CN103710390B - 一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法。它是将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-10mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-72小时，再经超声处理，超声后的溶液再经过滤，滤液即为纳米银溶液。本发明利用细菌的发酵液制备纳米银粒子，制备方法简便易行，可操作性强，成本低廉，且制备过程不会向环境排出有毒有害物质，是一项既简单又环保的纳米银制备技术。
Description
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法。
背景技术：
纳米银（Silver nanoparticles,简称Ag-NPs）被称为二十一世纪新一代的抗菌剂，它具有广谱的抗菌性能、高效的抗菌活性、低毒和不易使微生物产生抗药性的优点。纳米银目前已被广泛应用于各种医疗材料中，如创伤敷料、外科医生的面具、医用导管、医用手术器械、植入人体的组织等。基于纳米银优良的抗菌性能，其应用前景广阔，在生活用品领域、医疗卫生领域、建材领域、电子工业领域等都有广泛的市场需求。
纳米银粒子的制备方法很多，主要是液相化学还原法、电化学法、光化学还原法等化学方法，和还原球磨法、蒸发冷凝法、雾化法等物理方法，其中尤以化学还原法比较常见，但也需要严格控制反应条件，对制备技术的要求比较高。
发明内容：
本发明的目的是提供一种简便易行、可操作性强、成本低廉，且制备过程不会向环境排出有毒有害物质，比较环保的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法。
本发明的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，包括以下步骤：将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton（MH）培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-10mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-72小时，再经超声处理，超声后的溶液再经过滤，滤液即为纳米银溶液。
所述的超声处理优选为在冰浴条件下超声1-5min左右，超声输出功率为150-200瓦特。
所述的过滤优选是将超声后的溶液用孔径0.1-0.22μm的滤膜过滤。
本发明还提供了另外一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，包括以下步骤：将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton（MH）培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-1mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-24小时，再经过滤，滤液即为纳米银溶液。
所述的过滤优选是用孔径0.1-0.22μm的滤膜过滤。
本发明的Mueller–Hinton（MH）培养基是现有技术中已知的培养基，即水解酪蛋白（Mueller-Hinton）培养基，可以直接从试剂公司购买。
本发明利用细菌的发酵液制备纳米银粒子，制备方法简便易行，可操作性强，成本低廉，且制备过程不会向环境排出有毒有害物质，是一项既简单又环保的纳米银制备技术。
附图说明：
图1-图7分别是实施例1-7的纳米银溶液的电镜图。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
将金黄色葡萄球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养24h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入200μl的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为1mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应24h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为150瓦特，超声30s，间歇30s，重复6次。将超声后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图1所示，从图1可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
实施例2：
将金黄色葡萄球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养24h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入1ml的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为5mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应24h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为200瓦特，超声30s，间歇30s，重复6次。将超声后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图2所示，从图2可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
实施例3：
将金黄色葡萄球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养24h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入2ml的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为10mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应5h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为200瓦特，超声30s，间歇30s，重复10次。将超声后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图3所示，从图3可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
实施例4：
将粪肠球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养12h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入200μl的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为1mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应72h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为200瓦特，超声30s，间歇30s，重复2次。将超声后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图4所示，从图4可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
实施例5：
将粪肠球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床25℃振荡培养72h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入100μl的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5mM，置于水浴摇床上25℃振荡反应72h，然后振荡后的溶液在冰浴条件下进行超声破碎，输出功率为150瓦特，超声30s，间歇30s，重复2次。将超声后的溶液用0.1μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图5所示，从图5可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
实施例6：
将金黄色葡萄球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床25℃振荡培养72h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入200μl的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为1mM，置于水浴摇床上37℃振荡反应5h，然振荡后的溶液用0.22μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图6所示，从图6可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
实施例7：
将粪肠球菌接种到100ml的灭菌MH培养基中，充分混匀后置于恒温水浴摇床37℃振荡培养12h，将培养液加到离心管中置于离心机上5000rpm离心5分钟，将菌沉淀与上清液（菌悬液）分离。向20ml上清液中加入100μl的0.1M的硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5mM，置于水浴摇床上25℃振荡反应24h，然振荡后的溶液用0.1μm的滤膜过滤，得到澄清的纳米银溶液。该纳米银溶液的电镜图如图7所示，从图7可以看出，本实施例的纳米银溶液确实为纳米银溶液。
Claims (5)
1.一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，包括以下步骤：将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-10mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-72小时，再经超声处理，超声后的溶液再经过滤，滤液即为纳米银溶液。
2.根据权利要求1所述的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，所述的超声处理为在冰浴条件下超声1-5min，超声输出功率为150-200瓦特。
3.根据权利要求1所述的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，所述的过滤是将超声后的溶液用孔径0.1-0.22μm的滤膜过滤。
4.一种利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，包括以下步骤：将金黄色葡萄球菌或粪肠球菌接种到Mueller–Hinton培养基中，于25～37℃振荡培养12-72小时，然后将菌体和菌悬液分离开，取菌悬液，往菌悬液中加入硝酸银溶液，使银离子的浓度为0.5-1mM，然后在25～37℃条件下振荡反应5-24小时，再经过滤，滤液即为纳米银溶液。
5.根据权利要求4所述的利用细菌发酵液制备纳米银的简单方法，其特征在于，所述的过滤是用孔径0.1-0.22μm的滤膜过滤。
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