（EPO）产生不足或尿毒症血浆中一些毒素物质干扰红细胞的生成和代谢而导致的贫血，是慢性肾功能不全发展到终末期常见的并发症。当肾功能开始受损时，慢性肾病病人体内由肾脏分泌产生的促红细胞生成素的总量将不足以满足身体的需要，从而成为引发肾性贫血的最主要原因之一。除此以外，慢性肾功能不全、尿毒症病人，体内堆积大量代谢毒素，缩减了红细胞存活时间；慢性肾病病人长期控制蛋白质的摄入量，而尿蛋白则源源不断从病人体内流失，慢性肾病病人多发生出血倾向，这些情况都有可能导致慢性肾病病人发生肾性贫血。

低度贫血可以通过食疗来纠正血红蛋白水平，一般要给与富于营养和高热量、高蛋白、多维生素、含丰富无机盐和饮食，以助于恢复造血功能。但食疗对血红蛋白升高较慢，其对于中度贫血和重度贫血治疗效果不佳。贫血的药物治疗市场目前几乎全被促红细胞生成药物主导。这类药物靶向促红细胞生成素(EPO)这一生长因子受体能够刺激机体产生红细胞。促红细胞生成素(EPO)是一种可以增加人体血液中红细胞数量、提高血液含氧量的激素，在正常人体内有一定的含量，用于维持和促进正常的红细胞代谢，因此它可以被用来增加贫血患者体内的红细胞数量，用以改善贫血状况。该药物自1989年上市后市场份额稳步升高，迅速成长为“重磅炸弹”级药物。该药物治疗范围广，疗效确切，但由于该药物价格相对昂贵，需注射给药而非口服用药，从而使患者的用药依从性并不高。

白头翁是毛茛科植物白头翁Pulsatillachinensis（Bge.）Regel的干燥根，主要含有三萜皂苷、三萜酸、木脂素、白头翁灵、白头翁英、白头翁素、原白头翁素、胡萝卜苷以及糖蛋白等成分。《伤寒蕴要》中称白头翁为“热毒下痢紫血鲜血者宜之”，其具有清热解毒、凉血止痢的功效，主治热毒血痢、湿热肠黄。

依维莫司（everolimus）是西罗莫司（sirolimus）的衍生物，是一种mTOR的抑制剂，PI3K/AKT通路下游的一种丝氨酸苏氨酸激酶，由瑞士诺华公司最先研制开发，2003年首次在瑞典上市，依维莫司可以减缓肾癌细胞的生长，降低67%的死亡率，通过抑制肿瘤细胞的生长和增殖，直接作用于肿瘤细胞；通过抑制血管发生，导致肿瘤血管分布减少而发挥间接作用。

通过检索国内外现有技术发现，目前还没有采用白头翁水提物治疗溶血性贫血的文献报道，更没有采用白头翁水提物联合依维莫司治疗溶血性贫血的文献报道。

发明内容

本发明人采用乙酰苯肼致溶血性贫血模型进行相关的药效学研究时意外的发现，白头翁水提物表现出较好的抗溶血性贫血的生物活性。乙酰苯肼是一种强氧化剂，可干扰红细胞内多种酶的活性，使机体出现溶血性贫血：红细胞和血红蛋白明显减少，网织红细胞代偿性增多，肝脾肿大。注射乙酰苯肼后次日，大鼠即表现精神萎靡，神疲乏力，易惊，行动迟缓，团缩弓腰，口唇、眼睑、耳廓苍白，易脱毛，毛蓬竖少光泽；饮水多，进食减少，大便干黑而少等贫血症状。采用本发明的白头翁水提物灌胃治疗后，动物一般情况明显好转，外周血红细胞数、血红蛋白量明显回升，网织红细胞计数明显升高，骨髓造血加快。

在此基础上，本发明人进行了更为深入的研究，发现白头翁水提物联合依维莫司在防治溶血性贫血动物模型方面表现出意想不到的协同作用，因此本发明的目的在于提供一种治疗溶血性贫血的药物组合物及其应用。

具体地，本发明的目的是这样实现的：

一种治疗溶血性贫血的药物组合物，其中所述的药物组合物中活性成分由白头翁水提物和依维莫司组成。

优选地，如上所述治疗溶血性贫血的药物组合物，其中所述的活性成分中白头翁水提物和依维莫司的用量比为25-100：1。

进一步优选地，如上所述治疗溶血性贫血的药物组合物，其中所述的活性成分中白头翁水提物和依维莫司的用量比为50-100：1。

再进一步优选地，如上所述治疗溶血性贫血的药物组合物，其中所述的活性成分中白头翁水提物和依维莫司的用量比为100：1。

再进一步优选地，如上所述治疗溶血性贫血的药物组合物，其中所述的白头翁水提物按如下方法制备而得：将白头翁用乙醇加热回流提取，过滤，滤液弃掉后的剩余药渣加水加热回流提取，再过滤，滤液浓缩至膏状物，得白头翁水提物。

白头翁水提物联合依维莫司对溶血性贫血模型大鼠的疗效试验结果显示，与单药组相比，联合用药组大鼠的红细胞和血红蛋白浓度均较模型组明显上升，差异具有统计学意义（P＜0.01），这预示着白头翁水提物联合依维莫司可协同防治溶血性贫血。因此，本发明还提供一种制药用途，即：白头翁水提物和依维莫司组成的活性成分在制备治疗溶血性贫血的药物中的应用。

需要说明的是，本发明人发现白头翁水提物对溶血性贫血有较好的治疗作用，因此尝试将该水提物应用于再生障碍性贫血、肾性贫血。然而，令人遗憾的是，白头翁水提物并不能治疗其他类型的贫血。

与现有技术相比，本发明涉及的药物组合物具有如下优点和显著进步：

（1）为治疗贫血提供了新的候选药物，具有非常重要的临床意义。

（2）白头翁水提物为天然提取产物，毒性非常小，副作用和不良反应率低；依维莫司用量仅仅为常规用量的四分之一，因此费用、副作用和不良反应率也较低。

（3）白头翁水提物和依维莫司均可以通过口服方式用药，因此可以降低贫血患者的治疗费用，提高贫血患者的用药依从性。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于该实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1白头翁水提物的制备

称取白头翁干燥根1kg，粉碎，用12L浓度为80%乙醇（V/V）加热回流提取3h，过滤，弃掉滤液，滤渣中加入10L的80%乙醇（V/V），加热回流提取1.5h，过滤，弃掉滤液，滤渣中加入12L纯水加热回流提取2次，合并提取液，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥，得白头翁水提物冻干粉。

实施例2白头翁水提物的制备

称取白头翁干燥根1.5kg，粉碎，用18L浓度为85%乙醇（V/V）加热回流提取3h，过滤，弃掉滤液，滤渣中加入15L的85%乙醇（V/V），加热回流提取1.5h，过滤，弃掉滤液，滤渣中加入18L纯水加热回流提取2次，合并提取液，减压浓缩至膏状物，冷冻干燥，得白头翁水提物冻干粉。

实施例3白头翁水提物联合依维莫司对溶血性贫血模型大鼠的疗效试验

SPF级Wistar大鼠50只，体重180g~200g，雌雄各半，所有Wistar大鼠随机分成如下五组：正常对照组、模型对照组、水提物组、依维莫司组、联合用药组，每组10只。模型对照组大鼠在第1、第4、第7天皮下注射2%乙酰苯肼生理盐水注射液，第1天注射剂量为10ml/kg体重，第4、第7天剂量减半，第4天起每天以等量纯水灌胃。治疗组（水提物组、依维莫司组、联合用药组）按同样的方法造模，并于第4天起每天按如下方式灌胃相应的药物：

水提物组：按100mg／kg体重的剂量灌胃白头翁水提物冻干粉（实施例1制备），每天一次，共7天；

依维莫司组：按0.5mg／kg体重的剂量灌胃依维莫司，每天一次，共7天；

联合用药组：按50mg／kg体重的剂量灌胃白头翁水提物冻干粉（实施例1制备），同时按0.5mg／kg体重的剂量灌胃依维莫司，每天一次，共7天；

参照模型对照组，正常对照组大鼠用等量纯水代替2%乙酰苯肼进行皮下注射，然后以等量纯水进行灌胃。试验期间，饲喂正常固体饲料，自由饮水。试验第11天结束，眼眶取血，检测如下外周血指标：红细胞数、血红蛋白浓度、白细胞数、网织红细胞数。

外周血象检测结果：与正常对照组比较，模型对照组大鼠的红细胞数和血红蛋白量明显降低，白细胞、网织红细胞计数明显升高。除依维莫司组外，其他治疗组大鼠的红细胞和网织红细胞数、血红蛋白浓度均较模型组明显上升，差异具有统计学意义（P＜0.01）；另外，与单药组相比，联合用药组大鼠的红细胞和血红蛋白浓度均较模型组明显上升，差异具有统计学意义（P＜0.01），这预示着白头翁水提物联合依维莫司可协同防治溶血性贫血；具体结果见表1。

表1各组大鼠外周血细胞检测结果比较

组别	红细胞（10¹²个/L）	血红蛋白（g/L）	网织红细胞（10¹⁰个/L）	白细胞（10⁹个/L）
					正常对照组	6.78±0.38	135.03±5.20	13.16±0.73	8.57±1.32
模型对照组	2.59±0.26^▼	78.20±4.35^▼	19.48±1.75^▼	21.96±2.59^▼
					水提物组	3.97±0.41^★	104.60±5.72^★	46.05±3.40^★	14.20±1.85^★
依维莫司组	2.82±0.48	76.94±4.06	20.15±2.33	11.74±1.60^★
					联合用药组	6.90±0.53^★▽●	133.58±6.47^★▽●	35.58±4.06^★	12.13±1.84^★

与正常对照组比较，^▼ P＜0.01；与模型对照组比较，^★ P＜0.01；

与水提物组比较，^▽ P＜0.01；与依维莫司组比较，^● P＜0.01。

Claims

1.一种治疗溶血性贫血的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物中活性成分由白头翁水提物和依维莫司组成，所述的活性成分中白头翁水提物和依维莫司的用量比为100：1。

2.根据权利要求1所述治疗溶血性贫血的药物组合物，其特征在于：所述的白头翁水提物按如下方法制备而得：将白头翁用乙醇加热回流提取，过滤，滤液弃掉后的剩余药渣加水加热回流提取，再过滤，滤液浓缩至膏状物，得白头翁水提物。