CN103724060A

CN103724060A - 一种褐煤生物肥及其生产方法

Info

Publication number: CN103724060A
Application number: CN201310748587.XA
Authority: CN
Inventors: 郜琳; 杨雪松; 何茂; 史应武; 冯晓霄; 高雁; 杨红梅; 张涛; 尤陆花
Original assignee: XINJIANG CLEAN SEED NEW ENERGY Co Ltd
Current assignee: XINJIANG CLEAN SEED NEW ENERGY Co Ltd
Priority date: 2013-12-31
Filing date: 2013-12-31
Publication date: 2014-04-16
Anticipated expiration: 2033-12-31
Also published as: CN103724060B

Abstract

本发明公开一种褐煤生物肥及其生产方法。通过对新疆阜康市和沙湾煤矿区域煤样样品中进行低阶煤降解菌的筛选，获得具有较强液化活性的菌株，经过进一步筛选、驯化选育，获得两种DavidiellatassianaCGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomycesgriseoplanus）CGMCC No.8194。通过对所获菌株进行形态特征及相应序列测定分析，初步确定了其分类地位和属性，利用获得两种菌种降解低阶煤，以褐煤和秸秆等农业下脚料作为辅料，制备获得降解褐煤生产生物有机肥，经作物试种，并在棉花、水稻种植使用具有稳定而显著的增产增效的技术效果。

Description

一种褐煤生物肥及其生产方法

技术领域

本发明涉及微生物肥料制备技术领域，具体的，本发明涉及一种利用微生物降解褐煤生产生物肥及其生产方法的应用技术领域。

背景技术

中国有丰富的褐煤资源。褐煤是一种低阶煤，低阶煤是处于低变质阶段的煤，根据中国煤层煤分类GB/T17607分类，低阶煤的定义是Qgr.maf<24 MJ/kg 的煤。褐煤易风化自燃、发热量低、含水量、含氧量及挥发分较高的年轻煤种，芳香族碳含量较低，并含有少量的氮和硫等元素。褐煤直接燃烧热效率低，工业应用价值低，长期露天堆放，不仅造成能源的浪费，而且容易造成环境污染。因此，如何合理开发和充分利用褐煤将是一个值得深入研究的课题。

我国褐煤储量如此丰富，凡有煤矿的地方就有风化煤，它是一种含有大量的腐植酸的矿物，腐植酸总含量一般在30-70％之间，最高可达80％以上，用作热源实在可惜，褐煤中的无机组分也可被植物利用。褐煤的有机组分可经微生物降解。目前有的用于改良土壤质地，提高土壤孔隙度、降低pH 值、增加有机质、腐植酸含量以及钙、镁等矿质元素的含量，进一步提高土壤肥力，但是这种不经过发酵处理直接加入风化煤，由于风化煤结构稳定，腐植酸呈结合状态存在，一般水溶性和生理活性很低，不易被植物吸收，直接使用效果很差。所以用褐煤制造的肥料，成分较全，不会形成残留废物，是一种利用微生物制造腐植酸肥料的理想原料。现有技术中利用黄孢原毛平革菌，芽孢杆菌等进行褐煤生物肥生产的报道、研究较多，但是利用Davidiella tassiana和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）菌种进行褐煤生物肥的生产研究还未见报道。

发明内容

鉴于现有技术目前褐煤产量多、传统利用价值低、长期堆放造成环境污染的技术现状，本发明利用微生物转化技术的优点，旨在要解决的问题是利用提供的微生物Davidiella tassiana和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）降解褐煤生产生物肥，此生物肥是一种具有生物降解作用的风化煤生物有机肥，从而可提高有机肥的生物活性，提高有机肥的利用率，达到增产增收和改良土壤，获得良好的技术效果，具有广泛的实用性和价值。

本发明采用主要的技术方案：

通过对新疆阜康市和沙湾煤矿区域煤样样品中进行低阶煤降解菌的筛选，获得具有较强液化活性的的菌株，经过进一步筛选、驯化选育，获得两株编号为RM-1和RM-201的菌株。通过对所获菌株进行形态特征及相应序列测定分析，初步确定了其分类地位和属性，利用获得两种菌种降解低阶煤，以褐煤和秸秆等农业下脚料作为辅料，制备获得降解褐煤生产生物有机肥，经作物试种使用具有稳定而显著的增产增效的技术效果。

本发明具体提供一种褐煤生物肥的制备方法，%按照重量百分比计，以褐煤为利用原料，以玉米秸秆、棉花秸秆农作物秸秆为辅料，将褐煤粉碎至50目以下，将辅料长度粉碎至2mm以下，在煤粉中加入辅料组成配料，具体配比为褐煤40%-50%，20%-25%玉米秸秆，10%-15%棉花秸秆，调整水分至30-50%，然后按v/w 计将Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194发酵液各10%接入上述配料中，搅拌均匀，调整配料pH为6.5至7.5，28°C保温发酵培养5-7天后，经干燥后粉碎制备获得褐煤生物有机肥。

本发明获得经过上述制备方法获得的褐煤生物有机肥，%按照重量百分比计，褐煤生物有机肥组分由40%-50%褐煤、20%-25%玉米秸秆和10%-15%棉花秸秆组成的农作物秸秆、水分30-50%组成，%以v/w 计各接入10%的Davidiella tassiana CGMCC No.7440的发酵液和10%的灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194发酵液。

同时，本发明提供制备褐煤生物有机肥的优良菌种Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194。

本发明中，采用的菌种发酵液是将Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194分别接种到发酵罐培养48-72小时后得到的菌培养液。

本发明采用的两种低阶煤降解菌已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。菌株Davidiella tassiana的编号为RM-1，保藏号为CGMCC No.7440，保藏日期为2013年 4月9日；菌株灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）的编号为RM-201，保藏日期为2013年 9月16日，保藏号为CGMCC No.8194。上述两种降解菌，通过在新疆阜康和沙湾煤矿区域的煤样样品中分离、筛选和培养，获得一批作为可降解低阶煤的微生物菌株，从中筛选出编号为RM-1和RM-201的菌株，降解褐煤生产生物肥具有稳定而显著的效果，经微生物学分类与鉴定，属于Davidiella tassiana和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）。

进一步，本发明提供了两种菌种Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194的保存培养条件。

Davidiella tassiana CGMCC No.7440培养条件：CDA固体培养基：蔗糖3.0%，酵母提取物0.5%，K₂HPO₄ 0.1%，MgSO₄·7H₂O 0.05%，KCl 0.05%，NaNO₃0.3%，FeSO₄·7H₂O 0.001%，琼脂2%。培养条件：温度25°C,pH：6.5,培养时间：24-48h。在其CDA培养基斜面上25°C条件下，培养24-48小时，后采用无菌的脱脂牛奶为保护剂，真空冷冻干燥后低温保存；平时使用保存在CDA固体培养基的斜面上，4°C 冰箱保存备用。

灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）培养条件：NA固体培养基：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl 0.5%，琼脂2%。培养条件：温度28°C,pH：7.0,培养时间：24-48h。在其NA培养基斜面上28°C条件下，培养24-48小时，后采用无菌的脱脂牛奶为保护剂，真空冷冻干燥后低温保存；平时使用保存在NA固体培养基的斜面上，4°C 冰箱保存备用。

通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果:

本发明提供了分离得到的两种菌种Davidiella tassiana CGMCC No. 7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194，它们都是低阶煤降解菌。通过应用提供的菌种以及褐煤和秸秆等农业下脚料作为辅料，降解褐煤生产生物肥，使用褐煤生物有机肥的棉花产量增产明显，增产达到了37.1%；褐煤生物有机肥对水稻增产效果明显，比对照增产17%；棉花从长势上看，经施用本发明褐煤生物有机肥的棉花根茎粗壮，叶片鲜绿油亮，叶厚，棉桃个大，病虫害也明显减少，农药用量只有对照的45％，产量比对照的高出43.82％，获得稳定而显著的效果。发酵过程不使用化学溶剂，不会产生污染环境的二次废物，实现能源的可持续利用。

附图说明

图1显示为Davidiella tassiana CGMCC No. 7440的菌落形态图。

图2显示为灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194的菌落形态图。

具体实施方式

下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。

本发明中涉及到的主要原辅材料、试剂和仪器设备：

本发明采用的煤样：沙尔湖褐煤。

培养基及其它材料：培养基选用： CDA固体培养基、NA固体培养基。

主要仪器与试剂：MSSPX-250型生化培养箱，MLS-3020高压蒸汽灭菌锅，SW-CJ-1F B型单人双面净化工作台，E360K离心机，恒温摇床HWY-100。PCR仪 Eppendorf No:5345，电泳仪Bio-Rad Mode 200/2.0，凝胶成像仪United-Bio,GK-330C plus，PCR预混液(TaKaRa Biotechnology)，其余试剂均为分析纯。

本发明中选用的所有原辅材料，以及选用的菌种培养条件和方法都为本领域熟知选用的，本发明中涉及到的%都为重量百分比，除非特别指出除外。

实施例一：褐煤生物有机肥的制备

%按照重量百分比计，以褐煤为利用原料，以玉米秸秆、棉花秸秆农作物秸秆为辅料，将褐煤粉碎至50目以下，将辅料长度粉碎至2mm以下，在煤粉中加入辅料组成配料，具体配比为褐煤40%-50%，20%-25%玉米秸秆，10%-15%棉花秸秆，调整水分至30-50%，然后将Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194发酵液各按v/w 计10%接入上述配料中，搅拌均匀，调整配料pH为6.5至7.5，28°C保温发酵培养5-7天后，经干燥后粉碎制备获得褐煤生物有机肥。

经过上述制备方法获得的褐煤生物有机肥，%按照重量百分比计，褐煤生物有机肥组分由褐煤40%-50%，20%-25%玉米秸秆和10%-15%棉花秸秆组成的农作物秸秆，水分30-50%，各按10%添加的Davidiella tassiana CGMCC No.7440的发酵液和10%的灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194发酵液。

上述制备的褐煤生物有机肥采用的菌种发酵液是将Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194分别接种到发酵罐培养48-72小时后得到的菌培养液。

上述两种低阶煤降解菌已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。菌株Davidiella tassiana的编号为RM-1，保藏号为CGMCC No.7440，保藏日期为2013年 4月9日；菌株灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）的编号为RM-201，保藏日期为2013年 9月16日，保藏号为CGMCC No.8194。上述两种降解菌，通过在新疆阜康和沙湾煤矿区域的煤样样品中分离、筛选和培养，获得一批作为可降解低阶煤的微生物菌株，从中筛选出编号为RM-1和RM-201的菌株，降解褐煤生产生物肥具有稳定而显著的效果，经微生物学分类与鉴定，属于Davidiella tassiana和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）。

实施例二：Davidiella tassiana CGMCC No. 7440的分离筛选、分类及鉴定

（1）菌种的分离和筛选

通过在新疆阜康市煤矿区域的煤样样品中分离、筛选和培养，获得一批作为可降解新疆低阶煤的微生物菌株，通过进一步筛选，筛选的具体步骤是：取1g矿煤样样品，加入无菌水，分别稀释成10⁰、10^-1以及10^-2三个梯度浓度，均匀涂布于CDA固体培养基上，25℃，静置培养，待菌落充分生长后，挑选不同形态的菌落重新接种到CDA固体培养基进行纯化，如此反复纯化5代，经过平板筛选，共分离获得7株褐煤降解菌株；经过进一步复筛，得到降解菌株RM-1。从中筛选出一株编号为RM-1的菌株，将菌株接种到CDA固体培养基上，静置于25℃培养箱培养24-48h，待菌株长满整个培养基后，均匀加入一层硝酸处理过的煤粉，可见RM-1菌株可将新疆低阶煤降解，通过应用沙尔湖褐煤，哈密大南湖长焰煤等具有同样的效果，在RM-1菌丝体表面产生黑色液滴。降解沙尔湖褐煤具有稳定而显著的效果，培养72小时其能够明显的降解褐煤产生黑色液滴，经多次实验验证其降解效果较为稳定。经微生物学分类与鉴定，属于Davidiella tassiana类。

具体的，本发明提供的一种低阶煤降解菌Davidiella tassiana，编号为RM-1。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2013年 4月9日，保藏号是CGMCC No. 7440。经微生物学鉴定为Davidiella tassiana。该菌株最适生长条件为：温度25°C,培养基为CDA，培养条件：pH：6.5, 培养时间：24-8h。在CDA固体培养基上25℃培养48h,菌落特征为直径1cm左右的黄绿色菌落，呈近似圆形，表面呈短茸毛状，有丘状隆起褶皱，边缘呈纤毛状，质地疏松，易挑起，参见附图1；依照《真菌鉴定手册》，对编号为RM-1菌株进行形态学测定，生理生化检测确定编号为RM-1菌株为Davidiella tassiana中的成员。通过BLAST同源比对，菌株RM-1的ITS序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后,菌株RM-1与Davidiella tassiana处于最小分支, 是其近似种；菌株ITS序列提交至GeneBank中获得基因登录号为：KF002787。因而将编号为RM-1菌株确定为Davidiella tassiana。

（2） PCR 扩增拮抗菌ITS序列及其测序

挑取少量单菌落，放入盛有25μL无菌水的EP管中, 100°C煮沸8-10 min，后迅速放入冰水混合物中5 min。离心10000 r/min、5 min，4°C保存，用时取上清。PCR扩增ITS序列。ITS序列分析，以提取到的细胞总DNA为模板，利用引物：

上游引物ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′；

下游引物ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。

PCR扩增反应体系为50μL,含有24μL premix Taq,引物1 1μL，引物2 1μL，模板2μL，无菌水22μL。扩增条件: 94°C 4 min，94°C 55 s，53°C 30 s，72°C 90 s，30个循环；72°C 7 min。扩增产物（约500 bp）经1%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，PCR产物直接进行双向测序。

将PCR扩增产物进行测序，经测序后确认该片段实验长度为486bp，序列参见附后的基因序列表：SEQUENCE LISTING 1。

（3）ITS 序列比对及系统发育分析

将测序得到的ITS序列与GenBank数据库中的核苷酸序列进行BLAST分析，从中获取相近的ITS序列，菌株ITS序列提交利用GeneBank中的 BankIt 软件进行在线提交，获得基因登录号 KF002787；将RM-1的ITS序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后,菌株RM-1与Davidiella tassiana之间进化距离最短，是Davidiella tassiana的近似种。结合RM-1的形态结构特征及生理生化特性，将菌株RM-1确定鉴定为Davidiella tassiana。

实施例三：灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194的分离、筛选、分类及鉴定

（1）菌种的分离和筛选:通过在新疆沙湾煤矿区域的煤样样品中分离、筛选和培养，获得一批作为可降解新疆低阶煤的微生物菌株，通过进一步筛选，筛选的具体步骤是：取1g矿煤样样品，加入无菌水，分别稀释成100、10-1以及10-2三个梯度浓度，均匀涂布于NA固体培养基上，28℃，静置培养，待菌落充分生长后，挑选不同形态的菌落重新接种到NA固体培养基进行纯化，如此反复纯化5代，经过平板筛选，共分离获得7株褐煤降解菌株；经过进一步复筛，得到降解菌株RM-201。从中筛选出一株编号为RM-201的菌株，将菌株接种到NA固体培养基上，静置于28℃培养箱培养24-48h，待菌株长满整个培养基后，均匀加入一层硝酸处理过的煤粉，可见RM-201菌株可将新疆低阶煤降解，通过应用沙尔湖褐煤，哈密大南湖长焰煤等具有同样的效果，在RM-201菌丝体表面产生黑色液滴。降解沙尔湖褐煤具有稳定而显著的效果，培养72小时其能够明显的降解褐煤产生黑色液滴，经多次实验验证其降解效果较为稳定。经微生物学分类与鉴定，属于灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）。

具体的，本发明提供的一种低阶煤降解菌灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus），编号为RM-201。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2013年 9月16日，保藏号是CGMCC No.8194。经微生物学鉴定为灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）。该菌株最适生长条件为：温度28°C,培养基为NA，培养条件：pH：7.0, 培养时间：24-8h。在NA固体培养基上28℃培养48h,菌落特征为直径3mm左右的白色菌落，呈近似圆形，表面有显著的疣状突起，质地疏松，易挑起，参见附图2；依照《常见细菌系统鉴定手册》对编号为RM-201菌株进行形态学测定，生理生化检测确定编号为RM-201菌株为灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）中的成员。菌株16S序列提交至GeneBank中获得基因登录号为：KF002788。因而将编号为RM-201菌株确定为灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）。

（2） PCR 扩增降解菌16S序列及其测序:挑取少量单菌落，放入盛有25μL无菌水的EP管中, 100°C煮沸8-10 min，后迅速放入冰水混合物中5 min。离心10000 r/min、5 min，4°C保存，用时取上清。PCR扩增16S序列。16S序列分析，以提取到的细胞总DNA为模板，利用引物：

上游引物27F：5′- AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；

下游引物1492R：5′- TTAAGGATGGTGATGCCGCA-3′。

PCR扩增反应体系为50μL,含有24μL premix Taq,引物1 1μL，引物2 1μL，模板2μL，无菌水22μL。扩增条件: 94°C 4 min，94°C 55 s，53°C 30 s，72°C 90 s，30个循环；72°C 7 min。扩增产物（约1500 bp）经1%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，PCR产物直接进行双向测序。将PCR扩增产物进行测序，经测序后确认该片段实验长度为800bp，基因序列具体参见附后的序列表：SEQUENCE LISTING 2。

灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）最适生长条件为：温度28°C,培养基为NA培养基，培养条件：pH：7.0, 培养时间：24-48h。在NA固体培养基上28℃培养48h,菌落特征为直径3mm左右的白色菌落，呈近似圆形，表面有显著的疣状突起，质地疏松，易挑起；依照《常见细菌系统鉴定手册》对编号为RM-201菌株进行形态学测定，生理生化检测确定编号为RM-201菌株为Streptomyces griseoplanus中的成员。通过BLAST同源比对，菌株RM-1的16S序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后,菌株RM-201与Streptomyces griseoplanus处于最小分支, 是其近似种；菌株16S序列提交至GeneBank中获得基因登录号为：KF002788。结合菌种RM-201的形态结构特征及生理生化特性，将菌株RM-201确定鉴定为灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）。

实施例四：褐煤生物有机肥的应用

选取棉花作为指示作物，进行盆栽试验。将按上述实施例一提供的褐煤生物有机肥，按施用量80g/m²的标准使用。选取施肥植株与对照植株各50盆，置于室温自然光下进行培养。出苗15天后施肥植株比对照植株叶片更加鲜绿，叶片更加厚实；棉秆直径平均粗20%；株高平均高出15%；出苗率高30%。

实施例五：褐煤生物有机肥的应用

将按上述实施例一提供的褐煤生物有机肥，经在新疆生产建设兵团农五师团场的棉花示范园使用，与当地传统的施肥方式相比，在同等管理和同亩株的前提下，采用沟施方式施肥，棉田每亩底肥用本发明有机肥200公斤，对照的用市场上的有机肥200公斤。追肥时，示范园用用本发明有机肥60公斤，对照的用有机肥60公斤。棉花从长势上看，示范园的根茎粗壮，叶片鲜绿油亮，叶厚，棉桃个大，病虫害也明显减少，农药用量只有对照的45％，产量比对照的高出43.82％。

实施例六：褐煤生物有机肥在大田棉花种植生产中的应用试验

将按上述实施例一提供的褐煤生物有机肥，经在新疆阿克苏地区阿瓦提棉花示范基地进行了示范试验，试验结果发现：与对照相比，使用褐煤生物有机肥的棉花产量增产明显，增产达到了37.1%，取得了十分理想的效果。

一、材料与方法

1、试验地点及土壤条件：新疆阿克苏地区阿瓦提棉花示范基地。土壤条件适中，肥力中等，土地平整，灌水方便。

2、试验材料： a.棉花品种采用常见棉花品系。 b.肥料采用按照本发明技术方案制备的褐煤生物有机肥。

3、方法：设置1个处理和1个对照（CK）,每个小区面积相等为10m²（5m×2m），各处理除施肥有差异外，其他田间管理措施保持一致。

处理：常规施肥+褐煤生物有机肥120g做基肥；

对照（CK）：常规施肥；

其中：常规施肥为农家肥2吨/亩做基肥，追施尿素200g/小区。

二、田间管理及调查

经播种、追肥，处理组和对照组小区各用尿素200g；在间苗、除草，打药采用常见的方式。按照棉花生长期进行调查。

三、结果与分析

1、生理指标分析：由数据分析可以看出：通过多次调查的结果中，使用褐煤生物有机肥的株高和根均好于对照；其中，处理组的棉花比对照组的根长3.7cm，且田间表现为根系发达，侧根多；处理组的棉花比对照组的植株高5.4cm，说明褐煤生物有机肥能促进棉花生长发育，生长快，具有强根壮苗的作用。且田间表现为使用本发明褐煤生物有机肥的棉花比对照叶色浓绿，植株长势旺盛。

2、产量分析：数据分析可以看出：使用褐煤生物有机肥的处理与对照相比，平均单株重量比对照高15.3g，增产效果显著，高达37.1%。

3、效益分析：数据分析表明：使用褐煤生物有机肥的棉花比对照组的经济效益可观，增收显著，亩增效益达307.1元。

四、结论：本实验对棉花的一个生长周期进行了跟踪试验（5月2日-9月20日）从各项生理指标来看，使用褐煤生物有机肥的处理明显好于对照，主要表现如下。

褐煤生物有机肥对促进棉花根系生长和侧根发达作用明显；褐煤生物有机肥的棉花株高比对照高5.4cm；褐煤生物有机肥的棉花比对照增产效果明显，增产达37.1%；褐煤生物有机肥的棉花比对照亩增效益307.1元。可见，通过本实验表明：褐煤生物有机肥对棉花增产显著，效益好，建议大面积推广使用。

实施例七：褐煤生物有机肥在水稻大田种植生产中的应用试验

实验目的：选取不同的有机肥施用在随机选取的地块里，通过有机肥料示范试验选取一种在不同地块有机水稻稳定增产的有机肥料，为农场有机水稻在肥料选择上提供一定的依据。

选用本发明提供的技术方案制备获得褐煤生物有机肥、常见的阿姆斯肥、碧野肥和千代田肥四种有机肥，将以上四种有机肥料随机施用在不同的地块中，使用相同的种子，底肥和追肥都是示范有机肥，每一种有机肥与同一地块的对照进行比较：各种对照的底肥都是施倍得有机肥，热孜万家地块和黎明家地块追肥都是东力有机肥料，闫丰福家地块和闫雄家地块追肥都是绿增有机肥，从而选出一种稳定增产的有机肥料，各种肥料选取三点室内考种取其平均数，经济性状表现结果表1。

表1：经济性状表现结果表

表2：四种有机肥料示范试验产量明细表

结论：参见表1和表2，从四种有机肥料示范试验产量表中看，褐煤生物有机肥对水稻增产效果明显，比对照增产17%，褐煤生物有机肥是采用本发明制备的生物有机肥料，使得褐煤生物有机肥中NPK总含量达到10.3%，获得良好的经济性状。

SEQUENCE LISTING 1

<110> 新疆科林思德新能源有限责任公司

<120> 一种低阶煤降解菌及其在褐煤液化中的应用

<130> 2013

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 486

<212> DNA

<213> Davidiella tassiana

<400> 1

gttattcata accctttgtt gtccgactct gttgcctccg gggcgaccct gccttcgggc 60

gggggctccg ggtggacact tcaaactctt gcgtaacttt gcagtctgag taaacttaat 120

taataaatta aaacttttaa caacggatct cttggttctg gcatcgatga agaacgcagc 180

gaaatgcgat aagtaatgtg aattgcagaa ttcagtgaat catcgaatct ttgaacgcac 240

attgcgcccc ctggtattcc ggggggcatg cctgttcgag cgtcatttca ccactcaagc 300

ctcgcttggt attgggcaac gcggtccgcc gcgtgcctca aatcgtccgg ctgggtcttc 360

tgtcccctaa gcgttgtgga aactattcgc taaagggtgt tcgggaggct acgccgtaaa 420

acaaccccat ttctaaggtt gacctcggat caggtaggga tacccgctga acttaagcat 480

atcaaa 486

SEQUENCE LISTING 2

<110> 新疆科林思德新能源有限责任公司

<120> 一种褐煤生物肥及其生产方法

<130> 2013

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 800

<212> DNA

<213> 灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）

<400> 1

gcagtcgtac catggataac cgtcgaaggt ggtggattag tggcgaacgg gtgagtaaca 60

cgtgggcaat ctgcccttca ctctgggaca agccctggaa acggggtcta ataccggata 120

acactctgtc ccgcatggga cggggttaaa agctccggcg gtgaaggatg agcccgcggc 180

ctatcagctt gttggtgggg taatggccta ccaaggcgac gacgggtagc cggcctgaga 240

gggcgaccgg ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg 300

ggaatattgc acaatgggcg aaagcctgat gcagcgacgc cgcgtgaggg atgacggcct 360

tcgggttgta aacctctttc agcagggaag aagcgaaagt gacggtacct gcagaagaag 420

cgccggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag ggcgcaagcg ttgtccggaa 480

ttattgggcg taaagagctc gtaggcggct tgtcacgtcg gatgtgaaag cccggggctt 540

aaccccgggt ctgcattcga tacgggctag ctagagtgtg gtaggggaga tcggaattcc 600

tggtgtagcg gtgaaatgcg cagatatcag gaggaacacc ggtggcgaag gcggatctct 660

gggccattac tgacgctgag gagcgaaagc gtggggagcg aacaggatta gataccctgg 720

tagtccacgc cgtaaacgtt gggaactagg tgttggcgac attccacgtc gtcggtgccg 780

cagctaacgc attaagttcc 800

Claims

1.一种褐煤生物肥的制备方法，其特征在于，%按照重量百分比计，以褐煤为利用原料，以玉米秸秆、棉花秸秆农作物秸秆为辅料，将褐煤粉碎至50目以下，将辅料长度粉碎至2mm以下，在煤粉中加入辅料组成配料，具体配比为褐煤40%-50%，20%-25%玉米秸秆，10%-15%棉花秸秆，调整水分至30-50%，然后将Davidiella tassiana CGMCC No.7440和灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194发酵液各按v/w 计10%接入上述配料中，搅拌均匀，调整配料pH为6.5至7.5，28°C保温发酵培养5-7天后，经干燥后粉碎制备获得褐煤生物有机肥。

2.一种褐煤生物有机肥，其特征在于，%按照重量百分比计，褐煤生物有机肥组分由褐煤40%-50%，20%-25%玉米秸秆和10%-15%棉花秸秆组成的农作物秸秆，水分30-50%，%以v/w 计各接入10%的Davidiella tassiana CGMCC No.7440的发酵液和10%的灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）CGMCC No.8194发酵液组成。

3.一种低阶煤降解菌Davidiella tassiana RM-1, 该低阶煤降解菌Davidiella tassiana RM-1的保藏号为CGMCC No. 7440。

4.一种灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）RM-201, 该低阶煤降解菌灰平链霉菌（Streptomyces griseoplanus）RM-201的保藏号为CGMCC No.8194。

5.一种如权利要求2所述的褐煤生物有机肥在水稻种植生产中的应用。

6.一种如权利要求2所述的褐煤生物有机肥在棉花种植生产中的应用。