CN103734084A - 一种检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法，包括如下步骤：1）将由一只蜂王、若干工蜂和雄峰及一张新的子脾组成的蜂群封闭在固定的空间内，让蜂王在子脾上产卵24小时后，阻止蜂王在其上继续产卵但不限制工蜂喂养幼虫，并在食源中添加待测外源物质供工蜂采集和饲喂幼虫；2）定时拍照记录子脾的发育状况，并统计各项发育指标来量化待测外源物质对蜜蜂卵期至成虫前影响。本发明具有以下优点：该方法具有操作性强、操作简便、外源物质添加剂量、时间均可控等优点，同时，对于蜜蜂个发育节点时间选择正确且具有较强的可比性，能很好的客观的评价外源物质对蜜蜂这一阶段的危害。

Description

一种检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法

技术领域

本发明涉及蜜蜂生态安全评价领域，具体涉及一种检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法。 

背景技术

蜜蜂是高级社会性昆虫，以群体为单位过着社会性生活。一个正常蜂群由一只蜂王、上万只工蜂及千百只雄峰组成，蜂王、工蜂和雄峰统称为三型蜂。蜂群中，蜂王担负着产卵的功能，工蜂担负保温孵卵、清洁蜂房、采集食物、哺育等功能，而雄峰则主要担负交配的功能。蜜蜂的存在不仅能为人类提供大量营养丰富、滋补保健的蜂产品，更为重要的是蜜蜂授粉对提高农作物产量、改善果实品质和维护生态平衡具有十分重要的作用。 

蜜蜂为全变态昆虫，其个体发育须经过卵期、幼虫期、蛹期和成虫期四个时期。蜂王在王台中产下受精卵或未受精卵后，卵经过3天孵化成小幼虫，卵期不取食任何饲料。初孵化的幼虫为淡青色，不具足，平卧房底，此阶段的前三天蜜蜂幼虫由工蜂饲喂王浆，尔后，蜂王幼虫继续被饲喂营养丰富的王浆直至化蛹；但工蜂和雄峰幼虫改吃由蜂蜜、花粉直接调和成的食物，此期间，每只幼虫平均每天被饲喂1300多次，差不多每分钟一次。在幼虫后期，工蜂将幼虫房的房口封上一层蜡，称为封盖，之后幼虫在封盖房内共进行5次蜕皮、吐丝、作茧和化蛹。蜜蜂蛹期不进食，但幼虫期形成的各种组织和器官在继续分化和改造，逐渐形成成虫的各种器官。当成虫在蛹壳内完全形成时，蛹壳裂开，蜜蜂咬破巢房蜡盖羽化出房并开始成虫期。 

以往评价诸如农药或其它等环境外源物质对蜜蜂的危害往往集 中在其对成年蜂的影响上，比如农药等蜜蜂工蜂的急性毒性或者亚致死效应上，或者是比较粗放的去评估环境有害物质对蜜蜂卵期及幼虫期的危害，而忽略了对蜜蜂卵——成虫前的影响。

发明内容

为解决在不影响生理、生活习性的同时客观评价外源物质对蜜蜂卵——成虫前的影响的难题，本发明提供一种检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法。 

本发明检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法，包括如下步骤： 

1）将由一只蜂王、若干工蜂和雄峰及一张新的子脾组成的蜂群封闭在固定的空间内，让蜂王在子脾上产卵24小时后，阻止蜂王在其上继续产卵但不限制工蜂喂养幼虫，并在食源中添加待测外源物质供工蜂采集和饲喂幼虫； 

2）定时拍照记录子脾的发育状况，并统计各项发育指标来量化待测外源物质对蜜蜂卵期至成虫前影响。 

其中，步骤1）所述将蜂群封闭在固定的空间内为将蜂群封闭在纱网围成的空间中。 

其中，步骤1）所述蜂群由一只蜂王、若干框的工蜂和雄峰及一张新子脾组成。 

其中，步骤1）所述蜂群优选由一只蜂王、两框的工蜂和雄峰及一张新子脾组成。 

其中，步骤1）所述食源为糖水和/或花粉。 

其中，步骤2）所述发育指标选自孵化率、化蛹率、羽化率、孵化时间、封盖时间、封盖率、出房时间以及出房率等中的一种或几种。 

其中，步骤2）所述定时拍照记录子脾的发育状况为每隔一定时间将子脾从蜂箱中取出，用相机拍照，然后放回蜂箱中。 

本发明还提供所述检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法在评 价蜜蜂生态安全中的应用。 

本发明的优点是：本发明旨在不打破蜜蜂固有生物学特性的基础上，将外源物质添加到蜜蜂饲粮中以评判外源物质对蜜蜂的影响，尤其是蜜蜂卵期——成虫前的影响。将蜂群封闭在纱网中，使蜜蜂能在有限空间内自由活动，但不会对其生物学行为特性有过多改变。可将待测外源物质加入封闭空间内的食源中，使得蜜蜂的食源可控，添加外源物质的浓度、剂量及时间均可控，能最大程度模仿大田环境下外源物质对蜜蜂卵——成虫前（卵、幼虫和蛹期）的危害。同时，在蜜蜂发育关键时期定时采用高分辨率的相机对子脾的发育状况进行拍照，可在电脑上检查蜂子的发育状况，避免因操作或环境因素而给蜜蜂卵——成虫期带来的影响，以孵化时间、孵化率、封盖时间、封盖率、出房时间和出房率为指标，可量化评价外源物质对蜜蜂卵-成虫前的影响。 

该方法具有操作性强、操作简便、外源物质添加剂量、时间均可控等优点，同时，对于蜜蜂个发育节点时间选择正确且具有较强的可比性，能很好的客观的评价外源物质对蜜蜂这一阶段的危害。 

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。 

实施例1评价不同剂量Bt-Cry1Ac对蜜蜂成蜂前的影响 

传统的方式为： 

在开发的环境下，将新子脾加入蜂箱中供蜂王产卵24小时，然后用隔王板限制蜂王在其上产卵和其它工蜂喂养，在幼虫期每天定时用微量移液器往蜂巢中依次加入花粉和蜂蜜的混合物，并设置添加不同剂量Bt-Cry1Ac的处理，操作起来费时费力，且由于操作时间过长，幼虫发育过程中要求的恒温35℃得不到保障，幼虫发育受到严重影响，在衡量不同剂量Bt-Cry1Ac对成虫前发育影响时，对照组（不含Bt-Cry1Ac）由卵发育成蜂的比率过低，导致实验数据的可靠性大打 折扣。 

采用本发明的方法为： 

试验开始前，将具有一只蜂王、两框的工蜂和雄峰的蜂群放入16目纱网围成的3m×3m×2.5m一封闭空间中，供以足量的质量比2：1混合而成的花粉和蜂蜜的混合物（所用花粉和花蜜为普通市购花粉和花蜜即可），并辅以清洁的清水，每两天更换一次。待蜂群稳定后，将一张新子脾加入蜂箱中供蜂王产卵24小时，然后再用隔王板或其它措施阻止蜂王在其上继续产卵，但不限制其它工蜂喂养幼虫。 

按上述方式准备若干蜂群，在不同处理蜂群的食源中添加不同剂量Bt-Cry1Ac，为设置的不同剂量处理，添加的时间为蜂王产卵满24小时开始使用隔王板或其它措施时。以后每隔一定时间检查卵的孵化率、孵化时间、封盖时间、封盖率、出房时间以及出房率等。 

本发明的方法省去了用微量移液器往蜂巢中加入花粉和蜂蜜混合物的繁琐过程，其而由于操作时间大大减少，操作和环境因素对蜜蜂的影响降到了最低，卵发育成蜂的比率高达95%，远高于前者的70%，从而能保证试验顺利的进行。 

实施例2评价不同剂量吡虫啉对蜜蜂成蜂前的影响 

将具有一只蜂王、两框工蜂和雄峰的蜂群放入16目纱网（围成的3m×3m×2.5m封闭空间中。待蜂群稳定后，将新子脾加入蜂箱中供蜂王产卵24小时，然后用隔王板限制蜂王在其上产卵，但不限制其它工蜂喂养幼虫。封闭空间内人工提供足量的质量比2：1混合而成的花粉和蜂蜜的混合物，再辅以清洁的清水，每两天更换一次。按上述方式准备若干蜂群，在不同处理蜂群的食源中添加不同剂量吡虫啉。添加的时间为蜂王产卵满24小时开始使用隔王板或其它措施时。 

但在检查蜂群发育时，采用传统方法，具体为：事先采用一张和巢框同样大小、高透明的塑料膜覆盖在巢框上，每次用记号笔在相应位置上进行画圈标记，然后进行统计分析。该方法同样费时费力，且 和实施例1中一样，子脾脱离蜂箱时间较长，蜂群发育受到一定影响。 

而采用本发明的方法检查蜂群发育，即： 

在幼虫发育关键时期每隔6小时用高分辨率相机尼康D800将蜂群发育动态记录下来。检查前，准备一张与子脾同样大小的钢丝脾框一个，根据子脾的大小，将其分成4×8个同等大小的，使得每个小区里面的蜂巢数为100个。观察时，在各发育节点时间左右每6小时将子脾从蜂箱中取出，将钢丝框脾套在子脾上，然后用高分辨率相机拍摄记录固定区域内蜂子发育状况，然后再迅速的将子脾放回蜂箱中，以此减少环境因素对蜂子的影响。将拍摄来的照片上传到电脑，然后统计该区域内的卵数、幼虫数、封盖数以及出房数及相应的时间。即可根据这些数据计算相应的孵化率、孵化率、孵化时间、封盖时间、封盖率、出房时间以及出房率等发育指标，并据此来推断外源物质对蜜蜂卵——成虫前的危害。 

在未采用本发明之前，检查每个小区的时间长达三分钟，若以每框3个小区计算，含有幼虫的巢框暴露在阳光和无保温措施环境下的时间长达10分钟以上，而采用本发明的方法后，幼虫脱离蜂群恒温保护的检查时间可缩短在一分钟以内，大大缩减了检查的时间，从而保证了其它干扰因素的影响，可科学的根据蜂群发育各项指标来判断不同剂量吡虫啉对蜜蜂成蜂前的影响。 

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。 

Claims (8)

1.一种检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法，包括如下步骤：

1）将由一只蜂王、若干工蜂和雄峰及一张新的子脾组成的蜂群封闭在固定的空间内，让蜂王在子脾上产卵24小时后，阻止蜂王在其上继续产卵但不限制工蜂喂养幼虫，并在食源中添加待测外源物质供工蜂采集和饲喂幼虫；

2）定时拍照记录子脾的发育状况，并统计各项发育指标来量化待测外源物质对蜜蜂卵期至成虫前影响。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述将蜂群封闭在固定的空间内为将蜂群封闭在纱网围成的空间中。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述蜂群由一只蜂王、若干框的工蜂和雄峰及一张新子脾组成。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）所述蜂群由一只蜂王、两框的工蜂和雄峰及一张新子脾组成。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）所述食源为糖水和/或花粉。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）所述发育指标选自孵化率、化蛹率、羽化率、孵化时间、封盖时间、封盖率、出房时间以及出房率等中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）所述定时拍照记录子脾的发育状况为每隔一定时间将子脾从蜂箱中取出，用相机拍照，然后放回蜂箱中。

8.权利要求1-7任一项所述检测外源物质对蜜蜂成蜂前影响的方法在评价蜜蜂生态安全中的应用。