CN103651195A - 冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法 - Google Patents

冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103651195A
CN103651195A CN201310592906.2A CN201310592906A CN103651195A CN 103651195 A CN103651195 A CN 103651195A CN 201310592906 A CN201310592906 A CN 201310592906A CN 103651195 A CN103651195 A CN 103651195A
Authority
CN
China
Prior art keywords
androgenesis
cold shock
haploid
paramisgurnus dabryanus
induction method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201310592906.2A
Other languages
English (en)
Inventor
李雅娟
姜志强
周贺
王玉生
李佳奇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Ocean University
Original Assignee
Dalian Ocean University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Ocean University filed Critical Dalian Ocean University
Priority to CN201310592906.2A priority Critical patent/CN103651195A/zh
Publication of CN103651195A publication Critical patent/CN103651195A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开一种冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：取性腺发育良好的大鳞副泥鳅进行催产，分别取雄性大鳞副泥鳅的精液和雌性大鳞副泥鳅的卵子，将所得的精液用Kurokura’ssolution溶液稀释80-120倍；将稀释后的精子与卵子混合形成受精卵，将受精卵至于2.5-3.5℃的水中，冷休克处理50-70min，然后将受精卵放入常温水中进行孵化。这是一种无需卵子失活、可快速、高效生产大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法。

Description

冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法
技术领域
本发明涉及一种鱼类雄核发育单倍体的方法，特别是一种冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法。
背景技术
雄核发育（androgenesis）是指用精子生产只带父系遗传物质个体的繁殖方式。可用于纯系的建立，同时可冷藏濒危物种的精子，对物种的保护具有特殊的意义。另外，在水产养殖上，由于很多重要经济鱼类不同性别往往表现出不同的生产性能，如体型和体色的差异，生长速度的快慢，性成熟时间的不同等。如饲养137天后莫桑比克罗非鱼的雄鱼体重增长速度比雌鱼快1.74倍；又如饲养2年的黄颡鱼，雌性体重一般为100~200 g，雄性体重一般为200~350 g。所以，通过雄核发育控制鱼类的性别，选择具有最佳生长性能的雄性进行单性养殖，具有极为重要的应用价值。
关于人工诱导雄核发育的研究多见于鱼类，已成功培育出川鲽(Platichthys flesus)、马苏大麻哈鱼(Oncorhynchus msou)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、溪红点鲑(Salvelinus fontinalus)、鲤鱼(Cyprinus carpio)、鲫鱼(Carassius auratus)、吉福罗非鱼(Oreochromis niloticus)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudrus)、大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)、斑马鱼(Danio rerio)、虎皮鱼(Puntius tetrazona)等雄核发育二倍体。但是雄核发育二倍体的成活率极低。人工诱导鱼类雄核发育的方法主要包括两个步骤，即卵细胞染色体遗传失活及精子染色体加倍。卵细胞染色体遗传失活是人工诱导雄核发育的关键技术之一。在鱼类雄核发育的诱导中γ射线、Х射线及紫外线(UV)是常用的遗传失活手段。此种灭活方法虽然简单易行，但是用射线破坏卵子细胞核的同时，细胞质和其他细胞器也会遭受到不同程度的破坏，导致其受精后不能正常发育。因此现在需要一种新的雄核发育单倍体的方法出现。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种无需卵子失活、可快速、高效生产大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法。
本发明的技术解决方案是：一种冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：
a、取性腺发育良好的大鳞副泥鳅进行催产，分别取雄性大鳞副泥鳅的精液和雌性大鳞副泥鳅的卵子，将所得的精液用Kurokura’s solution溶液稀释80-120倍，
b、将稀释后的精子与卵子混合形成受精卵，将受精卵至于2.5-3.5℃的水中，冷休克处理50-70min，然后将受精卵放入常温水中进行孵化。
本发明同现有技术相比，具有如下优点：
本发明所公开的诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法，是取雄性大鳞副泥鳅的精液及雌性大鳞副泥鳅的卵子形成受精卵，只用冷休克处理的方法，让受精卵快速、高效的生产雄核发育单倍体。该方法无需卵子遗传失活，也避免了繁琐的操作程序，具有廉价、易操作等优点，解决了现有理化诱导对受精卵造成伤害的问题, 提高了雄核发育单倍体泥鳅孵化率和成活率，有利于大规模生产使用。其市场前景十分广泛，经济潜力巨大。
附图说明
图1是本发明实施例所制备的雄核发育单倍体大鳞副泥鳅染色体（n=24）的图片。
图2是对照组（2n♀× 2n♂）大鳞副泥鳅染色体（2n=48）的图片。
具体实施方式
下面将结合附图说明本发明实施例的具体实施方式，如图1、图2所示：一种冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法，按照以下步骤进行：
取发育良好的雄性大鳞副泥鳅及雌性大鳞副泥鳅，用传统的催产方法进行催产，水温23±1℃，效应时间10~12小时，确认排卵后，轻压腹部采集雌性大鳞副泥鳅的卵子，并用毛细管采集雄性大鳞副泥鳅的精液，所得精液用Kurokura’s solution溶液稀释80-12倍待用，其稀释倍数以100倍为最佳；Kurokura’s solution溶液的配制方法是现有技术，即NaCl 750 mg, CaCl2 20 mg, NaHCO3 20 mg, KCl 20 mg溶于100 ml蒸馏水中；
按现有技术的方法将稀释后的精液与卵子混合形成受精卵，将受精卵放入2.5-3.5℃的水中冷休克处理50-70min，其最佳水温为3℃，最佳冷休克处理时间为60min，将上述处理后的受精卵置于常温的水中进行孵化，孵化按照现有技术进行，如经常更换曝气的水体，保持室内空气新鲜和流动，及时用吸管吸出死卵等，孵化出的鱼苗放入水槽中进行饲养。
倍性检测： 
通过早期单个胚胎制片法对本发明实施例及对照组的大鳞副泥鳅体细胞染色体数目进行检测，对照组与本发明实施例的区别是受精卵未经冷休克处理。
早期单个胚胎制片法为：取本发明实施例及对照组发育眼胞期的胚胎30~50个，用镊子剖去卵膜和卵黄后，放入盛有0.0025%的秋水仙素中处理45min，0.8%的柠檬酸低渗20min，再用预冷的卡诺固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）固定3次，每次15~20min，最后-20℃冷冻12h以上。冷滴片，10%吉姆萨染色，镜检，拍照。         
本发明实施例照片如图1所示：结果表明雄核发育大鳞副泥鳅染色体为单倍体（n=24）。
对照组照片如图2所示：结果表明染色体为二倍体（2n=48）。

Claims (1)

1.一种冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：
a、取性腺发育良好的大鳞副泥鳅进行催产，分别取雄性大鳞副泥鳅的精液和雌性大鳞副泥鳅的卵子，将所得的精液用Kurokura’s solution溶液稀释80-120倍，
b、将稀释后的精子与卵子混合形成受精卵，将受精卵至于2.5-3.5℃的水中，冷休克处理50-70min，然后将受精卵放入常温水中进行孵化。
CN201310592906.2A 2013-11-22 2013-11-22 冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法 Pending CN103651195A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310592906.2A CN103651195A (zh) 2013-11-22 2013-11-22 冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310592906.2A CN103651195A (zh) 2013-11-22 2013-11-22 冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103651195A true CN103651195A (zh) 2014-03-26

Family

ID=50290916

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310592906.2A Pending CN103651195A (zh) 2013-11-22 2013-11-22 冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103651195A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105230533A (zh) * 2015-08-04 2016-01-13 中国水产科学研究院北戴河中心实验站 一种牙鲆雄核发育双单倍体的诱导及检测方法
CN106135123A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 湖南文理学院 鳖三倍体纯系的高效育成方法
CN106259132A (zh) * 2016-10-17 2017-01-04 大连海洋大学 一种获得红鳍东方鲀雄核发育单倍体的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102835338A (zh) * 2012-09-18 2012-12-26 大连海洋大学 冷休克诱导天然四倍体泥鳅雄核发育的方法
CN102925407A (zh) * 2012-11-22 2013-02-13 大连海洋大学 三倍体泥鳅鳍细胞的体外培养方法
CN103039386A (zh) * 2012-12-03 2013-04-17 大连海洋大学 诱导天然四倍体泥鳅雌核发育的方法
CN103210854A (zh) * 2013-01-18 2013-07-24 大连海洋大学 低温诱导红鳍东方鲀雄性化的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102835338A (zh) * 2012-09-18 2012-12-26 大连海洋大学 冷休克诱导天然四倍体泥鳅雄核发育的方法
CN102925407A (zh) * 2012-11-22 2013-02-13 大连海洋大学 三倍体泥鳅鳍细胞的体外培养方法
CN103039386A (zh) * 2012-12-03 2013-04-17 大连海洋大学 诱导天然四倍体泥鳅雌核发育的方法
CN103210854A (zh) * 2013-01-18 2013-07-24 大连海洋大学 低温诱导红鳍东方鲀雄性化的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MORISHIMA等: "Cold-shock eliminates female ucleus in fertilized eggs to induce androgenesis in the loach (Misgurnus anguillicaudatus), a teleost fish", 《BIOMED CENTRAL BIOTECHNOLOGY》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105230533A (zh) * 2015-08-04 2016-01-13 中国水产科学研究院北戴河中心实验站 一种牙鲆雄核发育双单倍体的诱导及检测方法
CN105230533B (zh) * 2015-08-04 2018-07-06 中国水产科学研究院北戴河中心实验站 一种牙鲆雄核发育双单倍体的诱导及检测方法
CN106135123A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 湖南文理学院 鳖三倍体纯系的高效育成方法
CN106259132A (zh) * 2016-10-17 2017-01-04 大连海洋大学 一种获得红鳍东方鲀雄核发育单倍体的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tsai et al. Advantages and applications of cryopreservation in fisheries science
Harvey et al. Theory and practice of induced breeding in fish
Targońska et al. Controlled reproduction of asp, Aspius aspius (L.) using luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) analogues with dopamine inhibitors
do Nascimento et al. Stereological analysis of gonads from diploid and triploid fish yellowtail tetra Astyanax altiparanae (Garutti & Britski) in laboratory conditions
Bozkurt et al. Cryopreservation of brown trout (Salmo trutta macrostigma) and ornamental koi carp (Cyprinus carpio) sperm
Chatain et al. Production of monosex male populations of European seabass, Dicentrarchus labrax L. by use of the synthetic androgen 17α-methyldehydrotestosterone
CN103548725A (zh) 线纹海马人工繁育方法
Vuthiphandchai et al. Sperm cryopreservation of silver barb (B arbodes gonionotus): cryoprotectants, cooling rate and storage time on sperm quality
CN103719018B (zh) 一种提高胚胎期鸭生长速度的方法
CN102835338A (zh) 冷休克诱导天然四倍体泥鳅雄核发育的方法
CN103404461B (zh) 乌苏里拟鲿人工诱导雌核发育方法
CN103651195A (zh) 冷休克诱导大鳞副泥鳅雄核发育单倍体的方法
Luo et al. Telophase of the first cleavage is the key stage for optimally inducing mitotic gynogenesis in rice field eel (Monopterus albus)
TrippEl et al. Effects of continuous light and triploidy on growth and sexual maturation in Atlantic cod, Gadus morhua
KR101288008B1 (ko) 양식산 뱀장어의 자성화 유도방법
Unuma et al. Optimum temperature of rearing water during artificial induction of ovulation in Japanese eel
Shazada et al. Short‐term storage of sperm in common carp from laboratory research to commercial production—A review
CN105123575B (zh) 一种可持续性观察大刺鳅胚胎发育的方法
CN103039386A (zh) 诱导天然四倍体泥鳅雌核发育的方法
JP5522395B2 (ja) 魚類の飼育方法
Zhang et al. The effects of extenders and sperm‐egg ratios on fertilizing ability of cryopreserved testicular sperm of northern pike (Esox lucius L.)
藤岡康弘 Induction of gynogenetic diploids and cytological studies in honmoroko Gnathopogon caurulescens.
CN106614188A (zh) 一种非定向交尾凡纳滨对虾全同胞家系批量制备方法
CN114532259B (zh) 一种虹鳟全雌三倍体规模化制种方法
CN106259132A (zh) 一种获得红鳍东方鲀雄核发育单倍体的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20140326