CN103768606A - 基于树枝状聚合物及其衍生物的新型纳米粒 - Google Patents
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Abstract
本发明设计一种基于树枝状聚合物(或其衍生物)的新型纳米粒。该纳米粒将树枝状聚合物引入脂质体内部，聚合物末端或末端嫁接的疏水链段掺入磷脂双分子层，或者使磷脂分子在球形聚合物表面通过疏水相互作用定向排列，形成树枝状聚合物骨架为“核”，磷脂单层或多层为“壳”的新型纳米粒。新型纳米粒能装载脂溶性药物，可用于药物的缓控释放和靶向传递。
Description
发明领域 本发明涉及到一种具有树枝状聚合物或球形分子的“内核”以及通过疏水相互作用而被覆在其表面的磷脂单分子层或双分子层(磷脂分子层可掺入PEG-脂质、两亲性分子等)或者通过电性相互作用定向排列在其表面的带相反电荷的分子形成的“外壳”这两部分组成的纳米或微米结构的微粒。
这种微粒可以包封脂溶性药物，用于口服、注射、吸入、经皮外用等多种给药途径。为提高稳定性，可以对微粒加入适量冻干保护剂冻干保存，用前加水复溶，或者将微粒分散在凝胶中给药。
本发明组合物可根据任何常规方法，用可药用的添加剂和辅料配制成各种制剂，例如滴鼻剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、霜剂、软膏剂和注射剂。
这种组合体系可以提高药物的体内外稳定性、改变药物的吸收、分布、代谢、排泄，或者是药物对某些器官组织具有特异的靶向性
背景技术 在给药系统研究领域中，微粒绐药系统非常引人瞩目，它包括微球、微囊、纳米球、纳米囊、胶束、药质体和脂质体等[1]。其中脂质体尤其受到人们的青睐，这是因为[2-4]：1〕所用材料磷脂和胆固醇是生物细胞膜的主要成分，是机体内源性物质，具有良好的生物相容性和可降解性，无毒无免疫原性；2〕脂质体的组成结构和生物细胞相似，易于与细胞发生吸附、融合、脂交换、内吞而被细胞摄取；3〕具有的一定的弹性和变形性，比相同粒径的其他类型的纳米粒容易进入病灶组织，如透过肿瘤组织的毛细血管壁进入肿瘤组织。此外，脂质体表面还很容易进行修饰，如用聚乙二醇(PEG)修饰的长循环脂质体、用对特定组织或细胞有特异结合性的配基进行修饰的主动靶向脂质体、双层脂膜掺入胆酸盐之后形成的柔性脂质体以及掺入带碱性脂质成分制备的用于基因转染的阳离子脂质体等[2-6]。通过选用合适的磷脂成分以及调整磷脂成分、胆固醇的用量比例，还可以制备pH敏感、热敏感的脂质体，利用病变局部pH、温度等的改变而在该处选择性释放药物。在脂质体内部包载磁性粒子还可以得到磁性脂质体，以磁场导引脂质体在体内特定部位释放药物[2-3]。
无论是水溶性药物还是脂溶性药物都能包封在脂质体中。尤其是脂溶性药物，多种制备方法都能获得很高的包封率。一些脂溶性蛋白也可嵌入双层脂膜中达到将近100％的包封率。大量试验证据表明，脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数，降低药物毒性减少副作用，并减少药物剂量等优点。脂质体的包封还可以提高药物的体内外稳定性、延长药物血浆半衰 期、改变药物在体内的分布，因此，在许多疾病尤其是癌症的治疗中显示了明显的优越性[2-5]。
对脂质体的研究由来已久，然而迄今为止，上市的脂质体产品还是寥寥无几，主要的原因是脂质体的稳定性问题[4]。饱和磷脂的应用可以大大改善脂质体的化学稳定性，目前脂质体的不稳定性主要来自药物渗漏、脂质体聚集和破裂。脂质体(图1-a)结构的维系依靠磷脂分子在水相中自发排列形成的双分子层。但由于没有内部骨架的支撑，双分子层很易受到外界因素的扰动而被破坏，如加热、酸性和碱性环境、表面活性剂、冷冻干燥等，而使包封的药物泄漏。如果在脂质体内部有一树枝状的骨架结构(图1-b、c)，从中心向四周辐射树枝状分支，分支末端掺入到磷脂双分子层，象一只手把磷脂双分子层“抓”住，则必定能增强脂质体的稳定性(如图1-d)。树枝状聚合物(图-2)的出现为这一构想的实现提供了现实的基础。
树枝状聚合物(dendrimer，图-2a)，一种新近发展起来的聚合物，它具有一种球状结构，从中央核心向四周辐射树枝状的重复单元，在重复单元的末梢有数目众多的功能团[7]。树枝状聚合物由中心核通过重复单元的的逐步反应向外延伸生长，每延伸一层即为一代(图-2b)，形成了外层为堆积的官能团、内层具有空腔的球体[8，9]。中心核、重复单元和外层端基这些结构决定了树枝状聚合物的大小、形状以及各种理化性质。该合成方法为发散法，此外还可以通过会聚法合成。
树枝状聚合物是真正意义上的纳米级分子，其直径范围从G0代到G10代为1-13纳米，每一代的聚合物都有精确的分子量和大小[10]。通过选择不同的重复单元和不同的代数，可以控制其内部空腔的大小和极性以及整体外形[11，12]，其表层的官能团也可以根据需要衍生化为氨基、羧基、羟基等，或者疏水化[9-10]。
药物分子既可以化学偶联在聚合物表面，也可以包封在聚合物内部空腔中[13，14]。和其它聚合物一样，和药物偶联之后能保护药物免受体内外的化学降解和酶解，屏蔽抗原作用点，降低肾小球过滤，从而提高稳定性和血液循环时间，降低用药剂量并在一定程度上实现药物的控制释放和被动靶向[15-20]。加上具有快速的细胞转运能力[18-21]，树枝状聚合物作为药物载体已经被广泛研究并证明具有很多优越性[16-20]。此外，树枝状聚合物还很容易为多种配体、造影剂修饰，具有广阔的应用前景。因而自从1985年问世[22]以来很快引起科学工作者的注意，迅速成为生命科学当今研究热点之一[23]。
关于树枝状聚合物和磷脂双层膜相互作用的研究很多[24-33]，基本上是以磷脂双层膜为模型考察树枝状聚合物在生物体内应用的安全性。带正电的树枝状聚合物(氨基末端)可以对于脂质双层形成穿孔，尤其是聚合物和双层带相反电荷时。氨基末端的dendrimer对脂质囊泡和细胞也有类似的作用。相互作用的强度取决于dendrimer的大小和所带电荷的性质，质子化 的dendrimer作用强，代数高作用增强[24，25]。
以上事实强烈说明，由于树枝状聚合物特殊的结构，通过特定操作在树枝状聚合物表面包敷磷脂分子层，制备类似脂质体的纳米粒，是完全可能的。但迄今为止，还没有人做过这方面的尝试。实践证明，以树枝状聚合物(dendrimer)为基础，将其表面的官能团以脂肪酰链疏水化处理，使之形成一个脂质小球，然后再借助于疏水相互作用以适当的方式可以将其表面组装上磷脂分子层而得到稳定的仿脂质体。
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附图说明
图1显示脂质体、树枝状聚合物和设想中的仿脂质体的结构，其中-a为脂质体，1-b和1-c树枝状聚合物的示意图，1-d为仿脂质体的示意图。
图2显示聚酰胺-胺型(PAMAM)树枝状聚合物的结构和“代”数示意图，图中每一圈为树枝状聚合物一“代”重复单元
图-3显示仿脂质体制备过程的示意图，其中A为表面为羧基的PAMAM树枝状聚合物，B为将聚合物表面羧基接枝上二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)的疏水化产物，C为在疏水化产物表面组装上磷脂单层得到的纳米结构(最简单的仿脂质体)，D为表面再被覆一层磷脂双分子层的双层仿脂质体，E为继续被覆磷脂双分子层的多层仿脂质体
图4G3.5PAMAM以硬脂胺疏水修饰产物的1H-NMR图谱(实施例1)
图5G4.O PAMAM以硬脂酸疏水修饰产物的13C-NMR图谱(实施例2)
图6实施例4中制备的脂质体(左，呈混浊的悬浮液，静置后立即出现沉淀)和新型纳米粒(右，带有蓝色乳光的胶体，久置稳定不变)。
图7实施例7中制备的新型纳米粒的粒径分布图(平均粒径约34nm)。
图8实施例7中制备的新型纳米粒的实物照片(从左至右依次为Brij78的用量分别为3％、0％、10％、15％和30％)
图9实施例8中乙醇注入法制备的新型纳米粒的实物照片
图10实施例10中乙醇注入-高压均质法制备的新型纳米粒的扫描电镜照片.
图11实施例11中制备的姜黄素新型纳米粒的实物照片(左)和透射电镜照片(右)
图12实施例11中制备的姜黄素新型纳米粒的粒径分布图(显示平均粒径不到90nm)
图13实施例子15和厚朴酚药物粉末和新型纳米粒的体外释放(含1％SDS的PBS为释放介质，37℃；左边曲线为和厚朴酚药物粉末的释放，中间曲线为不含DSPE-PEG的纳米粒的释放，右侧曲线为含DSPE-PEG纳米粒的释放)
具体实施方式本发明提供一种新型纳米粒。本发明涉及制备该新型纳米粒的方法，可以是但不限于薄膜分散法、反相蒸发法、乙醇注入法、高压乳匀法、透析法。
以下实施例用于进一步详细说明本发明。
实施例13.5代聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM dendrimer G3.5)的疏水化修饰
PAMAM dendrimer G3.5的的活化：
取适量的PAMAM dendrimer G3.5-COOH，以适量无水DMSO溶解。
按照PAMAM dendrimer G3.5-COOH:NHS:DCC=1:65:65(摩尔比)称取需要量的NHS、DCC，以无水DMSO溶解；然后加入上述DMSO溶液，反应约5～30分钟，形成活泼酯，即澄清溶液A。。
PAMAM dendrimer G3.5的疏水化修饰∶
按照PAMAM dendrimer G3.5-硬脂胺(1∶65，摩尔比)称取需要量的硬脂胺溶于无水氯仿后加入到上述活泼酯溶液中，必要时加入适量三乙胺或二甲基吗啉调节混合溶液pH为8～9，搅拌下反应24h。为使反应完全，通常DSPE可适当过量。
PAMAM dendrimer G3.5疏水化修饰产物的纯化
反应完成后，将反应液(如果有固体，取出反应液后用适当比例的氯仿-甲醇溶解后并入 反应液)，先对DMSO-氯仿(1∶1)透析24h，再对甲醇-氯仿(1∶1)、甲醇-氯仿(1∶2)、甲醇-氯仿(1∶3)、甲醇-氯仿(1∶5)透析，制定透析内液中检视不到硬脂胺、NHS、DCC等为止。将透析内液减压回收溶剂，即得PAMAM G3.5代疏水修饰产物。以TLC鉴别纯化效果，产物的1H-NMR图谱见附图4。
实施例2第4代聚酰胺-胺型树枝状聚合物(PAMAM dendrimer G4.0)的疏水化修饰
试验例1硬脂酸的活化：
取适量硬脂酸，以适量无水氯仿溶解。
按照硬脂酸：NHS：DCC=1∶1.2∶1.2(摩尔比)称取需要量的NHS、DCC，以无水氯仿溶解；然后加入上述氯仿溶液，反应约5～30分钟，形成硬脂酸的活泼酯。
试验例2PAMAM G4的疏水化修饰∶
按照PAMAM G4-硬脂酸(1∶65)称去需要量的PAMAM G4溶于无水DMSO后加入到上述活泼酯溶液中，必要时加入适量三乙胺或二甲基吗啉调节混合溶液pH为8～9，搅拌下反应24h。为使反应完全，通常硬脂酸活泼酯可适当过量。
试验例3PAMAM G4疏水化修饰产物的纯化
反应完成后，将反应液(如果有固体，取出反应液后用适当比例的氯仿-甲醇溶解后并入反应液)，先对DMSO-氯仿(1∶1)透析24h，再对甲醇-氯仿(1∶1)、甲醇-氯仿(1∶2)、甲醇-氯仿(1∶3)、甲醇-氯仿(1∶5)透析，制定透析内液中检视不到硬脂酸、NHS、DCC等为止。将透析内液减压回收溶剂，即得PAMAM G4代疏水修饰产物。以TLC鉴别纯化效果，产物的13C-NMR图谱见附图5。
实施例3第5代聚乙烯-亚胺型树枝状聚合物(PPI dendrimer G5)的疏水化修饰
试验例1硬脂酸的活化：
取适量硬脂酸，以适量无水氯仿溶解。
按照硬脂酸：NHS：DCC=1∶1.2∶1.2(摩尔比)称取需要量的NHS、DCC，以无水氯仿溶解；然后加入上述氯仿溶液，反应约5～30分钟，形成硬脂酸的活泼酯。
试验例2PPI G5的疏水化修饰∶
按照PPI G5-硬脂酸(1∶65)称去需要量的PPI G5溶于无水DMSO后加入到上述活泼酯溶液中，必要时加入适量三乙胺或二甲基吗啉调节混合溶液pH为8～9，搅拌下反应24h。为使反应完全，通常硬脂酸活泼酯可适当过量。
试验例3PPI dendrimer G5疏水化修饰产物的纯化
反应完成后，将反应液(如果有固体，取出反应液后用适当比例的氯仿-甲醇溶解后并入反应液)，先对DMSO-氯仿(1∶1)透析24h，再对甲醇-氯仿(1∶1)、甲醇-氯仿(1∶2)、 甲醇-氯仿(1∶3)、甲醇-氯仿(1∶5)透析，制定透析内液中检视不到硬脂酸、NHS、DCC等为止。将透析内液减压回收溶剂，即得PPI G5代疏水修饰产物。以TLC鉴别纯化效果。
实施例4新型纳米粒的制备(薄膜分散法，磷脂+胆固醇+树枝状聚合物)
脂质体组合物及对照品处方如下：
(1)普通脂质体：氢化磷脂-胆固醇(3∶1，摩尔比)
(2)新型纳米粒：氢化磷脂-胆固醇-PAMAM疏水修饰产物(3∶1∶0.05，摩尔比)
薄膜超声法制备脂质体和新型纳米粒
(1)普通脂质体：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、胆固醇，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，30℃超声30min，得的白色混浊，此条件下无法制备得到脂质体，其实物照片见附图6。
(2)新型纳米粒：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、胆固醇和PAMAMdendrimer G3.5疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，30℃超声10min即可得带有蓝色乳光的新型纳米粒悬液，，其实物照片见附图6。
实施例5新型纳米粒的制备(薄膜分散法，磷脂+树枝状聚合物)
方法一用聚酰胺-胺型树枝状聚合物PAMAM的疏水修饰产物
处方：氢化磷脂-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05，摩尔比)
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂和PAMAM dendrimer G3.5疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，30℃超声10min即可得带有蓝色乳光的新型纳米粒悬液。
方法二用聚乙烯-亚胺型树枝状聚合物PPI的疏水修饰产物
处方：氢化磷脂-PPI G5疏水修饰产物(3∶0.05，摩尔比)
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂和-PPI G5疏水修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，30℃超声10min即可得带有蓝色乳光的新型纳米粒悬液悬液。
实施例6新型纳米粒的制备(薄膜分散法，磷脂+DSPE-PEG+树枝状聚合物)
处方：氢化磷脂-(DSPE-PEG)-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05，摩尔比))
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、DSPE-PEG和PAMAM dendrimer G4疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，30℃超声10min即可得带有蓝色乳光的新型纳米粒悬液。
实施例7新型纳米粒的制备(薄膜分散法，磷脂+苄泽+树枝状聚合物)
处方：氢化磷脂-苄泽78-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05，摩尔比))
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、苄泽78和PAMAM dendrimer G4疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，30℃超声10min即可得带有蓝色乳光的新型纳米粒悬液，其粒径分布见附图7。
改变苄泽78的用量(Brij78的用量分别为3％、0％、10％、15％和30％)，均能制得带蓝色乳光的新型纳米粒，其实物照片见附图8。
实施例8新型纳米粒的制备(乙醇注入法)
处方一：氢化磷脂HSPC-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05，摩尔比)
制备方法：HSPC和疏水化PAMAM G4溶于0.5mL CHCL3：MeOH=3∶1的溶剂中，将其缓慢加入到60℃高速搅拌的8mLEtOH中，再旋蒸将其浓缩至约2mL，然后缓慢加入到60℃高速搅拌的8mL水中，最后继续于60℃搅拌30min，60℃对纯水透析至完全除去乙醇，得到得带蓝色乳光的纳米混悬液。
处方二：氢化磷脂-苄泽-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05，摩尔比)
制备方法：HSPC、苄泽78和疏水化PPI G5溶于0.5mL CHCL3：MeOH=3∶1的溶剂中，将其缓慢加入到60℃高速搅拌的8mLEtOH中，再旋蒸将其浓缩至约2mL，然后缓慢加入到60℃高速搅拌的8mL水中，最后继续于60℃搅拌30min，60℃对纯水透析至完全除去乙醇，得到得带蓝色乳光的纳米混悬液。制备的6个批次的新型纳米粒的实物照片见附图9。
实施例9新型纳米粒的制备(薄膜分散-高压均质法)
处方一：氢化磷脂-(DSPE-PEG)-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05，摩尔比))
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、DSPE-PEG和PAMAM dendrimerG4疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，涡旋振荡使薄膜脱落，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的清亮的新型纳米粒悬液。
处方：氢化磷脂-(DSPE-PEG)-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05，摩尔比))
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、DSPE-PEG和PAMAM dendrimer G4疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，涡旋振荡使薄膜脱落，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的清亮的新型纳米粒悬液。
处方：氢化磷脂-苄泽78-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05，摩尔比))
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、苄泽78和PAMAM dendrimer G4疏水化修饰产物，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，涡旋振荡使薄膜脱落，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的清亮的新型纳米粒悬液。
实施例10新型纳米粒的制备(乙醇注入-高压均质法)
处方一：氢化磷脂HSPC-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05，摩尔比))
制备方法：HSPC和疏水化PAMAM G4溶于0.5mL CHCL3：MeOH=3∶1的溶剂中，将其缓慢加入到60℃高速搅拌的8mLEtOH中，再旋蒸将其浓缩至约2mL，然后缓慢加入到60℃高速搅拌的8mL水中，最后继续于60℃搅拌30min，60℃对纯水透析至完全除去乙醇，得到得带蓝色乳光的纳米混悬液。50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的清亮的新型纳米粒悬液。
处方二：氢化磷脂-苄泽-PAMAM疏水修饰产物(3∶0.05∶0.05)，摩尔比)
制备方法：HSPC、苄泽78和疏水化PPI G5溶于0.5mL CHCL3：MeOH=3∶1的溶剂中，将其缓慢加入到60℃高速搅拌的8mLEtOH中，再旋蒸将其浓缩至约2mL，然后缓慢加入到60℃高速搅拌的8mL水中，最后继续于60℃搅拌30min，60℃对纯水透析至完全除去乙醇，得到得带蓝色乳光的纳米混悬液。50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的清亮的新型纳米粒悬液，其电镜扫面照片见附图10。
实施例11新型纳米粒对姜黄素的装载
处方：氢化磷脂-苄泽78-PAMAM疏水修饰产物-姜黄素(3∶0.05∶0.05∶0.5，摩尔比)
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、苄泽78和PAMAM dendrimer G4疏水化修饰产物和姜黄素，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，涡旋振荡使薄膜脱落，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的黄色的新型姜黄素纳米粒悬液，其实物照片和透射电镜照片见附图11，粒径分布图见附图12(显示平均粒径不到90nm)。
实施例12新型纳米粒对鬼臼毒素的装载
处方：氢化磷脂-苄泽78-PAMAM疏水修饰产物-鬼臼毒素素(3∶0.05∶0.05∶0.4，摩尔比)
制备方法：按上述处方比例精密称取所需的氢化磷脂、苄泽78和PAMAM dendrimer G4疏水化修饰产物和鬼臼素素，以适量氯仿溶解，30℃减压旋转蒸发除去有机溶剂，使在瓶壁上形成均匀干躁的薄膜；按照磷脂浓度5mg/ml加入需要量的去离子水，室温下水化，涡旋振荡使薄膜脱落，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有强烈蓝色乳光的黄色的新型姜黄素纳米粒悬液。
实施例13新型纳米粒对和厚朴酚的装载
处方：氢化磷脂-苄泽78-PAMAM疏水修饰产物-鬼臼毒素素(3∶0.05∶0.05∶0.3，摩尔比)
制备方法：将处方量的产物、HSPC、DSPE-PEG2000和和厚朴酚粉末溶解在1mL乙醇中，以100uL/min的速度，用蠕动泵缓慢注入到50℃加热并1200rmp搅拌的4mL水相中(10mMPBS)，注入完毕，50℃孵育10min，得和厚朴酚仿脂质体，对水透析出去乙醇，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有蓝色乳光的和厚朴酚的新型纳米粒。
实施例14新型纳米粒对和厚朴酚的装载
处方：氢化磷脂.苄泽78-PAMAM疏水修饰产物-鬼臼毒素素(3∶0.05∶0.05∶0.3，摩尔比)
制备方法：将处方量的产物、HSPC、DSPE-PEG2000和和厚朴酚粉末溶解在lmL乙醇中，以100uL/min的速度，用蠕动泵缓慢注入到50℃加热并1200rmp搅拌的4mL水相中(10mMPBS)，注入完毕，50℃孵育10min，得和厚朴酚仿脂质体，对水透析出去乙醇，50℃于2000bar压力下高压均质10个循环，得带有蓝色乳光的和厚朴酚的新型纳米粒。
实施例15和厚朴酚新型纳米粒对的体外释放
方法：参照实施例14制备和厚朴酚纳米粒，一种纳米粒在处方中含DSPE-PEG2000，另一种不含DSPE-PEG2000。制备好的纳米粒分散在含1％SDS的PBS中，取lml装在截留分子量为12000的透析袋中，对含1％SDS的PBS透析，定期取释放外液测定和厚朴酚含量，以释放量占药物总量的百分比对释放时间做图，得释放曲线。另取与纳米粒药物含量相当的和厚朴酚，分散在在含1％SDS的PBS中，取lml装在截留分子量为12000的透析袋中，对含1％SDS的PBS透析，同法制和厚朴酚药物粉末的释放曲线。
结果和厚朴酚药物粉末则在一天内就接近完全释放；两种纳米粒显示出良好的药物缓释效果，在一周时间内接近零级释放。
虽然已利用上述具体的实施方案对本发明进行了描述，但应认识到，本领域的技术人员还可进行各种的改进和改变，而且它们也应如权利要求书限定的本发明的范围之内。
Claims (12)
1.一种组合物，包括树枝状聚合物，磷脂和/或胆固醇和/或PEG-脂质，其中磷脂在树枝状聚合物表面单层或者多层定向排列形成具有“核-壳”结构的纳米、微米级的微粒。
2.如权利要求1所述的组合物，其中的树枝状聚合物经过表面疏水或者疏水化修饰的树枝状聚合物。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述的树枝状聚合物选自聚酰胺-胺型、聚丙烯-亚胺型树枝状聚合物。
4.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：其中所述的磷脂单层或双层混入PEG-脂质和/或胆固醇。
5.如权利要求1或2所述的组合物，其中的PEG-脂质选自PC-PEG，PE-PEG，胆固醇-PEG，PLA-PEG，PLGA-PEG，吐温、苄泽、卖泽之中的一个或者多个。
6.如权利要求15之一所述的组合物，其还包括其他药学上可接受的辅助剂。
7.如权利要求4所述的组合物，其中的药学上可接受的辅助剂选自表面活性剂、两亲性分子、直链脂肪胺、长链脂肪酸或者它们的混合物。
8.如权利要求1所述的组合物，辅助剂可以选择表面活性剂、两亲性分子、长链脂肪胺、长链脂肪酸等以及它们的混合物。
9.一种组合物，其包括权利要求1-8任一项的组合物用于脂溶性药物的包封。
10.一种组合物，其包括权利要求1-8任一项的组合物包载脂溶性药物后，可实现药物的缓控释放。
11.一种组合物，其包括权利要求1-11任一项的组合物，用于溶液、悬浮液、凝胶、冻干粉、颗粒剂、胶囊、滴丸、软胶囊、片剂、固体分散体形式给药。
12.一种组合物，其包括权利要求1-10任一项的组合物，用于口服、注射、吸入、透皮给药、粘膜给药、腔道给药。
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