CN103860644A - 一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用，所述乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。经过体外试验，发现本发明提供的丹参的乙酸乙酯提取物可抑制H1N1病毒，效果明显。
Description
技术领域
本发明涉及丹参提取物，具体涉及一种丹参的乙酸乙酯提取物及其制备方法和应用。
背景技术
流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，具有流行面广，传染性高，发病率高等特点，严重威胁人类的健康和生命。2009年，墨西哥爆发的H1N1流感是由禽流感、猪流感和人流感病毒基因混合而成，其特点是突然出现，传播迅速。
H1N1（又称猪流感）是一种病毒，是Orthomyxoviridae系列的一种病毒。它的宿主是鸟类和一些哺乳动物。几乎所有甲型的H1N1病毒已被隔离，野生鸟类出现疾病属罕见。有些H1N1病毒引起严重的疾病大多发生于家禽方面，而人类却很少出现。但经过鸟类和哺乳动物的传播和变异，这可能导致疫情或人类流感大面积传播。
H1N1流感病毒的群间传播主要是以感染者的咳嗽和喷嚏为媒介，在人群密集的环境中更容易发生感染，而越来越多证据显示，微量病毒可留存在桌面、电话机或其它平面上，再透过手指与眼、鼻、口的接触来传播。因此尽量不要身体接触，包括握手、亲吻、共餐等。如果接触带有甲型H1N1流感病毒的物品，而后又触碰自己的鼻子和口腔，也会受到感染。感染者有可能在出现症状前感染其他人，感染后一般在一周、或一周多后发病。小孩的传染性会久一些。目前，中国已成功研制出甲型H1N1流感疫苗。由于H1N1猪流感病毒不同于H1N1人类流感病毒，现有的流感疫苗并不能预防H1N1猪流感病毒。但四种治疗季节性流感的药物可预防猪流感：金刚烷胺（amantadine），金刚乙胺（rimantadine），奥司他韦（oseltamivir）和扎那米韦（zanamivir)。尽管其均为治疗流行性感冒的有效药物，但近期从猪流感患者体内检测出的病毒特征来看，它已对金刚烷胺（amantadine），金刚乙胺（rimantadine）有了抗药性。因此在治疗和预防时，采用奥司他韦（oseltamivir）和扎那米韦（zanamivir)将更为有效。
H1N1流感病毒作为流感的一种，可以用传统的中医理论和方法进行治疗，从中医角度讲，流感是感受外来邪气，客于肺经，闭其清道，肺气不得下降，其人必定流清涕、发热、恶风、恶寒、头疼身痛等情形。法宜宣散，如桂枝汤、麻黄汤、葛根汤之类。如不能及时治疗会转为内伤，引发肾阳衰而阴寒内生，肾络通于肺，心肺之阳不足，不能统摄津液，而流清鼻涕，患者必定没有外感的足征，多困倦无神，或喷嚏不休，或两脚冰冷，法宜扶阳，如四逆汤、白通汤、封髓丹、麻黄附子细辛汤、姜桂汤之类。
中医讲求辨证施治，根据流感不同类型分别治疗，有一诀窍：凡见打喷嚏、流清涕、鼻塞，而无其它症状，就属于内寒感冒，不论轻重，服四逆汤、麻黄附子细辛汤必效，病去药止，不留后遗症。若服其它感冒药，必然无效，而且，还会使病邪加深加重，转成肺肾等重病。
所以，治疗流感却服用治疗外感的药物，一定不会有很好的疗效。而且，还会将阴邪敛在体内，到一定时间必定会发作。而现行的中、西医的治疗方法，都具有再次将阴邪收敛的作用，如此经过多次积累，最终造成哮喘、鼻炎、咽炎、气管炎等呼吸系统疾病。
神经氨酸酶（neuraminidase，NA）是甲、乙型流感病毒中有唾液酸酶活性的表面糖蛋白，在病毒的复制和致病过程中起重要作用。所以神经氨酸酶抑制剂的研究与开发已成为寻找治疗流感病毒药物的研究热点。
丹参，来源于唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎，具有如下作用：
1、抗菌消炎作用：醇提丹参液对口腔常见致病菌有抑制作用。
2、保护肝脏的作用：丹参水或甲醇提取物能够治疗和预防肝硬化胆汁的肝纤维化。
3、对脑组织的作用：丹参提取物可以用作治疗学或保健食品的治疗和预防认知功能障碍
4、抗消化性溃疡：丹参水溶液治疗消化性溃疡、难治性溃疡效果较好。
5、心血管的作用：丹参中的丹参酮具有非常强的抗血凝作用。丹参素、原儿茶醛也具有抗凝作用；丹酚酸A能显著改善大鼠心肌缺血，提示丹参可对抗缺氧/复氧对心肌细胞的影响和损伤；丹酚酸B达到防治动脉样硬化的目的。
迄今为止，尚未有关于丹参的乙酸乙酯提取物及其相关应用的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种丹参的乙酸乙酯提取物。
本发明的另一目的是提供丹参的乙酸乙酯提取物的制备方法。
本发明的另一目的是提供丹参的乙酸乙酯提取物的应用。
本发明提供的丹参的乙酸乙酯提取物，由以下方法制备：丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。
所述丹参的乙酸乙酯提取物中：
所述石油醚为60-90℃的石油醚；
所述石油醚浸泡后渗滤的方法包括以下步骤：用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡12-48h，石油醚渗漉，得到丹参重量3-8倍量体积的渗滤液，即可。
所述残渣用乙醇提取的方法包括以下步骤：用60%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时。
优选地，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡18-36h，石油醚渗漉，得到丹参重量5-7倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用70%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍量体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
进一步优选，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用丹参重量3倍量体积的石油醚浸泡24h，石油醚渗漉，得到丹参重量5倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用丹参重量3倍量体积的80%的乙醇回流提取2次，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
解释说明，关于重量的多少倍体积，例如，用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡，以丹参为100g为例，则所用石油醚的用量为300-500ml。
本发明还提供了一种制备上述丹参的乙酸乙酯提取物的方法，该方法包括以下步骤：丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
本发明还提供了含上述丹参的乙酸乙酯提取物的制剂，该制剂由丹参提取物和药学上可接受的载体组成。
所述制剂为片剂、胶囊、颗粒或丸剂。
所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。
所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖等；
所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、淀粉、糊精、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等；
所述崩解剂选自微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠；
所述润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁；
所述助悬剂选自微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇；
所述润湿剂选自甘油、吐温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂；
所述溶剂选自乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油等；
所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯（吐温）等；
所述矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、柠檬酸或糖精钠。
本发明还提供了丹参的乙酸乙酯提取物的在制备抑制H1N1流感病毒药物中的应用。
在抑制H1N1流感病毒时，丹参的乙酸乙酯提取物的用量（即每日服用量限定为0.1mg-3g）
本发明还提供了丹参的乙酸乙酯提取物的检测方法，该检测方法是用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用分析系统（）对丹参提取物进行分析，以获得乙酸乙酯提取物的指纹图谱。
所述色谱分析条件为：色谱柱：Waters ACQUITY UPLCTMBEHC18 Column(50mm×2.1mm.i d.,1.7μm)；二元梯度洗脱，A相为水溶液；B相为乙腈，流速为0.25mL/min;质谱条件为：ESI离子源，正离子模式检测；自动3级质谱。
优选地，所述色谱条件见下表（即表1）：
表1：色谱条件
所述质谱条件为：ESI离子源，正离子模式检测；雾化器N2压力50psi；干燥气N2，流速15L/min；质量扫描范围50--1200；自动3级质谱。
经超高液相色谱——质谱联机分析，丹参的乙酸乙酯提取物中的主要成分是丹参酮类脂溶性化合物，包括丹参酮，丹参酮Ⅱ，隐丹参酮，二氢丹参酮。在ESI(+)检测模式得到的总离子流色谱中，含有的丹参酮类脂溶性化合物组分峰面积之和占全部组分色谱峰面积的75.43%。其中丹参提取物中的丹参酮类脂溶性成分含量较高。
本发明提供的丹参的乙酸乙酯提取物具有以下优点：
1、本发明提供了一种丹参的乙酸乙酯提取物，该提取物是丹参经过石油醚浸泡，然后渗滤，回收的残渣经过醇提，乙酸乙酯萃取得到的，经过检测，其含有丹参酮，丹参酮Ⅱ，隐丹参酮，二氢丹参酮。
2、本发明应用超高效液相色谱-质谱联机分析技术及结果构建丹参提取物指纹图谱的方法。该方法包括丹参的乙酸乙酯提取物的UPLC-MS分析条件。色谱峰的特征、色谱组分的质谱提供的化合物结果信息等。本发明公开的指纹图谱及其技术可用于丹参的品种鉴别及丹参提取物的质量监控。
3、本发明首次提供了丹参的乙酸乙酯提取物在制备抗流感的药物中的应用，经过体外试验，发现本发明提供的丹参的乙酸乙酯提取物可抑制H1N1病毒，效果明显。
附图说明
图1：丹参的乙酸乙酯提取物的UPLC色谱图；
图2：丹参的乙酸乙酯提取物的UPLC-MS正源总离子色。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明所使用的石油醚为60-90°的石油醚；
所述乙醇浓度均为70-90%。
实施例1：丹参的乙酸乙酯提取物
丹参粉碎成粗粉，过35目筛，称取500g丹参粗粉，然后用1500ml的石油醚浸泡24h，然后用石油醚渗滤，至渗漉液颜色变浅（约收取渗滤液2500ml），回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用80%乙醇回流提取2次，每次乙醇的用量为2500ml，每次提取时间为2小时，合并提取液，将其减压浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干得乙酸乙酯提取物0.99g（收率为0.2%）。
实施例2：丹参的乙酸乙酯提取物
丹参粉碎成粗粉，过20目筛，称取500g丹参粗粉，然后用2500ml的石油醚浸泡48h，然后用石油醚渗漉至渗漉液颜色变浅（约收取渗滤液3000ml），回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用75%乙醇回流提取2次，每次用2000ml的乙醇，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干得乙酸乙酯提取物1.95g（收率为0.39%）。
实施例3：丹参的乙酸乙酯提取物
丹参粉碎成粗粉，过25目筛，称取500g丹参粗粉，然后用2000ml的石油醚浸泡24h，然后用石油醚渗漉，至渗漉液颜色变浅（约收取渗滤液5000ml），回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用70%的乙醇回流提取2次，每次用1500ml的乙醇，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干得乙酸乙酯提取物0.8g（收率为0.16%）。
实施例4：丹参的乙酸乙酯提取物
丹参粉碎成粗粉，过30目筛，称取500g丹参粗粉，然后用2500ml的石油醚浸泡36h，然后用石油醚渗漉，至渗漉液颜色变浅（约收取渗滤液3500ml），回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用90%乙醇回流提取2次，每次用2500ml的乙醇，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干得乙酸乙酯提取物1.5g（收率为0.3%）。
实施例5：丹参的乙酸乙酯提取物
丹参粉碎成粗粉，过20目筛，称取500g丹参粗粉，然后用2000ml的石油醚浸泡48h，然后用石油醚渗漉，至渗漉液颜色变浅（约收取渗滤液3000ml），回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用60%乙醇回流提取2次，每次用2000ml的乙醇，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干得乙酸乙酯提取物0.64g（收率为0.13%）。
实施例6：含丹参的乙酸乙酯提取物的胶囊
1、组成：丹参的石油醚提取物（实施例1的方法制备）50g，淀粉15g，硬脂酸镁5g。
2、制备方法：按照配比称取原辅料，混合均匀，分装胶囊。
实施例7：含丹参的乙酸乙酯提取物的片剂
1、组成：丹参的乙醇提取物（实施例2的方法制备）50g，淀粉25g，微晶纤维素20g，硬脂酸镁5g。
2、制备方法：按照配比称取原辅料，混合均匀，分装胶囊。
实施例8：含丹参的乙酸乙酯提取物的颗粒剂
1、组成：丹参的乙酸乙酯提取物（实施例3的方法制备）50g，淀粉15g，微晶纤维素20g，硬脂酸镁6g。
2、制备方法：按照配比称取原辅料，按照等量递加法混合均匀，直接压片。
实验例1：药效实验
1、实验材料：
济防90-15甲型流感病毒株和四川2000-38乙型流感病毒株，均由中国预防医学科学院病毒所流感中心惠赠。
丹参的乙酸乙酯提取物溶液：将实施例1制备得到的丹参乙酸乙酯提取物用蒸馏水溶解，浓度为40ug/mL；
阳性对照药：扎那米韦（zanamivir），上海复蓝有限公司。其浓度为0.004ug/mL。
微板光学测定仪，Fluostar galary购自德国BMG公司。
2、实验分组：
阳性对照组：扎那米韦，浓度为0.004μg/Ml；
实验组：实施例1-5组，浓度为40μg/mL。
3、实验模型：
将神经氨酸酶（A/PR/8/34(H1N1)济防90-15甲型流感病毒株和四川2000-38乙型流感病毒株，经鸡胚传代，收尿囊液，-70℃保存备用）溶解在33mmol/L的MES（2-(N-吗啡啉）乙磺酸）缓冲溶液（pH6.5）和4mmol/L CaCl2中，得神经氨酸酶溶液，分别取30uL神经氨酸酶溶液和1uL的实施例1-5提供的丹参的乙酸乙酯提取物溶液或阳性对照组溶液（即：神经氨酸酶溶液与各实施例的提取物溶液混合，或者神经氨酸酶溶液与阳性对照组溶液混合），在37℃培养箱中孵育60min，然后加入终浓度为20umol/L的MUNANA（4-methylum-belliferyl-N-acetyl-α-D-neural-minic acid）的缓冲溶液100uL，立即用微板光学测定仪进行检测，激发波长360nm和发射波长为450nm。NA对照组用去离子水代替待评价样品，空白对照组用去离子水代替评价样品并且用反应缓冲液代替NA。
4、实验结果：见表2
表2：半数抑制浓度IC50（ug/mL）
表2结果显示：半数抑制浓度越低，其抗体的灵敏度越高，表1中实施例1的IC50为27.33±6.06，为五个实例中IC50最小的一种，说明其抗HINI流感病毒实施例效果较好）
实验例2：丹参的乙酸乙酯提取物超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用分析系统（即UPLC-Ｑ-TOF-MS）分析
1、实验部分
1.1试剂与样品
甲醇为色谱纯，美国Fisher公司；
超纯水，实验室ELGAPURELAB Classic-UVF纯水机，英国；
其他试剂均为市售国产分析纯。
1.2样品处理
丹参粉碎成粗粉，过35目筛，称取500g丹参粗粉，然后用1500ml的石油醚浸泡24h，用石油醚渗滤至渗漉液颜色变浅（约收取渗滤液2500ml），回收残渣，将残渣挥干石油醚，然后用80%乙醇回流提取2次，每次乙醇的用量为2500ml，每次提取时间为2小时，合并两次醇提液，将其减压浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
1.3仪器与条件
美国Waters AcquityTM UPLC/Q-TOF Premier；MassL-ynxV4.1工作站。
色谱条件同表1，即：
质谱条件：ESI离子源，正离子模式检测；雾化器N2压力50psi;干燥气N2，流速15L/min;质量扫描范围50--1200；自动3级质谱。（自动选择最强离子进行源内诱导裂解）。
2、结果与分析：结果见图1-2和表3
图1为丹参乙酸乙酯提取物的UPLC色谱图；
图2为丹参乙酸乙酯提取物UPLC-Q-TOF-MS总离子流图。
针对图2即丹参的乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-TOF-MS（﹢）分析的总离子流图，分析其色谱峰组分指纹信息，结果见表3
表3：丹参乙酸乙酯提取物中活性组分分析
| 序号 | 保留时间tR/min | MS1主要离子 | 化合物 |
| 2 | 3.923 | 309.1726 | 丹参酮ⅡB |
| 3 | 8.542 | 297.2097 | 隐丹参酮 |
| 4 | 5.303 | 279.1358 | 二氢丹参酮Ⅰ |
| 5 | 6.044 | 281.1521 | Tetrahydrotanshinone |
| 6 | 13.16 | 277.029 | 丹参酮iv |
表3内容显示：经查阅中外文献，分析鉴定出丹参乙酸乙酯提取物中的5个色谱峰，其中2号峰为丹参酮ⅡB，3号峰为隐丹参酮，4号峰为二氢丹参酮Ⅰ，5号峰为Tetra hydro tanshinone（四氢化丹参酮）,6号峰为丹参酮IV。
结果表明：丹参的乙酸乙酯提取物含有丹参酮类化合物，也是抗流感病毒的活性成分。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种丹参的乙酸乙酯提取物，其特征在于，该乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。
2.根据权利要求1所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述石油醚浸泡后渗滤的方法包括以下步骤：用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡12-48h，石油醚渗漉，得到丹参重量3-8倍量体积的渗滤液，即可。
3.根据权利要求1所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述残渣用乙醇提取的方法包括以下步骤：用60%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时。
4.根据权利要求1-3任一项所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用丹参重量3-5倍量体积的石油醚浸泡18-36h，石油醚渗漉，得到丹参重量5-7倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用70%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹参重量3-5倍量体积的乙醇，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
5.根据权利要求4所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述丹参的乙酸乙酯提取物由以下方法制备：丹参，用丹参重量3倍量体积的石油醚浸泡24h，石油醚渗漉，得到丹参重量5倍量体积的渗滤液，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用丹参重量3倍量体积的80%的乙醇回流提取2次，每次提取时间为2小时，合并提取液，然后浓缩至无醇味，再用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层清液，蒸干，即得丹参的乙酸乙酯提取物。
6.一种制备权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：丹参，用石油醚浸泡，石油醚渗滤，回收残渣，挥干残渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液浓缩至无醇味，然后用与浓缩液等体积的乙酸乙酯萃取，收集上层提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
7.含权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物的制剂，其特征在于，该制剂由丹参提取物和药学上可接受的载体组成。。
8.权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物或权利要求7所述的制剂在制备抑制H1N1流感病毒药物中的应用。
9.权利要求1-5任一项所述的乙酸乙酯提取物或权利要求7所述的制剂的检测方法，其特征在于，用超高效液相色谱-电喷雾串联质仪对丹参提取物进行分析，以获得乙酸乙酯提取物的指纹图谱。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
所述色谱分析条件为：色谱柱：Waters ACQUITY UPLCTMBEHC18 Column(50mm×2.1mm.i d.,1.7μm)；二元梯度洗脱，A相为水溶液；B相为乙腈，流速为0.25mL/min;
质谱条件为：ESI离子源，正离子模式检测；自动3级质谱；
优选地，所述色谱条件：
所述质谱条件为：ESI离子源，正离子模式检测；雾化器N2压力50psi；干燥气N2，流速15L/min；质量扫描范围50--1200；自动3级质谱。
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