CN103805676A - 一种厌氧菌的简便快速培养计数法 - Google Patents

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温建新
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Abstract

本发明公开了一种厌氧菌的简便快速培养计数法，根据高层半固体培养基具有良好厌氧性能的原理，我们设计出一种适用于不产气厌氧菌的进行简单快速菌落计数的方法。此法把稀释和计数集中在同一支试管内，以不易透氧、装有高层半固体培养基的试管代替常规的培养皿平板进行菌落计数，从而使活菌计数操作简化成“样品分散，逐级稀释+常规培养，菌落计数”3步，该方法具有有简化的操作步骤的优点，还有省略专用厌氧培养装置，缩短培养时间及节约试剂和材料等优点。

Description

一种厌氧菌的简便快速培养计数法
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种厌氧菌的简便快速培养计数法。
背景技术
厌氧菌的培养和活菌计数方法很多，通常都需要提供较复杂的装备和采取繁琐的操作，例如常用的厌氧罐技术，亨盖特滚管技术或厌氧手套技术等，故令一般实验室的工作人员难以操作。现有技术中一般需“样品分散，逐级稀释，涂布或浇注平板，厌氧培养，菌落计数”5步，操作繁琐。
发明内容
本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种厌氧菌的简便快速培养计数法，该方法具有有简化的操作步骤的优点，还有省略专用厌氧培养装置，缩短培养时间及节约试剂和材料等优点。其具体技术方案为：
一种厌氧菌的简便快速培养计数法，包括以下步骤：
(1)；准备样品：取斜面菌苔(纯种)溶于10ml生理盐水中，充分摇匀后备用。
(2)；制高层试管：将半固体培养基加热，融化，冷却至50℃，用10ml吸管在每支无菌试管中灌9ml，然后放在45℃水浴中保温待用。
(3)；按常规方法用无菌吸管(1ml)吸取1ml含菌样品至9ml半固体培养基试管中，再用另一支吸管上下轻搅动4-6次使充分混匀(不可产生气泡)，然后吸1ml至下一支试管中，如此逐级稀释直至10-5至10-7为止(可依据样品的含菌量而定)。
(4)；恒温培养：待稀释均匀后，各稀释度的试管垂直放置于试管架上，置37℃恒温培养24h左右。
(5)：观察与计数：各稀释度的高层半固体培养基试管内形成许多透镜状或近球状的菌落，数出各试管中试管形成的菌落数目。
进一步优选，一般一个样品可选3个稀释度，每一个稀释度做3个重复。
凡是每管菌落数在30-300个的试管，均作为统计对象。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：厌氧菌的种类很多，它们与医药、工业、农业、环境保护和基础理论研究有着密切的关系。厌氧菌的培养和计数方法很多，通常需要提供较复杂的装备和采取繁琐的操作，令一般实验室的工作人员难以下手。本发明根据高层半固体培养基具有良好厌氧性能的原理，我们设计出一种适用于不产气厌氧菌的进行简单快速菌落计数的方法。此法把稀释(在半固体培养基凝固前)和计数(在半固体培养基凝固后)集中在同一支试管内，以不易透氧、装有高层半固体培养基的试管代替常规的培养皿平板进行菌落计数，从而使活菌计数操作简化成“样品分散，逐级稀释+常规培养，菌落计数”3步，该方法具有有简化的操作步骤的优点，还有省略专用厌氧培养装置，缩短培养时间及节约试剂和材料等优点。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
一种厌氧菌的简便快速培养计数法，包括以下步骤：
(1)；准备样品：取斜面菌苔(纯种)溶于10ml生理盐水中，充分摇匀后备用。
(2)；制高层试管：将半固体培养基加热，融化，冷却至50℃，用10ml吸管在每支无菌试管中灌9ml，然后放在45℃水浴中保温待用。
(3)；按常规方法用无菌吸管(1ml)吸取1ml含菌样品至9ml半固体培养基试管中，再用另一支吸管上下轻搅动4-6次使充分混匀(不可产生气泡)，然后吸1ml至下一支试管中，如此逐级稀释直至10-5至10-7为止为止(可依据样品的含菌量而定)。
(4)；恒温培养：待稀释均匀后，各稀释度的试管垂直放置于试管架上，置37℃恒温培养24h左右。
(5)：观察与计数：各稀释度的高层半固体培养基试管内形成许多透镜状或近球状的菌落，数出各试管中试管形成的菌落数目。
一般一个样品可选3个稀释度，每一个稀释度做3个重复。
凡是每管菌落数在30-300个的试管，均作为统计对象。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种厌氧菌的简便快速培养计数法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)；准备样品：取斜面菌苔溶于10ml生理盐水中，充分摇匀后备用；
(2)；制高层试管：将半固体培养基加热，融化，冷却至50℃，用10ml吸管在每支无菌试管中灌9ml，然后放在45℃水浴中保温待用；
(3)；按常规方法用无菌吸管吸取1ml含菌样品至9ml半固体培养基试管中，再用另一支吸管上下轻搅动4-6次使充分混匀，然后吸1ml至下一支试管中，如此逐级稀释直至10-5至10-7为止；
(4)；恒温培养：待稀释均匀后，各稀释度的试管垂直放置于试管架上，置37℃恒温培养24h；
(5)：观察与计数：各稀释度的高层半固体培养基试管内形成许多透镜状或近球状的菌落，数出各试管中试管形成的菌落数目。
2.根据权利要求1所述的厌氧菌的简便快速培养计数法，其特征在于，一个样品选3个稀释度，每一个稀释度做3个重复。
3.根据权利要求1所述的厌氧菌的简便快速培养计数法，其特征在于，每管菌落数在30-300个的试管，均作为统计对象。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN201089771Y (zh) * 2007-07-05 2008-07-23 刘军义 厌氧菌活菌计数培养平板

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