CN103814866B - 江原钝绥螨驯化种群的扩增方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及江原钝绥螨驯化种群的扩增技术,具体是以酵母和维生素E的混合物作为甜果螨的复合食物进行饲养，再以上述方法饲养出的甜果螨作为江原钝绥螨的替代食物，强迫江原钝绥螨进行取食，经过多代筛选，从江原钝绥螨的自然种群中，筛选出取食替代食物后发育正常、产卵量较多、寿命较长的个体，再将这些筛选出的个体集中饲养后，获得初级驯化种群，然后对初级驯化种群进行捕食叶螨的食性筛选，获得对甜果螨和叶螨均具有较强捕食作用的个体，再将这些筛选出的个体集中饲养后，获得最终的驯化种群;在此基础上使用以酵母和维生素E混合物为复合食物的甜果螨作为江原钝绥螨的替代食物，对最终的驯化种群进行扩增。

Description

江原钝绥螨驯化种群的扩增方法及应用

技术领域

本发明涉及江原钝绥螨驯化种群的扩增方法及应用。

背景技术

 江原钝绥螨（Amblyseius eharai Amitai & Swirski）是捕食性螨类（天敌），主要分布于我国的柑桔、茶叶、枇杷、龙眼等果园以及自然界其它植物上，并以这些植物上的害螨或害虫为食物（猎物）。1995年有人曾经使用不同植物花粉（自然食物）来饲养江原钝绥螨，认为美人蕉花粉较适合江原钝绥螨的室内饲养，但未进行系统的繁殖效果测定。但上述花粉需要事先种植大量的植物才能获得，而要获得昆虫也需要种植大量的植物作为昆虫的食物，但植物的生产具有季节性，因而不能随时供应花粉或昆虫，如要随时获得大量的植物，只有在温室中进行种植（温室的建设与使用成本均相对较高，且需要大量的人工进行管理和收集花粉，可操作性不强），此外花粉与昆虫均不易长期保存，因此使用花粉和昆虫作为江原钝绥螨的食物，对江原钝绥螨种群进行扩增的成本相对较高，上述方法，但由于成本问题，江原钝绥螨始终未被大范围开发应用。

发明内容

本发明的目的是提供江原钝绥螨驯化种群的扩增方法，本发明的目的是通过如下方案来实现的: 所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法以酵母和维生素E混合物为复合食物进行饲养的甜果螨作为江原钝绥螨的替代食物; 所述的江原钝绥螨的替代食物，是指以酵母和维生素E的混合物为复合食物进行饲养的甜果螨，具体是将维生素E添加到酵母中，维生素E与酵母的重量比为10︰100，混合均匀后作为甜果螨的复合食物。

所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法具体步骤是:

a.首先从自然界中采集江原钝绥螨，并用柑桔全爪螨作为自然食物建立实验室种群，然后从实验室种群中筛选出健康的江原钝绥螨的卵，并用所述甜果螨作为替代食物进行饲养，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以所述甜果螨为替代食物，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续多代的筛选，获得初级驯化种群。

b.对初级驯化种群进行捕食叶螨的食性筛选，具体是:从初级驯化种群中筛选出健康强壮的江原钝绥螨的卵，并以柑桔全爪螨或其它叶螨作为食物，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以柑桔全爪螨或其它叶螨为食物，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续多代的筛选，筛选出对甜果螨和叶螨均具有较强喜好性的最终驯化种群。

c.对甜果螨和叶螨均具有较强捕食作用的最终驯化种群，对最终驯化种群进行扩增，具体是:首先在饲养容器中加入蓬松的填充物（如棉子壳、木屑、麦皮、蛭石等），为甜果螨和江原钝绥螨提供多缝多孔的自由活动空间，再加入所述均匀混合的酵母和维生素E混合物作为甜果螨的复合食物1-1000克，然后依次加入甜果螨和江原钝绥螨（江原钝绥螨︰甜果螨的比例为＝1︰5至1︰1000），最后盖上饲养容器的盖子，放入培养室内培养，培养温度为15℃-35℃，培养湿度为60%RH-100%RH（指空气相对湿度），培养10-60天即可。

所述的饲养容器为能透气又能防止甜果螨和江原钝绥螨逃逸的容器。

本发明与现有方法相比，本发明的新颖性首先在于，以均匀混合的酵母和维生素E混合物作为饲养甜果螨的复合食物，再以这些甜果螨作为江原钝绥螨的替代食物。在此基础上以上述替代食物对江原钝绥螨的种群进行驯化和扩增。传统方法则是以花粉和叶螨等昆虫作为食物来饲养江原钝绥螨。在现有公开的资料中，未见以酵母和维生素E混合物作为饲养甜果螨的复合食物的报道，也未见以这种方法饲养出来的甜果螨作为江原钝绥螨驯化和驯化种群扩增时的替代食物的报道，也未见单纯以甜果螨作为食物饲养江原钝绥螨的报道。本发明的新颖性还在于首先提出对江原钝绥螨的自然种群进行驯化，驯化时强迫从自然界中采集的江原钝绥螨改变原有捕食习惯，改为以权利要求1所述方法饲养的甜果螨为替代食物，经过多代反复筛选，获得能适应甜果螨作为替代食物的初级驯化种群，再从初级驯化种群中选择健康强壮的个体，再以自然食物（如叶螨等）进行饲养，再次经过多代反复筛选，最终筛选出即喜好取食甜果螨，又喜好取食自然食物（如叶螨）的江原钝绥螨的最终驯化种群。在现有公开的资料中，未见对江原钝绥螨进行驯化的相关报道。

本发明与现有方法相比，本发明的创造性首先在于在甜果螨的食物，即酵母中加入维生素E，当甜果螨在取食酵母时，同时摄入维生素E，然后以这些甜果螨作为替代食物饲养江原钝绥螨，能显著提高江原钝绥螨的产卵量（即繁殖力）和寿命。而现有方法未提到以甜果螨饲养江原钝绥螨，且如果仅以甜果螨饲养江原钝绥螨，每只雌性的江原钝绥螨仅能产下5-13粒左右的卵（如表1），而以本发明饲养的甜果螨（在其食物酵母中加入维生素E）作为江原钝绥螨的替代食物时，经过所述两级驯化后的江原钝绥螨，每只雌性能产下43-66粒左右的卵，与传统方法相比，本发明显然具有突出的实质性特点和显著的进步，因而具有明显的创造性。

表1    本发明与传统方法饲养的江原钝绥螨的寿命和产卵量

	甜果螨的食物	江原钝绥螨的寿命	江原钝绥螨的产卵量
				本发明	酵母+维生素	42-60天（雌成螨）	43-66粒/雌成螨
传统方法	酵母	15-26天（雌成螨）	5-13粒/雌成螨

本发明与现有方法相比，不再使用江原钝绥螨的自然食物来扩增其种群，而是首先以均匀混合的酵母和维生素E混合物作为甜果螨的复合食物，饲养出来的甜果螨作为江原钝绥螨的替代食物，再通过所述驯化方法，对江原钝绥螨的自然种群进行两级驯化，获得即喜好取食甜果螨（替代食物），又喜好取食自然食物（如叶螨）的江原钝绥螨的最终驯化种群，然后再以这种替代食物对江原钝绥螨的驯化种群进行扩增。与传统方法使用花粉、叶螨或昆虫等江原钝绥螨的自然食物相比，本发明在1 m²的单层面积上可以获得0.96亿只甜果螨，以之饲养江原钝绥螨，只需20-30天左右即可获得0.64亿只江原钝绥螨，且能根据空间大小增加饲养的层数，从而获得更多的江原钝绥螨。而传统方法需要经过植物栽培（含浸种、育苗、移苗等）、叶螨接种、捕食螨接种过程，生产周期约25天左右，生产效率仅为10000只/m²；而使用花粉的效率比使用叶螨还要低得多，因为在1株黄瓜或玉米上收集的花粉显然是极少的，而且具有季节性，不能随时获得，实际上使用花粉作为捕食性螨类的食物已经被本行业所淘汰。因此本发明在江原钝绥螨的扩增效率上具有显著的实质性进步，因而具有明显的创造性。

本发明所述的扩增材料包括酵母、维生素E、蛭石（填充物）、甜果螨、江原钝绥螨、饲养容器。酵母与维生素E是成熟的工业产品，生产者可以通过市场很方便地获得；甜果螨是一种仓储害螨，常见于含糖食物中，生产者可从中轻易分离得到，此外该螨也是农业和医学科研单位的研究对象，生产者也可从这些单位获得；江原钝绥螨是我国柑桔园中的优势天敌，分布极为广泛，生产者可从柑桔园轻易获得该天敌。其它扩增材料，如蛭石和饲养容器都可从市场购得。有了以上扩增资料，生产者通过以上方法步骤可顺利地扩增出大量的江原钝绥螨，因此该发明具有批量制造性。

本发明所述的扩增出的江原钝绥螨的驯化种群仍然保持着对自然食物（如叶螨或其它昆虫）的喜好性，因此可以广泛应用于农、林作物上的害螨和害虫的生物防治，配合其它物理或生物防治措施，可以减少农药的使用，对于生产绿色或无公害农产品具有显著的积极效果。

此外，本发明所使用的上述替代食物相对于传统方法而言具有明显的成本优势和可操作性。酵母和维生素E均是成熟的工业产品，成本低廉且能随时供应，经过简单的均匀混合后，以之作为甜果螨的复合食物来饲养甜果螨，能随时根据实际需要获得足够的甜果螨，且甜果螨在低温和有足够食物的情况下，可长期保存，繁殖成本和可操作性均强于传统方法的花粉和叶螨等昆虫。而要获得花粉和叶螨等昆虫，必须有大量的人工来种植大量的植物，在当下土地和人工成本居高不下的情况下，实际上已经不符合当前农业生产的实际，且植物的生产具有明显的季节性，不能随时供应，且花粉与昆虫能长期保存，不易操作。因此本发明所述方法能显著提高江原钝绥螨的扩增效率，并且能大幅减少扩增成本。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明进一步说明。

本发明涉及江原钝绥螨的驯化种群的扩增方法，其主要内容为，第一步：首先从自然界中采集江原钝绥螨，然后在室内以其自然食物－柑桔全爪螨（一种柑桔害螨）为食物，建立一个稳定的江原钝绥螨的实验室种群，并用添加了维生素E的酵母混合物饲养甜果螨，建立一个稳定的甜果螨室内种群（以之作为江原钝绥螨的替代食物）。第二步：从江原钝绥螨的实验室种群中选择健康的江原钝绥螨的卵，并以上述甜果螨作为替代食物饲养，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以上述甜果螨为食物，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续多代（至少1代以上）的筛选，筛选出取食上述替代食物后发育正常、产卵量较多、寿命较长的个体，再将这些筛选出的个体集中饲养后，获得初级驯化种群。第三步：再对初级驯化种群进行捕食叶螨（自然食物）的食性筛选，即从初级驯化种群中筛选出健康强壮的江原钝绥螨的卵，并以柑桔全爪螨或其它叶螨作为食物，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以柑桔全爪螨或其它叶螨为食物，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续多代（至少1代以上）的筛选，再将这些筛选出的个体集中饲养后，筛选出对甜果螨和叶螨均具有较强喜好性的最终驯化种群。第四步：对最终驯化种群进行扩增，具体是首先在饲养容器（即能透气又能防止螨虫逃逸的容器）中加入蓬松的填充物（如棉子壳、木屑、麦皮、蛭石等），为甜果螨和江原钝绥螨提供多缝多孔的自由活动空间，再加入权利要求2所述均匀混合的酵母和维生素E混合物作为甜果螨的复合食物（1-1000克），然后依次加入甜果螨和江原钝绥螨（江原钝绥螨︰甜果螨的比例为＝1︰5至1︰1000），最后盖上饲养容器的盖子，放入培养室内培养，培养温度为15℃-35℃，培养湿度为60%RH-100%RH（指空气相对湿度）。根据不同的培养温度，培养10-60天即可。

实施例1

第一步：建立江原钝绥螨和甜果螨实验室种群:

首先在实验室内种植30株的柑桔苗，每苗含60张左右的叶片，从柑桔园中采集3600只柑桔全爪螨，然后在每张柑桔叶上接入2只柑桔全爪螨，20天后即能获得大量的柑桔全爪螨。然后再从柑桔园中采集150只江原钝绥螨，每苗接入5只江原钝绥螨。建立一个稳定的江原钝绥螨的实验室种群。

在每100克酵母中加入10克的维生素E，均匀混合后作为甜果螨的复合食物。然后在一个密闭但透气的容器中（例如1.0 升的保鲜盒，在盖上开上一个直径约5厘米的透气孔，然后用500目的防虫网封口）加入200克的蛭石，再加入上述混合了维生素E的酵母50克，最后接入1000-1500只的甜果螨，从而建立一个稳定的甜果螨的实验室种群。

第二步：获得江原钝绥螨的初级驯化种群:

首先在一个直径10cm的常规培养皿中放入一片直径8cm（厚度不超过培养皿的高度）的海绵，然后加入适量的水，再在海绵上加入一片直径6cm的塑料膜，并用棉条围绕塑料膜的边缘，使棉条吸水，从而防治江原钝绥螨和甜果螨逃逸。制备200个这样的装置。从江原钝绥螨的实验室种群中筛选出健康的卵200粒，分别将这些卵挑入塑料膜中，并加入适量的上述甜果螨和上述含维生素E的酵母，在25度培养，当这些卵发育至成螨后，选择健康强壮的个体使之交配产卵，然后再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续10代的筛选，然后将筛选出的江原钝绥螨以上述甜果螨为替代食物进行集中饲养，获得初级驯化种群。

第三步：获得江原钝绥螨的最终驯化种群:

首先在一个直径10cm的常规培养皿中放入一片直径8cm（厚度不超过培养皿的高度）的海绵，然后加入适量的水，再在海绵上加入一片柑桔叶片，并用棉条围绕叶片的边缘，使棉条吸水，从而防治江原钝绥螨逃逸。制备200个这样的装置。然后在每张叶片上加入30只柑桔全爪螨（柑桔害螨），再从上述初级驯化种群中筛选出健康强壮的江原钝绥螨的卵，江原钝绥螨孵化后以柑桔全爪螨为食物，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以柑桔全爪螨为食，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续10代的筛选，然后将筛选出的江原钝绥螨以上述甜果螨为替代食物进行集中饲养，筛选出对甜果螨和叶螨均具有较强喜好性的最终驯化种群。

第四步：最终驯化种群的扩增:

在一个密闭但透气的容器中（例如1.0 升的保鲜盒，在盖上开上一个直径约5厘米的透气孔，然后用500目的防虫网封口）加入200克的蛭石，再加入上述混合了维生素E的酵母50克，然后分别接入45000只的甜果螨和3000只的江原钝绥螨。将这个容器移入培养温度为25度，湿度为75－90%（相对湿度）的培养室中，培养20天左右，即可获得40000-200000只的江原钝绥螨。

第五步：江原钝绥螨的保存与使用:

培养出的江原钝绥螨可根据实际情况选择保存或包装使用。需要保存时，可直接将培养室的温度降至10-15度左右，湿度保持75-85%相对湿度，或者将饲养容器移入具有相同温湿度条件的冷藏库中备用。使用时，可使用透气但密闭的小瓶进行分装，或选择透气的纸袋进行分装，分装时可选择手工方法，也可以在市场上购买相应的颗粒剂（粉剂）包装机进行包装。每瓶或每袋的包装量可根据不同的使用目的进行人工调节，每瓶或每袋可装入100-25000只江原钝绥螨。在实际应用时，如果是瓶子包装的，可拧开瓶盖，然后将里面的江原钝绥螨连同蛭石轻轻抖到植物叶片上，例如在柑桔园中使用防治柑桔全爪螨的为害时，可在每年的3-10月份，根据树冠大小和柑桔全爪螨的发生情况，每株柑桔树释放100-1000只江原钝绥螨。如果是袋子包装的产品，可撕开袋口，用图钉或挂勾固定在柑桔树杆上。江原钝绥螨是我国柑桔园中的本地优势天敌，当它被释放到柑桔后，可主动搜索和捕食柑桔全爪螨，控制柑桔全爪螨的为害，从面减少柑桔园中的农药使用量。且江原钝绥螨是我国本地的物种，不会对我国形成生物入侵，没有其它外来天敌的生物安全问题。

本发明方法应用: 本发明方法也应用于草栖钝绥螨Amblyseius herbicolus (Chant)、拟莲钝绥螨Amblyseius subpassiflorae Wu & Lan、拉哥钝绥螨Amblyseius largoensis (Muma)的驯化与驯化种群的扩增。

本发明不局限于上述具体的实施例，任何人在本发明的启示下得出的其他任何与本发明相同或相近似的方法，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.江原钝绥螨驯化种群的扩增方法，其特征是, 所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法以酵母和维生素E混合物为复合食物进行饲养的甜果螨作为江原钝绥螨的替代食物; 所述的江原钝绥螨的替代食物，是指以酵母和维生素E的混合物为复合食物进行饲养的甜果螨，具体是将维生素E添加到酵母中，维生素E与酵母的重量比为10︰100，混合均匀后作为甜果螨的复合食物; 所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法，具体步骤是:

a.首先从自然界中采集江原钝绥螨，并用柑桔全爪螨作为自然食物建立实验室种群，然后从实验室种群中筛选出健康的江原钝绥螨的卵，并用所述甜果螨作为替代食物进行饲养，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以所述甜果螨为替代食物，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续多代的的筛选，获得初级驯化种群；

b.对初级驯化种群进行捕食叶螨的食性筛选，具体是:从初级驯化种群中筛选出健康强壮的江原钝绥螨的卵，并以柑桔全爪螨或其它叶螨作为食物，当这些卵发育至成螨后，筛选那些健康强壮的个体进行雌雄配对，继续以柑桔全爪螨或其它叶螨为食物，当这些成螨产卵后，再从这些卵中筛选健康的个体，重复上述过程，进行连续多代的筛选，筛选出对甜果螨和叶螨均具有较强喜好性的最终驯化种群；

c.对甜果螨和叶螨均具有较强捕食作用的最终驯化种群，对最终驯化种群进行扩增，具体是:首先在饲养容器中加入蓬松的棉子壳、木屑、麦皮、蛭石填充物，为甜果螨和江原钝绥螨提供多缝多孔的自由活动空间，再加入均匀混合的酵母和维生素E混合物作为甜果螨的复合食物1-1000克，然后依次加入甜果螨和江原钝绥螨，江原钝绥螨︰甜果螨的比例为＝1︰5至1︰1000，最后盖上饲养容器的盖子，放入培养室内培养，培养温度为15℃-35℃，培养湿度为60%RH-100%RH，培养10-60天即可。

2.根据权利要求1所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法，其特征是, 所述的饲养容器为能透气又能防止甜果螨和江原钝绥螨逃逸的容器。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法，其特征是, 所述的江原钝绥螨驯化种群的扩增方法应用于草栖钝绥螨、拟莲钝绥螨、拉哥钝绥螨的驯化种群的扩增。