CN103705624B

CN103705624B - 一种延寿片的制备方法及应用

Info

Publication number: CN103705624B
Application number: CN201310714124.1A
Authority: CN
Inventors: 肖月升; 周振东; 刘雅敏; 邵海琴; 王艳琴; 耿建芳
Original assignee: Hebei University of Engineering
Current assignee: Hebei University of Engineering
Priority date: 2013-12-22
Filing date: 2013-12-22
Publication date: 2015-09-02
Anticipated expiration: 2033-12-22
Also published as: CN103705624A

Abstract

本发明提供一种延寿片的制备方法，由何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用。

Description

一种延寿片的制备方法及应用

技术领域

本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种延寿片的制备方法及应用。

背景技术

延寿片记载于卫生部标准WS3-B-0268-90，处方为何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g，以上十四味，何首乌50g粉碎成细粉；其余何首乌碎断成小块，与金樱子、桑椹、地黄、忍冬藤、牛膝、墨旱莲、黑豆加水煎煮，滤过，滤液浓缩成稠膏。杜仲、桑叶、莶草、菟丝子、女贞子、黑芝麻用70％乙醇加热回流提取，提取液浓缩成稠膏，两种稠膏与上述何首乌粉末制成颗粒，干燥，应出颗粒重90g，压片，包糖衣，即得。能补益肝肾，强壮筋骨。用于肝肾不足，头昏目花，耳鸣重听，四肢酸麻，腰酸无力，夜尿频数，须发早白。

现有技术中，尚未有延寿片在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用打粉和水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种延寿片的制备方法。

本发明的另一个目的在于提供一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用。

技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：

一种延寿片的制备方法，由何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。

上述一种延寿片的制备方法，所述CO₂超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。

上述一种延寿片的制备方法，所述CO₂超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。

上述一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用，延寿片由何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取当归、川芎、醋炙香附，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO₂流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。

上述一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用，延寿片制备方法中所述CO₂超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。

上述一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用，延寿片制备方法中所述CO₂超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。

现有技术中，延寿片每片0.3g，每次6片，一日3次，采用本发明制备成的延寿片每片0.3g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需3片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。

具体实施方式

以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

取何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1m1/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。

实施例2

取何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO₂流量3m1/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。

实施例3

取何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。

实施例4：延寿片抑制CNE-2Z细胞增殖的实验研究资料

1实验材料

1.1实验用细胞株

人鼻咽癌CNE-2Z细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。

1.2实验药物

研究药物：本发明延寿片：按实施例3方法制备。

药液储液：称取100mg延寿片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。

1.3实验试剂

DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司批号：2009/10）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司批号：2010242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号：080310182）；MTT(Biosharp批号：0793);PBS（实验室自配）；1.4实验器材

莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRA MAX190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号： KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。

2实验方法

1）CNE-2Z细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。

2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。

3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入延寿片溶液，继续培养24h。

4）24h后加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。

5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。

6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。

7）结果以药物对细胞的抑制率表示：

细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值×100%。实验重复3次。

3统计处理

采用Microsoft Excel2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。

4实验结果

MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对CNE-2Z细胞增殖抑制有差异（P<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0.001）。

表1延寿片对CNE-2Z细胞增殖抑制影响研究

注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001

5实验结论

延寿片可以抑制CNE-2Z细胞增殖，减少CNE-2Z细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。

Claims

1.一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用，其特征在于延寿片由何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取何首乌72g、莶草16g、菟丝子16g、杜仲8g、女贞子8g、桑叶8g、忍冬藤4g、桑椹16g、黑芝麻16g、地黄4g、金樱子16g、墨旱莲16g、黑豆16g、牛膝8g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6％，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO₂流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70％乙醇制颗粒，干燥，压片，制成300片，每片重0.3g。

2.根据权利要求1所述一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用，其特征在于延寿片制备方法中所述CO₂超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5％。

3.根据权利要求1所述一种延寿片在制备抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖药物中的应用，其特征在于延寿片制备方法中所述CO₂超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。