CN103667261A - 一种获得pcr扩增片段的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种获得PCR扩增片段的方法。步骤如下：首先将对象P CR加入模版DNA2ul以及秋水仙素溶液中，并将混合物摇匀；待其混合均匀后放置不高于60摄氏度的环境下进行变性，时间2分钟；然后对其进行链霉亲和素修饰；再将混合物放置下列环境下：90-95摄氏度，18秒，55-65摄氏度，半分钟，75摄氏度1分钟；在磁富集单重PCR的基础之上，对这四个位点进行磁富集多重PCR扩增。；四个位点的磁富集多重PCR的退火温度为34℃。本发明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丢失，且稳定性好，表达量高，具有成本低，操作简单的优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种实验方法，具体来说，一种获得PCR扩增片段的方法。
背景技术
质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器(主要指线粒体和叶绿体)中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌(大肠杆菌)、酵母菌和放线菌等生物中细胞核或拟核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体(Vector)。许多细菌除了拟核中的DNA外，还有大量很小的环状DNA分子，这就是质粒(plasmid)(补充：部分质粒为RNA)。质粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome)，这类质粒能够整合进真菌的染色体，也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。质粒在宿主细胞体内外都可复制，通过个些特性，人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，不断的复制，来得到目的产物。这就是转化的目的。
发明内容
为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案：
一种获得PCR扩增片段的方法，步骤如下：首先将对象PCR加入模版DNA2ul以及秋水仙素溶液中，并将混合物摇匀；待其混合均匀后放置不高于60摄氏度的环境下进行变性，时间2分钟；然后对其进行链霉亲和素修饰；再将混合物放置下列环境下：90-95摄氏度，18秒，55-65摄氏度，半分钟，75摄氏度1分钟；在磁富集单重PCR的基础之上，对这四个位点进行磁富集多重PCR扩增。
本发明中，四个位点的磁富集多重PCR的退火温度为34℃
本发明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丢失，且稳定性好，表达量高，具有成本低，操作简单的优点。
具体实施方式
一种获得PCR扩增片段的方法，其特征在于，步骤如下：首先将对象PCR加入模版DNA2ul以及秋水仙素溶液中，并将混合物摇匀；待其混合均匀后放置60摄氏度的环境下进行变性，时间2分钟；然后对其进行链霉亲和素修饰；再将混合物放置下列环境下：90摄氏度，18秒，55摄氏度，半分钟，75摄氏度1分钟；在磁富集单重PCR的基础之上，对这四个位点进行磁富集多重PCR扩增，四个位点的磁富集多重PCR的退火温度为34℃。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种获得PCR扩增片段的方法，其特征在于，步骤如下：首先将对象PCR加入模版DNA2ul以及秋水仙素溶液中，并将混合物摇匀；待其混合均匀后放置不高于60摄氏度的环境下进行变性，时间2分钟；然后对其进行链霉亲和素修饰；再将混合物放置下列环境下：90-95摄氏度，18秒，55-65摄氏度，半分钟，75摄氏度1分钟；在磁富集单重PCR的基础之上，对这四个位点进行磁富集多重PCR扩增。
2.如权利要求1所述的一种获得PCR扩增片段的方法，其特征在于，四个位点的磁富集多重PCR的退火温度为34℃。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| CN201310674223.1A CN103667261A (zh) | 2013-12-02 | 2013-12-02 | 一种获得pcr扩增片段的方法 |
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Publications (1)
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Family Applications (1)
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| CN201310674223.1A Pending CN103667261A (zh) | 2013-12-02 | 2013-12-02 | 一种获得pcr扩增片段的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103667261A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106636452A (zh) * | 2017-03-08 | 2017-05-10 | 海南出入境检验检疫局热带植物隔离检疫中心 | 进境植物检疫性有害生物八点楔天牛的快速鉴定方法 |
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2013
- 2013-12-02 CN CN201310674223.1A patent/CN103667261A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106636452A (zh) * | 2017-03-08 | 2017-05-10 | 海南出入境检验检疫局热带植物隔离检疫中心 | 进境植物检疫性有害生物八点楔天牛的快速鉴定方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140326 |