CN103845341A

CN103845341A - 泽泻醇a23-乙酸酯在制备防治动脉疾病药物中的应用

Info

Publication number: CN103845341A
Application number: CN201210521406.5A
Authority: CN
Inventors: 侯惠民; 程志红
Original assignee: Shanghai Modern Pharmaceutical Engineering Research Center Co Ltd
Current assignee: Shanghai Modern Pharmaceutical Engineering Research Center Co Ltd
Priority date: 2012-12-07
Filing date: 2012-12-07
Publication date: 2014-06-11

Abstract

本发明公开了泽泻醇A23-乙酸酯在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用。本发明的药物，毒性较小，适合长期服用。本发明的运用现代医药理论，提供了一种疗效确切、成分明确、质量可控的治疗动脉粥样硬化的药物，能够满足临床应用的需要。本发明的创造性在于：首次公开了泽泻醇A23-乙酸酯抑制高脂饮食导致的ApoE-/-小鼠颈动脉损伤后的血管内膜增生作用，显示其具有明显的治疗动脉粥样硬化作用。

Description

泽泻醇A23-乙酸酯在制备防治动脉疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及泽泻醇A 23-乙酸酯在医药上的一种新应用。

背景技术

心血管疾病已经成为威胁人类健康的头号杀手，据世界卫生组织2004年的报告，每三例死亡中就有一例的死因是心血管疾病，动脉粥样硬化是脑梗、心肌梗死等心血管事件的主要原因。

防止动脉粥样硬化的发生及促进动脉斑块的消退是降低心脑血管发病例和死亡率的根本措施。目前，治疗动脉粥样硬化的药物，如阿托伐他汀，已经公布的临床研究结果表明，阿托伐他汀是唯一被证明减少心血管事件优于血管重睑术的抗动脉粥样硬化药物，其对血管内膜增生的抑制作用独立于降血脂作用之外，是抗动脉粥样硬化的主要药物。

北京中医学院学报公开了一篇名为泽泻抗动脉粥硬化作用系列研究（二）—泽泻对实验性大鼠、家兔的降血脂作用及抑制家兔动脉粥样硬化作用（1991年第14卷第6期），文中报道了泽泻粗提取液（每1ml含泽泻生药4克），具有一定的抑制家兔主动脉内膜斑块的生成作用，但文中未对受试药物的具体活性成分进行详细说明。由于中药成分复杂、不同提取条件得到的提取物成分差异巨大，因此从该文献中无从获知泽泻中抑制主动脉内膜斑块生成的活性成分。

降血脂药物按照作用机理不同，主要分为①HMG-CoA还原酶抑制剂（他汀类）、②PPARα激活剂（贝特类）、③烟酸类、④多烯类（鱼油制剂）⑤中药红曲提取物（血脂康等）。这些药物降血脂作用明确，但其保护血管内皮、抑制主动脉内膜增生的功能却差异巨大，即使同为他汀类降血脂药物，阿托伐他汀是唯一被证明减少心血管事件优于血管重建术的降血脂药物。而部分降血脂药物对血管内膜增生完全没有抑制作用。因此，不能直接依据某个化合物的降血脂特性推断出其具有血管内膜保护作用。

泽泻醇A 23-乙酸酯（AlisolA 23-acetate）是中药泽泻中三萜类成分，已有文献对泽泻醇A 23-乙酸酯的生理活性报道较少，仅有其体外抗肿瘤的试验研究。未见泽泻醇A23-乙酸酯具有抗动脉粥样硬化、抑制血管内膜增生作用的文献公开发表。

发明内容

本发明的目的在于提供一种泽泻醇A 23-乙酸酯在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，以克服现有技术存在的上述缺陷，满足临床应用的需要。

本发明还涉及一种药物组合物，包括医药学上可接受的载体和治疗有效量的泽泻醇A，泽泻醇A可以与其它抗动脉粥样硬化药物合用以增加疗效。

所述药物组合物中，所述的混合物的重量含量为1～99.9%，优选的为50％~99.9%；

所述载体包括填充剂，如淀粉、微晶纤维素或糖粉、赋形剂，如甘露醇、乳糖或硫酸钙，崩解剂，如羧甲基淀粉钠、改良淀粉或低取代羟丙基纤维素；可采用本领域公知的方法，将所述药物组合物制备成为口服制剂，如片剂、硬胶囊、软胶囊、滴丸或颗粒剂等。

本发明中，所述泽泻醇A 23-乙酸酯来源可以是从泽泻属植物中提取得到，优选为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.更优选为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎。此外，泽泻醇A 23-乙酸酯可以通过半合成和（或）全合成等方法得到；

半合成方法可参见Chemical Modification of Alisol B 23-acetate and Their Cytotoxic Activity（Arch Pharm Res Vol 25,No 5,608-612,2002）的报道。

所述的泽泻醇A 23-乙酸酯的化学结构通式如下：

动物试验证明，泽泻醇A 23-乙酸酯对ApoE^-/-小鼠经高脂饲料喂养联合颈动脉损伤术造成的动脉粥样硬化模型具有显著的治疗效果，该药物可以通过口服途径施加于需要治疗的患者，剂量为20～550mg/天·人，具体可根据患者的病情、年龄等由医师决定。本发明的药物，毒性较小，适合长期服用。

本发明的运用现代医药理论，提供了一种疗效确切、成分明确、质量可控的治疗动脉粥样硬化的药物，能够满足临床应用的需要。本发明的创造性在于：首次公开了泽泻醇A 23-乙酸酯抑制高脂饮食导致的ApoE^-/-小鼠颈动脉损伤后的血管内膜增生作用，显示其具有明显的治疗动脉粥样硬化作用。

具体实施方式

实施例1

药材的提取：

方法1：取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎1公斤，制成饮片，用7500ml乙酸乙酯回流提取2次，每次0.5小时。合并提取液，减压回收溶剂，得到深褐色浸膏40g。

方法2：取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎3公斤，粉碎成粗颗粒，用75％乙醇渗漏，合并渗漏液，减压回收溶剂，得到深褐色浸膏110g。

方法3：取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎2公斤，粉碎成粗颗粒，置于CO₂超临界萃取仪中，萃取条件：CO₂压力为24～35MPa，萃取温度为41～55℃，萃取时间为1.5h，得到深褐色浸膏65g。

方法4：取泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎1公斤，制成饮片，用80％甲醇8000ml回流提取3次，每次1.0h，合并提取液液，减压回收溶剂，得到深褐色浸膏50g。

实施例2

泽泻醇A 23-乙酸酯的制备：

称取实施例1浸膏10g，上D101型大孔吸附树脂，以20％乙醇洗脱10个柱体积后，改用70％乙醇洗脱5个柱体积，收集70％乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得到黄色油状物2g；将2g黄色油状物溶解在65％甲醇中，采用制备级HPLC分离目标化合物。分离条件为：C18柱，流动相为65％甲醇，流速为50ml/min，检测波长208nm。得到纯度为95％（重量）的泽泻醇A 23-乙酸酯100mg。

高分辨质谱：m/z：555.36561,C₃₂H₅₂O₆Na⁺[M+Na],其分子式为C₃₂H₅₂O₆。

C¹³NMR(δ)：223.78、172.87、139.56、136.20、79.80、73.62、72.95、70.76、58.442、49.78、49.49、48.81、42.10、39.51、38.33、35.44、35.27、34.78、32.10、31.98、30.56、30.06、29.48、28.12、26.99、26.58、24.47、24.35、2169、21.23、20.74、20.638，与文献Chemical Modification of Alisol B 23-acetate and Their Cytotoxic Activity（Arch Pharm Res Vol 25,No 5,608-612,2002）中AlisolA 23-Acetate的C¹³NMR吻合，确定该化合物为泽泻醇A 23-乙酸酯。

实施例3

称取实施例2中泽泻醇A 23-乙酸酯10g，加入淀粉8g，微晶纤维素2g，硬脂酸镁0.2g，混合均匀，采用本领域公知的方法，制成片剂、胶囊剂或颗粒剂。

实施例4

称取实施例2泽泻醇A 23-乙酸酯10g，溶解于10ml乙醇中，加入羟丙基甲基纤维素（HPMC）4g，水浴上搅拌挥去溶剂，于真空干燥箱内60℃干燥2h，粉碎，过20目筛，填充胶囊，获得胶囊剂。

实施例5

泽泻醇A 23-乙酸酯也可以按照文献Chemical Modification of Alisol B 23-acetate and Their Cytotoxic Activity（Arch Pharm Res Vol 25,No 5,608-612,2002）提供的反应条件：四氢呋喃水溶液中用硫酸水解泽泻醇B 23-乙酸酯即可得到泽泻醇A 23-乙酸酯。

实施例6

本发明的药效学研究如下：

1、动物及分组：ApoE^-/-小鼠左侧颈动脉血管进行手术，损伤7天和28天各分为7组：高脂饮食手术组（VI组，n=10）

高脂饮食手术+低浓度泽泻醇A 23-乙酸酯组（预防组给予高脂饮食时给药10mg/kg，n=10）

高脂饮食手术+中浓度泽泻醇A 23-乙酸酯组（预防组给予高脂饮食时给药30mg/kg，n=10）

高脂饮食手术+高浓度泽泻醇A 23-乙酸酯组（预防组给予高脂饮食时给药90mg/kg，n=10）

高脂饮食手术+低浓度泽泻醇B 23-乙酸酯组（预防组给予高脂饮食时给药10mg/kg，n=10）

高脂饮食手术+中浓度泽泻醇B 23-乙酸酯组（预防组给予高脂饮食时给药30mg/kg，n=10）

高脂饮食手术+高浓度泽泻醇B 23-乙酸酯组（预防组给予高脂饮食时给药90mg/kg，n=10）

高脂饮食手术+阿托伐他汀组（预防组给予高脂饮食时给药，n=10）

高脂饮食组投食Western type Diet配方饲料（蛋白质：15.8%，脂肪：40%，碳水化合物：44.2%），低脂饮食组投食AIN-76A配方饲料（蛋白质：18.8%，脂肪：12.4%，碳水化合物：68.8%）。

2、血管损伤疾病模型的建立：先给予小鼠不同饲料（NPERC-8501 vehicle，low，high)喂养2周，按照分组进行VI手术后继续同样饲料喂养并分别给予不同浓度，7天和28天后小鼠终末取材。用1%戊巴比妥钠，90mg/kg麻醉小鼠，行心脏左心室取血后，分离出小鼠颈动脉血管，制作用于石蜡检测的组织标本，对小鼠模型予以评价。

3、血管管腔狭窄改变评价

实验第28天，过量麻醉处死小鼠，从左心室开口放血，取颈动脉行4%多聚甲醛固定后，石蜡包埋，5μm切片，行HE染色显示管腔狭窄情况。采用Image-pro plus 6.0图像分析软件测量血管内膜，中膜厚度，计算血管内膜/中膜比值，以评价血管损伤手术后血管管腔狭窄发生情况。

4、结果

各组小鼠颈动脉内膜/中膜面积比值统计结果见表1。

表1，小鼠颈动脉内膜/中膜面积比(χ±SD)

Figure 2012105214065100002DEST_PATH_IMAGE001

注：*表示与模型对照组比较P<0.05;**表示与模型对照组比较P<0.01;

#表示与模型对照组比较P<0.05

从表1中可以看出，泽泻醇A 23-乙酸酯给药组的小鼠颈动脉内膜/中膜面积比明显小于模型对照组，且呈量效关系，甚至，其高剂量组药效由于阳性对照药阿托伐他汀组，说明其抑制动脉血管内膜增生作用显著；而泽泻醇B 23-乙酸酯给药组的未见任何抑制动脉内膜血管增生的作用。

结论：泽泻醇A 23-乙酸酯具有显著的抑制动脉血管内膜增生的作用，显示其抗动脉粥样硬化作用明显，而同样具有降血脂作用的泽泻醇B 23-乙酸酯却显示毫无抑制血管内膜增生的疗效。

Claims

1.泽泻醇A 23-乙酸酯在制备防治动脉粥样硬化药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括治疗有效量的泽泻醇A23-乙酸酯和医药学上可接受的载体。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物为口服制剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为片剂、硬胶囊、软胶囊、滴丸或颗粒剂。