CN103816194B - 一种猪清热退烧的涂膜剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种猪清热退烧的涂膜剂，它包括如下组分：尼美舒利60～90克/升，柴胡挥发油40～60毫升/升，乙基纤维素15～25克/升，左旋薄荷醇18～22克/升，聚维酮k-3015～25克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。本发明还公开了上述猪清热退烧的涂膜剂的制备方法和应用。本发明的涂膜剂具有成膜性好、能够缓慢释放驱虫药物、快速退烧、疗效持久、应激小等优点。本发明配方及制作方法独特，治疗效果显著，能形成保护膜，膜内层药物渗透吸收，膜外层起到保护作用，不会自行脱落，具有水性擦剂、油性浇泼剂无法比拟的优点。

Description

一种猪清热退烧的涂膜剂及制备方法

技术领域

本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种经过皮肤给药途径来给猪清热退烧的涂膜剂及其制备方法。

背景技术

经皮给药制剂其实早就是一类广泛应用的产品了，在我国主要是中药的各种制剂型应用而较广。《黄帝内经》记载了浸渍、热熨、烟熏等中药外治的方法。《金匮要略》则创立了很多药物外治的方法与剂型，乳常用的药膏、油膏、药锭、水剂常被用来治疗伤风头痛、心悸、气喘等多种疾病。自宋以来，明间已有涂、擦、抹、敷、塞等40多种药物外治的方法，并介绍了捣、煎、熬、调、配等外用药的制备方法。清朝的程鹏程所撰的《急救广生集》是迄今最早的一部外治专著，嘉庆年间，收录了1500条处方，涉及疾病400多条之多。《古今中外外治真法》收载有贴、敷、涂、洗、浴、淋、浸渍、围、裹、药压、离子导入、药磁疗法等中药外治50余条.现代科技赋予了“经皮给药制剂”全新的内容，对经皮给药的研究已远远突破了传统界限，对药物成分的吸收与代谢有详细、科学的研究，给药制剂在原辅材料选择、质量控制、实验研究手段，外用给药的方式等方面均有大幅度的提高，与传统给药制剂相比现代进皮给药制剂均在重大改革之中，应该说真正意义上的标准化，产业化中药透皮制剂的应用和开发才刚开始。

现今，世界透皮制剂市场新剂型主要有贴片、凝胶剂、乳剂、喷雾剂、涂膜剂及液体喷射剂等，这类制剂正以15％的年增长率发展。年增长率已超过口服及吸收药系统市场。2005年透皮给药系统市场规模为127亿美元，据预测2015年将达到315亿美元。美国在近几年研究的临床试验的129种药物中，51种与透皮给药系统相关。

近年来，兽医科技工作者经过努力，也研制出一些兽用透皮制剂，这类制剂主要包括软膏剂、浇泼剂、气雾剂、涂膜剂、搽剂等。如李万坤等（2010）报道了贝硫磷浇泼剂对牦牛皮蝇蛆病的驱治效果，结果比注射剂效果更佳，平均治愈率比注射剂组高6.84％，并显示给药方便的特点。张寿成等(2001)用伊维菌素透皮剂来驱除羊寄生线虫安全有效，且省时省力。张森泉等（1993）报道了兽用杀痢王（透皮剂），治疗仔猪黄、白痢的效果优于其他药物。戴鼎震等（2005）还发明了一种治疗奶牛乳房炎的涂膜剂(专利号ZL200410065838.5)用于治疗奶牛乳房炎能有效的降低乳房炎的程度，提高奶产量。总体来说，透皮制剂与其他途径给药制剂相比，具有可产生持久，恒定及可控的血药浓度，给药方法简单，可减轻副作用，发现问题能及时停止给药，可减少给药次数和剂量等优点，特别可避免味苦、注射及捉拿动物带来的应激，尤其适用于动物使用，因此透皮制剂已日益受到兽医临床领域的关注。不过透皮制剂在兽医临床上的应用也要视情况而定。如驱除猪体内的寄生虫所需的药量较少，因吸收快，可一次达到疗效；但对持续感染的动物需多次用药，此时就使用能缓解，达到持久疗效的透皮制剂。

猪的发热是一种常见症状，很多疾病可以引起猪（尤其是仔猪）发烧。每年我国的生猪因各类感染性疾病导致发热疼痛的比例达80％。由于发烧、疼痛、猪的生理功能大为下降，而且导致热应激而降低肉质。解决问题的关键除了使用抗感染药物外还必须对症治疗——即降低体温，减少疼痛。常规的清热解痛的方法是注射安乃近或氨基比林等针剂，连用3～5天注射给药需要抓猪，固定及注射，这样无疑会加大对住的应激。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种猪清热退烧的新的给药形式——涂膜剂，通过喷涂在猪耳后或腹部皮肤给药，形成一层保护性药膜紧贴在皮肤表层，通过缓释，可持久释放清热解痛有效成分，对猪基本上没有应激，不会增加类似注射给药带来的疼痛，且药膜也不会脱落。

本发明还要解决的技术问题是提供上述涂膜剂的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种猪清热退烧的涂膜剂，它包括如下组分：

尼美舒利60～90克/升，柴胡挥发油40～60毫升/升，乙基纤维素15～25克/升，左旋薄荷醇18～22克/升，聚维酮k-3015～25克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

上述猪清热退烧的涂膜剂优选包括如下组分：

尼美舒利80克/升，柴胡挥发油50毫升/升，乙基纤维素20克/升，左旋薄荷醇20克/升，聚维酮k-3020克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

本发明所述的柴胡挥发油为浅黄油状液体，具有柴胡特有的香气，相对密度0.8910-0.922；折光1.4750-1.5000；旋光-9°～+10°。柴胡皂甙含量不低于35%，总挥发油含量99%以上，按《中国药典》2010版附录检验，符合规定即可。可直接市场上购买，或者按照现有方法合成。

上述猪清热退烧的涂膜剂的制备方法，它包括如下步骤：

（1）制备A液：将乙基纤维素15～25克、聚维酮k-3015～25克和三乙酸甘油酯5克加入400毫升无水乙醇中，置于45℃水浴锅中溶解，得到A液；

（2）制备B液：称取尼美舒利60～90克，加入400毫升无水乙醇中搅拌混匀，加入40～60毫升柴胡挥发油，搅拌搅匀，再加入40毫升乙醇胺，搅拌至溶解，再加入18～22克左旋薄荷醇，搅拌至溶解，得到B液；

（3）将B液缓慢加入A液中，边加边搅拌，最后用无水乙醇定容至1000毫升，混匀过滤制得。

上述猪清热退烧的涂膜剂在制备治疗猪发热药物中的应用。

有益效果：本发明配方是以退热西药尼美舒利为有效成分，柴胡挥发油作为辅药兼防腐剂、薄荷醇为促透剂、聚维酮、乙基纤维素为成膜材料、三乙酸甘油酯为基质，乙醇为溶剂，按一定比例和工艺配制成涂膜剂，制备的透皮剂具有成膜性好、能够缓慢释放驱虫药物、快速退烧、疗效持久、应激小等优点。通过喷涂在猪耳后或腹部皮肤给药，形成一层保护性药膜紧贴在皮肤表层，通过缓释，可持久释放清热解痛有效成分，对猪基本上没有应激，不会增加类似注射给药带来的疼痛，且药膜也不会脱落，对生猪的健康养殖具有重要意义。

附图说明

图1尼美舒利标准曲线。

图2兔皮肤给予4.5g尼美舒利后的血药浓度经时曲线。

图3仔猪造热后使用尼美舒利涂膜剂体温变化图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：

一种猪清热退烧的涂膜剂，它包括如下组分：

尼美舒利80克/升，柴胡挥发油50毫升/升，乙基纤维素20克/升，左旋薄荷醇20克/升，聚维酮k-3020克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

上述猪清热退烧的涂膜剂的制备方法，它包括如下步骤：

（1）制备A液：将乙基纤维素20克、聚维酮k-3020克和三乙酸甘油酯5克加入400毫升无水乙醇中，置于45℃水浴锅中溶解，得到A液；

（2）制备B液：称取尼美舒利80克，加入400毫升无水乙醇中搅拌混匀，加入50毫升柴胡挥发油，搅拌搅匀，再加入40毫升乙醇胺，搅拌至溶解，再加入20克左旋薄荷醇，搅拌至溶解，得到B液；

（3）将B液缓慢加入A液中，边加边搅拌，最后用无水乙醇定容至1000毫升，混匀过滤制得。

不能过程中不能沾一点水，否则会有大量析出。

实施例2：

一种猪清热退烧的涂膜剂，它包括如下组分：

尼美舒利60克/升，柴胡挥发油40毫升/升，乙基纤维素15克/升，左旋薄荷醇18克/升，聚维酮k-3015克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

上述猪清热退烧的涂膜剂的制备方法，它包括如下步骤：

（1）制备A液：将乙基纤维素15克、聚维酮k-3015克和三乙酸甘油酯5克加入400毫升无水乙醇中，置于45℃水浴锅中溶解，得到A液；

（2）制备B液：称取尼美舒利60克，加入400毫升无水乙醇中搅拌混匀，加入40毫升柴胡挥发油，搅拌搅匀，再加入40毫升乙醇胺，搅拌至溶解，再加入18克左旋薄荷醇，搅拌至溶解，得到B液；

（3）将B液缓慢加入A液中，边加边搅拌，最后用无水乙醇定容至1000毫升，混匀过滤制得。

不能过程中不能沾一点水，否则会有大量析出。

实施例3：

一种猪清热退烧的涂膜剂，它包括如下组分：

尼美舒利90克/升，柴胡挥发油60毫升/升，乙基纤维素25克/升，左旋薄荷醇22克/升，聚维酮k-3025克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

上述猪清热退烧的涂膜剂的制备方法，它包括如下步骤：

（1）制备A液：将乙基纤维素25克、聚维酮k-3025克和三乙酸甘油酯5克加入400毫升无水乙醇中，置于45℃水浴锅中溶解，得到A液；

（2）制备B液：称取尼美舒利90克，加入400毫升无水乙醇中搅拌混匀，加入50毫升柴胡挥发油，搅拌搅匀，再加入40毫升乙醇胺，搅拌至溶解，再加入22克左旋薄荷醇，搅拌至溶解，得到B液；

（3）将B液缓慢加入A液中，边加边搅拌，最后用无水乙醇定容至1000毫升，混匀过滤制得。

不能过程中不能沾一点水，否则会有大量析出。

实施例4：涂膜剂的稳定性、刺激性试验。

1、稳定性试验：本试验验证了3个批次“清热退烧涂膜剂（实施例1）”在密封、干燥、室温条件下保存1个月、2个月、3个月、6个月、12个月在颜色、气味、氯原酸和蛇床子素测定及对大白兔皮肤刺激性等方面有无变化。

（1）在不同时间段性状及有效成分测定。

选择3个批次的涂膜剂分别在生产后第1、2、3、6、12个月检查颜色、澄明度及尼美舒利含量检测，记录结果，并作比较分析。结果表明：在生产后1个月、2个月、3个月、6个月及12个月检查均与生产后第1天无明显区别（见表1）。

表1尼美舒利涂膜剂性状及有效成分测定

（2）观测兔皮肤刺激性试验。

分别取生产后6个月和12个月的“清热退烧涂膜剂（实施例1）”作大白兔试验。经试验，该涂膜剂不引起大白兔皮肤出现红、肿等刺激性反应，证实保存一年后，该药剂仍可安全涂抹用于治疗。

（3）涂膜剂对健康大白兔皮肤安全性试验。

取6只实验健康大白兔，雌雄各半，体重2.2+0.35kg，分为二组并在背部用脱毛剂脱出10×20cm²无毛区。脱毛后第2天，将一组兔在背部左侧涂布该涂膜剂，右侧涂布空白基质剂，待3-5分钟成膜后，隔离饲养观察；第二组用针剂人为破损皮肤，按下面标准观察并评定打分，最后统计平均刺激反应值，评价刺激性大小。评定标准红斑：无红斑0分；勉强可见1分；明显可见2分；中度严重红斑3分；紫红色红斑并有焦痂4分；水肿：无水肿0分；勉强可见1分；可见（边缘高出皮肤）2分；皮肤隆起约1mm，轮廓清楚3分；水肿隆起1mm以上4分。最高值为8分。结果由表2可以看出，完整皮肤组无红斑和水肿反应；损伤皮肤组未发现明显的红斑和水肿反应，个别兔在用药初有勉强可见的红斑但不久消失，表明该涂膜剂无论对完整皮肤组还是破损皮肤组均无明显的刺激性。

表2涂膜剂对健康大白兔皮肤安全性试验结果

（4）假单胞菌及金黄色葡萄球菌检测。

取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，2份分别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌液作为阳性对照，阳性菌为本单位分离、鉴定和保存的绿脓杆菌，第3份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照。培养18-24小时，观察阴性对照有无菌生长，其余2份培养液化线接种与溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，培养18-4小时。当阳性对照的平板生长的菌落呈阳性菌落时，供试品的平板无菌落或无疑似菌落生长，可判未检出铜绿假单胞菌。

取亚碲酸钠肉汤（或营养肉汤）培养基3份，每份100ml，2份分别加入规定量的供试液，其中1份加入对照菌液作为阳性对照，第3份加入与供试液等量的稀释液作为阴性对照。均培养18-24小时（必要时可延至48小时）。观察阴性对照有无细菌生长。取其余2份培养液划线接种于卵黄高盐琼脂培养基平板或甘露醇高盐琼脂培养基平板，培养24-72小时。当阳性对照菌C56005的平板呈现阳性菌落时，供试品的平板如无菌落生长，或有菌落但不同于上表所列特征，可判未检出金黄色葡萄球菌。

经微生物学检验，生产后第1、2、3、6、12个月的清热退烧涂膜剂（实施例1）液体培养均无可疑菌落生长，表明该制剂均未发现绿脓杆菌及金黄色葡萄球菌，由此证明该涂膜剂未受这两种细菌的污染。

实施例5：涂膜剂药物成分代谢试验。

1、标准曲线（STD）样品及质量控制（QC）样品制备

尼美舒利标准品为纯度100%，来源于中国食品药品检定研究院，批号：100555-201202。储存条件：2℃～8℃，避光。称取适量尼美舒利标准品各一份，分别用对应体积的乙腈精确配制为1.00mg/mL的标准品储备液。将各储备液用乙腈-水（50：50，v/v）逐级稀释至适当浓度，采用LC-MS/MS进行检测，测得两溶液浓度差不超过5%。将两储备液等体积混匀，获得尼美舒利储备液，2-8℃保存备用。精密称取地塞米松标准品约10mg，用适量乙腈溶解并摇匀，获得浓度为1.00mg/mL的内标储备液，4℃保存备用。取地塞米松储备液（1.00mg/mL）适量，用叔甲醚稀释制成浓度为1000ng/mL的内标工作液，4℃保存备用。制备标准及质控系列溶液。取适量空白兔血浆，分别加入适量标准系列溶液，制备的各标准系列溶液，配制成标准含药血浆。

2、血浆样品的处理

（1）从冰箱（-20℃）中取出样品，室温自然融化，涡旋30s。

（2）取血浆20μL至1.5mL离心管中。

（3）加400μL叔甲醚内标液（含地塞米松1000ng/mL），涡旋3min（2500rpm），12000rpm离心3min。

（4）取上清液100μL至96孔板中，45℃氮气吹干，加入1000μL乙腈-水（50：50，v/v）稀释液复溶并在摇床上震荡混匀96孔板约10min（500rpm）。

（5）每个样品进样5μL进行LC-MS/MS分析。

2、色谱及质谱条件

色谱和质谱条件分别见

表3和表4。

表3尼美舒利及内标地塞米松的色谱检测条件

表4尼美舒利及内标地塞米松的质谱检测条件

3、方法的选择性

分别取空白血浆、定量下限血浆以及给药后收集的血浆样品，按0项下进行样品于处理并进行LC-MS/MS分析，记录色谱图。考察是否有内源性的物质影响测定结果，确认本方法的选择性。

在本试验所采用的色谱条件下，尼美舒利的保留时间为2.70min，内标地塞米松的保留时间为2.46min，空白血浆中的内源性物质不干扰本品的测定，说明本法选择性良好。

4、标准曲线

按照上述要求操作配制标准曲线，进行样品于处理并进行LC-MS/MS分析，记录色谱图，计算待测物峰面积As和内标峰面积Ai的比值f（f=As/Ai），以血药浓度x为横坐标，峰面积比值f为纵坐标，用加权（W=1/x²）最小二乘法进行直线回归运算，求得标准曲线的线性回归方程f=ax+b。定量下限即为标准曲线线性范围的最低点。

测得在500～100000ng/mL浓度范围内，药物浓度与药物/内标峰面积比值符合线性回归方程：

Y=0.00285X+0.544(R²=0.9951)

结果见图1。

5、兔皮肤给予4.5g尼美舒利后的血药浓度实测数据

5只成年试验兔皮肤平均给予4.5g尼美舒利涂膜剂（实施例1）后的平均血药浓度见表5同，有效成分的变化曲线见图2。

表5试验兔皮肤给予4.5g尼美舒利后的平均血药浓度（μg/mL，n=5）

从图表可见，尼美舒利涂膜剂能有效地透过皮肤，进入血液，并持续在血液中存在。

实施例6：涂膜剂清热退烧试验。

1、试验兔人工造热退烧试验

取成年新西兰大白兔16只，分为四组，每组4只，第一组为用药组，第二组为安乃近退烧对照组，第三组为人工发烧不用药组，即阳性对照组；第四组为阴性对照组，即人工不致热也不用药组。第一组兔在背部剃毛。所有实验兔置于同一室温环境，温度25-28℃之间，每天上午8:00测温一次，取其平均值。连续三天体温无明显波动及开始人工致热，将第一至第三组兔用脂多糖注射液在兔肌肉注射1毫升，每隔5小时用水银体温计经肛门测一次体温，待体温上升至40℃以上，且阴性对照组体温无明显波动，将第一组实验兔进行涂膜剂（实施例1）用药，每只兔子在背部剃毛部位涂布药液5毫升，待药膜干燥后放开。第二组猪舍治疗剂量的安乃近注射剂。每隔一小时测温一次，记录体温变化情况，并作统计分析。结果见表6。从表6可见，尼美舒利涂膜剂能有效地降低发烧兔的体温，用药后3小时即能降至正常体温，且能持续保持。而安乃近注射组试验兔体温效果不佳，体温在造热后2小时降至正常体温后尚不能控制持续的体温升高。表明该涂膜剂能有效地解热。

表6试验兔人工造热退烧试验结果

2、猪人工发烧解热试验

取5头健康长杂6月龄断奶仔猪，分别饲养观察，每天上下午各测一次体温，确信每头猪体温稳定在38.5℃-39℃之间，开始人工造热，即在背部肌肉注射2毫升脱脂牛奶，然后每隔2小时测体温1次。当每头猪体温超过39.5℃，平均体温超过40℃时，开始用涂膜剂（实施例1）涂布治疗，在背部每头猪喷涂药液5毫升，每隔2小时测温一次，连续测至12小时后，再隔12小时测量一次，记录体温变化情况，比较分析猪体温变化趋势。

仔猪造热后使用尼美舒利涂膜剂体温变化情况见表7及图3。

表75头仔猪造热后使用尼美舒利涂膜剂体温变化表

处理	1号猪	2号猪	3号猪	4号猪	5号猪	平均℃
							正常体温	38.6	38.6	38.5	38.5	38.3	38.5
造热体温	40.1	40.2	39.9	40.5	40.3	40.2
							用药2h	39.5	39.9	39.4	39.8	39.6	39.6
用药4h	39.5	39.8	39.5	39.5	39.6	39.6
							用药6h	39.4	39.8	39.4	39.5	39.5	39.5
用药8h	39.5	39.9	38.6	38.9	38.6	39.1
							用药10h	38.4	38.9	38.6	38.5	38.5	38.6

用药12h	38.2	38.5	39.1	38.5	38.3	38.5
							用药24h	38.3	38.8	38.3	38.4	38.5	38.5

由图3表7可见，仔猪在造热后体温可上升至39.9℃-40.3℃，用药后2小时平均体温即可下降0.6℃，用药后10小时即可降至正常体温，且一直延续至24小时。但降温的速度不如兔子下降的快，这可能是由于兔子皮肤较薄，药物易于吸收，以及兔子用药量较大缘故。但肯定的是本涂膜透皮制剂能有效地降低发烧猪的体温，使其在较短的时间内体温下降，并维持在正常的水平。

Claims (4)

1.一种猪清热退烧的涂膜剂，其特征在于，它由如下组分组成：

尼美舒利60～90克/升，柴胡挥发油40～60毫升/升，乙基纤维素15～25克/升，左旋薄荷醇18～22克/升，聚维酮k-3015～25克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

2.一种猪清热退烧的涂膜剂，其特征在于，它由如下组分组成：

尼美舒利80克/升，柴胡挥发油50毫升/升，乙基纤维素20克/升，左旋薄荷醇20克/升，聚维酮k-3020克/升，三乙酸甘油酯5克/升，乙醇胺40毫升/升，溶剂为乙醇。

3.权利要求1所述的猪清热退烧的涂膜剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：

(1)制备A液：将乙基纤维素15～25克、聚维酮k-3015～25克和三乙酸甘油酯5克加入400毫升乙醇中，置于45℃水浴锅中溶解，得到A液；

(2)制备B液：称取尼美舒利60～90克，加入400毫升乙醇中搅拌混匀，加入40～60毫升柴胡挥发油，搅拌搅匀，再加入40毫升乙醇胺，搅拌至溶解，再加入18～22克左旋薄荷醇，搅拌至溶解，得到B液；

(3)将B液缓慢加入A液中，边加边搅拌，最后用乙醇定容至1000毫升，混匀过滤制得。

4.权利要求1所述的猪清热退烧的涂膜剂在制备治疗猪发热药物中的应用。